SuperSignal™化学发光持久性底物Thermo Scientific SuperSignal West Dura 持久性底物是一种基于鲁米诺的增强型化学发光 (ECL) 辣根过氧化物酶 (HRP) 底物,非常适合定量 Western 印迹,具有稳定光输出,适用于 Western 印迹分析的中等飞克级检测。
详细介绍
SuperSignal™化学发光持久性底物
Thermo Scientific SuperSignal West Dura 持久性底物是一种基于鲁米诺的增强型化学发光 (ECL) 辣根过氧化物酶 (HRP) 底物,非常适合定量 Western 印迹,具有稳定光输出,适用于 Western 印迹分析的中等飞克级检测。
产品细节 进行凝胶电泳并使用平行双样免疫印迹分析来检测新的一抗或抗体浓度非常耗费时间和金钱,而Restore Western Blot抗体剥离缓冲液可以消除使用化学发光免疫印迹底物检测免疫印迹过程中的浪费。Restore 抗体剥离缓冲液可以从免疫印迹中彻di、高效地从去除一抗和二抗,而不会去除或破坏已固定抗原,从而使得印迹可以被清除,而抗原可以重新检测,结果依然可靠。
使用Thermo Scientific SuperSignal辣根过氧化物酶底物进行化学发光免疫印迹检测,是当前见、zui灵敏的方法。由于这些底物不会沉淀并与膜表面永jiu结合,因此化学发光法检测到的免疫蛋白印迹可使用该试剂来剥离,从而移除亲和结合的一抗和二抗。为了达到良好的效果,抗体剥离缓冲液需要具有足够的强度来分离已结合的抗体,还需要足够温和使已转移的标靶蛋白仍保留在硝化纤维膜或PVDF膜上。Restore Western Blot 抗体剥离正具有这些特点。
通过剥离和重新检测,我们无需为了对不同标靶进行检测而进行多次凝胶电泳,避免浪费稀少或昂贵的样品。一次凝胶电泳产生的一张膜可通过使用Restore Western Blot抗体剥离缓冲液来去除一抗从而消除印迹。印迹剥离仅需花费15到30分钟,具体时间因一抗的亲和能力而不同。在去除印迹后,可使用新的一抗重新结合并检测。另外,印迹剥离之后还可以使用调整后的抗体浓度来进行重新结合,以便在初次结果不佳的情况下进一步优化实验条件。
SuperSignal West Pico PLUS 底物旨在提供卓yue的信号强度和灵敏度,以用于对 HRP 偶联物进行 Western 印迹分析。发光强度与出色的持续时间相结合,可实现多次曝光,更轻松获得发表级别的印迹图像。SuperSignal West Pico PLUS 底物与不同的膜、封闭试剂和各种抗体稀释液兼容,是大多数蛋白质印迹应用的理想选择。
LightShift EMSA 检测的原理类似于 Western 印迹。生物su末端标记的双螺旋 DNA 与细胞核提取物或纯化因子一起孵育并在天然凝胶上电泳。然后快速(30 分钟)将 DNA 转印到阳性尼龙膜上,进行紫外交联,用链霉su亲和素-HRP 偶联物进行探测,并与底物一起孵育。可在一天内完成从标记到得出结果。
蛋白与 DNA 的相互作用是控制许多细胞过程的关键,包括 DNA 复制、重组和修复、转录和病毒组装。研究基因调控和确定蛋白:DNA 相互作用的核心技术是电泳迁移率实验 (EMSA)。
EMSA 技术基于以下观察结果:在进行非变性聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳时,蛋白:DNA 复合物的迁移速度比无 DNA 分子慢。因为 DNA 迁移率会根据蛋白结合率发生偏移或速度减慢,因此,该实验也被称为凝胶偏移或凝胶延迟实验。直至 EMSA 蛋白:DNA 相互作用主要通过硝酸纤维素过滤柱结合试验进行研究。
Co-IP 是研究蛋白:蛋白相互作用的常用方法,其使用抗体对抗原(诱饵蛋白)进行免疫沉淀,对任何相互作用蛋白(猎物蛋白)进行免疫共沉淀。使用蛋白 A 或 G 的传统 co-IP 方法可导致抗体重链和轻链的共洗脱,而这些重链和轻链可能与相关条带共迁移,掩盖了重要的结果。Pierce Co-IP 试剂盒通过将抗体共价偶联至胺反应性树脂上,解决了该问题。该试剂盒包含用于蛋白结合和回收的优化缓冲液、进行对照实验所需的试剂以及高效离心柱和收集管,可缩短方案并尽量减少操作和混合。
免疫共沉淀试剂盒的特点:
•适用于任何纯化抗体—使用任何纯化抗体进行 co-IP 实验,无论物种或 Ig 类别(鸡 IgY、人 IgE、小鼠 IgG1、IgM 等)如何;不依赖蛋白 A 和蛋白 G 的亲和结合 • 无抗体干扰—共价结合方法和非还原洗脱系统可以产生纯 co-IP 产品,该产品不会被 IP 抗体污染 • 可重复使用的抗体微珠—共价抗体固定化允许重复使用制备的 IP 树脂,并可能节省昂贵抗体 • 全套试剂盒—所有用于抗体固定和许多 IP 实验的试剂,包括结合和洗涤缓冲液、洗脱缓冲液和便利的微量离心柱,使树脂操作更加简单和高效。 •随附对照微珠—提供未衍生化琼脂糖微珠,用作非特异性结合的阴性对照 • 通用—co-IP 方法与任何生理(非变性)蛋白样品缓冲液兼容,缓冲液与特异性抗体抗原和蛋白相互作用复合物兼容。
免疫共沉淀 (Co-IP) 是一种用于发现蛋白相互作用的常用体外方法。Pierce 免疫共沉淀试剂盒经过配置,是有效进行 Co-IP 实验的基本工具,能够产生不含棘手的 IP 抗体的纯 IP 和 co-IP 产物。通过使用可直接且永偶联纯 IP 抗体的 AminoLink Plus 树脂替代蛋白 A/G 琼脂糖微珠,对传统 co-IP 技术实现这种改善。温和(非还原、非变性)洗脱缓冲液可实现在保留琼脂糖微珠上固定化抗体的同时解离 IP 靶标。结果是获得一种可通过 Western 印迹(或甚至测序)进行分析的纯产物,无抗体干扰。
除消除 IP 抗体污染外,构成 Pierce Co-IP 试剂盒的抗体偶联方法还可避免传统蛋白 A 和蛋白 G 方法产生的非特异性结合相互作用和浸出污染。尽管偶联方法要求起始抗体包含在不含 BSA、明胶和其他贮藏蛋白稳定剂的无胺缓冲液中,但其不依赖于蛋白 A 或蛋白 G 这一事实意味着任何抗体种类或类别均可用于 IP(例如,IgM 和鸡 IgY)。实际上,任何纯化的蛋白都可以固定化用于结合配偶体的亲和纯化。
ThermoPierce™ 免疫共沉淀试剂盒
规格
检测
亲和纯化
适用于(设备)
微型离心机
形式
试剂盒
产品线
Pierce™
数量
1 个试剂盒
适用于(应用)
免疫沉淀(IP)
Target
无靶标特异性
类型
免疫沉淀试剂盒
足够用于
50 次反应
产品规格
试剂盒
内容与储存
足够用于:准备并进行 50 次 co-IP 反应,每次使用 25 µL 树脂 • AminoLink Plus 偶联树脂,2 mL • 偶联缓冲液 (20X),25 mL • 氰基peng氢化钠溶液 (5M),0.5 mL • 淬灭缓冲液,50 mL • 洗涤液,60 mL • IP 裂解/洗涤缓冲液,2 x 50 mL • 改良 Dulbecco PBS (20X),25 mL • 调节缓冲液 (100X),5 mL • 洗脱缓冲液,50 mL • 泳道标志物样品缓冲液 (5X),5 mL • Pierce 离心柱,螺旋盖,50 根柱 • 微量离心机收集管,2 mL,100 支管 • 微量离心机收集管,1.5 mL,50 支管 • Pierce 对照琼脂糖树脂,2 mL
传统 IP(无共价抗体连接)的抗原得率通常高于使用交联的 IP 方案。这是因为交联过程不可避免地会引起一些功能性抗体结合位点的损失。为了克服交联方法的这一限制,在交联 IP 方法中需要使用的 IP 抗体量可能多于等效传统 IP 程序。当然,交联免疫沉淀程序的优势在于 Western 印迹无干扰抗体条带。
足够用于:进行 40 次 IP 反应(使用 25 µL 微珠) •Pierce 蛋白 A/G 磁珠,1 mL • IP 裂解/洗涤缓冲液,2 x 50 mL • 偶联缓冲液 (20X),25 mL • DSS 交联剂,8 x 2 mg • 泳道标志物样品缓冲液 (5X),5 mL • 洗脱缓冲液,25 mL • 中和缓冲液,1 mL • 泳道标志物样品缓冲液 (5X),5 mL
蛋白 A/G 是一种基因工程化蛋白,结合了蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 结合结构域。该融合蛋白在大肠杆菌中表达。蛋白A/G含有蛋白A的四个Fc结合结构域和蛋白G的两个Fc结合结构域,最终分子量为50,460道尔顿(SDS-PAGE中测得为40至45kDa)。蛋白 A/G 的 pH 值依赖性低于单独的蛋白 A,但具备蛋白 A 和 G 的累加特性。
蛋白 A/G 可与所有的人 IgG 亚类结合,因此是用于纯化尚未确定亚类的多克隆或单克隆 IgG 抗体的理想选择。此外,它还可结合IgA、IgE、IgM和IgD(后者结合力较弱)。蛋白A/G还可与小鼠所有IgG亚类结合,但不结合小鼠IgA、IgM或血清白蛋白。因此,蛋白A/G是纯化和检测小鼠IgG各亚类单克隆抗体的佳绝选择,避免了IgA、IgM和小鼠血清白蛋白的干扰。小鼠单克隆的个别亚类与嵌合蛋白 A/G 的亲和力很可能强于与蛋白 A 或蛋白 G 的亲和力。
•高容量— 结合容量几乎是其他供应商的典型磁珠的 4 倍,每次实验的样品用量更少 •低非特异性结合— 稳定的预封闭磁珠可提供洁净的纯化产物(例如,抗体 IP 中洗脱的抗原中不含来自复合物 IP 基质的污染性蛋白) •灵活性— 一个磁珠上同时含有蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 结合结构域,非常便利 •兼容性— 磁珠兼容手动和自动化应用(例如,Thermo Scientific KingFisher 仪器) •检测一致性— 磁珠可消除树脂损耗,与仅使用微量离心管的传统 IP 方法相比,分离效率更高
这些磁珠包被经基因工程改造的 Pierce 蛋白 A/G,这是一种同时含有蛋白 A 及蛋白 G 的 IgG 结合结构域的重组融合蛋白,与单独使用蛋白 A 或者蛋白 G 相比,可从更广泛的物种和同种型范围中捕获抗体。使用我们的化学交联剂,您可以将抗体固定到磁粒子上,避免免疫沉淀样品受到 IgG 污染。这些微珠可与磁力架配合用于手工操作,亦可用于自动化平台(如 Thermo Scientific KingFisher 仪器)。
应用: • IP 和 Co-IP 实验(参见全套试剂盒) •用于非还原条件下分析的免疫沉淀 • 抗体纯化
Pierce 磁珠上固定的重组蛋白 A/G 由蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 结合结构域相融合而成。蛋白 A/G 包含蛋白 A 的四个 Fc 结合结构域及蛋白 G 的两个 Fc 结合结构域,使其成为研究及纯化免疫球蛋白的便利工具。因此,Pierce 磁粒子并不是简单地将蛋白 A 及蛋白 G 多肽进行混合后固定,更不是蛋白 A 磁珠与蛋白 G 磁珠的混合物。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.