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New England Biolabs(NEB)品牌代理商–上海金畔
1. New England Biolabs(NEB)品牌介绍
NEB公司——三十多年的卓越品质
NEB公司成立于二十世纪七十年代中期,拥有众多经验丰富的科学家,是生产生命科学试剂的领导者。目前,NEB为基因组研究提供最齐全的重组酶和天然酶,并且公司业务范围已延伸至蛋白质组学和药品开发领域。
回顾三十余年来的历程,NEB公司作为先驱公司之一,为促进生物科技工业的发展做出了巨大的贡献。NEB美国总部乔迁新址后拥有最尖端的设备,有一座现代化的发酵中心及设备齐全的实验室,这些实验室主要用于产品生产、质量监控、产品开发和基础科研之用。作为首批以商业规模生产限制性内切酶的公司之一,NEB一直专注于内切酶的研究,并保持业内领先水平。NEB公司一贯坚持以科学为本的原则,公司生产的试剂因其高质量、高性价比享誉世界。
重组酶
NEB公司对酶的生产与其基础科研不能分开,通过对限制/修饰系统的克隆和过量表达方面的研究,使我们能够大大降低成本,改善产品质量。NEB已经成功克隆了180多种内切酶,其中大多是完全克隆,少数是部分克隆。目前,NEB可供应240多种内切酶,其中180多种可以重组酶形式提供,同时还有大量的应用途广泛的重组聚合酶和重组修饰酶。
质量与客户服务
NEB公司凭借着严格的质检程序、深入的基础科研以及不断开发的研发项目,承诺为全球科技人员提供高纯度的科研产品。直接与NEB总部联系或与NEB的国际网点联系,即可体验到NEB的个性化客户服务。公司内负责生产以及负责进行质量监控的科学家(产品负责人)也就是技术支持人员。他们为客户解答有关限制核酸内切酶、甲基化酶、以及其他DNA修饰酶、蛋白质修饰酶方面的问题。同时,公司的有机合成部门可提供linkers、引物、adaptors、探针以及寡核苷酸合成等方面的信息。研究人员也可为客户提供技术支持服务,这些研究人员在DNA测序、甲基化、克隆、过量表达、发酵、蛋白质纯化以及蛋白质分析方面都有很深造诣。
基础科研
NEB在分子生物学和寄生虫学方面的基础研究由公司内部的资深科学家负责。这些科学家在他们各自的领域都卓有成绩,经常在业内著名杂志上发表文献,指导博士后工作、为大学生提供暑期实习机会,而且经常受邀去当地学校进行演讲。NEB鼓励公司与外界合作,每周学术探讨会为其他科学家们提供了交流和展示的平台。
环保政策
NEB公司在资助科研项目时最基本原则之一就是:一切工作都应符合保护生态环境。公司产品生产、分析以及运输过程既要满足产品的稳定性,也要符合我们的环保政策。20年来,NEB公司最引人注目的一项环保政策是:回收运输泡沫盒,虽然这项工作首创于美国,但是,目前加拿大、德国以及英国的分公司也同样实施了。公司还在内部开展多方位的回收工作,经常用再生纸张印刷市场宣传资料。这些小细节不会影响产品质量,但是对环境的保护却是显而易见。
公司职责
除环保政策外,通过基金会,NEB还竭力为改善当地社区及全人类尽微薄之力。NEB基金会创立于1982年,属私人性质,其宗旨是支持发展中国家的环保、教育、健康及艺术事业。此外,NEB捐款委员会也经常向当地社区进行捐款活动。
NEB公司的国际网络
NEB的国际销售网络是通过其代理商、附属机构和子公司来实现的。所有销售网点都承诺提供高质量、高性价比以及高水准的服务。国际销售网点覆盖的国家有:阿根廷、澳大利亚、奥地利、比利时、巴西、加拿大、中国、丹麦、德国、芬兰、法国、希腊、香港、冰岛、印度、爱尔兰共和国、以色列、意大利、日本、韩国、卢森堡、马来西亚、墨西哥、荷兰、新西兰、挪威、葡萄牙、新加坡、西班牙、瑞典、瑞士、台湾、泰国、英国。没有列出国家的客户可与位于美国的NEB总部取得联系,以便获得更多信息。
2. New England Biolabs(NEB)重点产品
生产和分销研究型抗体
3. New England Biolabs(NEB)官网
http://www.neb.com
4. 金畔生物代理New England Biolabs(NEB)品牌联系方式
上海金畔生物科技有限公司
地 址: 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
邮 编: 201208
qq:  2743691513
固话总机:021-50837765
订货热线:15221999938
网 址: www.jinpanbio.com
Email:sales@jinpanbio.com;

重组白蛋白,分子生物学级 货 号 B9200S NEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – 限制性内切酶 – 缓冲液稀释液

重组白蛋白,分子生物学级                              收藏

货 号
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#B9200S
12 mg
599.00

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相关产品:

 BSA,分子生物学级

 

反应条件

 分子生物学级别的重组白蛋白,是非牛类衍生的白蛋白,可以作为牛血清白蛋白(BSA)的替代品。与BSA一样,可以用于防止酶粘附到反应管壁上及移液枪表面。还可以用于在孵化期间稳定某些蛋白质。当需要避免牛血清白蛋白时,可以选择重组白蛋白。

New England Biolabs(NEB)品牌代理商

New England Biolabs(NEB)品牌代理商–上海金畔

1. New England Biolabs(NEB)品牌介绍
NEB公司——三十多年的卓越品质
NEB公司成立于二十世纪七十年代中期,拥有众多经验丰富的科学家,是生产生命科学试剂的领导者。目前,NEB为基因组研究提供最齐全的重组酶和天然酶,并且公司业务范围已延伸至蛋白质组学和药品开发领域。
回顾三十余年来的历程,NEB公司作为先驱公司之一,为促进生物科技工业的发展做出了巨大的贡献。NEB美国总部乔迁新址后拥有最尖端的设备,有一座现代化的发酵中心及设备齐全的实验室,这些实验室主要用于产品生产、质量监控、产品开发和基础科研之用。作为首批以商业规模生产限制性内切酶的公司之一,NEB一直专注于内切酶的研究,并保持业内领先水平。NEB公司一贯坚持以科学为本的原则,公司生产的试剂因其高质量、高性价比享誉世界。
重组酶
NEB公司对酶的生产与其基础科研不能分开,通过对限制/修饰系统的克隆和过量表达方面的研究,使我们能够大大降低成本,改善产品质量。NEB已经成功克隆了180多种内切酶,其中大多是完全克隆,少数是部分克隆。目前,NEB可供应240多种内切酶,其中180多种可以重组酶形式提供,同时还有大量的应用途广泛的重组聚合酶和重组修饰酶。
质量与客户服务
NEB公司凭借着严格的质检程序、深入的基础科研以及不断开发的研发项目,承诺为全球科技人员提供高纯度的科研产品。直接与NEB总部联系或与NEB的国际网点联系,即可体验到NEB的个性化客户服务。公司内负责生产以及负责进行质量监控的科学家(产品负责人)也就是技术支持人员。他们为客户解答有关限制核酸内切酶、甲基化酶、以及其他DNA修饰酶、蛋白质修饰酶方面的问题。同时,公司的有机合成部门可提供linkers、引物、adaptors、探针以及寡核苷酸合成等方面的信息。研究人员也可为客户提供技术支持服务,这些研究人员在DNA测序、甲基化、克隆、过量表达、发酵、蛋白质纯化以及蛋白质分析方面都有很深造诣。
基础科研
NEB在分子生物学和寄生虫学方面的基础研究由公司内部的资深科学家负责。这些科学家在他们各自的领域都卓有成绩,经常在业内著名杂志上发表文献,指导博士后工作、为大学生提供暑期实习机会,而且经常受邀去当地学校进行演讲。NEB鼓励公司与外界合作,每周学术探讨会为其他科学家们提供了交流和展示的平台。
环保政策
NEB公司在资助科研项目时最基本原则之一就是:一切工作都应符合保护生态环境。公司产品生产、分析以及运输过程既要满足产品的稳定性,也要符合我们的环保政策。20年来,NEB公司最引人注目的一项环保政策是:回收运输泡沫盒,虽然这项工作首创于美国,但是,目前加拿大、德国以及英国的分公司也同样实施了。公司还在内部开展多方位的回收工作,经常用再生纸张印刷市场宣传资料。这些小细节不会影响产品质量,但是对环境的保护却是显而易见。
公司职责
除环保政策外,通过基金会,NEB还竭力为改善当地社区及全人类尽微薄之力。NEB基金会创立于1982年,属私人性质,其宗旨是支持发展中国家的环保、教育、健康及艺术事业。此外,NEB捐款委员会也经常向当地社区进行捐款活动。

NEB公司的国际网络
NEB的国际销售网络是通过其代理商、附属机构和子公司来实现的。所有销售网点都承诺提供高质量、高性价比以及高水准的服务。国际销售网点覆盖的国家有:阿根廷、澳大利亚、奥地利、比利时、巴西、加拿大、中国、丹麦、德国、芬兰、法国、希腊、香港、冰岛、印度、爱尔兰共和国、以色列、意大利、日本、韩国、卢森堡、马来西亚、墨西哥、荷兰、新西兰、挪威、葡萄牙、新加坡、西班牙、瑞典、瑞士、台湾、泰国、英国。没有列出国家的客户可与位于美国的NEB总部取得联系,以便获得更多信息。

2. New England Biolabs(NEB)重点产品
生产和分销研究型抗体
3. New England Biolabs(NEB)官网
http://www.neb.com
4. 金畔生物代理New England Biolabs(NEB)品牌联系方式

上海金畔生物科技有限公司
地 址: 上海市浦东新区东靖路699弄36栋701室
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固话总机:021-50837765
订货热线:15221999938
网 址: www.jinpanbio.com
Email:sales@jinpanbio.com;

NEB® PCR 克隆试剂盒 货 号 #E1202SNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEB® PCR 克隆试剂盒                              收藏

NEB® PCR 克隆试剂盒             货   号                  #E1202S

货 号
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#E1202S
20 次反应
4,739.00

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相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒(无感受态细胞)

特性

 含 SP6 和 T7 启动子,便于体外转录
 克隆所有类型的 PCR 产物更为简单,包括平末端和 TA 末端
 克隆速度快,连接仅需 5 分钟
 筛选简单,几乎没有克隆背景,不需要蓝白斑筛选
 无需纯化步骤,节约时间
 两侧的限制性内切酶酶切位点方便亚克隆,包含两种单酶切选择
 BsaI 位点的除去以便 Golden Gate 克隆

概述

NEB PCR 试剂盒提供:优化的 2X 克隆预混液(其中配有独特的连接增强剂)和线性载体。该线性载体利用最新技术抑制背景菌落生长,使背景值降为最低。本试剂盒能简单、快速克隆各种 PCR 产物。具有校读功能的聚合酶产生平末端扩增子(如:Q5 或者 Phusion),无校对功能的聚合酶产生单碱基突出末端的扩增子(如 Taq、OneTaq、LongAmp Taq)。2X 克隆预混液中包含有末端修复成份,可在连接反应步骤前进行末端平齐化,因此,无论扩增子是何种末端都能完成有效连接。此外,使用本试剂盒,PCR 产物无需纯化,PCR 引物也无需经过 5´ -磷酸基修饰。 

• 提供下游菌落 PCR 或测序引物
• 试剂盒包含 1 kb 扩增子对照和线性载体及一次用量的大肠杆菌感受态细胞
• 比其它商业化产品保质期长(12 个月)

PCR 克隆试剂盒包含

– 克隆预混液
– 线性化 pMiniT™ 载体
– 对照扩增子
– 克隆检测正向引物
– 克隆检测反向引物
– NEB 10-beta E. coli 感受态细胞(克隆级)(仅在 NEB #E1202 提供) 

质保声明

NEB PCR 克隆试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com,www.neb-china.com。 

NEB® PCR 克隆试剂盒(含感受态细胞) 货 号 #E1203SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEB® PCR 克隆试剂盒(含感受态细胞)                              收藏

NEB® PCR 克隆试剂盒(含感受态细胞)             货   号                  #E1203S

货 号
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#E1203S
20 次反应
2,059.00

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相关产品

NEB PCR 克隆试剂盒

特性

 含 SP6 和 T7 启动子,便于体外转录
 克隆所有类型的 PCR 产物更为简单,包括平末端和 TA 末端
 克隆速度快,连接仅需 5 分钟
 筛选简单,几乎没有克隆背景,不需要蓝白斑筛选
 无需纯化步骤,节约时间
 两侧的限制性内切酶酶切位点方便亚克隆,包含两种单酶切选择
 BsaI 位点的除去以便 Golden Gate 克隆

概述

NEB PCR 试剂盒提供:优化的 2X 克隆预混液(其中配有独特的连接增强剂)和线性载体。该线性载体利用最新技术抑制背景菌落生长,使背景值降为最低。本试剂盒能简单、快速克隆各种 PCR 产物。具有校读功能的聚合酶产生平末端扩增子(如:Q5 或者 Phusion),无校对功能的聚合酶产生单碱基突出末端的扩增子(如 Taq、OneTaq、LongAmp Taq)。2X 克隆预混液中包含有末端修复成份,可在连接反应步骤前进行末端平齐化,因此,无论扩增子是何种末端都能完成有效连接。此外,使用本试剂盒,PCR 产物无需纯化,PCR 引物也无需经过 5´ -磷酸基修饰。 

• 提供下游菌落 PCR 或测序引物
• 试剂盒包含 1 kb 扩增子对照和线性载体及一次用量的大肠杆菌感受态细胞
• 比其它商业化产品保质期长(12 个月) 

PCR 克隆试剂盒包含

– 克隆预混液
– 线性化 pMiniT™ 载体
– 对照扩增子
– 克隆检测正向引物
– 克隆检测反向引物
– NEB 10-beta E. coli 感受态细胞(克隆级)(仅在 NEB #E1202 提供)  

质保声明

NEB PCR 克隆试剂盒经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com,www.neb-china.com。  

NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代) 货 号 #E1600SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)                              收藏

NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)             货   号                  #E1600S

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#E1600S
15 次反应
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停产通知

请注意:该产品已停产,库存售完为止,替代产品为 E1601。

特性

 无痕克隆 – 组装后无额外碱基存在
 可用于组装重复区
 兼容片段长度广(>15 kb 至 <100 bp)
 有效组装高 GC 区 

概述

Golden Gate 可高效、无痕的克隆组装 DNA片段。该方法起始于 1996 年,这是第一次使用IIS 型限制性内切酶和 T4 连接酶顺序或同时将多个目的基因插入到同一个载体骨架上。这类核酸内切酶产生用户确定的唯一的末端序列,该内切酶在识别位点之外进行切割。产生的 DNA突出末端与临近可连接的互补 DNA 末端退火。一旦组装上,结构中内切酶的识别位点已经不存在。因为每一个互补可连接的 4 碱基突出端都是钝端(内切酶识别位点已经不存在),目的组装产物随时间逐渐积累。该方法特别适用于多重组装实验,例如 TALEs (Transcription Activator
Like Effectors)和 TALENs(TALEs fused to a FokI nucleasecatalytic domain)。Golden Gate 方法也适用于单一目的基因的克隆实验。
 
NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)             货   号                  #E1600S

NEB Golden Gate 组装混合液包含

– NEB Golden Gate 组装混合液
– Golden Gate 反应缓冲液(10X) 

质保声明

NEB Golden Gate 组装混合液经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。 

NEB Golden Gate 组装混合液(停产有替代)             货   号                  #E1600S

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsaI-HF® v2) 货 号 #E1601LNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsaI-HF® v2)                              收藏

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#E1601L
100 rxns
4,959.00

#E1601S
20 rxns
1,849.00

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相关产品

NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞(高效级)

NEB 10-beta E. coli 感受态细胞(高效级)

Q5 热启动超保真 2 X 预混液

特性:

Ÿ   使用新酶 BsaI-HFv2(针对 Golden Gate 应用优化)

Ÿ   无缝克隆组装后无额外碱基存在

Ÿ   目的质粒含 T7/SP6 启动子

Ÿ   单次反应即可按顺序组装多个片段(2-20+

Ÿ   也可用于单个片段克隆和文库制备

Ÿ   有效组装高 GC 区和重复区

Ÿ   兼容片段长度广(<100 bp 至 >15kb

用于 Golden Gate 的 IIS 型限制性内切酶

 – BsaI (NEB #R0535)

– BsaI-HFv2 (NEB #R3733)

– BbsI (NEB #R0539)

– BbsI-HF (NEB #R3539)

– BsmBI (NEB #R0580)

– Esp3I (NEB #R0734)

概述:

 NEB Golden Gate 组装试剂盒(BsaI-HFv2)内含优化的混合液。利用 Golden Gate 方法,混合液中的 BsaI-HFv2 T4 DNA 连接酶可以完成多个片段的组装。试剂盒自带目的质粒 pGGA,为组装提供骨架,同时为亚克隆提供限制性内切酶酶切位点,以及为体外转录提供 T7/SP6 启动子序列。

 

Golden Gate 可高效、无痕地克隆组装 DNA片段。该方法起始于 1996 年,当时是第一次使用 IIS 型限制性内切酶和 T4 DNA 连接酶依次或同时将多个目的基因插入到同一个载体骨架上。

 

IIS 型限制性内切酶结合于识别位点,却在识别位点的下游特定位置进行切割,切割位点是位置特异的,而非序列特异的。这样,单个 IIS 型限制性内切酶可用于产生具有特定突出末端的 DNA 片段。例如,BsaI 的识别位点为 GGTCTCN1/N5),其中 GGTCTC 是识别和结合位点,而 N1/N5 表示切割位点位于上链的第一个碱基后,下链的第五个碱基后。片段连接是通过酶切产生的 4 个碱基突出端互补而形成。酶切后的片段及最终组装产物不再含有 IIS 型限制性内切酶识别位点,所以不可能进一步发生酶切。组装产物随时间逐渐积累。

 

该方法特别适用于多重组装实验,例如 TALEs (转录激活因子样效应物)和 TALENsTALES FokI 核酸酶催化结构域融合表达)。Golden Gate 方法也适用于单一目的基因的克隆实验以及不同来源基因的文库构建。

 

连接酶保真度的研究进展:NEB 的不断研究加深了我们对连接酶保真性的认识,包括评价末端连接保真度的多种手段的开发,从而更好地预测何种突出末端具有更高连接保真度。该研究使突出末端的选择更为慎重,这对于构建复杂 Golden Gate 组装产物尤为重要。更多详情请登陆 www.neb.com/goldengate

 

为加快实验进程,请登陆 GoldenGate.neb.com 使用设计软件。

Ligase Fidelity Viewer*

使 Golden Gate 突出末端连接组装设计变得可视化。*这是一个 NEBeta™ 软件,在设计和使用上还不够完善。欢迎分享您的使用反馈。使用该软件请登陆 www.neb.com/research/nebeta-tools

 NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsaI-HF® v2)            货   号                  #E1601L

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2) 货 号 #E1602LNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#E1602L
100 rxns
4,959.00

#E1602S
20 rxns
1,849.00

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特性

·试剂盒含 BsmBI-v2,经优化用于 Golden Gate 组装

· 无缝克隆 – 组装后无额外碱基
·单次反应实现多片段定向(2-20+)有序组装
·可用于单片段克隆和文库制备
·高效组装高 GC 含量或高重复序列
·兼容不同长度片段组装(< 100 bp 到 > 15 kb)
·试剂盒含目的质粒,克隆有 Golden Gate 组装常用的 IIS 内切酶位点
·登录 GoldenGate.neb.com 使用免费工具
 

概述

 NEB Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)是 BsmBI-v2 T4 DNA 连接酶的优化预混液。BsmBI-v2 NEB 公司研发的 BsmBI 的升级版本,在 Golden Gate 组装中的表现优于原酶。这些酶联合使用可完成多个插入片段/模块的组装,也可用于单插入片段克隆/文库构建。试剂盒提供 pGGAselect 目的质粒,作为组装骨架。该多功能目的质粒上定向克隆有 BsmBI-BsaI- BbsI- 的识别位点,使其能方便地与这三种在 Golden Gate 中最常用的 IIS 型限制性内切酶一起使用。该质粒还含有多个限制性内切酶识别位点,方便进行亚克隆,并具有 T7/SP6 启动子序列,供体外转录使用。

 

 起源于 1996 年的 Golden Gate 组装12技术可对 DNA 片段进行高效无缝组装,该技术利用 IIS 型限制性内切酶和 T4 DNA 连接酶的分步3或同步4作用,可将多个插入片段组装进载体骨架。

 

 IIS 型限制性内切酶与识别位点结合,却在识别位点下游的特定位置切割 DNA,切割位点是位置特异,而非序列特异。因此,单个 IIS 型限制性内切酶可用于产生具有特定突出末端的 DNA 片段。例如,BsmBI 的识别位点为 CGTCTC(N1/N5),其中 CGTCTC 是识别和结合位点,而 N1/N5 表示切割位点位于正义链的第一个碱基后,反义链的第五个碱基后。酶切片段间产生 4 个碱基的互补突出末端,发生退火进行连接。酶切后的片段及最终的组装产物不再含有 IIS 型限制性内切酶识别位点,所以不可能进一步发生酶切。组装产物随时间逐渐增多。

  

 该方法特别适用于多片段组装,例如 TALEs Transcription Activator Like Effectors,转录激活因子样效应物)5 TALENsTALEs FokI 核酸酶催化结构域融合表达)6Golden Gate 方法也适用于单片段克隆、构建不同来源的文库克隆来自不同来源的片段和涉及定向进化的多位点突变研究7

 

 请注意,虽然 Golden Gate 组装中常用到 BsmBI 内切酶,但 NEB 的试剂盒和操作步骤中则使用 BsmBI-v2,该酶是原酶经过改造和优化的升级版。

  

 观看视频教程,以了解更多 Golden Gate 组装的工作流程。

 

 1. 概述:使用 BsmBI-v2 进行 Golden Gate 组装操作

 NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)            货   号                  #E1602L

 

2. Golden Gate 工作流程

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)            货   号                  #E1602L

简单来讲,Golden Gate 组装需要 IIS 内切酶的识别位点,在本示例中,需要在 dsDNA 片段的两端加上其识别位点(CGTCTC)。酶切后,识别位点被切除,组装片段末端带有设计好的特定 4 碱基突出以指导组装。

 

3. BsmBI-v2 进行高效和高保真 Golden Gate 组装

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)            货   号                  #E1602L

遵循 11-20+ 片段组装的推荐循环步骤,在含有 LacI/LacZ 的表达框中组装 24 个片段。虽然 30 个循环足以完成复杂组装,但 BsmBI-v2 和 T4 DNA 连接酶的稳定性允许连续进行 65 个循环的组装且背景低。(a)组装效率和(b)组装准确性(保真度)与循环数的关系如图所示。

 

4. BsmBI-v2 T4 DNA 连接酶进行复杂组装

NEB® Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)            货   号                  #E1602L

 

遵循 11-20+ 片段组装的推荐循环步骤,在含有 LacI/LacZ 的表达框中组装 24 个片段,但延长循环数增加到  65 个循环。从 25 µl 组装反应中取 2 µl 进行转化和增菌培养后,取 1/10 体积的增菌培养物接种平板,1100 个菌落生长,菌落的保真度高达 96%,相当于每次组装反应产生 137,500 个菌落。该实验证明了酶混合液的稳定性,如果预期获得最大组装效率,循环数量可以超过标准的 30 个循环。 

NEB Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)包含:

– NEB® Golden Gate 酶预混液

– T4 DNA 连接酶反应缓冲液(10X

– pGGAselectII DNA

 

用于 Golden Gate IIS 型限制性内切酶

– BsaI (NEB #R0535)

– BsaI-HFv2 (NEB #R3733)

– BbsI (NEB #R0539)

– BbsI-HF (NEB #R3539)

– BsmBI (NEB #R0580)

– BsmBI-v2 (NEB #R0739)

– Esp3I (NEB #R0734)

 

NEB Golden Gate 组装试剂盒(BsmBI-v2)包含:

– NEB® Golden Gate 酶预混液

– T4 DNA 连接酶反应缓冲液(10X

– pGGAselectII DNA

 

用于 Golden Gate IIS 型限制性内切酶

– BsaI (NEB #R0535)

– BsaI-HFv2 (NEB #R3733)

– BbsI (NEB #R0539)

– BbsI-HF (NEB #R3539)

– BsmBI (NEB #R0580)

– BsmBI-v2 (NEB #R0739)

– Esp3I (NEB #R0734)

 

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Q5® 热启动超保真 DNA 聚合酶(M0493

Q5® 热启动超保真 2 X 预混液(M0494

dNTP 混合液(N0447

Quick-Load® 紫色 1 kb Plus DNA LadderN0550

质保声明

 NEB Golden Gate 组装混合液经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

参考文献

1. Engler, C. et al.(2008).PLoS ONE. 3, e3647.

2. Engler, C. et al.(2009).PLoS ONE. 4, e5553.
3. Lee, J.H. et al.(1996).Genetic Analysis: Biomolecular Engineering.13, 139–145.
4. Padgett, K.A. and Sorge, J.A.(1996).Gene.168,31–35.
5. Weber, E. et al.(2011).PLoS ONE.6,e19722.
6. Christian, M. et al.(2010).Genetics.186,757–761.
7. Pullman, P. et al.(2019).Nature.9,10932.
8. Potapov, V. et al.(2018).ACS Synth. Biol. 7, 2665–2674.
 

NEB 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 ) 货 号 #C2523HNEB酶试剂 New England Biolabs

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NEB 表达 E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

 

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株,最适于启动子为 Plac、Ptac、Ptrc 的表达载体
 菌落快速培养
 无动物来源产品
 蛋白酶缺陷型菌株

概述

全能型无 T7 表达菌株,为 pMAL 蛋白融合表达与纯化系统的推荐宿主菌株。

基因型

fhuA2 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr- 73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10–TetS
endA/Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率

高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、四环素、壮观霉素、链霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB Turbo E. coli 感受态细胞(高效级) 货 号 #C2984HNEB酶试剂 New England Biolabs

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NEB Turbo E. coli 感受态细胞(高效级)
NEB Turbo E. coli 电转级感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 100 ml . . . . . . . . . . ¥939

优点

 严谨的表达调控(lacI q
 6.5 小时后即可见到菌落
 生长 4 小时后即可提取 DNA
 质粒携带氨苄抗性,5 分钟完成转化实验
 克隆毒性基因
 无动物来源产品

概述

E. coli  感受态细胞适用于高效级转化,且菌落生长迅速(6.5 小时)。

基因型

F´ proA+B+ lacIq ΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lacproAB) glnV galK16 galE15 R(zgb-210::Tn10)TetS endA1 thi-1 Δ(hsdS-mcrB)5

特性

• 可做蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒

转化效率

高效级:1–3 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
电转级:> 1 x 1010 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2),呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB Turbo E. coli 感受态细胞(高效级)            货   号                  #C2984H

NEB Turbo 转化实验:使用 NEB Turbo 产品,8 小时后即可见到菌落。连接产物转化至 50 μl NEB Turbo E.coli 感受态细胞中,涂布于 LB/Amp 平板,37℃ 下分别孵育 8 小时、10 小时和 12 小时。NEB Turbo 可加快菌落的生长速度和蓝/白斑的筛选,从而使克隆实验变得更简便。
 
NEB Turbo E. coli 感受态细胞(高效级)            货   号                  #C2984H

过夜培养的单菌落,液体培养 3 小时后即可用于小量制备 DNA。再培养 1 小时后 DNA 产量加倍。

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB Turbo E. coli 电转级感受态细胞 货 号 #C2986KNEB酶试剂 New England Biolabs

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#C2986K
6 x 0.1 ml
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NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞 (高效级) 货 号 #C2987HNEB酶试剂 New England Biolabs

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#C2987H
20 x 0.05 ml
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#C2987I
6 x 0.2 ml
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#C2987P
1 x 96 孔板
8,049.00

#C2987R
1 x 384 孔板
17,599.00

#C2987U
96 x 50 μl/管
11,969.00

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NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞 (高效级)
NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞 (亚克隆效级)

NEB 5-alpha E. coli 电转级感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . ¥939

优点

 DH5α 衍生物
 无动物来源产品

概述

NEB 5-alpha E. coli  感受态细胞为 DH5α 衍生物,为多功能克隆菌株

基因型

fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 relA1 endA1 thi-1 hsdR17

特性

• 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的(hsdR)非甲基化 DNA
• 可进行蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒
• 可减少克隆 DNA 的重组反应(recA1

转化效率

高效级: 1–3 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
亚克隆效级: > 1 x 106 cfu/μg pUC19 DNA
电转级: > 1 x 1010 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB 5-alpha E. coli 感受态细胞 (亚克隆效级) 货 号 #C2988JNEB酶试剂 New England Biolabs

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#C2988J
6 x 0.4 ml
1,169.00

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NEB 5-alpha E. coli 电转级感受态细胞 货 号 #C2989KNEB酶试剂 New England Biolabs

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6 x 0.1 ml
3,009.00

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NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞 (高效级) 货 号 #C2992HNEB酶试剂 New England Biolabs

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#C2992H
20 x 0.05 ml
3,319.00

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6 x 0.2 ml
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NEB 5-alpha F´ Iq E. coli 感受态细胞 (高效级) 

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml. . . . . . ¥939

优点

 严谨的表达调控(lacI q
 克隆毒性基因
 含 F´ 因子的菌株,具有极高的转化效率
 DH5α 衍生物
 无动物来源产品

概述

该菌株含 F´因子,转化效率极高,适于克隆毒性基因。

基因型

F´proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) / fhuA2Δ(argF-lacZ)U169 phoA glnV44 f80 Δ(lacZ)M15 gyrA96 recA1 endA1 thi-1 hsdR17

特性

• 可高效转化 PCR、cDNA 或其它来源的(hsdR)非甲基化 DNA
• 可进行蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用于制备高质量质粒
• 可减少克隆 DNA 的重组反应(recA1
• 适用于 M13 噬菌体克隆的繁殖

转化效率

高效级: 1–3 x 109 cfu/μg

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、四环素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、链霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA

NEB 10-beta E. coli 感受态细胞 (高效级) 货 号 #C3019HNEB酶试剂 New England Biolabs

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20 x 0.05 ml
3,829.00

#C3019I
6 x 0.2 ml
2,929.00

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相关产品

NEB 10-beta E. coli 电转级感受态细胞

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 100 ml . . . . . . ¥939

优点

 可克隆大质粒和 BACs
 DH10B 衍生物
 无动物来源产品

概述

E. coli 感受态细胞为 DH10B 衍生物,广泛应用于多种高效级转化,包括克隆大质粒与BAC。

基因型

Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15 e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG
rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

特性

• 可高效转化真核来源的甲基化 DNA 或来自 PCR、cDNA 或其它来源的未甲基化 DNA
• 无需 IPTG,可进行蓝/白斑筛选
• 缺失非特异性核酸内切酶 I(endA1)活性,可用 于制备高质量质粒
• 可减少克隆 DNA 的重组反应(recA1

转化效率

高效级:1–3 x 109 cfu/μg pUC19 DNA
电转级:> 2 x 1010 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、链霉素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素、四环素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基
pUC19 对照 DNA
 
NEB 10-beta E. coli 感受态细胞 (高效级)            货   号                  #C3019H
 
质粒大小对转化效率的影响:化学法制备的 NEB 10-beta 感受态细胞比 NEB 5-alpha 更适合于大质粒的转化。如上图所示,质粒越大,两种感受态细胞转化效率的差值就越大。

NEB 10-beta E. coli 电转级感受态细胞 货 号 #C3020KNEB酶试剂 New England Biolabs

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#C3020K
6 x 0.1 ml
3,639.00

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NEB 表达 lq E. coli 感受态细胞 ( 高效级 ) 货 号 #C3037INEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 感受态细胞 – 蛋白表达菌株

NEB 表达 lq E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )                              收藏

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#C3037I
6 x 0.2ml
2,899.00

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NEB 表达 lq E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )

 

单独出售的组分

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . . . ¥939

优点

 BL21 源增强型菌株,最适于启动子为 Plac、Ptac、Ptrc 的表达载体
 对 IPTG 诱导的无 T7 质粒表达控制更好
 菌落快速培养
 lacIq 降低了本底表达
 蛋白酶缺陷型菌株
 无动物来源产品

概述

特点为有效调控 IPTG 诱导的无 T7 质粒表达。

基因型

MiniF lacIq (CamR) / fhuA2 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10–TetS)2 [dcm] R(zgb- 210::Tn10–TetS) endA/Δ(mcrC-mrr)114::IS10

特性

• Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失
• 不受限于 DNA 是否甲基化
• 是 pUC19 或其衍生质粒最理想的表达调控菌株

转化效率

高效级:0.6–1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

抗性

T1 噬菌体(fhuA2)、氯霉素、呋喃妥因

敏感性

氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素、链霉素、四环素

NEB E. coli 稳定感受态细胞 (高效级) 货 号 #C3040HNEB酶试剂 New England Biolabs

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NEB E. coli 稳定感受态细胞 (高效级)                              收藏

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#C3040H
20 x 0.05 ml
5,399.00

#C3040I
6 x 0.2 ml
4,159.00

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相关产品

NEB E. coli 稳定感受态细胞 (高效级)

单独出售的组份

SOC Outgrowth 培养基
#B9020S 4 x 25 ml . . . . . . ¥939

优点

 抗噬菌体 T1 感染(fhuA)
 无动物来源产品

概述

化学感受态 E. coli 细胞适用于高效转化及含重复片段的质粒提取。

基因型

F´ proA+B+ lacIq Δ(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/Δ(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ΔlacX74 galK16 galE15
e14- f80dlacZΔM15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)

特性

endA 突变,可用于制备高质量质粒
• 生长迅速的 recA 菌株

应用

• 不稳定插入片段的克隆
• 慢病毒及逆转录病毒克隆的分离及扩增
• 与 Gibson 组装反应及连接反应兼容

转化效率

 1–5 x 108 cfu/μg pUC19 DNA (NEB #C3040H)

> 1 x 109 cfu/μg pUC19 DNA (NEB #C3040I)

抗性

T1 噬菌体(fhuA)、链霉素、四环素

敏感性

氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、呋喃妥因、壮观霉素

随产品提供

SOC Outgrowth 培养基

pUC19 对照 DNA

NEB® 10-beta/Stable Outgrowth Medium 货 号 #B9035SNEB酶试剂 New England Biolabs

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs(NEB)酶试剂全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – Buffers – Buffers

NEB® 10-beta/Stable Outgrowth Medium                              收藏

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广州库存
成都库存
苏州库存

#B9035S
100 ml (4 x 25 ml)
1,189.00

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Description:

 

  • >Outgrowth Medium recommended for use with NEB 10-beta or NEB Stable Competent E. coli 
  • >Use to dilute the outgrowth prior to plating

         Add NEB 10-beta/Stable Outgrowth Medium to freshly transformed NEB 10-beta or NEB Stable E. coli cells and incubate for up to 1 hour before plating on selective media. This medium can also be used to dilute the outgrowth prior to plating.

Proterties and Usage

 

Storage Temperature

4°C

Note

 

  1. NEB 10-beta/Stable Outgrowth Medium is shipped at 0°C or -80°C. Upon receipt, store at room temperature or 4°C.