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概述
淀粉样变性病被卫生部门确定为一种特殊的疾病,是一种具有β折叠结构的称为淀粉样物质的不正常蛋白质,它聚集成纤维,并沉淀在内部器官和系统的外面,抑制这些器官和系统的功能。日本人中这样的疾病包括免疫细胞淀粉样变性病 (AL 淀粉样变性病)、敏感性AA淀粉样变性病、家族性淀粉样多发性神经病 (FAP) 和透析淀粉样变性病(DRA),并且据估计在日本有几百个这样的患者。淀粉样变性病大致可分为两类:沉积在全身各器官内的淀粉样物质[系统性淀粉样变性病],例如上文中提到的病症;以及淀粉样物质沉积于特定器官中的 [局部淀粉样变性病],例如在阿尔茨海默病中淀粉样物质沉积于大脑中。
1-溴-2,5-双(3-羧基-4-羟基苯乙烯基)苯 (BSB)用于检测淀粉样变性病,因为它与β-淀粉样肽 (Aβ)—与阿尔茨海默病相 关的淀粉样物质,具有高亲和力。Skovronsky 证实,在静脉注射 BSB 18 小时之后,该染料在转基因小鼠 Tg2576 脑组 织的老年斑中积累,该种转基因小鼠表达Aβ的淀粉样前体蛋白 (APP)。1) 不仅限于Aβ,Ando 以及其他研究者已宣布各种系统性淀粉样变性病 (AA、AL、ATTR、Ascr 及 Aβ2M) 中沉积的淀粉样物质用BSB比用刚果红 (一种常用于β折叠染 色的染料) 染色更敏感。BSB的荧光强度是刚果红的两倍。此外,BSB 不仅是染色的染料,还能够阻断FAP的淀粉样物 质前体TTR形成淀粉样物质。
产品使用步骤
样品的固定法
乙醇固定或福尔马林固定
染色操作方法
*本品是由 1 %w/vDMSO 溶液制成可配制 0.01%浓度溶液 10 ml,可配制 0.000 1%浓度溶液 1000 ml
1. FSB染色液配制
向产品中加入50 %的乙醇 并稀释成浓度为0.01-0.0001 %的 FSB溶液
2. 染色
将切片在 FSB 中浸泡 30 min。再浸入饱和碳酸锂 中然后用50%乙醇洗涤
3. 检测
紫外光(V 激发) 下检测染色区域
* 如果使用 MRI 法参考如下文献
M. Higuchi, N. Iwata, Y. Matsuba, K. Sato, K. Sasamoto, T. C.Saido, 19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo, Nature Neuroscience, 2005, 8(4), 527-33
病理切片染色实例
1、一个患有阿尔茨海默病患者的前皮质截面染色图。该组织用乙醇固定。发光部分为淀粉样物质。
Sub-adjacent 切片图中的数字对应于每个老年斑。
(图片由日本理化学研究所脑科学综合研究中心 Higuchi博 士和 Saido 博士慷慨提供)
2、患有AL淀粉样变性病患者的心脏组织切 片(刚果红是赤褐色的,BSB和FSB的发光部分为淀粉样物质)。Sub-adjacent切片。可以用FSB检测良好的部分,并且这些部分与淀粉样沉淀部分的对比是清晰的。
(图像由Ando博士慷慨提供:熊本大学 医学院,实验医学部)
3、FSB在静脉内注射,通过 in vivo MRI图像技术,检测患阿尔茨海默病小鼠脑部照片,可观察到淀粉样沉淀物 (老年斑)。
图像 A:19F-MRI图像、图像B:1H-MRI T2 放大图像、图像C:荧光显微镜下的荧光图像 (exvivo) 图像B中可观查到老人斑低信号 (黑) 部分。FSB的分布情况可在荧光显微镜下确认 (图像C),但相同检测部位通过19F-MRI现象检测 (图像A),可以更清晰的检测出 (图像B) 中检测不到或不清晰的部分。
注意事项:购买后根据自己的用量分装保存
参考文献
1. 19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo, Nature Neuroscience, 2005, 8(4), 527-33
2. An aberrant sugar modification of BACE1 blocks its lysosomal targeting in Alzheimer’s disease,
EMBO Molecular Medicine, 2015, 7, 175-189
3. Imaging of Peripheral Benzodiazepine Receptor Expression as Biomarkers of Detrimental versus Beneficial Glial Responses in
Mouse Models of Alzheimer’s and Other CNS Pathologies, The Journal of Neuroscience, 2008, 28(47), 12255-12267
4. Longitudinal, quantitative assessment of amyloid, neuroinflammation, and anti-amyloid treatment in a living mouse model of
Alzheimer’s disease enabled by positron emission tomography, The Journal of Neuroscience, 2007, 27(41), 10957-10968
常见问题Q&A
Q1:FSB荧光观察时的激发波长和发射波长。 |
A1:激发波长:390 nm, 发射波长:511 nm |
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