日本同仁化学DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

DNA损伤定量试剂盒

DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

•可以检测基因组DNA样品的碱基位点数量

•采用方便的比色法检测

•检测范围：40个碱基位点/ 1×10⁵ 碱基对DNA

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DNA损伤思维导图

选择规格：

20 samples

现货

DNA损伤检测方案

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

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试剂盒内含

产品概述

原理

技术信息

操作方法

常见问题Q&A

参考文献

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DNA损伤丨从实验思路到检测指标 PDF下载

指标	关联指标干货参考（点击查看）	检测指标（点击查看）
DNA损伤检测	γ-H2AX	DNA损伤检测试剂盒- γH2AX（绿、红、深红）
	AP位点	DNA损伤检测试剂盒（AP位点法）
	核小体	Nucleolus Bright (绿、红）
	细胞周期	Cell Cycle Assay Kit – PI/RNase Staining
DNA损伤关联指标	氧化损伤	DMPO
		BMPO
		TEMP
		SOD Assay Kit
		DPPH Antioxidant Assay Kit
	凋亡	Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit/PI
		Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit/PI
		Cell Cycle Assay Solution Deep Red/Blue
		JC-1 MitoMP Detection Kit
		Caspase-3 Assay Kit
	铁死亡	Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11
		Liperfluo
		GSSG/GSH Quantification Kit II
		Iron Assay Kit
		Mito-FerroGreen
	衰老	Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
		Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
		SPiDER-βGal
	自噬	Mitophagy Detection Kit
		DALGreen – Autophagy Detection
		DAPGreen – Autophagy Detection
		DAPRed – Autophagy Detection

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试剂盒内含

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

产品概述

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基，产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP；N’-氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后，DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法，用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×10⁵个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。

＊本试剂盒仅适用于基因组DNA中无碱基位点 (Abasic Sites)的检测。

原理

DNA损伤在除了复制过程中的DNA聚合酶错误外，保留有机体遗传信息的DNA在体内还受到环境辐射，紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的破坏，接收。如果这些错误和伤害得不到适当的修复，它们将导致突变，从而导致癌症和衰老。

DNA损伤部位有修复结构，其中之一就是去除碱修复。此时，将出现一个称为AP位点的基础位点（apurinic/apyrimidinic位点）。换句话说，AP位点的检测是可以测量DNA损伤位点的有效方法。

ARP（N’-氨基氧基甲基羰基肼基-D-生物素）是已知可以与该AP位点进行生物素特异结合的试剂。-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting-是一种可以通过使用ARP将DNA生物素化并固定在96孔微板上，可以简单地定量样品DNA中的AP 位点的试剂盒。

该试剂盒包含具有与AP位点的标准DNA，并且可以使用HRP标记的链霉亲和素通过生物素检测方法对AP位点进行定量。

使用方法请看实验例。

*冷藏保存中或恢复到室温时，有时会在管状管中看到水滴状的液粒。

这是由干燥防止剂液粒化而成的，产品的性能没有问题。

＊本套装中含有加入了溶液的试剂组件。

溶液可能会粘附在试管或瓶盖的内壁上，因此在打开前应先摇匀

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

技术信息

除试剂盒以外必要的物品

・10μl，200μl，1 ml微量移液器（可变型）

・200μl多通道移液器（可变型）

・培养箱（37℃）

・酶标仪

・0.5 ml，1.5 ml离心管

・离心机

・DNA纯化试剂盒

・纸巾

本公司出售各种DNA纯化试剂盒。

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue(Code：GK03)

关于DNA提纯的问题，请咨询同仁化学。

操作方法

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

常见问题Q&A

Q1: 是否可以创建40个以上AP位点/ 100,000个标准溶液？

A1:该试剂盒的标准DNA是0-40个AP位点/ 100,000ARP-DNA。但我们已经准备了多达50个AP站点/ 100,000个的ARP-DNA（暂时没有做到更多）。从理论上讲，可以制备更多的ARP-DNA，但这么做的话我们无法保证和保持校准线的线性程度。

如果要检测更高浓度的碱基损伤，但样品DNA没有相同浓度的损伤，您可以用0AP 位点-DNA（测定范围内稀释）后再进行测定，之后再换算实际AP数比较好。

Q2: AP位点是DNA的一个基本损伤位点，被用作氧化应激的指标，除了AP位点之外，还有其他氧化应激指标吗？

A2：我们创建了一个文档，概述了氧化应激的各种标记物。

从实验者的角度，描述了每种氧化应激标记的特性和检测样品的处理方法，因此请参考以下文档（日文）。

https://www.dojindo.co.jp/technical/beginner/stressmarker.pdf

Q3:建议在DNA的纯度为吸光度为1.8以上进行检测。是否能够测量至1.5？

A3:因为吸光度在1.5内没有做过类似实验，所以暂时无法确认。

我们用吸光度为1.6～1.7的DNA进行检测，但不能看到很大的变化。

所以推荐1.8或更高。

纯度低的话可能意味着蛋白质污染。低纯度蛋白质具有阻断作用，可能使DNA粘附在板上。

请使用尽可能高的纯度，因为它可能会阻止这种情况

Q4:是否可以存储提取的DNA而无需将其转换为ARP？

A4:存储是不可取的，因为这会增加AP位点的数量。（冷藏和冷冻）

如果要在不进行ARP化的情况下进行存储，请使用乙醇沉淀，制粒并冷冻保存。AP站点确实是容易发生剪切的部位。

但是，如果以catallist free的状态保存的话，即使在3’侧有断开也不会影响ARP的检测。

相反，如果提取的DNA储存在非冷冻状态的环境中，

由自然产生的去除碱形成的AP位点是一个更重要的问题。

所以在这种情况下，如果你的样品在正确存储标准DNA是可以进行修饰的。

ARP修饰后AP位点稳定，建议提取后迅速进行APR处理。

Q5:这个试剂盒可以检测什么？

A5：您可以定量DNA中的AP位点。AP位点是[apurinic / appyrimidinic site]的缩写，作用于受损的DNA。一般在去除碱修复过程中会出现。DNA的损伤除了复制时DNA polymerase的错误之外，还受到紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的影响。

通过测定AP位点可以检测DNA损伤。

Q6:这个试剂盒能测定的样品数量是多少？

A6：20samples为20个样品。

每个Filtration Tube都有20个samples。

因为一个样品一般使用一个Filtration Tube，所以这个Tube的数量即是可测定的样品数。

20samples的测定用的板也是1块板。

Q7:96孔板和过滤管中有溶液剩余，请告诉我废弃的方法

A7:多余的溶液请在确认以下成分信息后，按照政策规定的废弃规则废弃。

<配套试剂成分>

・ARP-DNA standard solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

・ARP solution（稀释后作废，不含有害成分）

・DNA binding solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

・Washing buffer（稀释水后废弃，不含有害成分）

・HRP-Striptavidin（稀释水后废弃，不含有害成分）

・TE buffer（可溶于水，EDA・2NA 0.1%以下）

・Substrate solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, “DNA Repair Enzymes”, Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.

2) T. Lindahl and B. Nyberg, “Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid”, Biochemistry, 1972, 11, 3610.

3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, “A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.

4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, “Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA”, Biochemistry, 1990, 29, 1737.

5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, “Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion”, Mutat. Res., 1992, 273, 253.

6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, “The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function”, J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.

7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, “DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes”, J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.

8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, “Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.

9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, “Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury”, Stroke, 2005, 36, 321.

10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, “Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1”, Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.

11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, “A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents”, Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

日本同仁化学Total Glutathione Quantification Kit试剂盒货号：T419 总谷胱甘肽定量试剂盒- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Total Glutathione Quantification Kit试剂盒货号：T419

总谷胱甘肽定量试剂盒

Total Glutathione Quantification Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

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选择规格：

100tests

氧化应激检测方案

关联产品

Total Glutathione Quantification Kit试剂盒货号：T419 总谷胱甘肽定量试剂盒

ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂

ROS检测

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit

超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST

二价铁离子检测探针—FerroOrange

细胞亚铁离子检测荧光探针

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测

细胞脂质过氧化物检测试剂盒

日本同仁化学DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting DK02- DOJINDO

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DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting DK02

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶，被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素，但在氧化应激中，诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting	DK02	DNA损伤定量检测
DPPP试剂	D350	氧化应激检测

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。

ストレスマーカー検出試薬 -Nucleostain- DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting- 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

02 酸化ストレス関連試薬

–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬

ストレスマーカー検出試薬

製品コード

DK02　 –Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 samples	￥86,700	346-90143

キット内容

20 samples	･ARP-DNA Standard Solution ×(0, 2.5, 5.0, 10, 20, 40 AP sites/100,000 bp)　　･ARP Solution ･DNA Binding Solution ･Washing Buffer　･HRP-Streptavidin ･TE Buffer ･Substrate Solution ･Filtration Tube ･96-well Microplate/U Bottom	各 250 μl × 1 250 μl × 1 10 ml × 1 × 1 25 μl × 1 40 ml × 1 10 ml × 1 20 tubes × 1

20 samples

･ARP-DNA Standard Solution
×(0, 2.5, 5.0, 10, 20, 40 AP sites/100,000 bp)　　
･ARP Solution
･DNA Binding Solution
･Washing Buffer　
･HRP-Streptavidin
･TE Buffer
･Substrate Solution
･Filtration Tube
･96-well Microplate/U Bottom

各 250 μl × 1

250 μl × 1
10 ml × 1
× 1
25 μl × 1
40 ml × 1
10 ml × 1
20 tubes
× 1

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

＜キット以外に必要なもの＞

・10 μl, 200 μl, 1 mlマイクロピペッター(可変式）　・200 μl 8連マイクロピペッター(可変式)　・インキュベーター(37℃) ・マイクロプレートリーダー　・0.5 ml, 1.5 ml遠心チューブ　・遠心機　・DNA精製キット　　・ペーパータオル

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, "DNA Repair Enzymes", Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.
2) T. Lindahl and B. Nyberg, "Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid", Biochemistry, 1972, 11, 3610.
3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, "A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine", J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.
4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, "Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA", Biochemistry, 1990, 29, 1737.
5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, "Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion", Mutat. Res., 1992, 273, 253.
6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, "The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function", J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.
7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, "DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes", J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.
8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, "Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.
9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, "Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury", Stroke, 2005, 36, 321.
10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, "Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1", Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.
11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, "A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents", Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

よくある質問

Q 40 AP sites/100,000以上のstandard solutionを作成することは出来ますか？: A

このキットのstandard DNAは0～40AP site/100,000 です。
弊社では、50 AP sites/100,000までのARP-DNAを調製したことは
ありますが、それ以上はありません。

　理論的にはそれ以上のARP-DNAを調製することは可能ですが、
検量線の直線性がどこまで保持されるかは保証できません。
　高いレベルの塩基損傷を検出するには、サンプルDNAを同じ濃度の損傷の無いDNA
つまり、0AP site-DNAで測定レンジに希釈してアッセイを行い、
その後に実際のAP数を換算して求める方が良いと思います。

Q DNA中の塩基損傷部位であるAP Siteは酸化ストレスの指標として使用されますが、 AP Siteの他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？: A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q DNAの純度が吸光度比で1.8以上を推奨されていますが、1.5程度でも測定出来ますか？: A

1.5では確認していませんので、保証は出来ません。
1.6～1.7のDNAでの測定では大きなバラツキは見られません。
推奨として1.8以上としております。

精製度が低いということは、タンパク質の混入が考えられます。
タンパク質はブロッキング作用を持ち、DNAがプレートに吸着するのを
防ぐ可能性がありますので、出来るだけ精度が高いものをご使用ください。

Q 抽出したDNAをARP化せずに保存することは可能でしょうか？: A

溶液状態での保存はAP siteが増えてくるので望ましくありません。（冷蔵・冷凍ともに）
ARP化せずに保存するのであれば、エタノール沈殿を行い、ペレット状にして冷凍保存してください。

　AP部位は確かに切断が起こりやすい部位です。

ただ、catalist freeの状態で保存されていれば3'側に切断があってもARPの検出には支障ありません。

むしろ抽出DNAは凍結状態以外の環境下で保存されていた場合、

自然に起こる脱塩基によって形成されたAP部位の方が重要な問題になります。

この場合、サンプルに同一条件下で保存されていた標準DNAが含まれる場合は

補正が可能になります。

　ARP修飾後のAP部位は安定ですので、抽出後の速やかなAPR処理をお勧めします。

Q このキットを使用して何を測定することが出来るのでしょうか？: A

DNA中のAP siteの定量が出来ます。
AP siteとは[apurinic/apyrimidinic site]の略で、損傷したDNAに働く
塩基除去修復の過程で現れるものです。

DNAの損傷は複製時のDNA polymeraseのエラーに加えて、環境中の放射線や
紫外線またはアルキル化剤等の化学物質、生体内における活性酸素などの
代謝産物により起こります。

AP siteを測定することによりDNA損傷をみることが出来ます。

Q このキットで測定できる検体数はどのくらいでしょうか？: A

20 samplesが20検体となります。
それぞれFiltration Tubeが20 samplesで20本入っています。
Filtration Tubeを一つのサンプルに1本使用しますので、このTubeの数が
測定できる検体数となります。

20 samplesも測定用のプレートは1枚です。

Q 96-wellマイクロプレートやフィルトレーションチューブ以外の溶液が余ったのですが、廃棄方法を教えて下さい。: A

余った溶液は、以下の成分情報をご確認の上、ご所属の機関の廃棄ルールに従って廃棄して下さい。
＜キットコンポーネント成分＞

・ARP-DNA standard solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・ARP solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・DNA binding solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・Washing buffer　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・HRP-streptavidin　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

・TE buffer　（水に可溶、EDTA・2NA 0.1%以下）

・Substrate solution　（水に希釈後廃棄、有害成分含まず）

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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GSSG/GSH Quantification Kit

02 酸化ストレス関連試薬

GSSG/GSH Quantification Kit

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

グルタチオン定量キット

製品コード

G257　 GSSG/GSH Quantification Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
200 tests	￥62,300	342-09011

キット内容

200 tests	・ Enzyme Solution ・ Coenzyme ・ Buffer Solution ・ Substrate (DTNB) ・ Standard GSH ・ Standard GSSG ・ Masking Reagent	50 μl x1 x2 60 ml x1 x4 x1 x1 20 μl x1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

特長

1)酸化型グルタチオン(GSSG)、還元型グルタチオン(GSH)の分別定量が可能である。
2)短時間で簡便に多検体の測定が可能である。

参考文献

参考文献を表示する

1) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
2) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
3) C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 415.
4) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl, "Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
5) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
6) M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47(9), 3951.
7) N. Miura, Y. Yanagiba, K. Ohtani, M. Mita, and M. Togawa, "Diurnal Variation of Cadmium-induced Mortality in Mice", J. Toxicol. Sci., 2012, 37(1), 191.
8) K. Okabayashi, T. Narita, Y. Takahashi and H. Sugiya, "Effrct of Oxidative Stress on Secretory Function in Salivary Gland Cells", Oxidative Stress-Environmental Induction and Dietary Antioxidants, V. Lushchak, InTech, 2012, 189.
9) G. Tian, J. Sawashita, H. Kubo, S. Nishio, S. Hashimoto, N. Suzuki, H. Yoshimura, M. Tsuruoka, Y. Wang, Y. Liu, H. Luo, Z. Xu, M. Mori, M. Kitano, K. Hosoe, T. Takeda, S. Usami and K. Higuchi, "Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice", Antioxid. Redox Signal., 2014, 20(16), 2606.
10) H. Nakagawa, A. Umemura, K. Taniguchi, J. Font-Burgada, D. Dhar, H. Ogata, Z. Zhong, M. A. Valasek, E. Seki, J. Hidalgo, K. Koike, R. J. Kaufman and M. Karin, "ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development", Cancer cell, 2014, 26(3), 331.
11) M. Sueyoshi, M. Fukunaga, M. Mei, A. Nakajima, G. Tanaka, T. Murase, Y. Narita, S. Hirata, and D. Kadowaki, "Effects of lactulose on renal function and gut microbiota in adenine-induced chronic kidney disease rats", Clinical and Experimental Nephrology., 2019,doi: 10.1007/s10157-019-01727-4.
12) S. Shiromizu, T. Yamauchi, N. Kusunose, N. Matsunaga, S. Koyanagi and S. Ohdo, Dosing Time-Dependent Changes in the Anti-tumor Effect of xCT Inhibitor Erastin in Human Breast Cancer Xenograft Mice', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, (11), 1921-1925.
13) K. Ogawa, A. Noda, J. Ueda, T. Ogata, R. Matsuyama, Y. Nishizawa, S. Qiao, S. Iwata, M. Ito, Y. Fujihara, M. Ichihara, K. Adachi, Y. Takaoka and T. Iwamoto, "Forced expression of miR-143 and -145 in cardiomyocytes induces cardiomyopathy with a reductive redox shift", Cell. Mol. Biol. Lett., 2020, doi:10.1186/s11658-020-00232-x.

よくある質問

Q どのようなサンプルが測れますか？: A

組織、血漿、赤血球、細胞のサンプルが測れます。
但し、血漿の場合はグルタチオン量が少ないため、検体によっては測り分けが困難な場合があります。

Q このKitで何サンプル測定できますか？: A

本キットは200testsです（96wellプレート2枚分）。

n=3とした場合、18サンプルの測り分けが可能です〈サンプルに着色がない場合）。

測り分けない場合（総グルタチオン量のみを測定する場合）は、50サンプル測定できます。

※サンプルに着色がある場合は、サンプルブランクの測定が必要です。

　サンプルブランクの測定方法は、FAQ 「サンプルに着色がある場合の測定方法」をご参照下さい。

※サンプルのレイアウト例：レーン1～6はGSSG濃度測定、レーン7～12は総グルタチオン濃度測定

Q サンプルに着色がある場合は、どうすればいいですか？: A

サンプルに着色がある場合、以下の2つの方法のどちらかでサンプルブランクを差し引くことが可能です。
①Kinetic methodで測定を行う。

　　※検量線の傾きで検量線を作成する為、サンプルブランクの影響を受けない。

②グルタチオン濃度算出の際、O.D.blankを引く代わりに、別途、測定したO.D. sample blankを引く。

　　グルタチオン（GSH, GSGG) = (O.D. sample – O.D. sample blank) / 検量線の傾き

　　＜O.D. sample blankの測定方法＞

　　　　　取扱説明書　「4. 測定」に従い、吸光度を測定する。

　　　　　その際、Coenzyme working solution, Enzyme working solutionを添加せず、

　　　　　Buffer solutionと純水を添加する。

Q GSSGとGSHの比率を測定することで、何が分かるのですか？: A

グルタチオンは通常、生体内で還元型（GSH）として存在していますが、
酸化ストレスなどの刺激によって酸化型（GSSG）に変換される為、

GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標となります。

Q GSH濃度はどのように求めるのですか？: A

検量線を基に求めた総グルタチオン（GSH＋GSSG)濃度とGSSG濃度より、

下式を用いてGSH濃度を算出します。

　GSH濃度＝総グルタチオン濃度－[GSSG濃度]×2

　※GSSG（酸化型グルタチオン）はGSH（還元型グルタチオン）２分子に相当します。

　　そのため、GSSG濃度を２倍にすることでGSH濃度に換算しています。

Q 推奨する5-スルホサリチル酸のメーカーやグレードはありますか？: A

特にメーカーの推奨はしておりません。試薬グレードの製品をご利用ください。

Q Masking reagentは、GSSG由来のGSHもマスキングしないのでしょうか？: A

酵素・補酵素添加後に、GSSGから生じたGSHは、マスキング剤と反応するより先にDTNBと反応してGSSGに戻るため、
GSSGから生じたGSHまでマスキングされることはありません。

Q マスキングの時間（37℃、1時間）が長くなってしまっても問題ありませんか？: A

多少長くなっても構いません。2時間まで測定実績がございます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) と何が違うのでしょうか？: A

今回のGSSG/GSH Quantification Kit（G257）はTotal Glutathione Quantification Kit(T419)では出来なかったGSSGとGSHの測り分けができます。
酸化ストレスの指標として、GSHとGSSGの比率は注目されています。

Q サンプル中のグルタチオン量が多いです。サンプルの希釈はできますか？: A

0.5％スルホサリチル酸（SSA)水溶液で希釈してください。
測定時のサンプル中SSA濃度は.0.5～1%にする必要があります。

SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。

Q 総グルタチオン量のみ測定する場合、マスキングの時間（37℃、1時間）は省略してよいですか？: A

省略可能です。
尚、本キットはGSSGとGSHの測り分けが可能な設計となっております。
測り分けが必要ない場合は、Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) もご利用いただけます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q 発色が弱い場合は、どうすればいいですか？: A

以下の3つが要因として考えられます。

1. 本キットでの測定範囲は 0.5 μmol/l 以上です。測定試料に含まれるグルタチオン量が、それよりも少ない可能性があります。
  測定範囲外の測定試料は、本キットでは測定できませんので、HPLC法など他の方法をご検討下さい。
  可能であれば、前処理の希釈倍率を下げる、サンプル量を増やすなど、測定試料の濃度を測定範囲以上にして下さい。
  ※発色を強める為に、発色の時間を長くすると検量線の直線性が得られなくなりますので、ご注意下さい。

2. 発色を阻害する物質が含まれている可能性があります。例えば、SH基と反応する化合物（マレイミド類）などは測定に影響を及ぼします。
  これらの化合物は前処理等で除くことができませんので、測定試料中に混在させない系で再度測定して下さい。

3.反応時のpHが低く、発色阻害が起こっている可能性があります。
   測定時にSSA濃度が1%以下になってるか、ご確認下さい。SSA濃度が1%以上の場合、発色阻害が起こります。
他の酸を用いた場合にはトリエタノールアミン等でpH7程度に中和するか、酸濃度が1％程度以下になるように希釈してから測定して下さい。

Q 測定値がマイナスになります。どのような要因がありますか。: A

以下の3つが要因として考えられます。

１．サンプル中のグルタチオン量が少ない可能性があります。
　　サンプルの量を増やして、ご検討ください。
　　なお、血漿はグルタチオン量が少なく、測定が困難な場合がございます。

2. サンプルの前処理中にGSHがアミノ基と副反応を起こして減少した可能性があります。
　　GSHは、中性条件で以下のような副反応により減少することが報告されています
（Methods in Enzymology, 1985, 113, 548）。
　　そのため、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。　　

　　GSH + amino acid ⇔　γ-Glu-amino acid +CysH-Gly (アミノ基転移)
　 GSH + H2O → Glu +CysH-Gly (加水分解)
　 GSH + GSH ⇔　γ-Glu-GSH +CysH-Gly (アミノ基転移)

３. サンプルの前処理中にGSHが酸化してGSSGとなった可能性があります。
　　2と同様、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。

Q 酸化ストレスの指標としてグルタチオンが測定されますが、他の酸化ストレスマーカーはありますか？: A

酸化ストレスマーカーに関する資料をご参考ください。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しております。

下記URLよりダウンロード可能です。
「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

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グルタチオン定量キット Total Glutathione Quantification Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Total Glutathione Quantification Kit

02 酸化ストレス関連試薬

Total Glutathione Quantification Kit

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬

グルタチオン定量キット

製品コード

T419　 Total Glutathione Quantification Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥36,500	348-90201

キット内容

100 tests	・Substrate（DTNB）　　　　・Enzyme Solution　　 50 μl ・Coenzyme　　　　・Buffer Solution　　　 50 ml ・Standard GSH	x2 x1 x2 x1 x1

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

特長

1) 高感度にtotal glutathioneを定量できる。
(検出範囲：6.25～100 μmol/L)
2) 一度に多検体の測定が可能である。

注意事項
キット開封後、各溶液の保存方法・保存期間は下記の通りである。
・Coenzyme working solution
純水で溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・Substrate working solution
溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・GSH standard solution
溶解後、-20℃にて保存。約2ヶ月使用できる。
・Enzyme working solution
希釈後、4℃にて保存。約2ヶ月使用できる。

参考文献

参考文献を表示する

    1) O. W. Griffith,"Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide Using Glutathione Reductase and 2-Vinylpyridine", Anal. Biochem., 1980, 106, 207.
    2) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
    3) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
    4) C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 415.
    5) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl,"Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
    6) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
    7) M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47(9), 3951.

よくある質問

Q 5-スルホサリチル酸(SSA)は何のために使用するのでしょうか？ SSAの代わりに使用できる試薬はありませんか？: A

「除タンパク質」と「GSHの安定化」の目的で使用します。
また、除タンパク質剤として通常用いられる酸（トリクロロ酢酸、過塩素酸、メタリン酸など）
では、SSAとピクリン酸がGSHの酸化を防ぐ効果が高いといわれています。

弊社のプロトコールどおりにSSAを使用された際には、反応時のpHが適正に
なるように調整されておりますが、他の酸を用いた場合には
トリエタノールアミン等でpH7程度に中和するか、
酸濃度が1％程度以下になるように希釈してから測定して下さい。

pHが低すぎると定量に影響します。

Q 酸化ストレスの指標としてグルタチオン濃度・GSH/GSSG比はよく測定されますが、グルタチオンの他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？: A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。

カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q サンプル中のglutathione量が多いのですが、サンプルを薄める時はどのようにすればよいのでしょうか？: A

水または0.5％スルホサリチル酸（SSA)で希釈してください。

5％SSAでも調製可能ですが、測定時にはSSA濃度を1％以下にする必要があります。

SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。

Q サンプル中のglutathione量が多いのですが、サンプルを薄める時はどのようにすればよいのでしょうか？: A

水または0.5％スルホサリチル酸（SSA)で希釈してください。

5％SSAでも調製可能ですが、測定時にはSSA濃度を1％以下にする必要があります。

SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。

Q グルタチオンのSH基に選択的に反応するのでしょうか？測定上、妨害物質となるものはありますか？: A

グルタチオンだけでなく、他のSH基を持つ化合物とも反応します。

また、必ずしもSH基選択的ではありません。その理由はキットに使用しているSH基との反応試薬(DTNB)が、
亜硫酸イオンやジスルフィドイオンとも同様の反応をするためです。また、シアンイオンなども妨害します。

妨害物質としては、アスコルビン酸,β-メルカプトエタノール,ジチオスレイトール[DTT]
のような還元性物質やシステイン、また、SH基と反応するような
化合物(マレイミドなど)は測定に影響を与えます。

その他として、アセトンなどの有機溶媒が共存すると吸光度が著しく変化します。
反応時のpHが低く(酸性)になることでも定量に影響を与えますのでご注意ください。

取扱条件

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タンパク質定量キット -Proteostain-Protein Quantification Kit-Rapid 同仁化学研究所

发表于2024年3月16日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

-Proteostain-Protein Quantification Kit-Rapid

19 その他の生化学、分析用試薬

-Proteostain-Protein Quantification Kit-Rapid

その他の生化学、分析用試薬

タンパク質定量キット

製品コード

PQ01　 -Proteostain-Protein Quantification Kit-Rapid

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
500 tests	￥11,600	347-90151
2500 tests	￥30,500	343-90153

キット内容

500 tests	[500回用] ・CBB Solution ・Standard BSA Solution (4,000 μg/ml)	100 ml x2 1.5 ml x1
2500 tests	[2500回用] ・CBB Solution ・Standard BSA Solution (4,000 μg/ml)	1,000 ml x1 1.5 ml x2

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコルタンパク質を定量したい

技術情報

キット以外に必要なもの

・20 μL, 200 μLマイクロピペッター（可変式）
・マイクロプレートリーダー(600 nmフィルター)
・96穴マイクロプレート
・1.5 mLチューブ（マイクロプレートリーダーが無い場合は、吸光光度計でも測定できます。）

よくある質問

Q たんぱく質の定量範囲: A

それぞれBSA換算で

Protein Quantification Kit-Rapidはstandard法で10 μg/mL～2000 μg/mLmicro法で1 μg/mL～50 μg/mLです。

Protein Quantification Kit-Wide rangeは100 μg/mL～5000 μg/mLになります。

Q 測定原理を教えて: A

RapidはBradford法を採用しています。

Coomassie Brilliant Blue G (CBB) をタンパク質検出試薬として用いており、高感度で反応が早いという特長を持っています。
Coomassie Brilliant Blue G はタンパク質に作用し、酸性条件で青色に呈色します。（λmax= 595 nm付近）

しかも呈色反応は1分以内に終了し、生じた色素は30分以上安定です。
この方法を使うことにより数分程度でタンパク質の定量を行うことが出来ます。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
危険・有害シンボルマーク

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–Nucleostain– DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting-

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＜キット以外に必要なもの＞

参考文献

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