特点1:荧光染料不会在细胞外聚集
将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中,并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。
结果,在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中,发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。
Mem Dye-Deep Red(紫):Ex: 640 nm/ Em: 640-760 nm
S公司 P产品(绿):Ex: 561 nm/ Em: 560-620 nm
S公司 P产品(红):Ex: 640 nm/ Em: 650-700 nm
实验条件
通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg),使用不同荧光染料染色后,添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中,孵育24小时,观察清洗后的荧光图像。
通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现,Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象,而P产品(绿色或红色)发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。
*检测装置:LM10-HSBFT 14(Nanosight公司生产)
与Mem-Dye溶液相比,P产品溶液的粒径也发生变化
另外,Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样,也没有发现荧光聚集的现象。
特点2:对外泌体的性质几乎没有影响
比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色前后的外泌体,通过测定NTA(纳米粒子跟踪分析)和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。
结果,确认使用产品P(绿色或红色)会因染色而引起的外泌体的变化。
而Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)对外泌体的性质几乎没有影响。
对外泌体颗粒直径的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。
结果,用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体,粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左),但在产品P染色前后,粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
*检测装置:LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)
对外泌体膜电位的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液,并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。
结果证实,使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较,使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多
*检测装置:Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)
参考文献
Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.
特点3:外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册,试剂盒内包含纯化所需的过滤管,可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管,与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比,能够以更高的回收率纯化外泌体。
|
回收率 |
过滤管(本试剂盒) |
50% |
凝胶过滤法 |
10% |
※本公司的实施例:通过NTA技术(纳米颗粒跟踪分析)比较提取前后的外泌体粒子数 |
关于使用过滤管进行纯化的有效性,常见问题是:标记后的纯化操作时,过滤膜上有颜色残留,能否确定未反应的染料彻底分离了?详见Q&A。
特点4:多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂,各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后,与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h,清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green: Ex: 488 nm / Em: 490-540 nm
Red: Ex: 561 nm / Em: 570-640 nm
Deep Red: Ex: 640 nm / Em: 640-760 nm
产品名称 |
容量 |
货号 |
外泌体膜荧光染色试剂盒 |
(绿色)ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green |
5 samples |
EX01 |
(红色)ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red |
5 samples |
EX02 |
(深红色)ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red |
5 samples |
EX03 |
外泌体蛋白荧光染色试剂盒 |
(绿色)ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green |
5 samples |
EX04 |
(红色)ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red |
5 samples |
EX05 |
(深红色)ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red |
5 samples |
EX06 |
*纯化的外泌体(超离心法),蛋白质:1-10 µg/sample,粒子数:10-100×10^8个/sample |