Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

生細胞測定 Cell Counting Kit-8と、死細胞測定 Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (各500 tests) のセット

製品コード

CK17　 Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
500 tests	￥33,900	346-09271

キット内容

500 tests	Cell Counting Kit-8 [500 回用] ・WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液 Cytotoxicity lDH Assay Kit-WST [500 tests] ・Dye Mixture　　　　　・Assay Buffer ・lysis Buffer ・Stop Solution	5ml x1 x1 55 ml x1 5.5 ml x1 27.5 ml x1

500 tests

Cell Counting Kit-8
[500 回用]
・WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液

Cytotoxicity lDH Assay Kit-WST
[500 tests]
・Dye Mixture　　　　　
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution

5ml x1

x1
55 ml x1
5.5 ml x1
27.5 ml x1

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
プロトコル生細胞数を測りたい(吸光測定)

技術情報

2つの指標で評価する理由

細胞傷害性を確認する際、生細胞のみ又は死細胞のみを指標とした評価では、データの信頼性が十分でない場合もあることから、測定原理の異なる複数の指標で評価することで実験の裏付けを行うケースが増えています。

1つの指標（生細胞）だけでの評価では…
生細胞：代謝活性（CCK-8、MTT、MTS、XTT等）

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

2つの指標（生細胞と死細胞）で評価すると…
生細胞：代謝活性（CCK-8、MTT、MTS、XTT等）
死細胞：細胞膜損傷（LDH Assay Kit）
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
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バイオフィルム薬剤効果測定キット Biofilm Viability Assay Kit 同仁化学研究所

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Biofilm Viability Assay Kit

06 細菌研究用試薬

Biofilm Viability Assay Kit

細菌研究用試薬
食品機能評価
バイオフィルム

バイオフィルム薬剤効果測定キット

バイオフィルム内微生物の生存率や活性度合を確認できる
測定の手間を大幅に低減
バラツキを抑えることが可能

製品コード

B603　 Biofilm Viability Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
96 tests	￥20,000	347-09583

「試験片用バイオフィルム形成能測定キット」をラインナップ！

・独自開発の蓋(TestPiece Holder)で、任意の素材をを簡便に測定できます

キット内容

96 tests	・WST Solution ・Electron Mediator Reagent ・96-peg lid ・96-well Plate	1 ml×1 0.12 ml×1 ×1 ×10

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual Engllish

Biofilm Viability Assay Kitの特長と操作

技術情報

測定原理

本キットはバイオフィルム内の生菌の代謝活性を測定することで、バイオフィルム内微生物に対する薬剤効果を確認するキットです。エネルギー代謝活動に関与する補酵素であるNADH（NADPH）は電子メディエーターを介してWSTを有色のformazanへと還元します。この還元能を利用することで微生物の代謝活性を検出します。

参考文献

参考文献を表示する

1) 古畑勝則, "Legionella pneumophilaの実験的バイオフィルム形成条件の検討", Bacterial adherence & Biofilm., 2019, 33, 39-42.

2) Y. Sato, T. Ubagai, S. T.-Nagakawa, Y. Yoshino, Y. Ono, "Effects of colistin and tigecycline on multidrug-resistant Acinetobacter baumannii biofilms: advantages and disadvantages of their combination", Sci. Rep.., 2021, 11, 11700. doi:10.1038/s41598-021-90732-3.

よくある質問

Q 発色試薬添加後のインキュベートはどのくらい行えばいいですか？: A

微生物種や代謝活性により、発色に要する時間は異なります。
初回は一定時間ごとに吸光度を確認しながら、24時間ほどインキュベートされる事をお勧めします。
取扱説明書の図2および図3にS.aureus、S.mutansを用いた実験例を掲載してます、ご参照ください。

Q 450 nm以外のフィルターで測定することは可能ですか？: A

440～480 nmの範囲に入るフィルターをご利用いただけます。

Q バイオフィルムの形成阻害や薬剤効果を評価するには、どの程度のバイオフィルム形成量が必要ですか？: A

Biofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）を利用した場合、測定手順の最後に得られるクリスタルバイオレット(CV)溶液の吸光度として、0.5以上(590 nm)を目安としております。

Q どのような菌種での測定実績がありますか？: A

小社ではBiofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）ならびにBiofilm Viability Assay Kit（本製品）を用いたバイオフィルムの評価において、以下の菌種での評価実績がございます。
　・Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）
　・Pseudomonas aeruginosa（緑膿菌）
　・Escherichia coli（大腸菌）
　・Streptococcus mutans（虫歯の原因菌のひとつ）
　・Porphyromonas gingivalis（歯周病の代表的な原因細菌）

上記の細菌を用いた実験例や培養条件等は、取扱説明書をご参照ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
危険・有害シンボルマーク

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微生物増殖アッセイキット Microbial Viability Assay Kit-WST 同仁化学研究所

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Microbial Viability Assay Kit-WST

06 細菌研究用試薬

Microbial Viability Assay Kit-WST

細菌研究用試薬

微生物増殖アッセイキット

寒天培地法や微量液体希釈法に比べ短時間での検出が可能である
マイクロプレートを使った多検体処理が可能である
培地成分による影響を受けにくい製品である

製品コード

M439　 Microbial Viability Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥6,800	348-08913
500 tests	￥24,200	342-08911

キット内容

100 tests	・WST Solution ・Electron Mediator Reagent (DMSO Solution)	1 ml×1 0.1 ml×1
500 tests	・WST Solution ・Electron Mediator Reagent (DMSO Solution)	1 ml×5 0.5 ml×1

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
プロトコル生菌の代謝活性を測定したい

技術情報

技術情報の目次

評価にかかる時間を大幅に短縮することが可能
わかりにくい濁度から見やすい色の変化へ
抗菌性試験での従来法(Spot-on-lawn法)との相関
発色原理
測定実績のある微生物

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	＜真菌（酵母）＞・Candida albicans JCM 1542	A. Azuma, N. Akiba and S. Minakuchi, "Hydrophilic surface modification of acrylic denture base material by silica coating and its influence on Candida albicans adherence", J. Med. Dent. Sci.., 2012, 59, (1), 1-7.
2)	＜グラム陰性菌＞・Escherichia coli BW25113	H. Y. Oh, J. O. Lee and O. B. Kim, "Increase of organic solvent tolerance of Escherichia coli by the deletion of two regulator genes, fadR and marR", Appl. Microbiol. Biotechnol.., 2012, 96, (6), 1619-27.
3)	＜グラム陰性菌＞・Escherichia coli K-12	T. Nakayashiki, N. Saito, R. Takeuchi, H. Kadokura, K. Nakahigashi, B. L. Wanner and H. Mori, "The tRNA thiolation pathway modulates the intracellular redox state in Escherichia coli", J. Bacteriol.., 2013, 195, (9), 2039-49.
4)	＜グラム陽性菌＞・Streptococcus mutans UA 159 ＜グラム陰性菌＞・Escherichia coli 1.1369	S. He, P. Zhou, L. Wang, X. Xiong, Y. Zhang, Y. Deng and S. Wei, "Antibiotic-decorated titanium with enhanced antibacterial activity through adhesive polydopamine for dental/bone implant", J. R. Soc. Interface., 2014, 11, (95).
5)	＜真菌（カビ）＞・Trichophyton rubrum NBRC 5807	K. Z. Hein, H. Takahashi, T. Tsumori, Y. Yasui, Y. Nanjoh, T. Toga, Z. Wu, J. Grötzinger, S. Jung, J. Wehkamp, B. O. Schroeder, J. M. Schroeder and E. Morita, "Disulphide-reduced psoriasin is a human apoptosis-inducing broad-spectrum fungicide", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.., 2015, 112, (42), 13039-44.
6)	＜真菌（カビ）＞・Trichophyton rubrum	S. Arai, T. Yoshino, T. Fujimura, S. Maruyama, T. Nakano, A. Mukuno, N. Sato and K. Katsuoka, "Mycostatic effect of recombinant dermcidin against Trichophyton rubrum and reduced dermcidin expression in the sweat of tinea pedis patients", J. Dermatol.., 2015, 42, (1), 70-6.
7)	＜グラム陽性菌＞・Staphylococcus aureus NBRC13276 ＜グラム陰性菌＞・Pseudomonas aeruginosa NBRC13275	T. Tsukatani, T. Kawaguchi, H. Suenaga, M. Shiga and T. Ikegami, "RAPID AND SIMPLE DETERMINATION OF MINIMUM BIOFILM ERADICATION CONCENTRATION BY A COLORIMETRIC MICROBIAL VIABILITY ASSAY BASED ON REDUCTION OF A WATER-TETRAZOLIUM SALT AND COMBINATED EFFECT OF ANTIBIOTICS AGAINST MICROBIAL BIOFILM", J Microbiol Biotechnol Food Sci.., 2016, 6, (1), 677.
8)	＜グラム陽性菌＞・Streptococcus mutans NCTC 10449	M. Hashimoto, H. Yanagiuchi, H. Kitagawa and Y. Honda, "Inhibitory Effect of Platinum Nanoparticles on Biofilm Formation of Oral Bacteria", Nano Biomed., 2017, 9, (2), 77-82.
9)	＜グラム陽性菌＞・Enterococcus faecalis FSCC 146002 ・Staphylococcus aureus ATCC 25923 ・Staphylococcus epidermidis FSCC 223011 ＜グラム陰性菌＞・Acinetobacter baumannii ATCC 19606 ・Enterobacter cloacae FSCC 145003 ・Escherichia coli ATCC 25922 ・Klebsiella pneumoniae FSCC 167002 ・Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ・Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331	Z. Xu, X. Zhao, X. Chen, Z. Chen and Z. Xia, "Antimicrobial effect of gallium nitrate against bacteria encountered in burn wound infections", RSC Adv.., 2017, 7, 52266-52273.
10)	＜真菌（酵母）＞・Candida albicans SC5314	J. Nagao, T. Cho, M. Mitarai, K. Iohara, K. Hayama, S. Abe and Y. Tanaka, "Antifungal activity in vitro and in vivo of a salmon protamine peptide and its derived cyclic peptide against Candida albicans", FEMS Yeast Res.., 2017, 17, (1).
11)	＜真菌（カビ）＞・Trichosporon asahii M9459 ・Trichosporon asahii M9925	T. Ichikawa, C. Hirata, M. Takei, N. Tagami, H. Murasawa and R. Ikeda, "Cell surface hydrophobicity and colony morphology of Trichosporon asahii clinical isolates", Yeast., 2017, 34, (3), 129-137.
12)	・土壌微生物	M. Kamitakahara, S. Takahashi, T. Yokoi, C. Inoue and K. Ioku, "Preparation of spherical porous hydroxyapatite granules as support materials for microorganisms", JCS Japan., 2018, 126, (9), 732-735.
13)	＜グラム陽性菌＞・Staphylococcus epidermidis ATCC 14990	F. Boschetto, T. Adachi, S. Horiguchi, D. Fainozzi, F. Parmigiani, E. Marin, W. Zhu, B. McEntire, T. Yamamoto, N. Kanamura, O. Mazda, E. Ohgitani and G. Pezzotti, "Monitoring metabolic reactions in Staphylococcus epidermidis exposed to silicon nitride using in situ time-lapse Raman spectroscopy", J Biomed Opt.., 2018,(5), 1-10.
14)	＜グラム陰性菌＞・Campylobacter concisus ATCC 33237 ・Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum JCM 12990	T. Nambu, D. Wang, C. Mashimo, H. Maruyama, K. Kashiwagi, K. Yoshikawa, K. Yamamoto and T. Okinaga, "Nitric Oxide Donor Modulates a Multispecies Oral Bacterial Community-An In Vitro Study", Microorganisms., 2019, 7, (9), 353.
15)	・Staphylococcus aures	S. Zhang, X. Qu, J. Jiao, H. Tang, M. Wang. Y. Wang, H. Yang, W. Yuan and B. Yue, "Felodipine enhances aminoglycosides efficacy against implant infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus, persisters and biofilms", Bioact. Mater., 2021, doi: 10.1016/j.bioactmat.2021.11.019.

よくある質問

Q 1cmや0.25cmのセルを使って測定できますか？: A

基本的には測定は可能です。
但し、96ウエルマイクロプレートと比較して、発色試薬量を多く必要としますので、実際に測定可能な検体数が減少します。

Q 糸状菌での使用実績はありますか？: A

Aspergillus属の麹菌を使用した実績があります。

Q 菌の増殖試験を行う場合、インキュベート時間はどれくらい行えばよいでしょうか？: A

微生物種(菌)の細胞密度により、インキュベート時間が異なります。
例えば、細胞密度が1×10⁶ CFU/mLで、約6時間後にコンフルエントに達する場合、2～5.5時間の間でインキュベートすることで、菌数を確認することができます。

Q 偏性嫌気性菌の測定は可能ですか？: A

偏性嫌気性菌は、酸素に暴露することで死滅し、十分な発色が得られないため測定できません。

Q 微生物の測定実績を教えて下さい。

  本製品ページの「技術情報」に微生物の測定実績を記載しております。  「測定実績のある微生物」の表をご参照ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
危険・有害シンボルマーク

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DAPI/PI で菌を二重染色 -Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI 同仁化学研究所

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–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI

細菌研究用試薬

DAPI/PI で菌を二重染色

蛍光二重染色に最適化した試薬を添加するだけのプロトコル
複数の指標で薬剤効果や菌の状態を評価できる
培養法と比較して評価にかかる時間を大幅に短縮できる

製品コード

BS08　 –Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥21,400	341-09721

＜使用回数の目安＞ 1 set あたり、約 100 検体分

キット内容

1 set	DAPI Solution PI Solution	25 μl × 4 25 μl × 4

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

蛍光染色例

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – DAPI/PI、CTC/DAPI、CFDA/PI を用いて、S. aureus（グラム陽性菌）ならびに E. coli（グラム陰性菌）をイメージングしました。

S. aureus（グラム陽性菌）の染色例

E. coli（グラム陰性菌）の染色例

よくある質問

Q Bacterial Viability Detection Kitで使用している染色試薬の蛍光特性を教えてください。

蛍光特性とその性質は以下の表をご参照ください。

なお、小社では共焦点蛍光顕微鏡と落射蛍光顕微鏡で観察した実績があります。

色素名	極大励起波長/極大蛍光波長	励起フィルター（推奨）	備考
DAPI	360 nm / 460 nm	UV 励起	膜損傷の有無に関わらず細胞内に透過し、核酸を染色する。
PI	530 nm / 620 nm	G 励起	膜損傷を有する細胞内にのみ透過し、核酸を染色する。
CTC	430, 480 nm / 630 nm	Bもしくは G 励起	呼吸活性により還元され赤色蛍光色素 (CTC formazan) を生成する。
CFDA	493 nm / 515 nm	B 励起	エステラーゼにより加水分解され緑色蛍光色素 (carboxy-fluorescin) を生成する。

Q グラム陽性菌やグラム陰性菌で染色に違いはありますか？

各色素の特徴として、以下が挙げられます。

DAPI：	グラム陰性菌では染まりにくい場合があります。
CTC：	グラム陽性、陰性に関わらず、CTCのみでは染まりにくい傾向がありますが、-Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI（BS09）に付属するEnhancing Reagentを使用することで染色能が向上します。
CFDA：	一般的にグラム陰性菌では染まりにくい傾向がございますが、本製品のプロトコルに記載しています、0.1mol/lリン酸バッファーを使用することで染色能が向上します。

Q 染色前に細菌を洗浄する必要はありますか？: A

細菌は染色前に洗浄する必要があります。

細菌を洗浄しない場合、DAPIやPIでは菌体外に存在する核酸を染色したり、CTCやCFDAでは培地成分の影響で蛍光を示すことでバックグラウンド上昇の原因となる可能性があります。

Q 細胞懸濁液や染色後の洗浄には何を使用すれば良いですか？: A

滅菌したPBSや生理食塩水が使用できます。

Q 蛍光が弱い場合の対処方法を教えてください。: A

試薬の添加量を増やすか（試薬濃度を上げる）、インキュベート時間を長くすることをご検討ください。

Q 二重染色後に菌を固定化することはできますか？: A

可能です。小社では二重染色後に終濃度4％のホルムアルデヒドで菌を固定化した実績があります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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CTC/DAPI で菌を二重染色 -Bacstain- Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI 同仁化学研究所

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–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

06 細菌研究用試薬

–Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

細菌研究用試薬

CTC/DAPI で菌を二重染色

蛍光二重染色に最適化した試薬を添加するだけのプロトコル
複数の指標で薬剤効果や菌の状態を評価できる
培養法と比較して評価にかかる時間を大幅に短縮できる

製品コード

BS09　 –Bacstain– Bacterial Viability Detection Kit – CTC/DAPI

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥38,500	348-09731

キット内容

1 set	CTC DAPI Solution Enhancing Reagent	10 mg × 4 25 μl × 4 700 μl × 1

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取扱説明書日本語
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