LysoPrime Green – High Specificity and pH Resistance

05 細胞染色用色素

LysoPrime Green – High Specificity and pH Resistance

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リソソーム染色色素 Green

• リソソームへの特異性が高い
• リソソームのpH変化の影響を受けにくい
• リソソームを一晩染色できる

• 製品コード
  L261　 LysoPrime Green – High Specificity and pH Resistance

＜使用回数の目安＞ 10 μl あたり、35 mm dish 10 枚、μ-Slide 8 well 10 枚

＜保存上の注意＞
・長期間の保存は、-80℃以下または液体窒素中での保存が望ましい。
・本製品は冷凍(-20℃)条件下でも経時的に劣化する。
　-80℃以下での保存が難しい場合は、できるだけ早く使用すること。
・凍結・解凍の繰り返しは、劣化を促すので避けること。

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マニュアル

リソソームへの特異性が高い

既存色素とLysoPrime Greenのリソソーム局在性をリソソームマーカータンパク LAMP1-RFP発現HeLa細胞を用いて比較しました。 既存色素による染色ではリソソーム以外にも分散してバックグラウンドが高くなったのに対し、LysoPrime Greenではバックグラウンドが抑えられる結果が得られました（蛍光画像 Merged）。また、蛍光画像の範囲において蛍光強度を測定した結果、LysoPrime Greenは既存色素と比較してリソソームへの局在性が高いことが判りました（右図）。

<検出条件>
Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm
Red   : Ex= 561 nm, Em= 560-620 nm
スケールバー: 20 µm

Q

輸送温度と保存温度（-80℃）が異なっていたのですが性能は問題ないのでしょうか。

A

本品は冷凍(-20℃)で輸送されますが、輸送に想定される期間で製品性能に影響を与える劣化や分解はございません。お手元に届き次第、-80℃にて保存して下さい。
なお、小社では本品を室温(25℃)で一ヶ月間保存した場合でも、リソソームの染色性能に影響がないことを確認しています。

※-80℃保存の純度を100%とした場合のHPLC純度推移

スケールバー：10 µｍ

Q

染色後にリソソーム以外が染まっているように見えるのですが。

A

LysoPrime Greenがリソソーム以外の核やその他オルガネラに非特異的吸着を起こした可能性が考えられます。LysoPrime Greenの最適な濃度は細胞種や細胞密度に影響するため、Working solutionの希釈倍率について1,000-4,000 倍の範囲を目安に最適濃度の検討を行ってください。参考として、HeLa細胞を用いてWorking solutionを各希釈倍率で染色した際の蛍光染色画像を掲載します（1,000 倍希釈時に非特異的吸着が観察されました)。

※スケールバー：10 µm

Q

血清含有培地で染色できますか。

A

染色できません。LysoPrime Greenは血清の影響を受けるため必ずHBSSや無血清培地等の血清を含まない溶液でworking solutionを作成してください。

Q

リソソームpHに影響を与える薬剤刺激を考えています。LysoPrime Greenの染色は、薬剤添加の前と後どちらで行えばいいですか。

A

染色後の刺激を推奨しております。LysoPrime GreenはpH依存的にリソソームに集積しますが、集積後にpHが変化してもリソソームに滞留し続けます。一方で、あらかじめ薬剤刺激等によりpHが中性付近に変化したリソソームにはLysoPrime Greenが集積できないため染色できません。そのため、染色能に影響が少ない染色後の薬剤刺激を推奨しております。

Q

落射型顕微鏡でも観察できますか？

A

落射型顕微鏡でも観察は可能ですが、細胞によっては、確認が困難な場合があります。 その際は、共焦点顕微鏡で観察されることをお勧めします。

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