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日本同仁化学脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07- DOJINDO

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脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07
脂肪酸摄取测定试剂盒
Fatty Acid Uptake Assay Kit
商品信息
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特点：

 

● 灵敏度高，操作简便

● 操作简单三步即可完成实验

● 无需清洗细胞

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脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

产品解说
试剂盒内含
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检测产品优势
选择指南
产品Q&A

产品解说

 

试剂盒内含

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

产品概述

该试剂盒使用Fatty Acid Uptake Probe作为脂肪酸类似物，通过位于细胞膜表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞，可以通过荧光显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪等荧光测量方法检测细胞的摄取能力。此外，该试剂盒配备了Quenching Buffer，可消除未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe的荧光，因此无需清洗细胞也可以检测。

检测产品优势

 

为什么脂肪酸摄取能力越来越受到关注？

脂肪酸是为生物体供应能量的重要物质。脂肪酸摄取能力不仅与肥胖和糖尿病等疾病有关，也是癌细胞的代谢指标之一（左下图）。细胞增殖活跃的癌细胞往往需要很多脂质，所以细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取很活跃（右下图）。因此，以癌细胞的脂肪酸代谢途径为目标，开发了很多药物。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

用单个试剂盒即可解决整个脂肪酸摄取实验！

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

本试剂盒所内含的脂肪酸类似物通过脂肪酸转运体被转运至细胞内，再通过荧光探针（荧光法）检测该类似物的摄入量【检测原理】。Quenching buffer可以省去清洗操作的麻烦和时间成本，进行检测【操作步骤】。

检测原理

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

操作步骤

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

检测仪器

HepG2细胞通过添加脂肪酸转运蛋白抑制剂CB-2，在不同仪器中检测其脂肪酸摄取能力的变化。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

选择指南

Washing Buffer或Quenching Buffer的选择指南

请参考下表，根据细胞种类和实验系统（操作和测量装置）选择Washing Buffer或Quenching Buffer。

〇：可测量、×：不可测量、△：参考注释

Washing Buffer (10×) Quenching Buffer
贴壁细胞 悬浮细胞 贴壁细胞 悬浮细胞
清洗操作 必要 不需要
荧光酶标仪 底部读数（透明底） 〇 〇 △※1
顶部读数 〇 ×
荧光显微镜 〇 〇
激光共聚焦显微镜 〇 △※2
流式细胞仪 〇 ×

※1接种的细胞需要覆盖板底（大约：3x105cells/well），使之静置一段时间，从而可检测在板底的贴壁细胞。

※2使用激光共聚焦显微镜时，请将Quenching Buffer用Washing Buffer稀释10倍后使用,如果不能使用ex:488nm,请使用ex:640nm进行检测。

实验例

确认细胞中脂肪酸代谢状态

在A549细胞中添加不含葡萄糖或含有25mmol/l葡萄糖的DMEM培养基，制备了正常状态（control）和饥饿状态（Starved）的两组细胞。使用本试剂盒对两组细胞进行染色，并使用荧光显微镜观察。

结果显示，在对照组细胞中，荧光素大多聚集在脂肪滴中，而在饥饿状态的细胞中荧光素主要集中在线粒体和内质网上。由此可看出在饥饿状态下的细胞脂肪酸代谢的变化。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

对照组细胞和饥饿组细胞的荧光图

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

*供参考的可检测数：35 mm dish 10块、 96孔板 1 块

产品Q&A

Q: 可用于哪些种类的细胞
A：在下述细胞中有使用实例。

 

细胞 由来
A549 人肺泡基底上皮腺癌细胞
HepG2 人肝癌细胞
HeLa 人宫颈癌细胞
Jurkat 人白血病T细胞
MOLT-4 人急性淋巴白血病细胞
3T3-L1 (preadipocyte) 前脂肪細胞
3T3-L1 (adipocyte) 脂肪細胞

 

Q: 将Fatty Acid Uptake Probe孵育进活细胞后，可以固定细胞吗？
A：<实验例>使用4%PFA固定染色后的细胞实验案例

Protocol:贴壁细胞

1.     将制备好的细胞接种在培养皿或96孔板上；

2.     用无血清培养基洗涤两次；

3.     加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO2存在下）中静置孵育15 min;

4.     去除上清液，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃、5%CO2存在下）中静置15 min；

5.     去除上清液，用Washing Buffer solution清洗1次；

6.     向细胞中加入4%PFA/PBS并在室温下孵育5 min；

7.     用PBS洗涤细胞3次，用荧光显微镜检测，荧光酶标仪检测。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

※固定会降低荧光强度

悬浮细胞

1.      取细胞样品至微管中；

2.      300×g离心5min，去除上清液;

3.      加入无血清培养基，300×g离心5min，去除上清液,重复两次;

4.      加入无血清培养基，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min；

5.      300×g离心5 min，去除上清液;

6.      加入Fatty Acid Uptake Probe working solution，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min ；

7.      300×g离心5min，去除上清液;

8.      用Washing Buffer solution清洗一次；

9.      加入4%PFA/PBS，混匀细胞，在室温下孵育5 min;

10.    300×g离心5 min，去除上清液;

11.    加入PBS，混匀细胞,300×g离心5 min，去除上清液；重复两次。

12.    用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07
Q: 用荧光酶标仪检测时，应该用哪种板子？
A: 检测荧光，请使用细胞培养用的黑色孔板。

〇：可使用、×：不可使用、△：参考注释

 

贴壁细胞 悬浮细胞
不透明底 透明底 不透明底 透明底
Washing Buffer (10×) Top Reading 〇 〇
Bottom Reading × 〇 × 〇
Quenching Buffer Top Reading × ×
Bottom Reading × 〇 × △※

※接种的细胞需要覆盖板底，使之静置一段时间，从而可检测在板底的贴壁细胞。

〈使用Quenching Buffer时，悬浮细胞的数据〉

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

实验案例使用孔板：

 

厂家 产品名 Cat No.
ibidi µPlate 96 well   ibiTreat black S 15 ib89626
Thermo   Fisher 96 Well Black/Clear   Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

 

Q: Fatty Acid Uptake Probe working solution可以保存吗？
A：无法保存。
Q：背景较高怎么办？
A：样品中可能存在未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe。可重复使用Washing Buffer solution清洗，或者考虑使用Quenching Buffer。
Q：试剂盒可检测的样品数量是多少？
A：请参照下表。

 

贴壁细胞 悬浮细胞
培养皿

（添加量）

 6   well

(1.5   ml/well)

 24-well

(0.3   ml/well)

 

 96-well

(0.1   ml/well)

 

 35-mm   dish

(1.5   ml/well)

 

 1.5-ml   microtube

(0.5   ml/tube)

 
样本数 7   sample 34   sample 100   sample 7   sample 20   sample

 

Q：使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测，应该怎么做？
A：使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测时，请将Quenching Buffer用Washing Buffer solution稀释10倍后使用，或者使用640nm激发光检测。

<用用激光共焦显微镜进行透射光观察时所看到的现象>

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07
Q：可以进行脂肪酸定量吗？
A：不能使用本产品定量脂肪酸。
Q：可以量化细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe吗？
A：无法定量细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe。该试剂是为了确认脂肪酸摄取能力的增减的配合用试剂。
Q：可以和其他荧光染料共染吗？
A：Fatty Acid Uptake Probe是使用红色荧光观察。因此，请使用绿色或者红色荧光检测以外的试剂进行共染色。

与本公司线粒体染色试剂MitoBright LT Deep Red（MT12）共染色的实绩。

〈进入红色荧光〉

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

〈与MitoBright LT Deep Red共染色〉

1. 制备细胞样品接种到培养皿或者孔板中；

2.去除培养基，用无血清培养基洗涤两次；

3.加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min；

4.去除上清液后，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min；

5. 去除上清液后，添加0.1µmol/l MitoBright LT working solution，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置30 min；

6. 去除上清液后，用HBSS洗涤两次；

7.加入HBSS并用荧光显微镜观察。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07
Q: 荧光显微镜观察时有什么注意事项吗？
A：荧光显微镜观察时，如果持续照射激发光，Fatty Acid Uptake Probe的荧光可能会淬灭。请控制连续的激发光的照射次数。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

日本同仁化学氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04- DOJINDO

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氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04
氨基酸摄取能力检测试剂盒
Amino Acid Uptake Assay Kit
商品信息
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运输条件：室温

特点：

 

● 使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测

● 简便操作即可检测氨基酸摄取能力

※注意：您选择的孔板类型会对实验结果产生重大影响。并非所有孔板都与本检测方法兼容。 

您可以下拉参考网站“常见问题Q&A”，查看推荐的孔板及其对检测结果的影响。

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氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

产品解说
规格性状
产品概述
运用领域
操作步骤
实验例
与传统方法比较
关联产品
常见问题Q&A
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规格性状

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

产品概述

氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。

在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。

氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。

运用领域

抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

操作步骤

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

实验例

使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

＜检测条件＞

细胞：HeLa cells

培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）

培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min

检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)

检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

<检测条件>

检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)

与传统方法比较

与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

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产品名 包装 价格 货号
 Glucose Uptake Assay Kit-Blue 1 set 3,980 UP01
    Glucose Uptake Assay Kit-Green 1 set 3,980 UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red 1 set 3,980 UP03

常见问题Q&A

 

Q：推荐什么类型的微孔板？
A：我们推荐以下几种微孔板

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

微孔板的类型对检测结果有何影响，请参考【Q&A:微孔板的类型会影响结果吗？】获取更多信息。

 

Q：微孔板的类型会影响结果吗？
A：是的。并非所有微孔板都与该测定兼容，有些微孔板可能无法进行某些测量（参见参考数据）。

建议使用以下板检测

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

<参考：微孔板之间的比较>

使用Ibidi板和其他制造商的微孔板，我们研究了HeLa细胞在氨基酸转运蛋白抑制剂BCH（2-氨基双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸）存在下摄取氨基酸的能力。然而，我们无法确认BCH对吸收的抑制，因为与推荐的Ibidi板相比，在其他制造商的微孔板中观察到更高的背景。

荧光显微镜观察

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

荧光酶标仪检测结果

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

 

 

Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？
A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。

 

 

 

Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？
A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。

 

Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？
A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。
Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？
A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。

 

Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？
A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。

 

Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？
A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。
Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？
A：主要可能的原因有以下两点：      ①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution

的浓度。(5~50倍稀释)

②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。
Q：如果荧光背景较高， 我该怎么办？
A： 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。
Q：BPA是否可以定量检测？
A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

产品文献

1、T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, “Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy”, 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.

2、Wencan Zhang，Xu Cao，Xiancai Zhong，Hongmin Wu，Yun Shi，Mingye Feng，Yi-Chang Wang， David Ann，Yousang Gwack，Yate-Ching Yuan，Weirong Shang ，and Zuoming Sun，”SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated up-regulation of amino acid transporter Slc7a5″，2023，PNAS【11.1】，doi：10.1073/pnas.2221352120.

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日本同仁化学胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05- DOJINDO

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胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05
胱氨酸摄取能力检测试剂盒
Cystine Uptake Assay Kit
商品信息
储存条件：-20度保存
运输条件：常温

特点：

 

● 可用荧光酶标仪高通量筛选

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20tests
100tests

现货

 

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05
胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05

产品概述
检测原理
检测实例
与传统方法比较
常见问题Q&A
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产品概述

胱氨酸(Cystine)是抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)的来源，在细胞内的氧化还原平衡中发挥着重要的作用。在癌症研究领域，Sulfasalazine、Erastin等xCT(胱氨酸/谷氨酸反向转运体)抑制剂可以改变细胞内的氧化应激平衡，进而引发细胞死之一的铁死亡。而在免疫研究领域，据报道，巨噬细胞和中性粒细胞在免疫刺激剂的作用下，xCT的表达会增高并增加细胞内的GSH水平，以平衡自身出于攻击癌细胞目的所释放的ROS。因此，无论是对癌细胞的研究还是免疫细胞的研究都离不开胱氨酸摄取能力这一重要指标。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05

检测原理

试剂盒内含的胱氨酸类似物(Cystine Analog, CA)与胱氨酸一样可以通过xCT的转运进入细胞内。细胞裂解后通过添加Reducing Agent还原CA并与检测试剂FOdA特异性反应，生成可产生荧光的物质。[专利申请中]

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05

检测实例

xCT抑制剂Sulfasalazine, Erastin的抑制效果评价

使用本试剂盒对xCT抑制剂Sulfasalazine和Erastin的抑制效果进行评价。荧光结果显示，两种抑制剂均对胱氨酸的摄取有明显的抑制作用。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05

与传统方法比较

以往在胱氨酸摄取检测时一般采用同位素示踪法，下面是本试剂盒与同位素示踪法结果的比较。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05

常见问题Q&A

Q1：胱氨酸类似物(CA)具体是通过哪种转运体进入细胞内的？
A1：Cystine Analog是通过胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)进入细胞内的。
Q2：目前有检测实绩的细胞有哪些？
A2：下列细胞都有检测实绩：人胶质母细胞瘤细胞, A172

人类肺泡基底上皮细胞, A549

人恶性黑色素瘤细胞, A375

人结肠癌细胞, HCT116

人肝癌细胞, HepG2

人早幼粒白血病, HL60

人纤维肉瘤细胞, HT1080

小鼠胚胎成纤维细胞, MEF

人小细胞肺癌细胞, SBC-5

人胶质瘤细胞, U-251 MG
Q3：胱氨酸类似物(CA)进入细胞后会被分解、代谢掉吗？
A3：胱氨酸类似物(CA)的构造非常稳定，实验范围内的操作不会被分解或代谢。
Q4：可以用这个试剂盒进行定量检测胱氨酸吗？
A4：本试剂盒不是胱氨酸定量检测试剂盒。
Q5：可以用这个试剂盒对进入细胞内的胱氨酸定量检测吗？
A5：不能定量检测进入细胞内的胱氨酸，本试剂盒是针对细胞摄取胱氨酸能力的数值化检测试剂盒。
Q6：样品间荧光几乎无差异时，应该如何确认改善？
A6：请检查以下五点。

1. 细胞数量发生变化。

根据细胞数或蛋白质浓度校正测量值（荧光强度）。

更多信息，请参阅常见问题9

2.胱氨酸类似物尚未完全融入细胞。

请按以下目的对说明书中各操作时间进行调整

. 在无胱氨酸培养基中培养的时间（贴壁细胞操作 3，悬浮细胞操作 4）：5 – 30 分钟。

. 胱氨酸类似物吸收时间（贴壁细胞操作 4，悬浮细胞操作 5）：30 – 60 分钟。

3.未被细胞吸收的胱氨酸类似物残留在孔中，导致本底升高。

用 PBS 重复清洗（贴壁细胞：操作 5，悬浮细胞：操作 6）。

4.工作溶液降解，背景升高。

配置工作液一段时间后，工作液中的荧光染料可能会被降解，荧光强度可能会增加。

配置工作液后不要等待太长时间。

5.细胞类型的影响

不同类型的细胞对胱氨酸的吸收能力大不相同，吸收能力低的细胞本底可能相对较高。 下图显示了不同癌细胞对胱氨酸吸收能力的差异。 如果无法通过上述措施解决本底问题，我们建议您首先考虑常见问题中列出的经过验证的细胞类型。

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号：UP05
Q7：配制CA Uptake solution时，除了不含胱氨酸的无血清培养基以外，还可以使用哪些Buffer？
A7：检测HeLa细胞时，有过使用HBSS或含有0.1% Glucose PBS（+）进行配制的成功实例。

 

Q8：如何根据细胞数量或蛋白质浓度对测量值（荧光强度）进行校正？
A8：我司推荐使用下表所列的方法。 由于校正方法和时间因使用的细胞（贴壁细胞和悬浮细胞）会有所不同，请参考下表校正【使用 UP05 测量的值】。

 

 

细胞 贴壁细胞 悬浮细胞
校正方法 核染色(荧光法) 蛋白质定量: BCA法 (比色法)
产品 Cell Count Normalization Kit

【Code:C544】

 Sodium bicinchoninate【Code:B037】
校正进行时间 操作说明书在对贴壁细胞进行实验步骤操作10(测量UP05)后使用该溶液 操作说明书在对悬浮细胞进行实验步骤操作9使用剩余的液体进行检测
校正操作步骤 参考Cell count Normalization KitCode:C544]的说明书中[更换培养基方法] 请参考UP05操作说明书中的以下实验例。(XCT 抑制剂Erastin 对胱氨酸转运体活性的抑制(悬浮细胞:HL60)

 

用【UP05 测量值】与【校正方法测量值】计算修正后的荧光强度。

校正荧光强度 = 【UP05 测量值】/【校正方法测量值】。

*【UP05 测量值】 = （样品孔测量值）- （空白孔测量值）

*【校正法测量值】=（样品孔测量值）-（无细胞孔测量值）

Q9：一般使用哪种孔板比较好？
A9：

下列厂家得孔板有过检测实绩：

 

公司名/ 产品名/ 货号

Ibidi/ μPlate 96 well ibiTreat black S 15/ Ib89626

AGC techno glass/ EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well/ 5866-096

Thermo Fisher/ 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10/ 165305
Q10：Cystine uptake solution可以长期保存吗？
A10：CA Uptake solution无法长期保存，请提前计算好用量，务必现用现配。

关联产品

产品名 包装 价格 货号
 Glucose Uptake Assay Kit-Blue 1 set 3,980 UP01
    Glucose Uptake Assay Kit-Green 1 set 3,980 UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red 1 set 3,980 UP03

相关文献

1、K. Hayashima, H. Katoh, “Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis”, J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.

2、H. Chen, L. Cao, K. Han, H. Zhang, J. Cui, X. Ma, S. Zhao, C. Zhao, S. Yin, L. Fan, H. Hu, “Patulin disrupts SLC7A11-cystine-cysteine-GSH antioxidant system and promotes renal cell ferroptosis both in vitro and in vivo”, 2022, Food Chem. Toxicol., doi: 10.1016/j.fct.2022.113255.

3、X. Hu, Y. He, Z. Han, W. Liu, D. Liu, X. Zhang, L. Chen, L. Qi, L. Chen, Y. Luo, Q. Li, P. Chen, Q. Wu, X. Zhu and H. Guo, “PNO1 inhibits autophagy-mediated ferroptosis by GSH metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma “, 2022, Cell Death Dis., doi:10.1038/s41419-022-05448-7.

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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所Glucose Uptake Assay Kit-Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットBlue

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • 蛍光顕微鏡やフローサイトメーターで測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP01　 Glucose Uptake Assay Kit-Blue
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set ￥42,800 342-09871

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Blue
WI Solution (50×)		 ×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

技術情報

既存法よりココが良い！4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Blueは青色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Blueはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト肝癌由来細胞 HepG2
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞 3LL
T細胞 CD4+ T cell
Q

阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

Q

グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？

A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

 

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO2
   インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。 
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

 

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

Q

Glucose Uptake Probe-Blueは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Blueを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

Probe solutionは保存可能でしょうか？

A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を一度行ってください。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？

A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？

A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか？

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

Q

グルコースの定量はできますか？

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所 グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットRed

    Glucose Uptake Assay Kit-Red

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

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上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所Glucose Uptake Assay Kit-Green

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Green

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットGreen

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • プレートリーダーを用いて測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP02　 Glucose Uptake Assay Kit-Green
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set ￥40,700 347-09821

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well plate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Green
WI Solution (50×)		 ×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

高輝度の色素を採用したことにより、既存法(2-NBDG)よりも高感度かつ短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

 

No. Sample Publication
1) 細胞
(HeLa)		 W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
2) 菌
(B. licheniformis; P. stutzeri)		 M. Jiang, Q. Li, S. Hu, P. He, Y. Chen, D. Cai, Y. Wu, S. Chen, "Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin", 2022, doi:10.1016/j.cej.2022.134686.
3) 細胞
(分化した3T3-L1脂肪細胞)		 Y. Liu, Y. Le, M. Xu, W. Wang, H. Chen, Q. Zhang, C. Wang, " Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes", Environ. Pollut., 2022, doi:10.1016/j.envpol.2022.119287.

 

 

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Greenはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト肝癌由来細胞 HepG2
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1)
悪性黒色腫 MO5
マウス筋芽細胞(未分化) C2C12
マウス筋管 C2C12
アストロサイト―マ U-251 MG
ヒト子宮頸癌由来細胞 HeLa
ルイス肺がん由来細胞 3LL
T細胞 CD4+ T cell
マウスマクロファージ様株化細胞 J774.1
線虫 N2

 

Q

阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

Q

グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？

A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。下記例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、
   5% CO2 インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。 
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

Q

Glucose Uptake Probe-Greenは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Greenを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q

Probe working solutionは保存可能でしょうか？

A

Probe working solutionは保存できません。Probe stock solutionは冷凍保存が一か月間可能です。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？

A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。マニュアルの洗浄操作6-7を繰り返してください。

Q

Glucose Uptake Probe-Greenに細胞毒性はありますか？

A

弊社製品のCell Counting Kit-8 (CK04)を用いてA549細胞におけるプローブの細胞毒性を調査した結果、細胞毒性は確認されませんでした。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？

A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか？

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか？

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所 グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

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    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    α-ケトグルタル酸測定キット

    α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所Glucose Uptake Assay Kit-Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Red

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

グルコース取り込み検出キットRed

  • グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • プレートリーダーやフローサイトメーターでも測定が可能
  • 取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる
  • 製品コード
    UP03　 Glucose Uptake Assay Kit-Red
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 set ￥42,800 349-09881

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容
1 set Glucose Uptake Probe-Red
WI Solution (50×)		 ×1
5 ml ×1

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所
試験成績書

SDSダウンロード

  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 日本語
    グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所
  • Manual English
    グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

Glucose Uptake Probe-Redは赤色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。
また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

 

No. Sample Publication
1) 菌
(OP50-1)		 Y. Suzuki, K. Kikuchi, K. Numayama-Tsuruta and T. Ishikawa, "Reciprocating intestinal flows enhance glucose uptake in C. elegans", Sci. Rep., 2022, doi:10.1038/s41598-022-18968-1.

よくある質問

Q

Glucose Uptake Probe-Redはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？

A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト肝癌由来細胞 HepG2
前駆脂肪細胞 preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞 adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞 3LL
T細胞 CD4+ T cell
Q

阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

Q

グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？

A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

 

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO2
   インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO2 インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。 
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

 

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

Q

Glucose Uptake Probe-Redは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？

A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q

Glucose Uptake Probe-Redを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q

Probe working solutionは保存可能でしょうか？

A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？

A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？

A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を行ってください。

Q

WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？

A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q

グルコースの定量はできますか？

A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q

取り込まれた色素の定量はできますか？

A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所 グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットBlue

    Glucose Uptake Assay Kit-Blue

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    グルコース測定キット

    Glucose Assay Kit-WST

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Amino Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Amino Acid Uptake Assay Kit

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞老化
  • 細胞内代謝
  • 蛍光色素
  • 顕微鏡
  • FCM

アミノ酸取り込み検出キット

  • アミノ酸取り込み能力を簡便に検出できる
  • 蛍光顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターを用いて検出が可能
  • 製品コード
    UP04　 Amino Acid Uptake Assay Kit
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
20 tests ￥17,100 346-09891
100 tests ￥48,200 342-09893

<使用回数の目安> 100 testsあたり、35 mm dish 10枚、96-well plate 1枚

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所 使用するマイクロプレートの種類によっては測定できない場合があります。
推奨のマイクロプレートの種類と、 結果への影響については FAQ をご参照ください。

キット内容
20 tests BPA Solution
BPA Dilution Buffer
Probe Solution　		 35 ×l×1
35 ×l×1
15 ×l×1
100 tests BPA Solution
BPA Dilution Buffer
Probe Solution　		 175 ×l×1
175 ×l×1
75 ×l×1

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マニュアル

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技術情報

この製品でできること

アミノ酸の取り込みを阻害する薬剤を抗がん剤としてスクリーニングしたり、正常細胞とがん細胞の取り込み能力を比較することができます。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用（リンク）
1 細胞
SCC7 Cell (マウス扁平上皮癌細胞)		 フローサイトメーター

T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, "Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy", 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.
2 細胞
CD4+ Cells		 フローサイトメーター

W. Zhang, X. Cao, X. Zhong, H. Wu, Y. Shi, M. Feng, Y.C. Wang, D. Ann, Y. Gwack, Y.C. Yuan, W. Shang and Z. Sun , "SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated upregulation of amino acid transporter Slc7a5", 2023, PNAS, doi:10.1073/pnas.2221352120.

よくある質問

Q

推奨する蛍光測定用のマイクロプレートを教えてください。

A

推奨するマイクロプレートは下記の通りです。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

※プレートの種類による結果への影響は、FAQ マイクロプレートの種類は結果に影響しますか？ をご参照ください。

Q

マイクロプレートの種類は結果に影響しますか？

A

はい。マイクロプレートの種類によっては測定できない場合があります(参考データ参照)。本キットの使用には、下記のプレートを推奨します。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

＜参考：プレート間の比較＞

Ibidi 製のプレートと他社メーカーのプレートを用い、アミノ酸トランスポーター阻害剤である、BCH(2-Aminobicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylic acid)存在下で、 HeLa細胞のアミノ酸取り込み能力を検出しました。この結果、推奨するIbidi製の プレートよりも、他メーカーの プレートはバックグラウンドが高く、BCHによる取り込みの阻害を確認することができませんでした。

 

蛍光顕微鏡観察
　アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

プレートリーダーよる検出

　アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

BPAはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？

A

BPAは、LAT1, LAT2, ATB0,+を介して取り込まれることが報告されています(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。また、小社では、LAT1の阻害剤BCHや、LAT1の基質であるleucineなどの競合阻害実験でBPAの取り込みが阻害されることを確認しています。

Q

使用実績のある細胞種を教えて下さい。

A

付着細胞(HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251), 浮遊細胞(MOLT4)

Q

BPAは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？

A

BPAは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q

BPAを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか？

A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q

蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？

A

2点原因が考えられるため、以下のようにすると改善される可能性があります。
①BPA uptake solutionの取り込み量が少ない可能性があります。その場合は、BPA Solutionの希釈倍率を下げてご検討ください。(5～50倍希釈)
②Working solutionが劣化している可能性があります。再度、Working solutionを調製してください。

Q

BPAは細胞内での局在性はありますか？

A

取り込まれたBPAは細胞内に均一に存在します。

Q

BPA uptake solution, Working solutionは保存可能でしょうか？

A

BPA uptake solution, Working solutionは保存できません。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？

A

細胞に取り込まれなかったBPAがウェル内に残存している可能性があります。
HBSSによる洗浄を繰り返してください。

Q

BPAの定量はできますか？

A

取り込まれたBPAの定量を行う事はできません。本キットは、アミノ酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所 アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害
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関連製品

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    グルコース取り込み検出キットGreen

    Glucose Uptake Assay Kit-Green

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    Glucose Assay Kit-WST

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    乳酸測定キット

    Lactate Assay Kit-WST

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    α-ケトグルタル酸測定キット

    α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

  • アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    老化細胞検出キット（マイクロプレート用）

    Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Cystine Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cystine Uptake Assay Kit

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞内代謝

シスチン取り込み検出キット

  • シスチン取り込み能力を簡便に検出できる
  • プレートリーダーを用いて検出が可能
  • 製品コード
    UP05　 Cystine Uptake Assay Kit
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
20 tests ￥19,300 344-09951
100 tests ￥53,500 340-09953

<使用回数の目安> 100 testsあたり、96-well plate 1 枚

キット内容
20 tests Cystine Analog Solution
Fluorescent Probe
Reducing Agent
Assay Buffer		 45 μl×1
×1
×1
5 ml×1
100 tests Cystine Analog Solution
Fluorescent Probe
Reducing Agent
Assay Buffer		 225 μl×1
×1
×2
25 ml×1

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マニュアル

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技術情報

この製品でできること

本キットはCystine Analog (CA)としてSelenocystineを用いており、細胞のシスチン取り込み能力を短時間の操作で簡便にプレートリーダーにて測定することが可能です。

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する
文献No. 対象サンプル 装置 引用（リンク）
1) 細胞
(A172; LN229)		 プレートリーダー K. Hayashima, H. Katoh, "Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis", J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.
2) 細胞
(HK2; 293T)		 プレートリーダー H. Chen, L. Cao, K. Han, H. Zhang, J. Cui, X. Ma, S. Zhao, C. Zhao, S. Yin, L. Fan, H. Hu, "Patulin disrupts SLC7A11-cystine-cysteine-GSH antioxidant system and promotes renal cell ferroptosis both in vitro and in vivo", 2022, Food Chem. Toxicol., doi: 10.1016/j.fct.2022.113255.
3) 細胞
(Hep 3B)		 プレートリーダー X. Hu, Y. He, Z. Han, W. Liu, D. Liu, X. Zhang, L. Chen, L. Qi, L. Chen, Y. Luo, Q. Li, P. Chen, Q. Wu, X. Zhu and H. Guo, "PNO1 inhibits autophagy-mediated ferroptosis by GSH metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma ", 2022, Cell Death Dis., doi:10.1038/s41419-022-05448-7.

 

よくある質問

Q

蛍光測定用のマイクロプレートはどのようなものが使えますか？

A

使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

社名 製品名 Cat No.
ibidi μPlate 96 well ibiTreat black S 15 ib89626
AGC techno glass EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well 5866-096
Thermo Fisher 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

Q

Cystine Analogはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？

A

Cystine Analogはシスチン・グルタミン酸トランスポーター(xCT)を介して細胞内へ取り込まれます。

Q

細胞種の実績を教えて下さい。

A

下記の細胞において使用実績があります。

由来 細胞名
ヒト神経膠芽腫由来細胞 A172
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞 A549
ヒト悪性黒色種 A375
ヒト結腸腺癌 HCT116
ヒト子宮頸癌由来細胞 HepG2
白血病細胞 HL60
ヒトサルコーマ細胞 HT1080
マウス胚性線維芽細胞 MEF
ヒト肺小細胞​癌 SBC-5
アストロサイト―マ U-251 MG

 

 

 

Q

Cystine Analogは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？

A

Cystine Analogは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q

Cystine uptake solutionは保存可能でしょうか？

A

Cystine uptake solutionは保存できません。添加前に必要量のCystine uptake solutionを調製して下さい。

Q

シスチンを定量することはできますか？

A

本製品を用いてシスチンを定量することはできません。

Q

細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできますか？

A

細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできません。本製品は、シスチン取り込み能力を数値化するためのキットです。

Q

サンプル間またはブランクとの蛍光強度差が無い場合、何を確認すればよいですか？

A

以下5点をご確認ください。

1.細胞数が変化している。　
   測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質量で補正してください。
　詳細はよくある質問[測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。]をご参照ください。

2. 細胞へCystine Analogが十分取り込まれていない。
   マニュアルの各操作の時間を以下を目安にご検討ください。
　　 ・シスチン不含培地での培養時間 (接着細胞 操作3, 浮遊細胞 操作4 )：5 – 30分間　
　　 ・Cystine Analogの取り込み時間 (接着細胞 操作4, 浮遊細胞 操作5 ) : 30 – 60分間

3. 細胞に取り込まれなかったCystine Analogがウェル内に残存することでバックグラウンドが上昇している。　
   PBSによる洗浄(接着細胞：操作5, 浮遊細胞：操作6)を繰り返してください。

4. Working solutionが分解しており、バックグラウンドが上昇している。
   Working solutionを調製後、時間をおくと溶液に含まれる蛍光色素が分解し、蛍光強度が 高くなる可能性があります。
   Working Solution調製後、時間をおかずに添加してください。

5. 細胞種の影響
   細胞種ごとにシスチンの取り込み能は大きく異なっており、取り込み能が低い細胞種では相対的にバックグラウンドが高く見えることがあります。下図は異なるがん細胞のシスチン取り込み能の違いを示しています。上記記載の対処法でもバックグラウンドが解決できない場合には、よくある質問記載の実績のある細胞種でまずご検討いただくことをおすすめいたします。　

   シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

シスチン不含無血清培地以外にCA Uptake solutionの調製に使用できるバッファーはありますか？

A

HeLa細胞においてHBSSや0.1%Glucoseを含むPBS(+)を使用して測定した実績がございます。

Q

測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。

A

小社では下記表に記載する方法を推奨しております。使用する細胞（接着細胞・浮遊細胞）により補正方法とタイミングが異なるため、下記表を参照し[UP05による測定値]を補正してください。

細胞 接着細胞 浮遊細胞

補正方法

核染色（蛍光）

タンパク質定量法: BCA法　(比色)

製品

Cell Count Normalization Kit [Code:C544]

Sodium bicinchoninate [Code:B037]
市販のキット

補正のタイミング

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所取扱説明書 接着細胞の操作10（UP05の測定）後の溶液を用いる。

取扱説明書 浮遊細胞の操作9で使用した溶液の残りを使用する。

補正の操作

シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Cell count Normalization Kit [Code:C544]
の取扱説明書 [培地交換法]をご参照ください。

取扱説明書 の下記 実験例をご参照ください。
[xCT阻害剤エラスチンによるシスチントランスポーター活性阻害(HL60)]

[UP05による測定値]を [補正方法による測定値]で補正蛍光強度を計算してください。
補正蛍光強度=[UP05による測定値]/[補正方法による測定値]

※[UP05による測定値] = (サンプルの測定値) – (ブランクの測定値)
※[補正方法による測定値] = (サンプルウェルの測定値) – (細胞なしのウェルの測定値)

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害
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    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

  • シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

    細胞内鉄イオン測定試薬

    FerroOrange

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所Fatty Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Fatty Acid Uptake Assay Kit

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞内代謝
  • 顕微鏡
  • FCM

脂肪酸取り込み検出キット

  • 脂肪酸取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
  • 3 ステップの簡便操作
  • Quenching Buffer（同梱）で洗浄不要
  • 製品コード
    UP07　 Fatty Acid Uptake Assay Kit
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
100 tests ￥32,000 343-10031

使用回数の目安
1 set あたり96-well plate 1 枚

キット内容
100 tests ・Fatty Acid Uptake Probe
・Quenching Buffer
・Washing Buffer (10X)		 ×1
11 ml×1
11 ml×1

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  • 取扱説明書 日本語
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技術情報

なぜ、脂肪酸取り込み能力が注目されているのか？

脂肪酸は、生体がエネルギーを得るために重要な物質です。脂肪酸取り込み能は肥満や糖尿病などの疾患に関わるだけでなく、がん細胞における代謝指標の 1 つでもあります（左図）。細胞増殖が活発ながん細胞は多くの脂質を必要とするため、細胞内における脂肪酸合成や細胞外からの脂肪酸取り込みが活発に行われています（右図）。そのため、がん細胞の脂肪酸代謝経路をターゲットとした多くの薬剤が開発されています。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

よくある質問

Q

使用実績のある細胞種を教えてください。

A

下記の細胞において使用実績がございます。

細胞名 由来

A549

ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞

HepG2

ヒト肝癌由来細胞

HeLa

ヒト子宮頸癌由来細胞

Jurkat

ヒト白血病T細胞

MOLT-4

ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞

3T3-L1 (preadipocyte)

前駆脂肪細胞

3T3-L1 (adipocyte)

脂肪細胞
 

Q

Fatty Acid Uptake Probeを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか？

A

4% PFAを用いて染色後の細胞を固定した実績がございます。

〈プロトコル〉
－付着細胞－
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
6. 4% PFA/PBSを細胞へ添加し、室温で5分間インキュベートした。
7. PBSで細胞を3回洗浄後、蛍光顕微鏡で観察、プレートリーダーで測定した。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

※固定化により蛍光強度は低下します。

－浮遊細胞－
1. マイクロチューブに細胞を準備した。
2. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
3. 無血清培地を加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
4. 無血清培地を添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
5. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
6. Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
7. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
8. Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
9. 4% PFA/PBSを添加し、ピペッティングにより懸濁後、室温で5分間インキュベートした。
10. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
11. PBSを加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
12. 蛍光顕微鏡で観察、フローサイトメーターで測定した。

 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？

A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

〇: 使用可、×: 使用不可、△: 注釈参照

 

付着細胞

浮遊細胞

 

不透明底

プレート

透明底

プレート

不透明底

プレート

透明底

プレート

Washing Buffer (10×)

使用時

Top Reading

〇

〇

Bottom Reading

×

〇

×

〇

Quenching Buffer

使用時

Top Reading

×

×

Bottom Reading

×

〇

×

△※

※細胞がプレートの底を覆う程度に播種し、しばらく静置させて細胞をプレートの底に沈めることで測定することは可能です。

〈Quenching Buffer使用時、浮遊細胞のデータ〉

 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

また、使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

メーカー名

製品名

Cat No.

ibidi

µPlate 96 well ibiTreat black S 15

ib89626

Thermo Fisher

96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10

165305
 

Q

Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存可能でしょうか？

A

Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存できません。

Q

バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？

A

細胞に取り込まれなかったFatty Acid Uptake Probeがウェル内に残存している可能性があります。Washing Buffer solutionによる洗浄を繰り返すか、Quenching Bufferの使用をご検討ください。

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えてください。

A

下記表をご参照ください。

 

付着細胞

浮遊細胞

培養器材

(添加量)

6-well

(1.5 ml/well)

24-well

(0.3 ml/well)

96-well

(0.1 ml/well)

35-mm dish

(1.5 ml/well)

1.5-ml microtube

(0.5 ml/tube)

測定可能

サンプル数

7 sample

34 sample

100 sample

7 sample

20 sample
 

Q

Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行ったのですが、透過光観察ができません。どうすればいいですか？

A

Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合は、QuenchingBufferをWashing Buffer solutionで10倍希釈してご使用いただくか、640 nmレーザーを用いて透過光観察を行ってください。

〈共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合に見られる現象〉

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

脂肪酸を定量することはできますか？

A

本製品を用いて脂肪酸を定量することはできません。

Q

細胞内に取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできますか？

A

取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできません。本製品は、脂肪酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

Q

他の蛍光色素との共染色を行うことはできますか？

A

Fatty Acid Uptake Probeは赤色蛍光への漏れ込みが僅かに観察されます。そのため、緑色および赤色蛍光検出以外の色素を用いて共染色を行って下さい。

弊社ミトコンドリア染色用色素MitoBright LT Deep Red (MT12)との共染色を行った実績がございます。

〈赤色蛍光への漏れ込み〉

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

〈MitoBright LT Deep Redとの共染色プロトコル〉
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、0.1 µmol/l MitoBright LT working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO2存在下)で30分間静置した。
6. 上清を除去した後、HBSSを用いて2回洗浄した。
7. HBSSを添加し、蛍光顕微鏡で観察した。

 脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q

蛍光顕微鏡観察時の注意点はありますか？

A

蛍光顕微鏡観察時、励起光を照射し続けるとFatty Acid Uptake Probe由来の蛍光が退色する可能性があります。連続した励起光の照射は控えてください。

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

 

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取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
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