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Genome Walking Kit酶试剂盒Takara

发表于2024年1月11日由whatman中国官网

Genome Walking Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6108	Genome Walking Kit	10 次	￥1,502

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■ 制品内容 (10 次量)

AP1 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl AP2 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl AP3 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl AP4 Primer (100 pmol/μl ) 50 μl Control Template (100 ng/μl )*1 10 μl Control Specific Primer SP1 (10 pmol/μl )*2 10 μl Control Specific Primer SP2 (10 pmol/μl )*2 10 μl Control Specific Primer SP3 (10 pmol/μl )*2 10 μl TaKaRa LA Taq (5 U/μl ) 25 μl 10X LA PCR Buffer II (Mg2+plus) 1 ml dNTP Mixture (2.5 mM each) 400 μl 6X Loading Buffer 1 ml   *1 Control Template 是Human HL60来源的基因组DNA。 *2 Control Specific Primers是根据人基因组中的ALDOA基因设计的特异性引物。

■ 制品说明

染色体步移技术 (Genome Walking) 是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以下几方面的应用： 1. 根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究； 2. 步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列； 3. 鉴定T-DNA或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等； 4. 用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列； 5. 用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。 对于基因组测序已经完成的少数物种 (如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等) 来说，可以轻松地从数据库中找到某物种已知序列的侧翼序列。但是，对于大多数生物而言，在不了解它们的基因组序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术。 以PCR技术为基础的染色体步移的主要问题是在预先不了解未知区域序列信息的情况下，如何设计两个特异性引物来扩增未知区域。而传统的染色体步移方法，如：反向PCR法、连接接头法等，都有操作复杂、非特异性扩增、连接效率低等弊端。 本试剂盒是一种根据已知基因组DNA序列，高效获取侧翼未知序列的试剂盒。相对于其它传统方法，本试剂盒具有高效、简便、特异性高、灵敏度高、一次性获得的未知序列较长等特点。其主要原理是根据已知DNA序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物(SP Primer)，与试剂盒中提供的四种经过特别设计的退火温度较低的兼并引物，即AP1、AP2、AP3、AP4进行热不对称PCR反应。通常情况下，其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称PCR反应，通过三次巢式PCR反应即可获取已知序列的侧翼序列。如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据第一次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。此外，本试剂盒中还含有Control DNA及Control Primer，可以方便进行Control实验。

■ 试剂盒原理：以使用兼并引物AP1为例。

图1. Genome Walking Kit的实验原理图

■ 各种引物的序列

引物名称 引物序列 (5’→3’)        Control Specific Primer SP1     AAATGCTGCAGCCTCCCTCTCACCC        Control Specific Primer SP2     AATACCAGAAATGTGCCCTCCCGTG        Control Specific Primer SP3     TGAGCTGGCAGGTTGTAGTCTCTGT

■ 特异性引物的设计

图2. Genome Walking Kit特异性引物设计示意图

特异性引物设计原则： 根据经过验证的已知序列区 (最好不少于500 bp) 设计三个特异性引物 (见上图)：设计方向为需要扩增的未知区域方向，SP2的位置应设计在SP1的内侧，SP3位于SP2的内侧。每两个引物之间的距离没有严格规定，一般以60-100 bp为宜。引物设计原则：引物的长度为22-26 nt，GC含量45-55%，Tm值60-70℃，引物Tm值计算公式：Tm=69.3+0.41(G/C)%×100 – 650/L (引物碱基数)。其他要求和普通PCR反应用引物相同。

■ 注意事项

1. 使用本试剂盒时，进行三次PCR反应时使用的AP引物必须是同种AP引物，即：1st PCR反应时使用的是AP1，则2nd和3rd PCR反应都必须使用AP1。对于不同物种，各条AP引物的扩增效率各不相同。 2. 在设计特异性引物时，SP3 Primer不要距离未知序列区域太远，一般以100-200 bp为宜，以增加获取未知序列的有效长度。

页面更新：2019-08-21 10:11:30

Genome Walking Kit酶试剂盒Takara

发表于2024年1月9日由whatman中国官网

Genome Walking Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6108	Genome Walking Kit	10 Rxns	￥1,502

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■ 制品内容 (10 次量)

AP1 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl AP2 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl AP3 Primer (100 pmol/μl ) 30 μl AP4 Primer (100 pmol/μl ) 50 μl Control Template (100 ng/μl )*1 10 μl Control Specific Primer SP1 (10 pmol/μl )*2 10 μl Control Specific Primer SP2 (10 pmol/μl )*2 10 μl Control Specific Primer SP3 (10 pmol/μl )*2 10 μl TaKaRa LA Taq (5 U/μl ) 25 μl 10 × LA PCR Buffer II (Mg2+plus) 1 ml dNTP Mixture (2.5 mM each) 400 μl 6 × Loading Buffer 1 ml   *1 Control Template 是Human HL60来源的基因组DNA。 *2 Control Specific Primers是根据人基因组中的ALDOA基因设计的特异性引物。

■ 制品说明

染色体步移技术 (Genome Walking) 是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以下几方面的应用： 1. 根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究； 2. 步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列； 3. 鉴定T-DNA或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等； 4. 用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列； 5. 用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。 对于基因组测序已经完成的少数物种 (如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等) 来说，可以轻松地从数据库中找到某物种已知序列的侧翼序列。但是，对于大多数生物而言，在不了解它们的基因组序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术。 以PCR技术为基础的染色体步移的主要问题是在预先不了解未知区域序列信息的情况下，如何设计两个特异性引物来扩增未知区域。而传统的染色体步移方法，如：反向PCR法、连接接头法等，都有操作复杂、非特异性扩增、连接效率低等弊端。 本试剂盒是一种根据已知基因组DNA序列，高效获取侧翼未知序列的试剂盒。本试剂盒是在TAIL-PCR (thermal asymmetric interlaced PCR，即交错热不对称PCR）的基础上进行改进的。相对于其它传统方法，本试剂盒具有高效、简便、特异性高、灵敏度高、一次性获得的未知序列较长等特点。其主要原理是根据已知DNA序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物(SP Primer)，与试剂盒中提供的四种经过特别设计的退火温度较低的兼并引物，即AP1、AP2、AP3、AP4进行热不对称PCR反应。通常情况下，其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称PCR反应，通过三次巢式PCR反应即可获取已知序列的侧翼序列。如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据第一次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。此外，本试剂盒中还含有Control DNA及Control Primer，可以方便进行Control实验。

■ 试剂盒原理：以使用兼并引物AP1为例。

图1. Genome Walking Kit的实验原理图

■ 各种引物的序列

引物名称 引物序列 (5’→3’)        Control Specific Primer SP1     AAATGCTGCAGCCTCCCTCTCACCC        Control Specific Primer SP2     AATACCAGAAATGTGCCCTCCCGTG        Control Specific Primer SP3     TGAGCTGGCAGGTTGTAGTCTCTGT

■ 特异性引物的设计

图2. Genome Walking Kit特异性引物设计示意图

特异性引物设计原则： 根据经过验证的已知序列区 (最好不少于500 bp) 设计三个特异性引物 (见上图)：设计方向为需要扩增的未知区域方向，SP2的位置应设计在SP1的内侧，SP3位于SP2的内侧。每两个引物之间的距离没有严格规定，一般以60-100 bp为宜。引物设计原则：引物的长度为22-26 nt，GC含量45-55%，Tm值60-70℃，引物Tm值计算公式：Tm=69.3+0.41(G/C)%×100 – 650/L (引物碱基数)。其他要求和普通PCR反应用引物相同。

■ 注意事项

1. 使用本试剂盒时，进行三次PCR反应时使用的AP引物必须是同种AP引物，即：1st PCR反应时使用的是AP1，则2nd和3rd PCR反应都必须使用AP1。对于不同物种，各条AP引物的扩增效率各不相同。 2. 在设计特异性引物时，SP3 Primer不要距离未知序列区域太远，一般以100-200 bp为宜，以增加获取未知序列的有效长度。

页面更新：2018-12-25 11:39:43

Random Primer（hexadeoxyribonucleotide mixture; pd(N)6）酶试剂盒Takara

发表于2024年1月7日由whatman中国官网

Random Primer（hexadeoxyribonucleotide mixture; pd(N)6）
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3801	Random Primer（hexadeoxyribonucleotide mixture; pd(N)6）	80 nmol	￥247

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■ 形态 冻结干燥品。   ■ 制品说明 本制品是由随机序列组成的6 mer脱氧核糖核酸混合物 (有46种可能序列)，序列5’末端 磷酸化。   ■ 保存 -20℃。   ■ 制备方法 固相亚磷酰胺法合成。   ■ 用途 1. 由mRNA合成cDNA时，可代替Oligo dT及其它特异性引物进行反转录反应，反应可在同一个离心管中进行。通常每μg mRNA使用100 pmol (随机) 引物。 2. 使用[α-32P] dCTP或DIG-dUTP进行DNA标记来替代缺口翻译。制备的探针可用于杂交。通常每μg DNA使用120 pmol (随机)引物。   ■ 使用注意 使用灭菌水溶解本制品。为避免反复冻融，请于-20℃分份保存。

页面更新：2019-04-16 11:38:28

Random Primer（nonadeoxyribonucleotide mixture; pd(N)9）酶试剂盒Takara

发表于2024年1月7日由whatman中国官网

Random Primer（nonadeoxyribonucleotide mixture; pd(N)9）
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3802	Random Primer（nonadeoxyribonucleotide mixture; pd(N)9）	50 nmol	￥229

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■ 形态 冻结干燥品。   ■ 制品说明 含有9个碱基的随机序列引物 (有49种可能序列)。5’末端磷酸化修饰。   ■ 保存 -20℃。   ■ 制备方法 固相亚磷酰胺法合成。   ■ 用途 1. 由mRNA合成cDNA时，可代替Oligo dT及其它特异性引物进行反转录反应。通常每μg mRNA使用100 pmol (随机) 引物。 2. 使用[α-32P] dCTP进行DNA标记来替代缺口翻译。制备的探针可用于杂交。通常每μg DNA使用120 pmol (随机) 引物。   ■ 注意事项 使用灭菌水或TE（10 mM Tris-HCl（pH 8.0）, 1 mM EDTA）溶解，于-20℃保存，避免反复冻融。

页面更新：2019-04-16 11:40:04

Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)酶试剂盒Takara

发表于2024年1月4日由whatman中国官网

Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3788	Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)	100 Rxns each	￥1,188

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■ 制品内容（100次量*1）

包含以下6对引物 GFP_primer-1*2 (2 μM each) 500 μl   GFP_primer-2*3 (2 μM each) 500 μl   lacZ_primer-1*4 (2 μM each) 500 μl   lacZ_primer-2*4 (2 μM each) 500 μl   Reference_primer-1*5 (2 μM each) 500 μl   Reference_primer-2*6 (2 μM each) 500 μl     *1 使用TB Green Premix ExTaq II试剂配制25 μl反应体系的使用次数。 *2 GFP_primer-1是在EGFP和AcGFP1相同序列区域设计的引物对 (Primer Mix)。 *3 GFP_primer-2是在EGFP特异区域设计的引物对 (Primer Mix)，不能检出AcGFP1基因。 *4 lacZ_primer-1，2是分别在lacZ (β-galactosidase)基因两个不同区域设计的引物对 (Primer Mix)。 *5 Reference_primer-1是扩增小鼠第15号染色体上的Ywhaz 基因一部分的引物对 (Primer Mix)。 *6 Reference_primer-2是扩增小鼠第4号染色体上的Raver2 基因一部分的引物对 (Primer Mix)。

■ 各制品信息

Primer名称 扩增片段大小   GFP_primer-1 127 bp   GFP_primer-2 162 bp   lacZ_primer-1 96 bp   lacZ_primer-2 141 bp   Reference_primer-1 115 bp   Reference_primer-2 89 bp

■ 制品说明

转基因鼠中作为导入基因的报告基因，GFP (EGFP、AcGFP1) 和lacZ 基因被广泛使用。通过Real Time PCR方法对报告基因进行检测，可以筛选导入基因个体。 本制品中还含有作为内参照使用的小鼠基因组DNA检测用的Primer Mix （检测Ywhaz基因和Raver2基因），使用Primer Mix （检测Ywhaz基因和Raver2基因）可以应用相对定量法对各种样品间导入的基因量进行比较。

■ 保存

-20℃。

页面更新：2021-02-08 15:00:18

Rat Housekeeping Gene Primer Set酶试剂盒Takara

发表于2024年1月4日由whatman中国官网

Rat Housekeeping Gene Primer Set
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3792	Rat Housekeeping Gene Primer Set	1 Set	￥1,338

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■ 制品内容

Rat_B2m_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Tbp_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Gusb_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Ppia_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Ywhaz_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Rps18_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Actb_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Atp5f1_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Rplp2_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Pgk1_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Hprt_primer (10 μM each) 100 μl     Rat_Gapdh_primer (10 μM each) 100 μl       注：各基因的信息 (GenBank Accession、Entrez Gene、Symbol) 、Perfect Real Time Support System 的Primer Set ID及扩增片段大小信息，详见说明书中的“管家基因相关信息表”。

■ 制品说明

使用Real Time RT-PCR方法进行基因相对表达量分析时，经常使用管家基因进行mRNA的校正。为了得到正确的定量结果，选择实验体系中稳定表达的管家基因非常重要。 本制品是为使用嵌合法进行Real Time RT-PCR解析实验时，提供一系列管家基因检出用的Primer Set。可以根据需要，选择适合各实验体系的参照基因。   ■ 保存 -20℃。

页面更新：2019-10-12 10:06:48

Human Housekeeping Gene Primer Set酶试剂盒Takara

发表于2024年1月4日由whatman中国官网

Human Housekeeping Gene Primer Set
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3790	Human Housekeeping Gene Primer Set	1 Set	￥1,338

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■ 制品内容

Human_ATP5F1_primer (10 μM each) 100 μl     Human_TFRC_primer (10 μM each) 100 μl     Human_YWHAZ_primer (10 μM each) 100 μl     Human_RPLP0_primer (10 μM each) 100 μl     Human_RPLP1_primer (10 μM each) 100 μl     Human_ACTB_primer (10 μM each) 100 μl     Human_RPLP2_primer (10 μM each) 100 μl     Human_HPRT1_primer (10 μM each) 100 μl     Human_B2M_primer (10 μM each) 100 μl     Human_RPS18_primer (10 μM each) 100 μl     Human_TBP_primer (10 μM each) 100 μl     Human_PGK1_primer (10 μM each) 100 μl     Human_PPIA_primer (10 μM each) 100 μl     Human_GAPDH_primer (10 μM each) 100 μl     Human_GUSB_primer (10 μM each) 100 μl       注：各基因的信息 (GenBank Accession、Entrez Gene、Symbol) 、Perfect Real Time Support System 的Primer Set ID及扩增片段大小信息，详见说明书中的“管家基因相关信息表”。

■ 制品说明

使用Real Time RT-PCR方法进行基因相对表达量分析时，经常使用管家基因进行mRNA的校正。为了得到正确的定量结果，选择实验体系中稳定表达的管家基因非常重要。 本制品是为使用嵌合法进行Real Time RT-PCR解析实验时，提供一系列管家基因检出用的Primer Set。可以根据需要，选择适合各实验体系的参照基因。

■ 保存

-20℃。

页面更新：2021-02-08 13:32:39

Mouse Housekeeping Gene Primer Set酶试剂盒Takara

发表于2024年1月4日由whatman中国官网

Mouse Housekeeping Gene Primer Set
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3791	Mouse Housekeeping Gene Primer Set	1 Set	￥1,338

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■ 制品内容

Mouse_Atp5f1_prime (10 μM each) 100 μl     Mouse_B2m_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Hprt1_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Rplp1_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Ppia_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Rps18_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Pgk1_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Gusb_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Tbp_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Actb_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Tfrc_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Ywhaz_primer (10 μM each) 100 μl     Mouse_Gapdh_primer (10 μM each) 100 μl       注：各基因的信息 (GenBank Accession、Entrez Gene、Symbol) 、Perfect Real Time Support System 的Primer Set ID及扩增片段大小信息，详见说明书中的“管家基因相关信息表”。

■ 制品说明

使用Real Time RT-PCR方法进行基因相对表达量分析时，经常使用管家基因进行mRNA的校正。为了得到正确的定量结果，选择实验体系中稳定表达的管家基因非常重要。 本制品是为使用嵌合法进行Real Time RT-PCR解析实验时，提供一系列管家基因检出用的Primer Set。可以根据需要，选择适合各实验体系的参照基因。   ■ 保存 -20℃。

页面更新：2021-02-08 15:27:59