日本同仁化学Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒- DOJINDO

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Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

产品文献

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1set

现货

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

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试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测

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Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

操作步骤

　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。 Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

日本同仁化学Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒- DOJINDO

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Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256

乳酸检测试剂盒

Lactate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 操作简便

● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸

● 试剂稳定性高

● 享有显色底物WST专利

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葡萄糖乳酸检测

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代谢检测方案

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概述

原理

特点

乳酸标准曲线

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.3. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. MitoPeDPP 线粒体内脂质过氧化物检测

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Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

概述

乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物，也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明，乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。

Lactate Assay Kit-WST^®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸，并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST^®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量，可用96孔板检测，灵敏度高，最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。

WST^®：WST是日本同仁化学研究所的注册商标

原理

本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。

另外，试剂盒中含有乳酸标准液，可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

特点

特点1：操作简单，只需要加入试剂

只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂，培养即可。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

特点2：试剂稳定性高

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

乳酸标准曲线

可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。

当乳酸浓度在1 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

实验例

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用

1、在96孔板中接种1×10⁴个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素)，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

2、去除上清液后，在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。

3、在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

4、培养后，吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中，并用超纯水稀释8倍制备样品溶液，然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。

5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。

6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。

7、在每孔中加入80 µl工作液。

8、在37℃培养箱中培养30 min。

9、用酶标仪测定450 nm的吸光度，并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用，随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加，乳酸浓度逐渐减少

葡萄糖和乳酸的测定例

用葡萄糖测定试剂盒（货号：G264）和乳酸测定试剂盒检测（货号：L256）:检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

■实验条件

细胞：Jurkat细胞（5×10⁵细胞）

药物：Phloretin（终浓度：100 µmol/l）

培养时间：过夜培养

■结果

Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取，减少了葡萄糖的消耗，增加了培养基中葡萄糖的量，并减少了乳酸的量。

常见问题Q&A

Q：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸吗？

A：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸。
但是在含有血清的情况下，由于背景上升，需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。
【参考数据】
含和不含10％FBS的吸光度比较

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

<结果>
在培养基中加入10％FBS的组吸光度大大升高，因此需要测定培养基作为背景对照。

Q：如何检测细胞内乳酸含量？

（1）用微量管收集1×10⁵的细胞^*1。

（2）以300×g离心2 min后去除上清液。

（3）加入300 μl的PBS，用移液器吹打使其重悬，再以300×g离心2 min后去除上清液。
（4）加入300 μl细胞裂解液^*2（0.1％Triton-X）并涡旋1 min，制成细胞裂解液。

（5）以8000×g离心5 min，收集上清液。
（6）将步骤（5）所得溶液用超滤离心管（PALL，No.OD010C3，滤膜分子量：10K）以12,000×g 离心10 min^*3去除蛋白质，得到待测样品。

*1、样品为HeLa细胞时，为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量，需要1×10⁵的细胞甚至更多。
*2、如果细胞裂解液中含有SDS会抑制显色，因此不要使用含有SDS的缓冲液。

*3、内源性乳酸脱氢酶（LDH）会导致背景增高，因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶

（LDH）。
※测定样品设定为3个复孔时（n=3），合计至少需要60 μl以上（每孔20 μl×3）。
※如果过滤后滤液不足60 μl，可适当延长过滤时间。
※稀释细胞裂解液至合适的浓度，使结果在标准曲线范围内（0-1 mmol/l）。

Q：配制后的Working Solution稳定性如何，可以保存多久？

A：Working Solution需要现配现用。
光会影响Working Solution的稳定性，所以配制后请用铝箔纸包裹。
配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。
（Working Solution遇到光，溶液的颜色会由红色变为橙色，背景会升高。）

Q：为什么我的样品孔没有显色？

A：样品中的乳酸浓度可能低于检测限（0.02 mmol/l）。
乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测，因此请考虑其他方法，如LC-MS。
如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。
请降低稀释比例，从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。

Q：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量乳酸浓度。
实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂），
并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。

Q：该试剂盒可以定量D-Lactate吗？

A：该试剂盒是用于L-Lactate的定量，不能定量D-Lactate。

Q：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。

Q：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

96孔板排列示意图（n=3）

参考文献

编号	文献名	年分	IF
1	Hypoxia-induced exosomal circPDK1 promotes pancreatic cancer glycolysis via c-myc activation by modulating miR-628-3p/BPTF axis and degrading BIN1	2022	23.2
2	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine	2020	19.9
3	YAP mediates compensatory cardiac hypertrophy through aerobic glycolysis in response to pressure overload	2022	19.5
4	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nature Metabolism,2020, 2,81–96	2020	13.5
5	Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis, Biomaterials,2021, 269:120631	2020	12.8
6	Metabolome Analysis Reveals Excessive Glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK Signaling in Methotrexate-Resistant Primary CNS Lymphoma-Derived Cells, Clinical Cancer Research,2020, 26(11):2754-2766	2020	11.2
7	Inhibition of glycolytic activator PFKFB3 suppresses tumor growth and induces tumor vessel normalization in hepatocellular carcinoma	2021	9.8
8	Epigenetic silencing of LncRNA LINC00261 promotes c-myc-mediated aerobic glycolysis by regulating miR-222-3p/HIPK2/ERK axis and sequestering IGF2BP1	2021	8.8
9	PLEKHA5 regulates the survival and peritoneal dissemination of diffuse-type gastric carcinoma cells with Met gene amplification, Oncogenesis,2021, 10(3):25	2021	7.5
10	An iPSC-based neural model of sialidosis uncovers glycolytic impairment-causing presynaptic dysfunction and deregulation of Ca2+ dynamics	2021	7.1
11	Tumor cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic metabolism in lung cancer cells,Cancer Science,2020, 111(4):1241-1253	2020	6.7
12	Tumor cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic metabolism in lung cancer cells	2020	6.5
13	Sodium-Glucose Co-Transporter 2 Inhibitors Correct Metabolic Maladaptation of Proximal Tubular Epithelial Cells in High-Glucose Conditions	2020	6.2
14	Metabolites Produced by a New Lactiplantibacillus plantarum Strain BF1-13 Isolated from Deep Seawater of Izu-Akazawa Protect the Intestinal Epithelial Barrier from the Dysfunction Induced by Hydrogen Peroxide	2022	6.1
15	MicroRNA-505, Suppressed by Oncogenic Long Non-coding RNA LINC01448, Acts as a Novel Suppressor of Glycolysis and Tumor Progression Through Inhibiting HK2 Expression in Pancreatic Cancer	2021	6.1
16	Matrine Promotes Human Myeloid Leukemia Cells Apoptosis Through Warburg Effect Mediated by Hexokinase 2, Frontiers in Pharmacology,2019, 10:1069	2019	5.8
17	Mutant KRAS drives metabolic reprogramming and autophagic flux in premalignant pancreatic cells	2021	5.8
18	Long Non-Coding RNA TMPO-AS1 Promotes GLUT1-Mediated Glycolysis and Paclitaxel Resistance in Endometrial Cancer Cells by Interacting With miR-140 and miR-143	2022	5.7
19	Circ_0002111/miR-134-5p/FSTL1 signal axis regulates tumor progression and glycolytic metabolism in papillary thyroid carcinoma cells	2022	5.5
20	SIRT3-Mediated SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells, Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732	2021	5.3
21	Metabolic changes in synovial cells in early inflammation: Involvement of CREB phosphorylation in the anti-inflammatory effect of 2-deoxyglucose	2021	4.1
22	Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway, Biochemical and Biophysical Research Communications,2019, 510(4):501-507	2019	3.6
23	Neopetrosidines A–D, pyridine alkaloids isolated from the marine sponge Neopetrosia chaliniformis and their cell cycle elongation activity	2021	3.5
24	Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway	2019	3.3
25	Circ_0000442 functions as a tumor repressor in breast cancer by impacting miR-1229-3p and upregulating ZBTB1	2020	2.5
26	Suppressive Effects of Anisomycin on the Proliferation of B16 Mouse Melanoma Cells In Vitro	2021	2.1
27	Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration	2023	15.1
28	Arresting calcium-regulated sperm metabolic dynamics enables prolonged fertility in poultry liquid semen storage	2023	4.6
29	Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment	2023	6.6

日本同仁化学Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264- DOJINDO

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Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

葡萄糖检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST

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储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

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葡萄糖乳酸检测

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代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

产品解说

活动进行中

试剂盒内含

概述

原理

操作步骤

制作葡萄糖标准曲线

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

试剂盒内含

	50 tests	200 tests
Dye Mixture	×1	×1
葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖)	150 μl×1	600 μl×1
酶(绿盖)	×1	×1
Assay Buffer	3.5 ml×1	14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖)	350 μl×1	1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液^＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×10⁵ cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×10⁶ cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？

A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。

Q2：Working Solution的稳定性如何？

A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。

Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？

A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。

Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例?

A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。

Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？

A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」

（1）将细胞^*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液^*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×10⁵cells以上，Jurket细胞需要2×10⁶ cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。

A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

96孔板排列示意图（n=3）

Q7:可以测量L-Glucose吗？

A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。

参考文献

No	检测对象	文献
1	小鼠血清	Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2	链霉菌	Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3	HCT116细胞	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4	P388白血病细胞	2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5	小鼠精子细胞	Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9

*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。

日本同仁化学Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

谷氨酸的定量检测试剂盒

Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

选择规格：

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产品概述

原理

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

产品概述

原理

操作步骤

只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。 Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

日本同仁化学Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268- DOJINDO

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Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

谷氨酰胺定量检测试剂盒

Glutamine Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamine的定量

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试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

产品解说

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凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Glutamate Assay Kit-WST 谷氨酸的定量检测

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NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

产品概述

谷氨酰胺是TCA循环的中间体α-酮戊二酸的主要来源，并且是用于核酸和其他氨基酸合成及能量产生的重要物质。根据文献报道特别是在癌细胞中，谷氨酰胺作为底物可促进Glutaminolysis的生成，而Glutaminolysis是产生α-酮戊二酸的途径之一。同时Glutaminolysis还可以消除活性氧并减少氧化型谷胱甘肽。

Glutamine Assay Kit-WST是用于定量检测谷氨酰胺的试剂盒。无论是培养基内还是细胞内的谷氨酰胺均可以通过WST的还原反应进行定量，可检测的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酰胺进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酰胺标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酰胺的浓度。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酰胺浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酰胺标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

Q3：是否可以定量D-Glutamine？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酰胺浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酰胺浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酰胺浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酰胺浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酰胺浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒货号：G268

参考文献

1、K. Hayashima, H. Katoh, “Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis”, J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.

2、R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, “Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a”, Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.

3、S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, “Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions”, 2022, Int. J. Mol. Sci., doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

4、M Chen, G Wang, Z Xu, J Sun, B Liu, L Chang, J Gu, Y Ruan, X Gao,S Song,Loss of RACK1 promotes glutamine addiction via activating AKT/mTOR/ASCT2 axis to facilitate tumor growth in gastric cancer,Cellular Oncology, 2023,doi:https://doi.org/10.1007/s13402-023-00854-1.

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谷氨酸的定量检测试剂盒

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● 享有显色底物WST专利

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原理

操作步骤

　　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

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实验例

　　标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

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铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

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Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。 Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

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· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

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NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

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操作步骤

*向谷氨酰胺标准溶液和含有谷氨酰胺酶的样品孔中加入谷氨酰胺酶溶液，并在样品(不含谷氨酰胺酶溶液)的每个孔中加Reaction Buffer。

由下式算出检测样品中的谷氨酰胺浓度。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

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实验例

标准曲线的实验例：

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

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常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 12个样品(参照下图)

谷氨酰胺标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

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＊当n=3时，至少需要240 μl(每孔40 μl×6孔)。

样品中的谷氨酰胺浓度(mmol/l)＝(含有谷氨酰胺酶溶液)-(不含谷氨酰胺酶溶液)

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

Q3：是否可以定量D-Glutamine？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamine定量，无法定量D-Glutamine。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解液样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

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Glucose Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルコース測定キット

細胞培養上清のグルコースを測定可能
マイクロプレートを使った多検体処理が可能

製品コード

G264　 Glucose Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥19,900	342-09413
200 tests	￥41,900	346-09411

キット内容

50 tests	・Dye Mixture ・Glucose Standard ・Enzyme ・Assay Buffer ・Reconstitution Buffer	×1 150 μl×1 ×1 3.5 ml×1 350 μl×1
200 tests	・Dye Mixture ・Glucose Standard ・Enzyme ・Assay Buffer ・Reconstitution Buffer	×1 600 μl×1 ×1 14 ml×1 1.4 ml×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

Glucose Assay Kit-WST の使い方

技術情報

グルコースの検出原理

本キットは、グルコース量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養上清^＊のグルコースを検出することができます。またキットにはグルコース標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルコース濃度を測定することができます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
*細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問　培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルコース及び乳酸の測定例

グルコーストランスポーター阻害剤である Phloretin をJurkat 細胞に加えた際の代謝活性の変化をGlucose Assay Kit-WST 及びLactate Assay Kit-WST にて確認しました。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点：細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正（ノーマライゼーション）が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットはこちらから

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	血清（マウス）	M. Shinohara, Y. Tashiro, M. Shinohara, J. Hirokawa, K. Suzuki, M. O. Takeya, M. Mukouzono, S. Takeda, T. Saito, A. Fukumori, T. C. Saido, R. Morishita and N. Sato, "Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes”, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2)	微生物（Streptomyces albulus ）	K. Yamanaka, Y. Hamano and T. Oikawa, "Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus.”, J. Biosci. Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3)	細胞（HCT116）	K. Ohshima, S. Nojima, S. Tahara, M. Kurashige, K. Kawasaki, Y. Hori, M. Taniguchi, Y. Umakoshi, D. Okuzaki, N. Wada, J. Ikeda, E. Fukusaki and E. Morii, "Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine”, Nat Metab, 2020, 2(1), 81
4)	細胞（P388白血病）	T. Matsuo, Y. Konya, E. Hirayama and Y. Sadzuka , "2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cells”, Oncol Lett , 2020, 20(1), 962-966
5)	細胞（マウス:精子）	M. Hashimoto, S. Kimura, C. Kanno, Y. Yanagawa, T. Watanabe, J. Okabe, E. Takahashi, M. Nagano and H. Kitamura, "Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm”, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9
6)	細胞（マクロファージ）	N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fbroblasts under infammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188

　＊細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご確認ください。

よくある質問

Q 測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、下記表に記載のサンプル数を測定頂けます。

※検量線作成：8点（0, 0.00785, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 mmol/l）をn=3で評価。

Glucose standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか？: A

490 nmのフィルターでも使用できます。
ただし、吸光度の値は450 nmで測定した場合よりも低くなります。

Q 細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。: A

細胞内のグルコースを測定した実績がございます。
操作の詳細は、よくある質問「細胞内グルコース測定はできますか？」をご参照ください。
その他のサンプルについては実績がございません。

Q 細胞内のグルコース測定はできますか？

細胞内グルコース測定は可能です。
「0.1% Triton X-100 水溶液」と「限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)」が必要です。
下記のサンプル調製手順を参照ください。

(1)	細胞*¹を1.5 mlマイクロチューブに回収する。 ※測定に必要な細胞数は、細胞種により検討が必要です。HepG2細胞およびJurkat細胞での測定実績を下記図に示しておりますので参照ください。
(2)	300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(3)	冷PBS 300 µlを加え、ピペッティングにより懸濁後、300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(4)	細胞溶解液*²(0.1% Triton X-100 水溶液)を250 µlを加え、ピペッティングにより細胞を溶解した後、 12,000 x gで5分間遠心する。
(5)	操作(4)の上清200 µlを限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)に移し、12,000x gで10分間遠心する。 ※測定用サンプルはn=3で測定する場合、合計150 µl以上は必要です(1ウェルあたり50 µl×3ウェル分)。 ※遠心後の濾液が150 µl以上ない場合は、遠心時間を延長して下さい。
(6)	操作(5)で得られた濾液を測定サンプルとする。その後、キット付属の取扱説明書に従い、グルコース濃度を測定する。 ※測定試料は、検量線範囲内(0-0.5 mmol/l)に入るように適宜細胞溶解液で希釈し、測定に用いて下さい。

*¹0.02 mmol/l以上のグルコースを検出するためにはHepG2細胞の場合、1×10⁵ cells以上、
Jurkat細胞の場合、2×10⁶ cells以上必要。
*²細胞溶解液にSDSを含むと発色を阻害するため、SDSを含むバッファーの使用はできません。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Q 2-Deoxy-D-glucoseも検出されますか？: A

本キットでは、2-Deoxy-D-glucoseもグルコースとして検出されます。

Q L-Glucoseの測定はできますか？: A

本製品はβ-D-Glucose測定用となりますので、L-Glucoseの測定はできません。

Q Working solutionはどのくらい安定ですか？: A

Working solutionは保存できないので、用時調製して下さい。
Working solutionは光に不安定なため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温にて4時間安定です。
（Working solutionを光に暴露させると溶液の色が赤色から橙色に変化し、バックグラウンドが上昇します）

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか？: A

サンプル中に還元性の物質が含まれると、色素（WST）が誤発色して正確なグルコース濃度を測定できません。
還元性を持つ薬剤を培地に添加して実験を行う場合は、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地」＋「薬剤のみ」を同時に評価し、検量線およびサンプルの吸光度から試薬ブランクとして差し引いてください。

Q 発色反応が進まない場合の原因を教えて下さい。: A

測定試料に含まれるグルコース濃度が、0.02 mmol/lより低い可能性があります。
グルコース濃度が0.02 mmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できませんので、LC-MSなど他の方法をご検討下さい。
なお、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げ、グルコース濃度を定量可能範囲以上に調整してください。

Q 測定試料は保存できますか?: A

保存できます。
細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で３週間、細胞ライセートサンプルの場合は、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。
ただし、細胞ライセートサンプルの場合は、除タンパク処理 *を行って下さい。
( *よくある質問「細胞内のグルコース測定はできますか？」操作5)の溶液を保存してください。)

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glutamine Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamine Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルタミン測定キット

製品コード

G268　 Glutamine Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥58,900	348-09611

キット内容

100 tests	・Dye Mixture ・Glutamine Standard　・Enzyme　・Assay Buffer　　　　　　　　　　・Reconstitution Buffer　　　　・lysis Buffer ・Glutaminase　　・Reaction Buffer　　・Filtration Tube	×1 ×1 ×1 7.5 ml×1 750 ×l×1 25 ml×1 20 ×l×1 5 ml×1 ×12

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
パンフレット

技術情報

グルタミンの測定原理

本キットは、グルタミン量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミンを検出することができます。またキットにはグルタミン標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン濃度を定量することができます。

グルタミン測定キット Glutamine Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用(リンク)
1	細胞 (マクロファージ)	N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fibroblasts under inflammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188.
2	細胞 (去勢抵抗性前立腺がん細胞)	R. Imamura, S. Kitagawa, T. Kubo, A. Irie, T. Kariu, M. Yoneda, T. Kamba, T. Imamura, "Prostate cancer C5a receptor expression and augmentation of cancer cell proliferation, invasion, and PD‐L1 expression by C5a", Prostate, 2020, doi:10.1002/pros.24090.
3	細胞 (HSC-2; HSC-3; HeLa; HaCaT)	S. Liu, J. Washio, S. Sato, Y. Abiko, Y. Shinohara, Y. Kobayashi, H. Otani, S. Sasaki, X. Wang and N. Takahashi, "Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions", 2022, doi:10.1016/j.snb.2021.130554.

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96 wellプレート1枚当たり12サンプル数測定できます(検量線の測定濃度を下表の通り8点で作成した場合)。

Glutamine standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

注) Glutamine Assay Kit-WSTを用いてサンプル中グルタミン濃度を定量する場合、1サンプルにつき、[Glutaminase solution処理済有のサンプル(n=3)]および[Glutaminase solution処理無のサンプル(n=3)]の計6well分が必要です。

サンプル中のグルタミン濃度(mmol/l)=(Glutaminase solution処理済有)-(Glutaminase solution処理無)

Q Working solutionは保存できますか？: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

Q D-Glutamineの定量はできますか。: A

本製品はL-Glutamine定量用となりますので、D-Glutamineの定量はできません。

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか。: A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地＋薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。

Q 測定試料は保存できますか。: A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しています。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

Q サンプルが発色しません。: A

本キットで定量可能なグルタミン濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン量が5 µmol/Lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。: A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。（下図参照）

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意
危険・有害シンボルマーク

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グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Glutamate Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glutamate Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルタミン酸測定キット

製品コード

G269　 Glutamate Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥53,500	345-09621

キット内容

100 tests	・Dye Mixture ・Glutamate Standard　・Enzyme　・Assay Buffer　　　　　　　　　　・Reconstitution Buffer　　　　・lysis Buffer 　・Filtration Tube	×1 300 ×l×1 ×1 7.5 ml×1 750 ×l×1 25 ml×1 ×24

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
パンフレット

技術情報

グルタミン酸の測定原理

本キットは、グルタミン酸量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養液や細胞内のグルタミン酸を検出することができます。またキットにはグルタミン酸標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルタミン酸濃度を定量することができます。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

フェロトーシス研究におけるグルタミン酸とグルタチオンの測定例

エラスチン処理により、シスチン/ グルタミン酸トランスポーター(xCT) を阻害すると、鉄依存性の細胞死であるフェロトーシスが誘導されることが知られています。エラスチン処理したA549 細胞において、グルタミン酸放出量および細胞内グルタチオン量を確認したところ、エラスチン処理した細胞はグルタミン酸放出量が減少し、シスチンの取り込みが阻害されたことにより、グルタチオン量が減少する結果が得られました。

グルタミン酸測定キット Glutamate Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

フェロトーシス研究において、脂質過酸化を蛍光イメージングで検出する試薬「Liperfluo」を使用した論文報告が増えています。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用(リンク)
1	食品 (出汁、味噌汁、醤油、トマトジュース)	K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, "Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples", Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.
2	細胞培養上清 (骨髄由来抑制細胞)	Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, "Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF", Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、96ウェルプレートで24サンプルを測定できます。
(検量線の測定濃度を下表の通り、8点で作成した場合)

Glutamate standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q Working solutionは保存できますか？: A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。

※Working solutionは調製後、遮光下であれば室温で4時間安定です。光に暴露させた場合、溶液の色が褐色味を帯びてきます。

Q D-Glutamateの定量はできますか。: A

本製品はL-Glutamate定量用のため、D-Glutamateの定量はできません。

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか。: A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なグルタミン酸濃度の定量ができません。
培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして細胞を含まない培地＋薬剤のみの試薬ブランクを一緒に測定して下さい。

Q 測定試料は保存できますか。: A

細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。

細胞ライセートサンプルの場合、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。ただし、保存を行う前に、キット付属のFiltration Tubeにて除タンパク処理を行って下さい。

Q サンプルのウェルが発色しません。: A

本キットで定量可能なグルタミン酸濃度は5 µmol/l以上です。グルタミン酸濃度が5 µmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれているグルタミン酸量が5 µmol/lよりも少ない可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲以上にして下さい。

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。: A

450 nm以外では、490 nmのフィルターで使用可能です。
ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。（下図参照）

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意

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ACE阻害活性測定キット ACE Kit – WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ACE Kit – WST

02 酸化ストレス関連試薬

ACE Kit – WST

酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

ACE阻害活性測定キット

初めての方も使いやすい
必要な試薬は1キットに
一度に多検体のスクリーニングができる

製品コード

A502　 ACE Kit – WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥43,100	345-08923
100 tests	￥79,400	349-08921

キット内容

50 tests	・Substrate Buffer　　　・Enzyme A　・Enzyme B　・Enzyme C ・Coenzyme　　　　　・Indicator Solution	1 ml x1 x1 x1 x1 x1 5 ml x1
100 tests	・Substrate Buffer ・Enzyme A　　　　　　・Enzyme B　　　　　　・Enzyme C　　　　　　・Coenzyme　　　　　　・Indicator Solution	1 ml x2 x2 x2 x2 x2 5 ml x2

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

ACE Kit-WST の使い方

技術情報

キット以外に必要なもの

・プレートリーダー(450 nmフィルター)　・2～20 μl, 20～200 μl, 100～1000 μlのマイクロピペット　・マルチチャンネルピペット
・96穴マイクロプレート　・インキュベーター(37℃)　・ディスポーザブルシリンジ(1 ml)

参考文献

参考文献を表示する

1) L. H. Lam, T. Shimamura, K. Sakaguchi, K. Noguchi, M. Ishiyama, Y. Fujimura and H. Ukeda, "Assay of angiotensin I-converting enzyme-inhibiting activity based on the detection of 3-Hydroxybutyric acid", Anal. Biochem., 2007, 364, 104.
2) L. H. Lam, T. Shimamura, S. Manabe, M. Ishiyama and H. Ukeda, "Assay of Angiotensin I-converting Enzyme-inhibiting Activity Based on the Detection of 3-Hydroxybutyrate with Water-soluble Tetrazolium Salt", Anal. Sci., 2008, 24, 1057.
3) 浅尾浩史他, "ヤマトトウキの調製過程におけるアンジオテンシンI変換酵素(ACE)阻害活性と品質特性の変化", 近畿中国四国農研究, 2010, 17, 9.
4) C. C. Lau, N. Abdullah and A. S. Shuoib, "Novel angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from an edible mushroom, Pleurotus cystidiosus O.K. Miller identified by LC-MS/MS", BMC Complement. Altern. Med., 2013,13, 313.
5) K. Yamaki, "Screening Research Methods for α-glucosidase Inhibitors and Angiotensin-converting Enzyme Inhibitors in Fermented Soybean Products and Fermented Milk Products", JARQ, 2014, 48, 41.
6) R. Nakabayashi, Z. Yang, T. Nishizawa, T. Mori and K. Saito, "Top-down Targeted Metabolomics Reveals a Sulfur-Containing Metabolite with Inhibitory Activity against Angiotensin-Converting Enzyme in Asparagus officinalis", J. Nat. Prod., 2015, 78(5), 1179.
7) M. Alauddin, H. Shirakawa, K. Hiwatashi, A. Shimakage, S. Takahashi, M. Shinbo and M. Komaia, "Processed soymilk effectively ameliorates blood pressure elevation in spontaneously hypertensive rats", J. Funct. Foods., 2015, 14, 126.
8) N. Ontiverosa, V. López-Terosb, M. Vergara-Jiménezc, A. R. Islas-Rubiod, F. I. Cárdenas-Torresc, E. Cuevas-Rodrígueze, C. Reyes-Morenoe, D. M. Granda-Restrepof, S. Lopera-Cardonaf, G. Isaí Ramírez-Torresb and F. Cabrera-Chávezc, Amaranth-hydrolyzate enriched cookies reduce the systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats', J. Funct. Foods., 2019,doi:10.1016/j.jff.2019.103613.
9) J. H. Lee, T. Kim, H. I. Yong, J. Y. CHa, K. Song, H. G. L, J. Je, M. Kang, Y. Choi, "Peptides inhibiting angiotensin-I-converting enzyme: Isolation from flavourzyme hydrolysate of Protaetia brevitarsis larva protein and identification", 2022, Food Chemistry, doi:10.1016/j.foodchem.2022.133897.

よくある質問

Q ACE活性は測定できますか？: A

ACE活性は測定できません。このキットは、ACEの阻害活性を測定できます。

Q キットの利点は何ですか？: A

従来法（酢酸エチル法）と比較して、下記の点で安全で迅速・簡便な手法となります。
　｢有機溶媒を使用しない｣
　｢一度に多検体を測定できる｣
　｢再現性の高いデータが得られる｣

Q サンプル数はどれくらい測定できますか？: A

IC50を得るためにサンプルを6段階希釈した場合（n=3）、96 wellマイクロプレート１枚で4サンプルを測定可能です。
*正確な測定値を得るため、n=3以上でお使いください。

<下図>プレートレイアウト例（n=3の場合）

Q 測定に影響を与える物質を教えてください？: A

1. アスコルビン酸などの還元物質は、Indicator soutionに含まれるWSTを還元し、正の誤差を生じます。
　アスコルビン酸の場合、濃度を0.01%以下で測定してください。

2. アミノアシラーゼや3HBDHを阻害する物質が含まれていると、酵素反応に影響を与えるために正確な測定ができません。

3. クエン酸や酢酸を含む強酸性のサンプルでは、Substrate bufferに含まれる成分が沈殿し、発色を阻害する場合があります。
　サンプルをpH5以上に調整して測定してください。
　（少量の炭酸水素ナトリウムの粉末を加えて中和して遠心分離し、上清をご使用ください）

4. サンプルに不溶性物質を含む場合、ろ過後の溶液または遠心後の上清をサンプルとしてください。

5. 着色の強いサンプルの場合、取扱説明書を参照してください。

Q 測定したいサンプルが水に溶けにくいのですが、測定は可能ですか？: A

水に溶けにくいサンプルはDMSOやエタノールに溶解後、水で希釈して下さい。
DMSOやエタノールであれば、測定試料中の有機溶媒濃度として、1%程度までは測定に影響を与えないことを確認しております。

Q 前処理の方法や注意点を教えて下さい。: A

【試料前処理例（野菜/果物の場合）】

・食品試料の場合、試料をホモジナイズ後、遠心分離し、その上清をご使用下さい。

・濁りがある場合、濾過するか、希釈して濁りが測定に影響しないよう澄明な溶液としてください。

・着色が強い場合、適宜希釈し、測定に影響のない範囲で測定下さい。取扱説明書を参照してください。

Q 反応対象となるアンジオテンシン変換酵素はACEのみですか？ACE2も反応対象になりますか？: A

ACEのみとなります。
このキットでは、ACE2の阻害活性を測定することはできません。

Q Enzyme BとEnzyme Aの溶解の順番を逆にすると何か問題はありますか？: A

感度が低くなります。
必ずEnzyme Bを先に純水で溶解し、その溶液を用いてEnzyme Aを溶解してください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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抗酸化能測定キット SOD Assay Kit – WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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SOD Assay Kit – WST

02 酸化ストレス関連試薬

SOD Assay Kit – WST

酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

抗酸化能測定キット

製品コード

S311　 SOD Assay Kit – WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥10,100	341-90193
500 tests	￥26,000	345-90191

キット内容

100 tests	・WST Solution ・Enzyme Solution ・Buffer Solution ・Dilution Buffer	1 ml x 1 20 μl x 1 11 ml x 2 10 ml x 1
500 tests	・WST Solution ・Enzyme Solution ・Buffer Solution ・Dilution Buffer	5 ml x 1 100 μl x 1 100 ml x 1 50 ml x 1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書 500 tests 日本語
Manual 500 tests English
取扱説明書 100 tests 日本語
Manual 100 tests English
プロトコル SOD様活性を測定したい

技術情報

測定方法

96wellプレートを用い、サンプル調製から測定まで約1時間で完了します。

参考文献

参考文献を表示する

1) H. Ukeda, A. K. Sarker, D. Kawana and M. Sawamura, "Flow-Injection Assay of Superoxide Dismutase Based on the Reduction of Highly Water-Soluble Tetrazolium", Anal. Sci., 1999, 15, 353.
2) H. Ukeda, D. Kawana, S. Maeda and M. Sawamura, "Spectrophotometric Assay for Superoxide Dismutase Based on the Reduction of Highly Water-soluble Tetrazolium Salts by Xanthine-Xanthine Oxidase", Biosci. Biotechnol. Biochem., 1999, 63, 485.
3) <受田浩之, 森山洋憲, 川名大介, 片山泰幸, 中林錦一, 沢村正義, 「スーパーオキシドアニオン消去活性新規測定法の食品への応用」, 日本食品科学工学会誌, 2002,49, 25.
4) <森山洋憲, 片山泰幸, 中林錦一, 受田浩之, 沢村正義, 「高知県産茶および青果物の有するスーパーオキシドアニオン消去能の測定」, 日本食品科学工学会誌, 2002,49, 679.
5) H. Ukeda, T. Shimamura, M. Tsubouchi，Y. Harada, Y. Nakai and M. Sawamura, "Spectrophotometric Assay of Superoxide Anion Formed in Maillard Reaction Based on Highly Water-soluble Tetrazolium Salt", Anal. Sci., 2002, 18, 1151.
6) N. Tsuji, N. Hirayanagi, M. Okada, H. Miyasaka, K. Hirata, M. H. Zenk and K. Miyamoto, "Enhancement of Tolerance to Heavy Metals and Oxidative Stress in Dunaliella Tertiolecta by Zn-induced Phytochelatin Synthesis", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 293, 653.
7) A. Sakudo, D. C. Lee, K. Saeki, Y. Nakamura, K. Inoue, Y. Matsumoto, S. Itohara and T. Onodera, "Impairment of Superoxide Dismutase Activation by N-Terminally Truncated Prion Protein (PrP) in PrP-deficient Neuronal Cell Line", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2003, 308, 660.
8) J.-H. Zhu, X. Zhang, J. P. Mcclung and X. G. Lei, "Impact of Cu,Zn-Superoxide Dismutase and Se-Dependent Glutathione Peroxidase-1 Knockouts on Acetaminophen-Induced Cell Death and Related Signaling in Murine Liver", Exp. Biol. Med., 2006, 231, 1726.
9) H. R. Rezvani, S. Dedieu, S. North, F. Belloc, R. Rossignol, T. Letellier, H. de Verneuil1, A. Taieb1, F.Mazurier, "HIF-1α: a Key Ffactor in the Keratinocyte Response to UVB Exposure", J. Biol. Chem., 2007, 10, 1074.
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11) R. H. Burdon, V. Gill and C. Rice-Evans, "Reduction of a Tetrazolium Salt and Superoxide Generation in Human Tumor Cells (HeLa)", Free Rad. Res. Commun., 1993,18, 369.
12) Y. Sakurai, I. Anzai and Y. Furukawa, "A Primary Role for Disulfide Formation in the Productive Folding of Prokaryotic Cu,Zn-superoxide Dismutase", J. Biol. Chem., 2014, 289(29), 20139.
13) A. Weichert, A. S. Besemer, M. Liebl, N. Hellmann, I. Koziollek-Drechsler, P. Ip, H. Decker, J. Robertson, A. Chakrabartty, C. Behl and A. M. Clement, "Wild-type Cu/Zn superoxide dismutase stabilizes mutant variants by heterodimerization", Neurobiol. Dis., 2014, 62, 479.
14) J. M. Hartney, T. Stidham, D. A. Goldstrohm, R. E. Oberley-Deegan, M. R. Weaver, Z. Valnickova-Hansen, C. Scavenius, R. K.P. Benninger, K. F. Leahy, R. Johnson, F. Gally, B. Kosmider, A. K. Zimmermann, J. J. Enghild, E. Nozik-Grayck and R. P. Bowler, "A common polymorphism in extracellular superoxide dismutase affects cardiopulmonary disease risk by altering protein distribution", Circ Cardiovasc Genet, 2014, 7(5), 659.
15) J. Wu, Y. Sun, Y. Zhao, J. Zhang, L. Luo, M. Li, J. Wang, H. Yu, G. Liu, L. Yang, G. Xiong, J. Zhou, J. Zuo, Y. Wang and J. Li, "Deficient plastidic fatty acid synthesis triggers cell death by modulating mitochondrial reactive oxygen species", Cell Res., 2015, 25(5), 621.
16) E. Harunari, C. Imada, Y. Igarashi, "Konamycins A and B and Rubromycins CA1 and CA2, Aromatic Polyketides from the Tunicate-Derived Streptomyces hyaluromycini MB-PO13^T'", J. Nat. Prod., 2019, 82, (6), 1609-1615.
17) N. Kajihara, D. Kukidome, K. Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E. Araki, "Low glucose induces mitochondrial reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial cells", J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750.
18) H- J. Kim, H- J. Kim, J. Jeon, K- C. Nam, K- S. Shim, J- H. Jung, K. S. Kim, Y. Choi, S- H. Kim, A. Jang, Comparison of the quality characteristics of chicken breast meat from conventional and animal welfare farms under refrigerated storage', Poultry Science., 2020, 99, 1788-1796.
19) T. Shoji, S. Masumoto, N. Moriichi, Y. Ohtake, T. Kanda, Administration of Apple Polyphenol Supplements for Skin Conditions in Healthy Women: A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Clinical Trial', Nutrients., 2020, 12, (1071), .
20) Y. Hirata, Y. Ito, M. Takashima, K Yagy, K. Oh-Hashi, H. Suzuki, K. Ono, K. Furuta and M. Sawada, Novel Oxindole-Curcumin Hybrid Compound for Antioxidative Stress and Neuroprotection.', ACS Chem. Neurosci.., 2020, 11, (1), 76-85.

よくある質問

Q SOD様活性と試薬の発色の関係について教えてください。: A

SOD様活性が強いと試薬の発色は弱くなります。また、SOD様活性が弱いと試薬の発色は強くなります。下記をご参照ください。

＜キットの原理＞

WST-1はスーパーオキサイド（以下、2O₂^–）によって還元されることで、WST-1 formazanに変化し発色します。SOD様活性を持つ物質がサンプル中に存在するとキサンチンオキシダーゼ（XO）を介して発生する2O₂^–を除去しますので、還元されるWST-1の量が少なくなります。2O₂^–がWST-1の還元に使われるか、SOD様活性により除去されるかの競争反応により発色の度合いが変化します（下図）。併せて製品ページの「技術情報：測定原理」もご参照ください。

・SOD様活性が弱い場合

・SOD様活性が強い場合

Q Mn-SODとCu, Zn-SOD 及びEC(extracellular)-SODの測り分けはできますか？: A

サンプル溶液にKCN（potassium cyanide）またはDDC（Diethyldithiocarbamate）を添加することでCu, Zn-SOD 及びEC(extracellular)-SODの活性を阻害し、Mn-SOD の活性が測定できます。

【測定例】
・SODのサンプル溶液にKCNまたはDDCを終濃度が1-10 mmol/l となるように添加し、室温にて5分間インキュベートする。
・インキュベート後の溶液（20 μl）を用いて、SOD Assay Kit-WSTのマニュアルに従ってSOD様活性を測定する。

*注意点*
・KCNやDDCの濃度およびインキュベーション時間は、サンプルによって検討が必要となります。下記の論文を参考してください。
・ユニット（U）算出の際は、KCN又はDDC添加により希釈されたサンプルの希釈倍率を考慮して計算して下さい。

1) Greenough MA, Volitakis I, Li QX, Laughton K, Evin G, Ho M, Dalziel AH, Camakaris J, Bush AI, “Presenilins promote the cellular uptake of copper and zinc and maintain copper chaperone of SOD1-dependent copper/zinc superoxide dismutase activity”, J Biol Chem., 2011, 286, 9776.

2) Hajime Fujimoto, Jun-ichi Taguchi, “Manganese superoxide dismutase polymorphism affects the oxidized low-density lipoproteininduced apoptosis of macrophages and coronary artery disease.”, European Heart Journal. 2008. 29, 1267.

3) A. Dacanay, S. C. Johnson, R. Bjornsdottir, R. O. Ebanks, N. W. Ross, M. Reith, R. K. Singh, J. Hiu, and L. L. Brown, "Molecular Characterization and Quantitative Analysis of Superoxide Dismutases in Virulent and Avirulent Strains of Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida"Journal of Bacteriology, 2003, 185 (15), 4336.

1) Heikkila RE, Cabbat FS, Cohen G. “In vivo inhibition of superoxide dismutase in mice by diethyldithiocarbamate”, J Biol Chem., 1976, 251, 2182.

Q SODキットを使用して、測定した際の[unit]算出の方法はどのようにすればよいのでしょうか？: A

SOD活性の定義としましては、チトクロムｃ法の時も同様ですが、「IC50=1U:発色を50％阻害する時のSODの活性を示す濃度」になります。

このキットでの1Uの定義は、「WSTの発色を50%阻害する時のSODの活性」です。
従って、サンプルを希釈していき、IC50の時の希釈倍率のSODの活性が1Uです。

「U」は「単位」ですので、これを「量」に換算します。

この時、タンパク量を容量で算出するのか、重量で算出するのかで、1U/mlもしくは1U/mg proteinと表示します。

カタログに記載している阻害曲線は、活性既知のSODを希釈し測定しています。
たまたまIC50値が1U/ml付近になっています。

<50％阻害するサンプル濃度を1Uとする方法：ユニットをWST法として表現>
例：サンプルのIC50値の希釈倍率を x10.75　とする。

（このキットでは測定に使用するサンプル量が20μl、全量が240μl）

IC50を示す測定時のサンプル希釈率は「10.75倍」になります。
　–>『10.75倍に希釈された液、「20 μl中」に存在する SOD 量が1単位である』
　となります。

単位で考えると、測定時のものが「１U」ですので、希釈前サンプルは「10.75U」　となります。

アッセイで添加したのは20 μ （0.02 ml)ですので、サンプル 1 mlあたりのunit数を計算する。

アッセイで添加する20 μl中に1単位含まれるので
10.75/0.02 = 537.5 U/ml

SOD抽出過程（前処理）で希釈が生じていれば、元々の試料の活性は前処理での希釈を計算して
希釈率ｘ537.5 = ○ U/ml of サンプル

となります。

＊ここでは容量に換算しております。
　例えば：血液であれば　「○ U/ml of blood」など
　タンパク量や質量(mg)に換算したい場合は、さらに別途換算してください。

Q 酸化ストレスの指標としてSOD様活性はよく測定されますが、 SOD様活性の他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？: A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q SOD様活性を測定する方法としてはどのようなものがありますか？: A

一番一般的に知られている方法は
・チトクロムｃ法

　です。その他

・NBT法

・エピネフリン法

・亜硝酸法

・ESR法

などが知られております。

NBT法はxanthine/xanthine oxidaseをスーパーオキサイド産生系とし、テトラゾリウム塩の還元反応を利用しており、操作が簡便であることから汎用されております。

しかし、生成するホルマザンが不溶性の沈殿物であることやNBTがxanthine oxidaseと直接反応することから100％阻害率を測定できないなどの問題がありました。

弊社のWST法は、発色基質として「WST-1」を使用しこれらの問題を解決しております。

（測定原理はNBTと同様とお考え下さい）

Q superoxideとWST-1の反応の阻害が０（発色が100％）となるところが全く発色しません。酵素(Xanthine oxidase)が失活しているのでしょうか？: A

酵素(Xanthine oxidase)は失活していなくても、働いていない場合があります。酵素溶液は懸濁液になっていますので静置して置くと酵素が沈んでしまいます。良く振ってからご使用ください。上澄みだけを取ってしまうとsuperoxideは全く発生しませんので発色もしません。

Q 脂溶性成分は測定できますか？: A

本キットは水溶性サンプルの測定を主な対象としており、水に溶解できないサンプルは測定出来ません。なお、脂溶性物質を低濃度域で溶解可能な場合は、DMSOやエタノールに一度溶解後、蒸留水やPBSで出来る限り希釈し、測定してください。
注意①サンプル中にDMSOは5%、エタノールは25%含まれますと測定に影響します。溶媒濃度を測定に影響しない濃度まで希釈しご使用ください。

注意②検討の際は、必ずBlank2とBlank3を測定し、誤発色等の影響がないかご確認ください。

Q SOD Assay Kit – WSTは食品等の測定も可能となっておりましたが、必要な前処理の方法を教えて下さい。: A

下記のような方法により処理し、測定を行うことが出来ます。

<茶葉>
茶葉資料10 gに蒸留水400 mlを加えてホモジナイズ処理し、5 ℃で48時間静置して抽出し、ろ過(No.2:アドバンテック東洋(株))した後、さらにメンブレンフィルター(pore size 0.45μm:富士フィルム(株))で処理する。
<ワイン>
直接メンブランフィルターでろ過し、測定試料とする。
緑茶や赤ワイン等はそのもの自体に着色がありますが、100倍程度に希釈すると測定に対する色の影響は回避できます。
<植物・野菜類>
1)蒸留水(野菜の重量に対し5倍量程度）で4 ℃、1分間ホモジナイズする。
2)ホモジネートをろ紙でろ過し、ろ液(水での抽出物）を凍結乾燥する。
3)凍結乾燥したものを0.1 mol/lリン酸バッファー(pH7.4)に溶かし、これを測定試料とする。溶かしたものはなるべく早く使用する。
＊上記試料により得られた活性値は、水による抽出物の凍結乾燥後の重量もしくはホモジナイズ前の野菜重量当りの活性値とする。

【参考文献】
日本食品科学工学会誌,2002, 49(1),25～31.
日本食品科学工学会誌,2002, 49(10),679～682.

-注-
食品中にはキットのに使用している色素を直接発色させてしまう還元物質が多く存在します。これまで得られている報告では20～100倍に希釈する事によりその影響を押さえることが出来ております。

Q 測定に影響を与える物質にはどのようなものがありますか？: A

アスコルビン酸、グルタチオン(還元型)など還元性物質は正誤差を与えます。
これらの物質が下記の濃度存在した場合10％程度の吸光度の上昇が認められますが、
吸光度の上昇は[blank2]として差し引くことにより影響は回避できます。
・ascorbic acid：0.1 mmol/l

・glutathione,reduced form：5 mmol/l

・bovine serum albumin(BSA)：5% w/v

（BSAは吸光度の上昇は見られませんが、SOD様活性を示しますのでこれよりも高濃度にならないようにして下さい）

Q 組織の前処理に使用するショ糖緩衝液はどのように調製すればよいですか？

下記の調製例をご参照ください。

＜ショ糖緩衝液 1000mlを調製する場合＞

試薬	使用量（モル濃度）
ショ糖	85.57 g（0.25 mol/l）
2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol （トリス緩衝剤）	1.21 g（0 mmol/l）
2NA(EDTA・2Na)	372 mg（1 mmol/l）

上記3種類の試薬を800 ml程度の純水に加えて溶解させ、攪拌しながら塩酸を加えてpH 7.4に調整する。
その後、純水を加え全量1000 mlとする。

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微生物増殖アッセイキット Microbial Viability Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Microbial Viability Assay Kit-WST

06 細菌研究用試薬

Microbial Viability Assay Kit-WST

細菌研究用試薬

微生物増殖アッセイキット

寒天培地法や微量液体希釈法に比べ短時間での検出が可能である
マイクロプレートを使った多検体処理が可能である
培地成分による影響を受けにくい製品である

製品コード

M439　 Microbial Viability Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥6,800	348-08913
500 tests	￥24,200	342-08911

キット内容

100 tests	・WST Solution ・Electron Mediator Reagent (DMSO Solution)	1 ml×1 0.1 ml×1
500 tests	・WST Solution ・Electron Mediator Reagent (DMSO Solution)	1 ml×5 0.5 ml×1

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
プロトコル生菌の代謝活性を測定したい

技術情報

技術情報の目次

評価にかかる時間を大幅に短縮することが可能
わかりにくい濁度から見やすい色の変化へ
抗菌性試験での従来法(Spot-on-lawn法)との相関
発色原理
測定実績のある微生物

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	＜真菌（酵母）＞・Candida albicans JCM 1542	A. Azuma, N. Akiba and S. Minakuchi, "Hydrophilic surface modification of acrylic denture base material by silica coating and its influence on Candida albicans adherence", J. Med. Dent. Sci.., 2012, 59, (1), 1-7.
2)	＜グラム陰性菌＞・Escherichia coli BW25113	H. Y. Oh, J. O. Lee and O. B. Kim, "Increase of organic solvent tolerance of Escherichia coli by the deletion of two regulator genes, fadR and marR", Appl. Microbiol. Biotechnol.., 2012, 96, (6), 1619-27.
3)	＜グラム陰性菌＞・Escherichia coli K-12	T. Nakayashiki, N. Saito, R. Takeuchi, H. Kadokura, K. Nakahigashi, B. L. Wanner and H. Mori, "The tRNA thiolation pathway modulates the intracellular redox state in Escherichia coli", J. Bacteriol.., 2013, 195, (9), 2039-49.
4)	＜グラム陽性菌＞・Streptococcus mutans UA 159 ＜グラム陰性菌＞・Escherichia coli 1.1369	S. He, P. Zhou, L. Wang, X. Xiong, Y. Zhang, Y. Deng and S. Wei, "Antibiotic-decorated titanium with enhanced antibacterial activity through adhesive polydopamine for dental/bone implant", J. R. Soc. Interface., 2014, 11, (95).
5)	＜真菌（カビ）＞・Trichophyton rubrum NBRC 5807	K. Z. Hein, H. Takahashi, T. Tsumori, Y. Yasui, Y. Nanjoh, T. Toga, Z. Wu, J. Grötzinger, S. Jung, J. Wehkamp, B. O. Schroeder, J. M. Schroeder and E. Morita, "Disulphide-reduced psoriasin is a human apoptosis-inducing broad-spectrum fungicide", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.., 2015, 112, (42), 13039-44.
6)	＜真菌（カビ）＞・Trichophyton rubrum	S. Arai, T. Yoshino, T. Fujimura, S. Maruyama, T. Nakano, A. Mukuno, N. Sato and K. Katsuoka, "Mycostatic effect of recombinant dermcidin against Trichophyton rubrum and reduced dermcidin expression in the sweat of tinea pedis patients", J. Dermatol.., 2015, 42, (1), 70-6.
7)	＜グラム陽性菌＞・Staphylococcus aureus NBRC13276 ＜グラム陰性菌＞・Pseudomonas aeruginosa NBRC13275	T. Tsukatani, T. Kawaguchi, H. Suenaga, M. Shiga and T. Ikegami, "RAPID AND SIMPLE DETERMINATION OF MINIMUM BIOFILM ERADICATION CONCENTRATION BY A COLORIMETRIC MICROBIAL VIABILITY ASSAY BASED ON REDUCTION OF A WATER-TETRAZOLIUM SALT AND COMBINATED EFFECT OF ANTIBIOTICS AGAINST MICROBIAL BIOFILM", J Microbiol Biotechnol Food Sci.., 2016, 6, (1), 677.
8)	＜グラム陽性菌＞・Streptococcus mutans NCTC 10449	M. Hashimoto, H. Yanagiuchi, H. Kitagawa and Y. Honda, "Inhibitory Effect of Platinum Nanoparticles on Biofilm Formation of Oral Bacteria", Nano Biomed., 2017, 9, (2), 77-82.
9)	＜グラム陽性菌＞・Enterococcus faecalis FSCC 146002 ・Staphylococcus aureus ATCC 25923 ・Staphylococcus epidermidis FSCC 223011 ＜グラム陰性菌＞・Acinetobacter baumannii ATCC 19606 ・Enterobacter cloacae FSCC 145003 ・Escherichia coli ATCC 25922 ・Klebsiella pneumoniae FSCC 167002 ・Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ・Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331	Z. Xu, X. Zhao, X. Chen, Z. Chen and Z. Xia, "Antimicrobial effect of gallium nitrate against bacteria encountered in burn wound infections", RSC Adv.., 2017, 7, 52266-52273.
10)	＜真菌（酵母）＞・Candida albicans SC5314	J. Nagao, T. Cho, M. Mitarai, K. Iohara, K. Hayama, S. Abe and Y. Tanaka, "Antifungal activity in vitro and in vivo of a salmon protamine peptide and its derived cyclic peptide against Candida albicans", FEMS Yeast Res.., 2017, 17, (1).
11)	＜真菌（カビ）＞・Trichosporon asahii M9459 ・Trichosporon asahii M9925	T. Ichikawa, C. Hirata, M. Takei, N. Tagami, H. Murasawa and R. Ikeda, "Cell surface hydrophobicity and colony morphology of Trichosporon asahii clinical isolates", Yeast., 2017, 34, (3), 129-137.
12)	・土壌微生物	M. Kamitakahara, S. Takahashi, T. Yokoi, C. Inoue and K. Ioku, "Preparation of spherical porous hydroxyapatite granules as support materials for microorganisms", JCS Japan., 2018, 126, (9), 732-735.
13)	＜グラム陽性菌＞・Staphylococcus epidermidis ATCC 14990	F. Boschetto, T. Adachi, S. Horiguchi, D. Fainozzi, F. Parmigiani, E. Marin, W. Zhu, B. McEntire, T. Yamamoto, N. Kanamura, O. Mazda, E. Ohgitani and G. Pezzotti, "Monitoring metabolic reactions in Staphylococcus epidermidis exposed to silicon nitride using in situ time-lapse Raman spectroscopy", J Biomed Opt.., 2018,(5), 1-10.
14)	＜グラム陰性菌＞・Campylobacter concisus ATCC 33237 ・Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum JCM 12990	T. Nambu, D. Wang, C. Mashimo, H. Maruyama, K. Kashiwagi, K. Yoshikawa, K. Yamamoto and T. Okinaga, "Nitric Oxide Donor Modulates a Multispecies Oral Bacterial Community-An In Vitro Study", Microorganisms., 2019, 7, (9), 353.
15)	・Staphylococcus aures	S. Zhang, X. Qu, J. Jiao, H. Tang, M. Wang. Y. Wang, H. Yang, W. Yuan and B. Yue, "Felodipine enhances aminoglycosides efficacy against implant infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus, persisters and biofilms", Bioact. Mater., 2021, doi: 10.1016/j.bioactmat.2021.11.019.

よくある質問

Q 1cmや0.25cmのセルを使って測定できますか？: A

基本的には測定は可能です。
但し、96ウエルマイクロプレートと比較して、発色試薬量を多く必要としますので、実際に測定可能な検体数が減少します。

Q 糸状菌での使用実績はありますか？: A

Aspergillus属の麹菌を使用した実績があります。

Q 菌の増殖試験を行う場合、インキュベート時間はどれくらい行えばよいでしょうか？: A

微生物種(菌)の細胞密度により、インキュベート時間が異なります。
例えば、細胞密度が1×10⁶ CFU/mLで、約6時間後にコンフルエントに達する場合、2～5.5時間の間でインキュベートすることで、菌数を確認することができます。

Q 偏性嫌気性菌の測定は可能ですか？: A

偏性嫌気性菌は、酸素に暴露することで死滅し、十分な発色が得られないため測定できません。

Q 微生物の測定実績を教えて下さい。

  本製品ページの「技術情報」に微生物の測定実績を記載しております。  「測定実績のある微生物」の表をご参照ください。

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還元系発色試薬・細胞増殖測定用試薬 WST-1 | CAS 150849-52-8 同仁化学研究所

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WST-1

10 酸化還元系発色試薬

WST-1

酸化還元系発色試薬

還元系発色試薬・細胞増殖測定用試薬

製品コード

W201　 WST-1
CAS番号

150849-52-8
化学名

2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt
分子式・分子量

C₁₉H₁₁IN₅NaO₈S₂=651.35

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 mg	￥12,300	342-06451
100 mg	￥26,200	348-06453
500 mg	￥84,000	346-06454

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技術情報

溶解例

10 mg/mL（水）、6.5 mg/10 mL（50 mmol/L トリスbuffer, pH8.0）

参考文献

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1) M. Ishiyama, M. Shiga, K. Sakamoto, M. Mizoguchi and Pin-Gang He, "A New Sulfonated Tetrazolium Salt That produces a Highly Water-soluble Formazan Dye", Chem. Pharm. Bull., 1993, 41, 1118.
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7) T. Takenouchi and E. Munekata, "Trophic Effects of Substance P and β-Amyloid Peptide on Dibutyryl Cyclic AMP-Differentiated Human Leukemic (HL-60) Cells", Life Sci., 1995, 56, 479.
8) T. Iwaki, A. Iwaki, Y. Fukumaki and J. Tateishi, "β-Crystallin in C6 Glioma Cells Supports their Survival in Elevated Extracellular K+: the Implication of a Protective Role of β-Crystallin Accumulation in Reactive Glia", Brain Res., 1995, 673, 47.
9) 渡邉正己, "細胞増殖測定法", 組織培養, 1995, 21(12), 435.
10) M. Ishiyama, H. Tominaga, M. Shiga, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno, "A Combined Assay of Cell Viability and vitro Cytotoxycity with a Highly Water-soluble Tetrazolium Salt, Neutral Red and Crystal Violet", Biol. Pharm. Bul., 1996, 19, 1518.
11) 溝口誠, 石山宗孝, 志賀匡宣, 佐々本一美, 臨床化学分析における新規な酸化及び還元発色試薬の開発, 分析化学, 1996, 45, 111.
12) T. Mosmann, "Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays", J. Immunol. Methods, 1983, 65, 55.
13) A. H. Cory, T. C. Owen, J. A. Barltrop and J. G. Cory, "Use of an Aqueous Soluble Tetrazolium/Formazan Assay for Cell Growth Assays in Culture", Cancer Commun., 1991, 3, 207.
14) N. W. Roehm, G. H. Rodgers, S. M. Hatfield and A. L. Glasebrook, "An Improved Colorimetric Assay for Cell Proliferation and Viability Utilizing the Tetrazolium Salt XTT", J. Immunol. Methods, 1991, 142, 257.
15) 本多宏明, 小澤善徳, 森川秀行, 水村津与志, 長田嘉穂，鈴木昌治，"マイクロプレートリーダーを用いるしょうゆ中L-グルタミン酸，グルコースおよびアミノ基の定量", 醤油の研究と技術, 2005, 31(2), 63.

よくある質問

Q WST-1と1-Methoxy PMSを持っているので、これを使用して細胞数測定に使用したい。調整法を教えて下さい。: A

試薬からの調整の手順は以下の通りです。

1.1-Methoxy PMSを7mg秤量し、10 mLの純水に溶解する。
—– 2 mmol/L の溶液となる。
2.WST-1を16.3 mg秤量し、4.5 mLの20 mmol/L HEPES(pH7.4)に溶解する。
3.1-Methoxy PMS水溶液0.5 mLを先のWST-1溶液に加え、全量 5 mLとする。
4.必要に応じ0.22 μmのメンブランフィルターで濾過滅菌する。

＊それぞれの溶液は、冷蔵保存してください。
＊混合前であれば、溶液状態で冷蔵で半年ほど使用できます。（①と②の状態）
＊混合すると安定性が落ちますので、冷蔵保存しても3日程度しか使用できません（③の状態）

取扱条件

規格
性状：	本品は、淡黄色～黄褐色粉末で、水に溶ける。
水溶状：	試験適合
モル吸光係数：	21,600 以上(244 nm付近)
水分：	6.0％以下
鋭敏度：	試験適合
薄層クロマトグラフィー：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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還元系発色試薬 WST-3 | CAS 515111-36-1 同仁化学研究所

发表于2024年3月16日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

WST-3

10 酸化還元系発色試薬

WST-3

酸化還元系発色試薬

還元系発色試薬

製品コード

W202　 WST-3
CAS番号

515111-36-1
化学名

2-(4-Iodophenyl)-3-(2,4-dinitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt
分子式・分子量

C₁₉H₁₀IN₆NaO₁₀S₂=696.34

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 mg	￥28,800	345-08881

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ご購入方法
お問い合わせ

技術情報

溶解例

10 mg/mL（水）

参考文献

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1) M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, Y. Ohkura, K. Ueno, K. Nishiyama and I. Taniguchi, "Novel Disulfonated Tetrazolium Salt That Can Be Reduced to a Water-soluble Formazan and Its Application to the Assay of Lactate Dehydrogenase", Analyst, 1995, 120, 113.
2) I. Sakurabayashi, T. Watano, S. Yonehara, K. Ishimaru, K. Hirai, T. Komori and M. Yagi, "New Enzymatic Assay for Glycohemoglobin", Clin. Chem., 2003, 49, 269.

取扱条件

規格
性状：	本品は、淡黄色～淡褐色粉末で水に溶ける。
水溶状：	試験適合
モル吸光係数：	36,000 以上(235 nm付近)
鋭敏度：	試験適合
薄層クロマトグラフィー：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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還元系発色試薬 WST-8 formazan | CAS 193149-76-7 (無水物として）同仁化学研究所

发表于2024年3月16日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

WST-8 formazan

10 酸化還元系発色試薬

WST-8 formazan

酸化還元系発色試薬

還元系発色試薬

製品コード

W209　 WST-8 formazan
CAS番号

193149-76-7 (無水物として）
化学名

1-(2-Methoxy-4-nitrophenyl)-3-(2,4-disulfophenyl)-5-(4-nitrophenyl)formazan, disodium salt hydrate
分子式・分子量

C₂₀H₁₄N₆Na₂O₁₁S₂･xH₂O(分子量は無水物として計算)=624.47

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 mg	￥Request	343-09301

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技術情報

注意事項

・本製品を粉末の状態で取り出し使用する場合、性状の性質上、静電気等の要因で容器内に付着し、取り出しにくい場合があります。
・容器内に付着し、取り出せなかった粉末に関しては、使用する溶媒を容器に入れ、溶かし出して使用してください。

取扱条件

規格
性状：	本品は、暗赤紫～暗青紫色粉末で水に溶ける。
純度(HPLC)：	95.0％以上
水溶状：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合

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Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System酶试剂盒Takara

发表于2024年2月24日由whatman中国官网

Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	MK400	Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System	2,500 次	￥3,405

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■ 制品内容

Premix WST-1

25 ml

■ 制品说明

本制品是通过吸光度比色分析法对细胞增殖和细胞活力进行检测的试剂。其检测原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸四唑盐还原酶 (succinate-tetrazolium reductase) 将四唑盐WST-1还原为水溶性formazan dye，进而通过吸光度比色分析法进行检测。此方法取代了[³H]-thymide掺入法，实现了非放射性检测。琥珀酸四唑盐还原酶存在于线粒体中，只有在活细胞中才具有活性，培养基中添加的四唑盐在琥珀酸四唑盐还原酶的作用下，还原生成formazan dye，活细胞数越多，样品中的琥珀酸四唑盐还原酶活性就越强，生成的formazan dye就越多，生成的formazan dye数量与活细胞数成线性正比关系。使用本制品检测时，无需洗涤细胞和使用放射性同位素，从微量培养开始，即可使用酶标仪在同一个微孔板上测定其光吸收值。本制品通过检测细胞活力，可以用于药物敏感性分析和药物筛选。

■ 保存

-20℃避光保存。

■ 特点

◇ 无需使用放射性同位素。
◇ 无需使用有机溶剂来溶解反应生成的formazan dye。
◇ 吸光度值与活细胞数成线性正比关系。
◇ 与MTT法相比，灵敏度更高。
◇ 可在同一个微孔板上进行不同反应时间的结果测定。

■ 用途

◇ 检测生长因子、cytokines、mitogens、nutrients等细胞增殖能力的影响。

◇ 分析抗癌药等具有细胞毒性和抑制细胞生长的化合物。

◇ 评估具有抑制细胞生长作用的抗体与生理介质。

页面更新：2020-12-09 15:03:16

Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System酶试剂盒Takara

发表于2024年2月23日由whatman中国官网

Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	MK400	Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System	2500 Tests	￥3,405

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■ 制品内容

Premix WST-1

25 ml

■ 制品说明

■ 保存

-20℃避光保存。

■ 特点

■ 用途

◇ 检测生长因子、cytokines、mitogens、nutrients等细胞增殖能力的影响。

◇ 分析抗癌药等具有细胞毒性和抑制细胞生长的化合物。

◇ 评估具有抑制细胞生长作用的抗体与生理介质。

页面更新：2019-08-16 13:32:01

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