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EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-质粒纯化 分子生物试剂12381

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EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-质粒纯化 分子生物试剂

  • 产品型号：  12381
  • 简单描述
  • EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-质粒纯化纯化得到至多2.5 mg无内毒素超转染级纯质粒或柯斯质粒DNA得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg纯化流程快，同时去除内毒素获得高产量高拷贝质粒DNA使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA
详细介绍

EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-质粒纯化

纯化得到至多2.5 mg无内毒素超转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg

  • 纯化流程快，同时去除内毒素

  • 获得高产量高拷贝质粒DNA

  • 使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA

EndoFree Plasmid Kit基于阴离子交换技术，可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges通过过滤快速澄清裂解液，DNA产量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度，非常适合超转染级纯的应用。

质粒纯化方法与转染效率。

使用两种方法独立制备pRSVcat，分别使用脂质体介导的方法转染到COS-7、HeLa和LMH细胞中，及使用磷酸钙转染至Huh7细胞中。平均转染效率以相对于QIAGEN Plasmid Kit制备的DNA的转染效率表示。

QIAGEN Plasmid Kit procedures.

Neutralized bacterial lysates are incubated directly in the QIAfilter Cartridge and cleared in seconds by filtration. After the endotoxin removal step, the cleared lysate is then loaded onto the anion-exchange tip where plasmid DNA selectively binds under appropriate low-salt and pH conditions. RNA, proteins, metabolites, and other low-molecular-weight impurities are removed by a medium-salt wash, and ultrapure plasmid DNA is eluted in high-salt buffer. The DNA is concentrated and desalted by isopropanol precipitation and collected by centrifugation.

质粒纯度与转染效率。

图中显示了在无血清条件下，在悬浮液中生长的CHO SSF3 X9细胞中，质粒DNA的数量和质量对转染效率的影响。每个点代表三次独立实验的平均值；Rel. LU：相对光单位。（数据由瑞士巴塞尔诺华公司的M. Zang-Gandor提供。）

细菌细胞壁。

大肠杆菌细胞壁示意图。

EndoFree Plasmid Mega Kit (5)-质粒纯化

性能

EndoFree Plasmid Mega Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化过程中，不需要额外步骤，也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Mega-Giga Cartridge过滤细菌裂解液，通过重力流QIAGEN-tip 2500阴离子交换柱纯化质粒DNA。从500 ml–2.5 l培养液中至多纯化2.5 mg DNA（培养液体积取决于质粒拷贝数量、插入片段大小、宿主菌和培养介质。）纯化的DNA无内毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素，内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染。QIAGEN超纯无内毒素DNA也适用于基因治疗研究、基因免疫研究和其他敏感应用。

质粒制备中的内毒素水平*
质粒准备方法 内毒素(EU†/µg DNA) 平均转染效率‡
EndoFree Plasmid Kit 0.1 154%
QIAGEN Plasmid Kit 9.3 100
2x CsCl 2.6 99%
Silica-gel slurry 1230.0 24%
*宿主菌：大肠杆菌DH5α  质粒： pRSVcat.
† 1 ng LPS = 1.8 EU.
‡ 根据表中数据计算 “Plasmid purification method versus transfection efficiency”.
无内毒素DNA配合原代细胞得到高转染率*
DNA 纯化方法 转染细胞百分比
EndoFree Plasmid Kit 21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit 8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry 5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率，由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。（数据由C. Chew and J. Parente友情提供，Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理

纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤，获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置，用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可wanquan去除SDS沉淀，清除细菌裂解液，相比离心可大量节约时间，减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Mega-Giga Cartridges采用内部真空的方式轻松的澄清大量的细菌裂解物。

QIAGEN-tips中dute的阴离子交换树脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）专为核酸纯化而开发。它的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装QIAGEN-tips，限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质，如benfen，氯仿，溴化乙锭和CsCl，限度地减少对用户和环境的危害。

内毒素，又称脂多糖或LPS，是革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分，如大肠杆菌。内毒素在质粒解裂纯化过程中释放，并显著地降低内毒素敏感的细胞株转染效率。此外，内毒素与DNA竞争“自由”转染试剂，影响转染实验。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞中非特异性免疫反应，从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类，如IL -1和前列腺素的合成。总体而言，内毒素在转染实验中是不可控变量，影响结果的可重复性，使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中，内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联，干扰研究。

操作流程

在碱性条件下，细菌细胞裂解，用QIAfilter Mega-Giga Cartridge清除粗裂解物。将Endotoxin Removal Buffer加入到过滤后的裂解液中。冰浴后，将纯净的裂解物上样到阴离子交换柱上，在适当的低盐和pH条件下，质粒DNA选择性结合。用中盐缓冲液清除RNA、蛋白质、代谢产物和其他低分子量杂质，超纯质粒DNA被高盐缓冲液洗脱。DNA由异丙醇脱盐、沉淀并且离心回收。

应用

使用EndoFree Plasmid Kits纯化的DNA适合多种敏感应用，包括：

  • 转染，包括原代、敏感和悬浮细胞

  • 基因治疗研究

  • 基因沉默

  • 显微注射

特点
参数
Applications Transfection, gene therapy
Culture volume/starting material 500 ml – 2.5 liters culture volume
Plasmid type High-copy, low-copy, cosmid DNA
Processing Manual (vacuum and centrifugation)
Samples per run; throughput 1 sample per run
Technology Anion-exchange technology
Time per run or prep per run 220 min
Yield


QIAGEN EndoFree Plasmid Mega Kit无内毒素质粒提取试剂盒12381

发表于由

QIAGEN EndoFree Plasmid Mega Kit无内毒素质粒提取试剂盒

  • 产品型号：  12381
  • 简单描述
  • QIAGEN EndoFree Plasmid Mega Kit无内毒素质粒提取试剂盒EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术，可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges过滤快速澄清裂解液。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度，适合超转染级纯的应用。EndoFree Plasmid Buffer Set可用于制备10次m
详细介绍

QIAGEN EndoFree Plasmid Mega Kit无内毒素质粒提取试剂盒

纯化得到至多10 mg的无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA

  • 纯化得到的DNA内毒素水平低于0.1 EU/µg
  • 纯化流程快，同时去除内毒素
  • 获得高产量、高拷贝质粒DNA
  • 使用LyseBlue，获得的裂解和高产量的DNA

QIAGEN EndoFree Plasmid Mega Kit无内毒素质粒提取试剂盒

质粒纯化方法与转染效率。

使用两种方法独立制备pRSVcat，分别使用脂质体介导的方法转染到COS-7、HeLa和LMH细胞中，及使用磷酸钙转染至Huh7细胞中。平均转染效率以相对于QIAGEN Plasmid Kit（100％）制备的DNA的转染效率表示。

质粒纯化方法与转染效率。

使用两种方法独立制备pRSVcat，分别使用脂质体介导的方法转染到COS-7、HeLa和LMH细胞中，及使用磷酸钙转染至Huh7细胞中。平均转染效率以相对于QIAGEN Plasmid Kit（100％）制备的DNA的转染效率表示。

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膜タンパク質可溶化剤 MEGA-8 | CAS 85316-98-9 同仁化学研究所

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膜タンパク質可溶化剤 MEGA-8 | CAS 85316-98-9 同仁化学研究所MEGA-8

07 膜タンパク質可溶化剤

MEGA-8

膜タンパク質可溶化剤 MEGA-8 | CAS 85316-98-9 同仁化学研究所

  • 膜タンパク質可溶化剤
  • デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

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  • CAS番号
    85316-98-9
  • 化学名
    n-Octanoyl-N-methyl-D-glucamine
  • 分子式・分子量
    C15H31NO6=321.41
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 g ￥5,500 348-05071
5 g ￥18,700 344-05073
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技術情報

溶解例

0.5 g/50 mL(水)

参考文献

参考文献を表示する

1) J. E. K. Hildreth, "N-D-Gluco-N-methylalkanamide Compounds, a New Class of Non-ionic Detergents for Membrane Biochemistry", Biochem. J., 1982, 207, 363. 
2) M. Okawauchi, M. Hagio, Y. Ikawa, G. Sugihara, Y. Murata and M. Tanaka, "A Light-Scattering Study of Temperature Effect on Micelle Formation of N-Alkanoyl-N-Methylglucamines in Aqueous Solution", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1987, 60, 2718. 
3) G. Sugihara, M. Hagio, M. Tanaka and Y. Ikawa, "The CMC of the Mixed System of MEGA-9 with MEGA-10 in Water at 30℃", J. Colloid Interface Sci., 1988, 123, 544. 
4) G. Sugihara, "Pressure Effect on Micelle Formation in Mixed Systems of Sodium Perfluorooctanoate with Hydrocarbon Surfactants-sodium Dedocyl Sulfate, Sodium Decyl Sulfate and Nonanoyl-N-methylgulcamine", Surfactants in Solution, 1989, 7, 397. 
5) V. De Pinto, R. Benz and F. Palmieri, "Interaction of Non-Classical Detergents with the Mitochondrial Porin A New Purification Procedure and Characterization of the Pore-forming Unit", Eur. J. Biochem., 1989, 183, 179. 
6) Y. Wada, Y. Ikawa, H. Igimi, Y. Murata, S. Nagadome and G. Sugihara, "Mixed Micelle and Mixed Adsorbed Film Formations of Anionic Fluorocarbon-Nonionic Hydrocarbon Surfactant Mixtures", J. Jpn. Oil Chem. Soc., 1990, 39, 548. 
7)R. M. DeVay, L. Dominguez-Ramirez, L. L. Lackner, S. Hoppins, H. Stahlberg and J. Nunnari, "Coassembly of Mgm1 isoforms requires cardiolipin　and mediates mitochondrial inner membrane fusion", J. Cell Biol., 2009, 186, 793.

よくある質問

Q

cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。

A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。 

　その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。 

　一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
　ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
　cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。
https://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

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取扱条件

規格
性状： 本品は、白色粉末で吸湿性があり、水に溶ける。
純度(HPLC)： 98.0％ 以上
水溶状： 試験適合 0.020 以下(280 nm)
融点： 80～90℃
pH(25℃)： 5.0～8.0
IRスペクトル： 試験適合
取扱条件
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関連製品

膜タンパク質可溶化剤 MEGA-9 | CAS 85261-19-4 同仁化学研究所

发表于由

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07 膜タンパク質可溶化剤

MEGA-9

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  • 膜タンパク質可溶化剤
  • デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

  • 製品コード
    M015　 MEGA-9
  • CAS番号
    85261-19-4
  • 化学名
    n-Nonanoyl-N-methyl-D-glucamine
  • 分子式・分子量
    C16H33NO6=335.44
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 g ￥6,400 345-05081
5 g ￥22,400 341-05083
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技術情報

溶解例

0.5 g/50 mL(水)

参考文献

参考文献を表示する

1) J. E. K. Hildreth, "N-D-Gluco-N-methylalkanamide Compounds, a New Class of Non-ionic Detergents for Membrane Biochemistry", Biochem. J., 1982, 207, 363. 
2) M. Okawauchi, M. Hagio, Y. Ikawa, G. Sugihara, Y. Murata and M. Tanaka, "A Light-Scattering Study of Temperature Effect on Micelle Formation of N-Alkanoyl-N-Methylglucamines in Aqueous Solution", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1987, 60, 2718. 
3) G. Sugihara, M. Hagio, M. Tanaka and Y. Ikawa, "The CMC of the Mixed System of MEGA-9 with MEGA-10 in Water at 30℃", J. Colloid Interface Sci., 1988, 123, 544. 
4) G. Sugihara, "Pressure Effect on Micelle Formation in Mixed Systems of Sodium Perfluorooctanoate with Hydrocarbon Surfactants-sodium Dedocyl Sulfate, Sodium Decyl Sulfate and Nonanoyl-N-methylgulcamine", Surfactants in Solution, 1989, 7, 397. 
5) V. De Pinto, R. Benz and F. Palmieri, "Interaction of Non-Classical Detergents with the Mitochondrial Porin A New Purification Procedure and Characterization of the Pore-forming Unit", Eur. J. Biochem., 1989, 183, 179. 
6) Y. Wada, Y. Ikawa, H. Igimi, Y. Murata, S. Nagadome and G. Sugihara, "Mixed Micelle and Mixed Adsorbed Film Formations of Anionic Fluorocarbon-Nonionic Hydrocarbon Surfactant Mixtures", J. Jpn. Oil Chem. Soc., 1990, 39, 548.
7)D. Locke, C. Liu, X. Peng, H. Chen, and M. L. KahnFc, "Rγ-independent Signaling by the Platelet Collagen Receptor Glycoprotein VI", J. Biol. Chem., 2003, 278, 15441.
8)T. Amano, T. Wakagi and T. Oshima, "An Ecto-Enzyme from Sulfolobus acidocaldarius Strain 7 Which Catalyzes Hydrolysis of Inorganic Pyrophosphate, ATP, and ADP: Purification and Characterization", J. Biochem., 1993, 114, 329.
9)K. Inatomi, Y. Kamagata and K. Nakamura, "Membrane ATPase from the aceticlastic methanogen Methanothrix thermophila., J. Bacteriol., 1993, 175, 80.
10)T. Iwasaki, T. Wakagi, Y. Isogai, T. Iizuka and T. Oshima, "Resolution of the Aerobic Respiratory System of the Thermoacidophilic Archaeon, Sulfolobus sp. Strain 7", J. Biol. Chem., 1995, 270, 30893.
11)J. Sakamoto, Y. Handa and N. Sone, "A Novel Cytochrome b(o/a)3-Type Oxidase from Bacillus stearothermophilus Catalyzes Cytochrome c-551 Oxidation", J. Biochem., 1997, 122, 764.
12)N. Sone, S. Koyanagi and J. Sakamoto, "Energy-Yielding Properties of SoxB-Type Cytochrome bo3 Terminal Oxidase: Analyses Involving Bacillus stearothermophilus K1041 and Its Mutant Strains1", J. Biochem., 2000, 127, 551.
13)N. Sone, M. Sekimachi and E. Kutoh, "Identification and properties of a quinol oxidase super-complex composed of a bc1 complex and cytochrome oxidase in the thermophilic bacterium PS3", J. Biol. Chem., 1987, 262, 15386.
14)T. Tanaka, M. Inoue, J. Sakamoto and N. Sone, "Intra- and Inter-Complex Cross-Linking of Subunits in the Quinol Oxidase Super-Complex from Thermophilic Bacillus PS3", J. Biochem., 1996, 119, 482.

よくある質問

Q

cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。

A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。 

　その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。 

　一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
　ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
　cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。

https://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

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取扱条件

規格
性状： 本品は、白色粉末で吸湿性があり、水に溶ける。
純度(HPLC)： 98.0％ 以上
水溶状： 試験適合 0.020 以下(280 nm)
pH(25℃)： 5.0～8.0
融点： 85～92℃
IRスペクトル： 試験適合
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関連製品

膜タンパク質可溶化剤 MEGA-10 | CAS 85261-20-7 同仁化学研究所

发表于由

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膜タンパク質可溶化剤 MEGA-10 | CAS 85261-20-7 同仁化学研究所MEGA-10

07 膜タンパク質可溶化剤

MEGA-10

膜タンパク質可溶化剤 MEGA-10 | CAS 85261-20-7 同仁化学研究所

  • 膜タンパク質可溶化剤
  • デタージェント

膜タンパク質可溶化剤

  • 製品コード
    M016　 MEGA-10
  • CAS番号
    85261-20-7
  • 化学名
    n-Decanoyl-N-methyl-D-glucamine
  • 分子式・分子量
    C17H35NO6=349.46
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
1 g ￥5,500 342-05091
5 g ￥18,700 348-05093
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技術情報

溶解例

0.5 g/50 mL(水)

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1) J. E. K. Hildreth, "N-D-gluco-N-methylalkanamide Compounds, a New Class of Non-ionic Detergents for Membrane Biochemistry", Biochem. J., 1982, 207, 363. 
2) M. Okawauchi, M. Hagio, Y. Ikawa, G. Sugihara, Y. Murata, and M. Tanaka, "A Light-Scattering Study of Temperature Effect on Micelle Formation of N-alkanoyl-N-methylglucamines in Aqueous Solution", Bull. Chem. Soc. Jpn., 1987, 60, 2718. 
3) G. Sugihara, M. Hagio, M. Tanaka and Y. Ikawa, The CMC of the Mixed System of MEGA-9 with MEGA-10 in Water at 30℃", J. Colloid Interface Sci., 1988, 123, 544. 
4) G. Sugihara, "Pressure Effect on Micelle Formation in Mixed Systems of Sodium Perfluorooctanoate with Hydrocarbon Surfactants-sodium Dedocyl Sulfate, Sodium Decyl Sulfate and Nonanoyl-N-methylgulcamine", Surfactants in Solution, 1989, 7, 397. 
5) V. De Pinto, R. Benz and F. Palmieri, "Interaction of Non-Classical Detergents with the Mitochondrial Porin A New Purification Procedure and Characterization of the Pore-forming Unit", Eur. J. Biochem., 1989, 183, 179. 
6) Y. Wada, Y. Ikawa, H. Igimi, Y. Murata, S. Nagadome and G. Sugihara, "Mixed Micelle and Mixed Adsorbed Film Formations of Anionic Fluorocarbon-Nonionic Hydrocarbon Surfactant Mixtures", J. Jpn. Oil Chem. Soc., 1990, 39, 548. 
7)T. Yamasaki, S. Izumi, H. Ide and Y. Ohyama, "Identification of a Novel Rat Microsomal Vitamin D3 25-Hydroxylase", J. Biol. Chem., 2004, 279, 22848.

よくある質問

Q

cmc（臨界ミセル濃度）はタンパク質可溶化にどのように関係するのですか。

A

界面活性剤はcmc以上の濃度でないとミセルを形成しません。 

　その濃度以上でないとタンパク質の可溶化も出来ません。
タンパク質を可溶化する場合、最終濃度がcmc以上となるように調製する必要があります。 

　一方、タンパク質を可溶化した溶液からこの界面活性剤を除去するときにもcmcは重要となります。
透析を例として説明します。ミセルは界面活性剤の集合体ですが、ミセルを形成することで
一つの大きな分子として振る舞います。
　ミセルを形成している場合、ミセルは透析膜を通過出来ません。
よって、cmcが比較的大きい分子ほど、モノマーの状態の比率が高くなる傾向がありますので、
透析により簡単に除去できます。
　cmc以下に希釈すれば透析はさらに容易になるため、cmcが高いほど低い希釈率で透析ができます。

下記に同仁販売製品一覧およびcmc値を示します。ご参照ください。
https://www.dojindo.co.jp/download/det/det1.pdf

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取扱条件

規格
性状： 本品は、白色粉末で吸湿性があり水に溶ける。
純度(HPLC)： 98.0％ 以上
水溶状： 試験適合 0.020 以下(280 nm)
pH(25℃)： 5.0～8.0
融点： 88～95℃
IRスペクトル： 試験適合
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