APE 1 货 号 #M0282LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

APE 1                              收藏

APE 1                 货   号                  #M0282L APE 1                 货   号                  #M0282L APE 1                 货   号                  #M0282L APE 1                 货   号                  #M0282L APE 1                 货   号                  #M0282L

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#M0282L
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#M0282S
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特性

 单细胞凝胶电泳(彗星试验)
 碱洗脱
 碱解旋
 改良切刻翻译 

概述

人源脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶APE 1,也称为 HAP 1 或 Ref-1,与大肠杆菌外切酶 III 蛋白具有同源性。APE 1水解断裂脱嘌呤/脱嘧啶位点 5´ 端的磷酸二酯键,产生单链 DNA 断裂,留下 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端。除具有 AP 核酸内切酶活性外,据报道 APE1 还具有弱的 DNA 3´ 二酯酶、3´ 到 5´ 核酸外切酶和 RNase H 活性。
除 DNA 修复活性外,APE 1 还能体外调控许多转录因子的 DNA 结合活性。APE 1 已被证实能刺激 Fos-Jun 异源二聚体、Jun-Jun 同源二聚体、Hela 细胞 AP-1 蛋白以及包括 NF-kB、Myb 和 ATF/CREB 家族成员在内的其它几种转录因子的 DNA 结合活性。 

来源

克隆有人 APE 1 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X NEBuffer 4
[50 mM KAc,20 mM Tris-Ac,10 mM Mg(Ac)2,1 mM DTT(pH 7.9 @ 25℃)],37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

APE 1 核酸内切酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中,37℃ 条件下,1 小时能切割 20 pmol 含一个 AP 位点* 的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

* AP 位点的创建方法如下:37℃ 条件下,用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖基化酶(UDG)处理 20 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 bp 寡核苷酸双链 2 分钟。

彗星试验的推荐稀释倍数

1:103。详细步骤请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

热敏磷酸酶 货 号 #M0289LNEB酶试剂 New England Biolabs

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热敏磷酸酶                              收藏

热敏磷酸酶                货   号                  #M0289L 热敏磷酸酶                货   号                  #M0289L 热敏磷酸酶                货   号                  #M0289L 热敏磷酸酶                货   号                  #M0289L

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#M0289L
5,000 units
3,209.00

#M0289S
1,000 units
769.00

#M0289V
500 units
409.00

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特性

 DNA 和 RNA 的去磷酸化

 克隆载体去磷酸化,防止载体自连
 测序或 SNP 分析前除去 PCR 反应中dNTP 和焦磷酸盐
 T4 PNK 标记 5´ DNA 末端前的去磷酸化

概述

热敏磷酸酶催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外,热敏磷酸酶水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸(NTP 和 dNTP)。热敏磷酸酶在分子生物学研究中应用广泛,如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团,用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中,对线性载体去磷酸化,防止自连。该酶可以作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端。热敏磷酸酶也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP,用于制备测序模板和 SNP 分析。热敏磷酸酶 在 70℃ 温育 5 分钟即可完全的、不可逆的失活,因此,在连接或末端标记之前,可以不用去除热敏磷酸酶。 

来源

克隆有 TAB5 AP 基因的 E. coli 菌株,该基因最初克隆于质粒 pNI 中,后来重新克隆于质粒 pEGTAB7-4.1 中。 

反应条件

1X 热敏磷酸酶反应缓冲液
[50 mM Bis Tris-丙烷 HCl,1 mM MgCl2,0.1 mM ZnCl2(pH 6.0 @ 25℃)],37℃ 温育。
热失活:80℃ 加热 2 分钟。 

质保声明

热敏磷酸酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

 
1 μg 经内切酶消化产生 5´ 凹陷末端的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 > 95% 的 DNA 再环化(通过转化 E. coli 细胞来检测)。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
 

浓度

5,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

热稳定无机焦磷酸酶 货 号 #M0296LNEB酶试剂 New England Biolabs

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热稳定无机焦磷酸酶                              收藏

热稳定无机焦磷酸酶               货   号                  #M0296L 热稳定无机焦磷酸酶               货   号                  #M0296L 热稳定无机焦磷酸酶               货   号                  #M0296L

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#M0296L
1,250 units
3,249.00

#M0296S
250 units
809.00

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特性

  增强 DNA 复制

热稳定无机焦磷酸酶               货   号                  #M0296L

概述

无机焦磷酸酶(PPase)催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。 

P207–4 + H20 → 2HP04–2

来源

重组 E. coli 菌株,携带从极度耐热的 Thermococus litoralis 中克隆的无机焦磷酸酶基因。 

单位定义

1 单位指标准反应条件下 [0.5 ml 反应体系,50 mM Tricine(pH 8.5),1 mM MgCl2 和 0.32 mM PPi,75℃ 反应 10 分钟],每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐的酶量。 

浓度

2,000 units/ml。 

Cre 重组酶 货 号 #M0298LNEB酶试剂 New England Biolabs

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Cre 重组酶                              收藏

Cre 重组酶                货   号                  #M0298L Cre 重组酶                货   号                  #M0298L Cre 重组酶                货   号                  #M0298L Cre 重组酶                货   号                  #M0298L

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#M0298L
250 units
3,229.00

#M0298M
(高浓度5X)250 units
3,229.00

#M0298S
50 units
799.00

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特性

 两个 loxP 位点之间 DNA 的切割
 含 loxP 位点 DNA 分子的融合
 loxP 位点之间 DNA 序列的翻转 

概述

Cre 重组酶是细菌噬菌体 P1 的 I 型拓扑异构酶,催化 loxP 位点间的 DNA 进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre 介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP 识别一个 34 bp 序列,其两端是两个 13 bp 的反向重复序列,中间是起定向作用的 8 bp 间隔区。重组产物根据 loxP 位点的位置和相对方向而不同,两个含单 loxP 位点的 DNA 将被融合。两个正向重复 loxP 位点间的 DNA 将以环状形式切割,而两个反向 loxP 位点间的 DNA 序列将被翻转。 
 

来源

纯化自重组 E. coli 菌株,其携带有编码细菌噬菌体 P1 的 Cre 重组酶的质粒,酶的 N 端添加了丙氨酸和甘氨酸残基。 

反应条件

1X Cre 重组酶反应缓冲液
[33 mM NaCl,50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2],37℃ 温育。
热失活:70℃ 加热 10 分钟。 

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系,37℃ 条件下,30 分钟使 0.25 μg 的 pLox2+ 对照 DNA 产生最大位点特异性重组所要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后进行氨苄抗性平板筛选。 

浓度

1,000 units/ml 和15,000 units/ml

注意事项

建议进行琼脂糖凝胶电泳前,将 Cre 重组酶反应混合物于 70℃ 温育 10 分钟。

由于 Cre 重组酶反应是一个动态平衡过程,用 loxP2+ 对照底物仅有 20-30%发生重组。由于重组产物的量较少,故溴化乙锭染色后呈现微弱条带,同时伴有底物染色强度相应减弱。

延长温育时间不会提高重组效率,反而还可能导致大分子量重组产物的生成。


反应中增加 Cre 重组酶量将形成 loxP 依赖性 Cre-DNA 复合物,从而抑制重组反应。 

对照 DNA

线性化 pLox2+ 长 3,625 bp,距两端 400 bp 处各有一 loxP 位点。两 loxP 位点之间有一复制原点和一个氨苄青霉素抗性基因。loxP 位点之间的重组产生一个环状(2,787 bp)的氨苄青霉素抗性质粒(0.8% 琼脂糖凝胶电泳约 1.7 kb 大小)和一个 838 bp 长的 DNA 片段。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

核酸内切酶 V 货 号 #M0305SNEB酶试剂 New England Biolabs

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核酸内切酶 V                              收藏

核酸内切酶 V                 货   号                  #M0305S 核酸内切酶 V                 货   号                  #M0305S 核酸内切酶 V                 货   号                  #M0305S 核酸内切酶 V                 货   号                  #M0305S 核酸内切酶 V                 货   号                  #M0305S

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#M0305S
250 units
839.00

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特性

 切割含脱氧次黄嘌呤核苷的寡核苷酸
 切割错配 

概述

核酸内切酶 V 是在 E. coli 中发现的一种 DNA 修复酶。它识别 DNA 中的脱氧次黄嘌呤核苷,即脱氧腺苷的去氨基产物。核酸内切酶 V,也称为脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 内切酶,识别含脱氧次黄嘌呤核苷(无论配对与否)的双链或单链 DNA。也可识别含脱碱基(AP)位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对 loop 环、折叠 flaps 和类 -Y 型结构的 DNA,但是识别后者的能力不如前者。普遍认为核酸内切酶 V 发挥 DNA 修复功能时,还需另外一种蛋白的存在,因为它不能切除 DNA 上的脱氧次黄苷或受损碱基。
 
核酸内切酶 V 对错配脱氧次黄嘌呤核苷 3´ 端第二个磷酸二酯键进行切割,产生一个 3´ 羟基、5´ 磷酸的切刻。 

来源

重组 E. coli 菌株,携带有 Endo V 基因与编码麦芽糖结合蛋白(MBP)基因的融合基因。融合蛋白纯化后具有生物活性。该蛋白含 223 个氨基酸,分子量为 24.9 kDa。 

反应条件

1X NEBuffer 4
[50 mM KAc,20 mM Tris-Ac,10 mM Mg(Ac)2 ,1 mM DTT(pH 7.9 @ 25℃)],37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。 

质保声明

核酸内切酶 V 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 10 μl反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内能够切割 1 pmol 含单脱氧次黄嘌呤核苷位点* 的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

* 脱氧次黄嘌呤核苷位点的制备:合成 34 mer 寡核苷酸双链时,在其一条链的中间掺入脱氧次黄嘌呤核苷(dI)碱基。 

浓度

10,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

PreCR® 修复混合液 货 号 #M0309LNEB酶试剂 New England Biolabs

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PreCR® 修复混合液                              收藏

PreCR® 修复混合液               货   号                  #M0309L PreCR® 修复混合液               货   号                  #M0309L PreCR® 修复混合液               货   号                  #M0309L

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#M0309L
150 次反应
7,039.00

#M0309S
30 次反应
1,759.00

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相关产品

beta-Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+)

 
 

特性

 用于 PCR 反应、微阵列分析和其它 DNA 技术
 操作简便
 不损伤模板  

PreCR® 修复混合液               货   号                  #M0309L

概述

PreCR 修复混合液是一种鸡尾酒式的酶混合试剂,用于在 PCR 反应、微阵列分析或其它 DNA 技术之前,修复受损的 DNA 模板。PreCR 修复混合液作用于多种受损 DNA,包括那些阻碍 PCR 反应的损伤(如:缺嘌呤/缺嘧啶点、胸腺嘧啶二聚体、切刻和缺口)和经诱导而发生突变的位点(如:脱氨基胞嘧啶和 8-氧鸟嘌呤)。此外,它将去除 DNA 3´ 末端的多种半基团而保留羟基基团。PreCR 修复混合液不能修复所有抑制和干扰 PCR 的损伤。PreCR 修复混合液可以与任何一种嗜热聚合酶配合使用。 

来源

混合液中每一种重组蛋白都来自 E.coli 菌株的表达。  

应用

在 PCR 或其它 DNA 技术之前修复 DNA。  

试剂组成

1X PreCR 修复混合液
10X ThermoPol 反应缓冲液
100X NAD+ 溶液
对照模板(紫外损伤的 λDNA)
对照模板使用的 PCR 引物

纯化的 BSA 

PreCR® 修复混合液               货   号                  #M0309L
使用 PreCR 修复混合液修复不同类型的 DNA 损伤。胶图显示了经过 PreCR 修复混合液处理(+)和未经处理(-)的受损 DNA 的扩增结果。DNA 损伤的类型已经在图上方给出。注意:热处理 DNA 为 99℃ 温育 3 分钟。Marker M 是 2- Log DNA Ladder (NEB #3200)。

DNA 损伤类型
PreCR® 修复混合液               货   号                  #M0309L
 

南极热敏 UDG 货 号 #M0372LNEB酶试剂 New England Biolabs

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南极热敏 UDG                              收藏

南极热敏 UDG                 货   号                  #M0372L 南极热敏 UDG                 货   号                  #M0372L 南极热敏 UDG                 货   号                  #M0372L 南极热敏 UDG                 货   号                  #M0372L 南极热敏 UDG                 货   号                  #M0372L

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#M0372L
500 units
3,689.00

#M0372S
100 units
909.00

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特性

 去除 PCR 残存污染
去除单链或双链 DNA 尿嘧啶碱基
 

概述

南极热敏 UDG (尿嘧啶-DNA 糖基化酶)能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶,产生的缺嘧啶位点,在高温或高 pH 下,极易水解断裂。升高温度和 pH 都会影响其水解活性。该产品对高温敏感,50℃ 以上就可以将酶完全失活。 

来源

克隆有来自嗜冷海洋细菌(psychrophilic marine bacterium)UDG 基因的重组 E. coli 菌株。 

反应条件

1X 标准 Taq 反应缓冲液
[10 mM Tris-HCl,50 mM KCl,1.5 mM MgCl2(pH 8.3 @25℃)],37℃ 温育。
热失活:50℃ 加热 5 分钟。 

质保声明

南极热敏 UDG 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量。检测条件为:50 μl 标准 Taq 反应缓冲液中,37℃ 条件下,30 分钟从含 0.2 μg DNA(104-105 cpm/μg)的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。 

浓度

1,000 units/ml。 

注意事项

南极热敏 UDG 在多数 PCR 反应缓冲液中均有活性,但活性受高离子强度(> 100 mM)抑制。 

参考文献

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β-琼脂糖酶 I 货 号 #M0392LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 其它

β-琼脂糖酶 I                              收藏

β-琼脂糖酶 I                 货   号                  #M0392L β-琼脂糖酶 I                 货   号                  #M0392L β-琼脂糖酶 I                 货   号                  #M0392L β-琼脂糖酶 I                 货   号                  #M0392L β-琼脂糖酶 I                 货   号                  #M0392L

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#M0392L
500 units
3,529.00

#M0392S
100 units
879.00

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特性

 从琼脂糖凝胶中提取 DNA
 不含 DNase 和 RNase 

概述

β-琼脂糖酶切割琼脂糖亚单位或未置换的新琼脂乙糖(3,6-酐-α-L-吡喃型半乳糖基-1-3-D-半乳糖)生成新琼脂-寡糖。β-琼脂糖酶 I消化琼脂糖,形成不能再成胶的碳水化合物分子,同时释放所俘获的 DNA。通常残留的碳水化合物分子或 β-琼脂糖酶 I 不会影响随后的限制性内切酶消化、连接反应及转化反应等 DNA 操作。 

来源

重组 E. coli 菌株,此菌株的质粒上携带有 β-琼脂糖酶 I 的编码基因。 

反应条件

1X β-琼脂糖酶 I 反应缓冲液
[10 mM Bis Tris-HCl(pH 6.5 @ 25℃),1 mM EDTA],42℃ 温育。 

注意事项

琼脂糖:由于在反应温度 42℃ 条件下,溶液必需呈液态,所以仅低熔点琼脂糖适合于用 β-琼脂糖酶 I 消化。
pH 敏感性:β-琼脂糖酶 I 在 pH 6.5 时有最适酶活力,在 pH 5.0-8.5 范围内可以保持 > 75% 的酶活力。
盐敏感性:NaCl 或 Na2EDTA 浓度在 50 到 500 mM之间不影响 β-琼脂糖酶 I 活性。 

质保声明

β-琼脂糖酶 I 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指 42℃ 条件下,1 小时消化 200 μl 低熔点琼脂糖或 NuSieve 琼脂糖生成可溶性新琼脂-寡糖所需的酶量。

经 β-琼脂糖酶 I处理后乙醇沉淀的琼脂糖量 

β-琼脂糖酶 I                 货   号                  #M0392L

65℃ 条件下在含 1 mM Na2EDTA 的 10 mM Bis Tris-HCl 中熔化含 200 μl 1% 低熔点琼脂糖凝胶的样品,冷却到 42℃,加入 1 单位或 2 单位的 β-琼脂糖酶 I 反应不同时间。不能被消化的琼脂糖可通过加入终浓度为 250 mM 的 NaOAc 和 75% 的异丙醇,-70℃ 冷却来沉淀,沉淀后的琼脂糖可通过在 0.1 N 的 HCl中煮沸水解。碳水化合物含量以占 200 μl 未消化低熔点琼脂糖凝胶的百分比表示。

浓度

1,000 units/ml。 

热失活

95℃ 加热 2 分钟或 65℃ 15 分钟温育可使 50 单位的 β-琼脂糖酶 I 失活。β-琼脂糖酶 I 可以在 45-50℃ 保持几个小时的活性。反应体系中存在琼脂糖可以稳定 β-琼脂糖酶 I。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

快速去磷酸化试剂盒 (停产有替代) 货 号 #M0508LNEB酶试剂 New England Biolabs

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快速去磷酸化试剂盒 (停产有替代)                              收藏

快速去磷酸化试剂盒 (停产有替代)             货   号                  #M0508L

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#M0508L
500 次反应
3,119.00

#M0508S
100 次反应
789.00

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特性

 DNA 和 RNA 的去磷酸化
 克隆载体去磷酸化,防止载体自连
 测序或 SNP 分析前除去 PCR 反应中dNTP 和焦磷酸盐
 T4 PNK 标记 5´ DNA 末端前的去磷酸化

停产通知

 请注意:该产品已停产,库存售完为止,替代产品为M0525

概述

快速去磷酸化试剂盒中的快速小牛肠碱性磷酸酶(CIP)是热敏重组 CIP。快速 CIP 非特异性的催化 DNA 和 RNA  5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外,快速 CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸(NTPs 和 dNTPs)。快速 CIP 能去除DNA 和 RNA 末端的磷酸基团,其应用广泛。在克隆中,该酶对线性载体去磷酸化,防止自连。快速 CIP 10 分钟即可使 5´ 突出端、凹陷端和平末端去磷酸化。该酶还可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTPs,用于制备测序模板和 SNP 分析。
 
不像野生型 CIP,快速 CIP 可以热失活,80℃ 2 分钟即可完全不可逆的热失活,从而在连接和末端标记前没必要除去该酶。

 
快速去磷酸化试剂盒包括:
– CutSmart 缓冲液
– 快速小牛肠碱性磷酸酶(CIP)

质保声明

快速去磷酸化试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

贮存与使用

存储温度

-20°C 

注意事项

1.      与大部分的磷酸酶一样,快速 CIP 的活性依赖于 Zn2+ Mg2+。该酶在配方中,已经将锌原子结合到活性中心,因此,反应时无需添加额外的锌离子或其他辅助因子。

2.      CIP 1X NEBuffer 1.12.13.1 NEBuffer 1234中均有活性。

3.      快速 CIP 在一价盐离子存在时,其活性可被增强。

4.      金属螯合剂 ( EDTA )、无机磷酸盐和磷酸盐类似物等可抑制快速 CIP 活性。

5.      还原剂( DTTβ-巯基乙醇)的存在可抑制快速 CIP 活性。 

参考文献

1.      Weissig, H. et al. (1993). Biochem. J. 290, 503-508.

2.      Manes, T (1998). J. Biol. Chem.. 273, 23353-23360. 

快速 CIP 货 号 #M0525LNEB酶试剂 New England Biolabs

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快速 CIP                              收藏

快速 CIP                货   号                  #M0525L 快速 CIP                货   号                  #M0525L 快速 CIP                货   号                  #M0525L 快速 CIP                货   号                  #M0525L

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#M0525L
5,000 units
5,289.00

#M0525S
1,000 units
1,099.00

#M0525V
500 units
589.00

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特性

快速且不可逆的热失活,节省纯化步骤
贮存稳定性优于野生型酶
快速 CIP 反应时无需加入锌等额外添加剂因此建立反应速度更快反应时间更短仅 10分钟
反应条件灵活,兼容任何限制性内切酶缓冲液,无需纯化
活性更高,所需酶量更少,降低单次反应成本
无需备有多个磷酸酶,快速 CIP 可从 DNA、RNA 和 dNTPs 中去除 5 ‘ – 和 3 ‘ – 磷酸基
降解 PCR 产物中未掺入的 dNTP,提高 DNA 测序和 SNP 分析质量
重组酶保证纯度、批间一致性和更高性价比

概述

快速 CIP (M0525) 是重组表达的热敏小牛肠碱性磷酸酶(CIP)。本产品是小牛肠碱性磷酸酶(CIP,M0290)和快速去磷酸化试剂盒(M0508)的替代产品。

快速 CIP 催化 DNA 和 RNA 5´ 和 3´ 磷酸单脂的去磷酸化反应。另外,快速CIP 水解核糖和脱氧核糖核苷三磷酸(NTP 和 dNTP)。快速 CIP 在分子生物学研究中应用广泛,如去除 DNA 和 RNA 末端的磷酸基团,用于后续的克隆和探针末端标记。在克隆中,对线性载体去磷酸化,防止自连。该酶可以快速作用于 5´ 突出端、凹陷端和平末端,反应时间仅需 10 分钟。快速 CIP 也可以用来降解 PCR 反应中的游离 dNTP,用于制备测序模板和 SNP分析

与野生型 CIP 相比,快速 CIP 在 80°C 加热 2 分钟即可 100% 不可逆热失活,无需加入任何其他试剂如镁离子、EDTA 等。因此在连接或者末端标记前无需纯化处理。

来源

 小牛肠碱性磷酸酶基因克隆自小牛肠粘膜并在毕赤酵母中表达。

反应条件

 

 1X CutSmart 反应缓冲液

[50 mM KAc, 20 mM Tris-Ac, 10 mM Mg(Ac)2,100 μg/ml BSA(pH 7.9 @ 25℃)],37℃ 温育。
 

质保声明

 

 快速 CIP 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

详情请登陆 https://www.neb.com/products/m0525-quick-cip#Product%20Information

单位定义

 1 单位指在 1 ml 反应体系中,37℃ 条件下,1 分钟催化 1 μmol 的对硝基苯磷酸盐(PNPP)水解成对硝基苯酚所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 https://www.neb.com/products/m0525-quick-cip#Product%20Information

浓度

 5000 units/ml

参考文献

 关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 https://www.neb.com/products/m0525-quick-cip#Product%20Information

KLD 酶混合液 货 号 #M0554SNEB酶试剂 New England Biolabs

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KLD 酶混合液                              收藏

KLD 酶混合液             货   号                  #M0554S

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#M0554S
25 reactions
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KLD 酶混合液
#M0554S 25次反应 . . . . . .¥3,599

特性:

 KLD 酶混合液             货   号                  #M0554S

概述

 概述:Q5 定点突变试剂盒可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变,该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶,结合客户自行设计的引物,在各种质粒中引入替换、缺失和插入突变。为保证效率,将产物转入试剂盒提供的高效级 NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞,质粒长度可达 14.3 kb。

应用:

 • 在质粒 DNA 上产生替换、插入、缺失突变

Q5 定点突变试剂盒包含:

 – Q5 热启动超保真预混液(2X)

– KLD 酶混合液(10X)和反应缓冲液(2X)
– 对照引物混合液(各 10 μM)和 DNA 模板
(5 ng/μl)
– NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(高效级)
– pUC19 转化对照质粒(5 pg/μl)
– SOC Outgrowth 培养基

质保声明:

 Q5 定点突变试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

实验流程:

 KLD 酶混合液             货   号                  #M0554S

热敏核酸外切酶 I 货 号 #M0568LNEB酶试剂 New England Biolabs

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热敏核酸外切酶 I                              收藏

热敏核酸外切酶 I                货   号                  #M0568L 热敏核酸外切酶 I                货   号                  #M0568L 热敏核酸外切酶 I                货   号                  #M0568L 热敏核酸外切酶 I                货   号                  #M0568L

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#M0568L
15,000 units
3,839.00

#M0568S
3,000 units
949.00

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特性

去除 DNA 测序或 SNP 分析前 PCR 反应体系中单链引物

去除巢式 PCR 反应体系中单链引物
从双链 DNA 中去除单链 DNA
 

概述

 具有从 3’→5’方向水解单链 DNA 的外切酶活性。

反应条件

1X NEBuffer 3.1,37℃ 温育。

热失活:80℃ 加热 1 分钟。
 

单位定义

 1 单位指在 37℃ 条件下,100 μl 体系,6 分钟内催化释放 2 nmol 的酸可溶性核苷酸所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

浓度

 20,000 units/ml

热稳定 FEN1 货 号 #M0645SNEB酶试剂 New England Biolabs

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热稳定 FEN1                              收藏

热稳定 FEN1                 货   号                  #M0645S 热稳定 FEN1                 货   号                  #M0645S 热稳定 FEN1                 货   号                  #M0645S 热稳定 FEN1                 货   号                  #M0645S 热稳定 FEN1                 货   号                  #M0645S

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#M0645S
1,600 units
909.00

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特性

  切除 DNA flap 结构

概述

 热稳定 Flap 核酸内切酶 1 (FEN1) 催化切除分叉双链 DNA 底物中的flap 结构,产生 5´ 磷酸末端。DNA 连接酶可以连接 FEN1 消化产物产生双链 DNA。在体内,FEN1 是冈崎片段加工成熟的基本元件,并参与调控碱基切除修复过程。

来源:

 纯化自含 Thermococcus 9°N FEN1 基因的 E.coli 菌株。

反应条件:

1X ThermoPol 反应缓冲液

[20 mM Tris-acetate,10 mM (NH4)2SO4,10 mM KCl,
10 mM MgSO4,0.1% Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃)],65℃温育。

质保声明:

热稳定 FEN1 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆

www.neb.com 或 www.neb-china.com。

单位定义:

 1 单位指在 10 μl 反应体系中,65℃ 条件下,10 分钟内切割 10 pmol 含 5´ flap 结构的寡核苷酸底物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆

www.neb.com 或 www.neb-china.com。

浓度:

32,000 units/ml

参考文献:

 关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。

核酸消化混合液 货 号 #M0649SNEB酶试剂 New England Biolabs

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核酸消化混合液                              收藏

核酸消化混合液              货   号                  #M0649S 核酸消化混合液              货   号                  #M0649S

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#M0649S
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特性

  Convenient one-step protocol
  Digests both DNA and RNA to single nucleosides
  Low-glycerol formulation significantly reduces glycerol-induced ion suppression during MS analysis

概述

核苷消化混合液是复合酶,能一步将 DNA 或 RNA 消化成单核苷,省去了多步耗时的消化步骤,特别适用于液相色谱-质谱(LC-MS)定量分析。

反应条件

1X Nucleoside Digestion Mix Reaction Buffer.   Incubate at 37°C.

贮存温度

-20°C

注意事项

1.  Dilution of the Nucleoside Digestion mix may result in a decrease of enzymatic activity and incomplete

      digestion of substrate. Therefore, we recommend using 1 µL of the Nucleoside Digestion Mix for

      digestion of samples containing < 1 µg of DNA or RNA substrate.
2.  Samples containing a large number of modifications (particularly modifications at the ribose 2´-position)

     may benefit from overnight incubation with the Nucleoside Digestion Mix in order to achieve complete

     digestion. No signal deterioration has been observed by incubating DNA or RNA samples with the

      Nucleoside Digestion Mix for up to 24 hours at 37°C. Alternatively, the ratio of Nucleoside Digestion

      Mix:nucleic acid may be increased from 1 μl/μg substrate to 5-10 μl/μg substrate to ensure complete

      digestion.
3.  Although it is not necessary to stop the reaction prior to LC-MS, the mix can be inactivated by the

     addition of EDTA (5 mM, final concentration).
4.  In order to reduce the ion suppression effects of glycerol, the Nucleoside Digestion Mix has been

     formulated to contain very little glycerol (<1%) and therefore the mix will freeze when stored at -20°C.

     The mix is stable for >2 years when stored at -20°C and can withstand 50 freeze-thaw cycles without

     significant activity loss.
5.  As carryover of certain reaction components (e.g., EDTA, detergents, etc) from upstream steps may

     result in incomplete digestion, it is highly recommended that DNA or RNA substrates be purified

     (column purification/phenol chloroform extraction) before digestion with the Nucleoside Digestion

     Mix.

切割错配核酸内切酶 I 货 号 #M0678SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – DNA 修复蛋白

切割错配核酸内切酶 I                              收藏

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#M0678S
4,000 units
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产品特点

 切割错配核酸内切酶 I            货   号                  #M0678S

DNA 核酸内切酶
催化切割一些 DNA 错配(T:T,G:G 和 G:T)
在两条链上错配碱基 5端的第三个磷酸二酯键处切割,切割后产生 5 bp 粘性末端,含 3′-OH 和 5′- 磷酸
对于 T 错配切割效果最好;无法识别所有类型的 DNA 错配
 

产品描述

切割错配核酸内切酶 I 是一种依赖 Mg2+ 的 DNA 核酸内切酶,可特异切割错配碱基对(T:T、G:G 和 T:G 错配)。切割错配核酸内切酶 I 在两条链上错配碱基 5端的第三个磷酸二酯键处切割,切割后产生 5 bp 粘性末端。切割错配核酸内切酶 I 优先切割的 DNA 错配为:T:T、G:G 和 T:G,也可轻松切割 T:I、G:I 和 G:U 错配。此外,实验证明:切割错配核酸内切酶 I 在 T:C 类型的 DNA 错配中可在含 T 的链上形成切刻。该酶还能切割 DNA:RNA 杂交链上的 T:G 和 T:U 错配,但其切割效率低于 DNA:DNA 错配。

 

图 1.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配
切割错配核酸内切酶 I            货   号                  #M0678S

A)构建四个在同一位点包含特定突变质粒(p1-p4),使用差异磷酸化引物(正向或反向)扩增生成 8 个双链 PCR 片段,长度约 672 bp ds1-ds8)。经 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒(NEB #T1030)纯化后,使用 5 units Lambda 核酸外切酶,经37℃孵育 60 分钟,以特异性降解双链片段中的磷酸化链(2.2 µg),从而产生一系列单链(正链/负链),同一位点碱基为 A/T/C/G。随后使用 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒(NEB #T1030)对这些单链片段(ss1-ss8)进行纯化。

B)将纯化后的含有 A/T/C/G 的单链片段进行混合,可形成精准配对的 DNA(绿色 √ 框)或含单碱基错配的双链片段(黄色 × 框)。为了生含错配碱基的双链,在下述条件下,选择特定的正/反义链进行混合:在 1X NEBuffer 2.1 中重新退火,加热至 95℃,再冷却至室温。上述实验可产生 8 DNA 错配(A:AA:CA:GC:CC:TG:GG:TT:T)。(C)如下方法检测该酶切割 dsDNA 中特定错配的能力:在 200 ng 含错配的 dsDNA 中加入 80 units 切割错配核酸内切酶 I37℃孵育 30 分钟。后将产物进行琼脂糖(1.2%)凝胶电泳并用溴化乙锭染色观察。

 

图 2.切割错配核酸内切酶 I 能够切割双链 DNA 上的 T:T、G:T 和 G:G 错配 

 

切割错配核酸内切酶 I            货   号                  #M0678S

使用前端带有 FAM 荧光标记(蓝色示踪染料),末端带有 ROX 荧光标记(红色示踪染料)的双链 DNA 片段与80 units 切割错配核酸内切酶 I(+M0678)在 NEBuffer r2.1 中,37℃孵育 30 分钟,用于测定切割错配核酸内切酶 I 切割 dsDNA 中特定错配的能力。样品经毛细管电泳分析显示:酶解样品(+M0678 样品)与未经酶处理的样品(-M0678)相比,T:T、G:T 和 G:G 错配的底物峰发生偏移。此外,在 30 分钟内即可看到 T:C 错配中的含 T 链(蓝色链)出现一些轻微切割。该酶在 T:C 错配底物上的切刻活性随着时间的推移而增加(最多 18 小时,本数据未显示)。
 

USER® 酶 货 号 #M5505LNEB酶试剂 New England Biolabs

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USER®  酶                货   号                  #M5505L USER®  酶                货   号                  #M5505L USER®  酶                货   号                  #M5505L USER®  酶                货   号                  #M5505L

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#M5505L
250 units
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50 units
799.00

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特性

 在 DNA 的尿嘧啶处产生缺口
 USER 克隆
 定向 RNA 测序
 NEBNext 接头切割

概述

USER™(尿嘧啶-特异性切除试剂)酶在尿嘧啶位置产生一个单核苷酸缺口。USER 酶是尿嘧啶 DNA 糖基化酶(UDG)和 DNA 糖基化酶-裂解酶 Endo VIII 的混合物。UDG 催化尿嘧啶碱基的切割,形成一个脱碱基(脱嘧啶)位点,但保持磷酸二酯骨架结构完整。Endo VIII 的裂解酶活力使脱碱基位点 3´ 和 5´ 端的磷酸二酯键断裂,释放无碱基的脱氧核糖。 

来源

分别从 E. coli K-12 菌株纯化 Endo VIII 和尿嘧啶 DNA 糖基化酶。该菌株的质粒上含有编码这两种酶的基因。 

反应条件

CutSmart 反应缓冲液。37℃ 温育。 

质保声明

USER 酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

单位定义

1 单位指在 10 μl 反应体系中,37℃ 条件下,15 分钟使 10 pmol 的含有单一尿嘧啶碱基的 34 mer 寡核苷酸双链产生切刻所需要的酶量。活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

浓度

1,000 units/ml。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

M13KO7 辅助噬菌体 货 号 #N0315SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 其它

M13KO7 辅助噬菌体                              收藏

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特性

产生用于测序和突变的单链噬菌粒 DNA 

概述

 
M13KO7 是 M13 噬菌体。其具有 P15A 的复制起点和 Tn903 卡那霉素抗性基因,这两个片段插入 M13 的复制起点。 M13KO7 在没有噬菌粒 DNA的条件下也能复制。当存在一个携带有野生型的M13 或 f1 复制起点的噬菌粒时,单链噬菌粒可以完整包装,并分泌到培养基中。该特性使其便于生产用作突变和测序的单链噬菌粒 DNA。 M13KO7携带卡那霉素抗性标记。

来源

M13KO7 噬菌体上清按照标准程序分离自受侵染的 E. coli ER2738。 

浓度

1.0 X 1011 pfu/ml。 

注意事项

NEB 不推荐将 M13KO7 作为一个克隆载体使用。构建噬菌体展示文库,推荐使用 Ph.D.™ 肽库展示克隆系统(详见 251 页)。 

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特性

• 常用克隆载体
• 四环素、青霉素抗性 

浓度

1,000 μg/ml 

分子量/长度

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特性

• 常用克隆载体
• 四环素、青霉素抗性 

浓度

1,000 μg/ml 

分子量/长度

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#N0362S
25 gel lanes
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