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C34H20O7S2
604.65
特点：
● 荧光背景低
● 灵敏度高
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C34H37CuN5O12S
803.29
特点：
● 检测细胞内H2S
● 灵敏度高
● 特异性强
产品性状
规格
性状： 本品为蓝色固体
纯度（HPLC）： 90%以上
荧光光谱： 符合实验要求
处理条件
保存方法： 0~5°C
产品概述
硫化氢 (H2S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。 H2S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H2S是以HS–的状态存在的 (pKa=7)。HS– 很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。 -SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H2S的荧光探针，当和H2S反应时会发出较强的绿色荧光。 -SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H2S。
原理
硫化氢 (H2S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H2S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H2S是以HS–的状态存在的(pKa=7)。HS–很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。
-SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H2S的荧光探针，当和H2S反应时会发出较强的绿色荧光。
-SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H2S。
溶液配制
制备1 mmol/l HSip-1 DA储存液
加53 ul DMSO至含有50 ug HSip-1 DA的管子中，用移液器吹打溶解。
*配制好的溶液请在-20℃保存，可以保存1个月
荧光参数
E x：470 ～ 500 nm
Em：500 ～ 550 nm
实验案例
用HSip-1 DA检测硫化氢的荧光成像
1. 在 u-slide 8孔板 (ibidi)中接种HeLa细胞，并在37℃,5%的CO2培养箱中过夜培养。
2. 更换培养基，用无血清的MEM培养基清洗细胞2次。
3. 用无血清的MEM培养基稀释1 mmol/l 的HSip-1 DA储存液，制成5 umol/l 的HSip-1 DA工作液。
* 请根据细胞种类优化HSip-1 DA的终浓度。
4. 在细胞中加入200 ul 5 umol/l的 HSip-1 DA工作液，并在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
5. 去除上清液，用HBSS清洗细胞2次。
6. 在每孔中加入200 ul 200 umol/l 的Na2S溶液，并在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
7. 去除上清液，用HBSS清洗细胞2次。
8. 加入200 ul HBSS，用共聚焦荧光显微镜观察细胞。
用HSip-1 DA检测HeLa细胞 (经过Na2S处理) 中的硫化氢
(A: Control, B: 用200 umol/l Na2S 处理)
参考文献
1) Sasakura, et al., Development of a Highly Selective Fluorescence Probe for Hydrogen Sulfide,J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 18003-18005
2) Kenjiro Hanaoka, et al., Discovery and Mechanistic Characterization of Selective Inhibitors of H2Sproducing Enzyme: 3-Mercaptopyruvate Sulfurtransferase (3MST) Targeting Active-site Cysteine Persulfide, Scientific Reports, 2017, 7, 40227
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C30H33CuN5O10S
719.22
产品性状
规格：
性状： 本品为褐色固体
纯度（HPLC）： 90%以上
处理条件
保存方法： 0~5°C
产品概述
硫化氢 (H2S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。 H2S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H2S是以HS-的状态存在的 (pKa=7)。HS- 很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。 -SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H2S的荧光探针，当和H2S反应时会发出较强的绿色荧光。 -SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H2S。
检测原理
硫化氢 (H2S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。
H2S被认为是一种类似于NO和CO的气体信号分子，但在生理条件下大约80％的H2S是以HS–的状态存在的(pKa=7)。
HS-很容易转变为各种过硫化物和多硫化物。
-SulfoBiotics- HSip-1 是一种新的特异性检测H2S的荧光探针，当和H2S反应时会发出较强的绿色荧光。
-SulfoBiotics- HSip-1 DA可以穿透细胞膜检测细胞内的H2S。
溶解比例
制备10 mmol/l HSip-1储存液，加117 ul超纯水至含有1 mg HSip-1的管子中，用移液器吹打溶解。
*配制好的溶液请在-20℃保存，可以保存1个月。
荧光参数
Ex： 470 ～ 500 nm
Em：500 ～ 550 nm
实验案例
一. 用HSip-1检测硫化氢
1. 用PBS稀释10 mmol/l HSip-1储存液，制成200 umol/l的 HSip-1工作液。
2. 用1 ml 充氮处理过的超纯水溶解7.8 mg Na2S制成 100 mmol/l Na2S溶液。
3. 吸取20 ul 100 mmol/l 的Na2S溶液至980 ul超纯水中，制成2 mmol/l 的Na2S溶液。
4. 吸取100 ul 2 mmol/l 的Na2S溶液至900 ul超纯水中，制成200 umol/l 的Na2S溶液。
5. 用超纯水稀释200 umol/l 的Na2S溶液，制成一个系列浓度的 (200 umol/l, 100 umol/l,
50 umol/l, 25 umol/l, 12.5 umol/l, 6.3 umol/l, 3.2 umol/l, 0 umol/l) 的Na2S标准溶液。
6. 吸取350 ul 200 umol/l的 HSip-1工作液至300 ul的Na2S溶液中，并用涡旋振荡器振荡混匀。
7. 上述溶液在室温培养30 min后，转移至96孔板中 (200 ul/孔)。
8. 用荧光酶标仪测定在516 nm (ex=491 nm)的荧光强度。
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C15H25N2O3PS2
376.47
特点：
● 缓慢释放H2S的供体
● 水溶性好
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C20H22N4O4S
414.48
特点：
● HPLC的方法检测H2S
● 灵敏度高
产品性状
规格
性状： 本品为无色或淡黄色固体
纯度（HPLC）： 97%以上
含量 ： 0.540~0.600（370nm）
处理条件
保存方法： 避光冷藏
产品概述
硫化氢 (H2S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H2S被认为是一种除了NO和CO以外的第三种气体信号分子，在生理状态下大约80％的硫化氢解离为HS–(pKa=7.0)。Monobromobimane (简称mBBr) 法是硫化氢检测最灵敏和可靠的方法之一。1个分子的H2S可以与2个分子的mBBr反应生成1个分子的Sulfide dibimane.采用高效液相色谱法 (HPLC)可以分析谷胱甘肽或半胱氨酸和mBBr反应生成的Sulfide dibimane， 由于它可以发出荧光，所以检测的灵敏度较高1),2),3)。
检测原理
硫化氢 (H2S) 在舒张血管，保护细胞和调节胰岛素分泌方面具有重要的生理作用已经得到广泛的认可。H2S被认为是一种除了NO和CO以外的第三种气体信号分子，在生理状态下大约80％的硫化氢解离为HS–(pKa=7.0)。Monobromobimane (简称mBBr) 法是硫化氢检测最灵敏和可靠的方法之一。1个分子的H2S可以与2个分子的mBBr反应生成1个分子的Sulfide dibimane 。采用高效液相色谱法 (HPLC)可以分析谷胱甘肽或半胱氨酸和mBBr反应生成的Sulfide dibimane， 由于它可以发出荧光，所以检测的灵敏度较高。
实验案例
HPLC实验例
样品的预处理
1. 吸取30 ul样品至含有70 ul 100 mmol/l Tris-HCl缓冲液 (pH 9.5,0.1 mmol/l DTPA) 的管子中。
2. 加入50 ul 10 mmol/l的mBBr乙腈溶液。
3. 培养30 min。
4. 加入50 ul 200 mmol/l的 5-磺基水杨酸。
5. 取上清液作为检测样品。
* 有关mBBr法的详细情况，请参见Methods Enzymol.，2015，554，314)。
硫化氢的定量分析
6. 加入100 ul乙腈至含有10 nmol Sulfide dibimane的管子中，用移液器吹打使溶解，制成0.1 mmol/l 的Sulfide dibimane储存液。
7. 用乙腈稀释0.1 mmol/l Sulfide dibimane储存液，稀释成一个系列浓度梯度的溶液。
8. 吸取上述系列浓度梯度的溶液各5 ul注射入HPLC色谱柱，制成一条标准曲线 (下图)。
9. 通过HPLC分析样品 ，计算Sulfide dibimane的峰面积。
10. 用标准曲线计算样品中HS–的浓度。
注意：Sulfide dibimane溶液对光敏感，请避光并在一天内用完。
＜HPLC条件＞
柱：Inersil ODS-3
流动相：A) 0.1% TFA/H2O ，
B) 0.1% TFA/Acetonitrile (TFA: Trifluoroacetic acid) B conc.：
5%-35% (0-5 min)，
35%-55% (5-16 min)，
55%-70% (16-23 min)
检测：荧光 (Ex: 390 nm, Em: 475 nm)
流速：1 ml/min
柱温：40℃
文献
1) G. L. Newton, R. Dorian and R. C. Fahey,Anal. Biochem., 1981, 114, 383.
2) E. A. Wintner, T. L. Deckwerth, W. Langston, A.Bengtsson, D. Leviten, P. Hill, M. A. Insko, R.Dumpit,E.Vanden Ekart, C. F. Toombs and C. Szabo,Br. J. Pharmacology, 2010, 160, 941.
3) X. Shen, C. B. Pattillo, S. Pardue, S. C. Bir, R.Wang and C. G. Kevil,Free Radic. Biol. Med., 2011, 50, 1021
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