硅胶珠型microRNA分离试剂盒

FUJIFILM Wako提供能使从Ago 免疫沉淀到RNA 提取等一系列实验操作简化的“microRNA Isolation Kit”系列。使用本系列试剂盒能简便地从人和小鼠的细胞或组织中提取Ago蛋白结合的microRNA以及靶mRNA，还能从培养上清、血清、血浆中提取游离Ago蛋白结合的microRNA。所提取到的RNA可以应用于qPCR、微阵列检测、NGS等下游实验。本系列包括采用磁珠的MagCapture™ microRNA Isolation Kit，以及采用了硅胶珠法的microRNA Isolation Kit。

microRNA Isolation Kit抗Ago抗体固定珠子具有非特异吸附性低的特征，它采用二氧化硅基聚合物珠粒，以离心为基础进行免疫沉淀操作。在从免疫沉淀后的硅胶珠中提取RNA的步骤时，采用苯酚/氯仿提取（P/C法）及乙醇沉淀来提取RNA。FUJIFILM Wako推出含有固定了抗Ago1抗体（2A7）、抗人Ago2抗体（4G8）、抗小鼠Ago2抗体（2D4）、抗人Ago3抗体（1C12）的硅胶珠的4种试剂盒。

◆试剂盒组成（以Human Ago2为例，10次用）

1.　Anti-Human Ago2 Antibody Beads Solution：500 μL×1瓶

2.　Cell Lysis Solution：50 mL×1瓶

3.　Elution Solution：500 μL×1瓶

4.　Ethachinmate：30 μL×1瓶

5.　3 mol/L Sodium Acetate：400 μL×1瓶

◆操作示意图

◆试剂盒使用实例

用microRNA Isolation Kit, Human Ago2通过Urea-PAGE分离从三种5×10⁶ cells的人培养细胞株（HeLa、HepG2、HEK293），和小鼠培养细胞株（P388D1）中提取的microRNA组分，再进行银染（311-03961、CLEAR STAINAg、20 tests）检测。结果表明能从人培养细胞中特异性提取microRNA（图1）。以同样的银染试剂，检测用microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2从5×10⁶ cells的人培养细胞（HeLa）和啮齿动物培养细胞株（P388D1、CHO、PC-12）中提取的microRNA组分。结果表明，能从三种啮齿动物培养细胞株中特异性提取microRNA而不能从人细胞株中提取（图2）。

图1.通过用Human Ago2提取的microRNA的进行银染检测

图2. 对Mouse Ago2提取的microRNA的进行银染检测

microRNA增强试剂盒

microRNA Booster Kit

◆产品概况

　　Stemgent^® microRNA Booster 试剂盒增强和简化了 mRNA 的重编程，可用正常或者病人特定类型细胞制备有效的iPS细胞系。 microRNA Booster 试剂盒包括microRNA 重编程混合物和 B18R重组蛋白。

　　microRNA增强型 mRNA 重编程方法改进了第一代mRNA重编程试剂盒，递送更快速的重编程动力学，流水线操作，提供了难以进行重编程类型细胞的重编程效率。 microRNA-增强型方法是Stemgentm^® RNA Reprogramming Kit 和 microRNA Booster Kit、Stemfect™ RNA Transfection Kit配套使用，至少8天内获得原代iPS细胞克隆。该新方法改进了动力学，减少了每次转染mRNA的剂量，与基于饲养层细胞mRNA重编程方法相比，每个孔减少大约35%~45%的mRNA量。

◆优势

◆案例・应用

◆相关产品

试剂盒成分

●　2 瓶 – microRNA Reprogramming 混合物l (20 μM) (货号 05-0036), 35 μL

●　B18R 重组蛋白, 不含载体(货号. 03-0017), 50 μg

保存和保质期Storage and Stability

●　将microRNA 重编程混合物和 B18R 蛋白保存在 -70℃以下。

●　按照指示的保存，收到货后至少可以保存3个月。

质量控制

 Stemgent^® microRNA Booster试剂盒用人新生的包皮成纤维细胞成功进行基于RNA重编程。所有试剂盒组分都灭过菌，检测不含支原体。

推荐使用

●　Stemgent^® microRNA Booster Kit用于microRNA-增强型mRNA重编程

●　参考制备NuFF-条件性Pluriton培养基用于制备条件性重编程培养基。

●　参考操作手册： Stemgent^® mRNA 重编程系统，关注实验细节和材料处理。

Specification Sheets

 00-0073 Product Specification Sheet

Safety Data Sheets

03-0017 Safety Data Sheet

00-0073 Safety Data Sheet

05-0036 Safety Data Sheet

Protocols

   microRNA Enhanced mRNA Reprogramming

Application Notes

     MicroRNA Application Note

Product Sheets

      Product Sheet_RNA Reprogramming

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Additional Publications

7q11.23 dosage-dependent dysregulation in human pluripotent stem cells affects transcriptional programs in disease-relevant lineages

Josowitz R, Lu J, Falce C, D’Souza SL, Wu M, Cohen N, Dubois NC; Zhao Y; Sobie EA; Fishman GI; Gelb BD. Identification and purification of human induced pluripotent stem cell-derived atrial-like cardiomyocytes based on sarcolipin expression. PLoS ONE 9(7): e101316 (2014)

 Briggs SF; Dominguez AA; Chavez SL; Reijo Pera RA. "XIST in human preimplantation embryos and iPSCs." Stem Cells 33:1771 (2015)