KOD DNA polymerase具有强力的3’→5’核酸外切酶活性(校正活性),可准确地对目的片段进行扩增,作为克隆用PCR酶获得了广泛的好评。然而,高保真性PCR酶在20?30循环以后,容易出现扩增无法持续的<停滞现象>。KOD -Plus- Neo在高保真性PCR酶:KOD -Plus-系列技术的基础上,应用了本公司新开发的「延伸增强剂」,保持了KOD -Plus-系列高保真性(约为Taq的80倍)的同时,通过抑制<停滞现象>,明显提高了对微量模板DNA、长目的片段的扩增效率。
简要备注① 关于Polymerase 应用于PCR的DNA polymerase大致可分为2大类。一类是从嗜热菌中分离出来的被称为polⅠ型的聚合酶,以Taq、Tth DNA polymerase为代表。另一类是从超嗜热Archaea中分离出来的被称为α型的聚合酶,KOD、Pfu DNA polymerase属于该类。α型酶具有polⅠ型酶所没有的3’→5核酸外切酶活性。该活性被称为Proof-reading(校正)活性,与PCR的保真性有着非常深厚的渊源。KOD DNA polymerase利用该Proof-reading活性,表现出很高的保真性。但具备该活性的酶一般被认为对PCR反应效率有不好的影响。KOD -Plus- Neo通过应用新的延伸增强剂、热启动法、以及Buffer组分的改良,大大提高了PCR效率。
Memo② 什么是热启动? 在室温条件下配制PCR反应溶液时,配制过程中聚合酶会开始反应。在室温下由于引物的特异性降低,很容易产生非特异性反应等副反应。另外,KOD DNA polymerase具有很强的3’→5’核酸外切酶活性(Proof reading活性),这也是产生副反应的原因之一。热启动法是指在高温阶段,激活聚合酶活性的方法,迄今为止已有好多种方法。其中zui严格的是使用中和抗体的方法。 KOD -Plus- Neo中由于混合了两种抗Taq DNA polymerase抗体,在常温状态下可*抑制聚合酶的活性及校正活性。而该抑制作用在PCR的预变性阶段*失活,对PCR没有任何影响。
ReverTra Ace (MMLV Reverse Transcriptase RNaseH-) Code No. TRTLot No. ****** Storage Store at -20℃ Size 10,000units( 101) 50,000units( 102) Source : Escherichia coli DH5?? (pDV68) Concentration : 100 units/μl Unit Definition : One unit is the amount of enzyme activity that incorporates 1 nmole of dTTP into acid insoluble fraction in 10 minutes at 42℃ when poly(A)+ RNA and oligo (dT)20 are used as template-primer. Assay Condition : 50 mM Tris-HCl(pH8.3) 75 mM KCl 3 mM MgCl2 10 mM DTT 240 μg/ml poly(A)+ RNA 0.1 μM oligo (dT)20 1 mM dTTP 0.3 μM [methyl-3H]dTTP Storage Buffer : 20 mM Tris-HCl(pH7.5) 100 mM NaCl 0.1 mM EDTA 10 mM 2-mercaptoethanol 0.01 % NP-40 50 % Glycerol 5 X Buffer : Not containing dNTPs. cDNA synthesis reaction requires1mM of dNTPs. Quality Control 1. RNase Activity : When 50 units of this enzyme were incubated with 0.5 μg of MS2 RNA for 1 hour at 42℃, RNase activity was not observed after agarose gel electrophoresis. Remarks Research Use Only. Not for Human Use
KOD -Plus- is based on DNA polymerase from the hyperthermophilic Archaeon Thermococcus kodakaraensis KOD11) 2). KOD -Plus- exhibits excellent high PCR fidelity and efficiency. The enzyme solution of KOD -Plus- contains two types of anti-KOD DNA polymerase antibodies that inhibit polymerase and 3’??5’ exonuclease activity, thus allowing for Hot Start PCR3). KOD -Plus- generates blunt-end PCR products, due to 3’??5’ exonuclease (proof-reading) activity.
zui大特征: 优良的保真性
KOD -Plus-系列的酶具有强力3‘→5’核酸外切酶活性(Proof-reading活性),相比KOD DNA
polymerase,保真性更高,约为Taq DNA polymerase的80倍。zui适用于克隆。