日本同仁化学Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)- DOJINDO

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)
ATP Assay Kit-Luminescence
商品信息
储存条件:0-5°C
运输条件:常温

特点:

 

● 操作简便,检测仅需10分钟

● 灵敏度高,微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格:
200 tests
600 tests
1000 tests
2000 tests

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)

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产品原理
实验注意事项
实验操作步骤
参考文献

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NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

 

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法:多功能酶标仪

检测结果:化学发光值

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)

注意:该试剂盒只能比较实验组对照组结果,但是不能完全定量检测

(试剂盒内不含标准品)

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中,每孔加入 100 μl 细胞悬液(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl 细胞悬液)。

*为了获得更准确的检测结果,建议每个实验组至少设置三个复孔(n=3)。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl Working solution)。

*气泡会对实验结果产生影响,如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时,建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后,建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果,如果必须在 有光源的地方震荡,建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能,请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下,避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性,建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值(RLU)。

CCK-L,仪器检测实验例,详见如下:(实验例仅供参考)

细胞内ATP活性检测(CCK-L)的仪器设置

参考文献

编号 文献 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094
2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity,Cellular & Molecular Biology Letters, 2023,doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

日本同仁化学Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18- DOJINDO

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18
细胞活性(ATP检测)
ATP Assay Kit-Luminescence
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储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

 

● 操作简便,检测仅需10分钟

● 灵敏度高,微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

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参考文献

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NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法:多功能酶标仪

检测结果:化学发光值

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

注意:该试剂盒只能比较实验组对照组结果,但是不能完全定量检测

(试剂盒内不含标准品)

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中,每孔加入 100 μl 细胞悬液(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl 细胞悬液)。

*为了获得更准确的检测结果,建议每个实验组至少设置三个复孔(n=3)。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl Working solution)。

*气泡会对实验结果产生影响,如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时,建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后,建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果,如果必须在 有光源的地方震荡,建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能,请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下,避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性,建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值(RLU)。

CCK-L,仪器检测实验例,详见如下:(实验例仅供参考)

细胞内ATP活性检测(CCK-L)的仪器设置

参考文献

编号 文献 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094
2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity,Cellular & Molecular Biology Letters, 2023,doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所ATP Assay Kit-Luminescence

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

ATP Assay Kit-Luminescence

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • ミトコンドリア関連
  • 細胞内代謝

ATP測定キット

  • 安定した発光による高感度検出
  • 標準品の同梱で、不安定なATPの秤量が不要
  • 試薬を加えるだけの簡単な操作
  • 製品コード
    A550  ATP Assay Kit-Luminescence
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
50 tests ¥26,800 346-09793
200 tests ¥48,200 340-09791
キット内容
50 tests ・Enzyme Solution
・Substrate
・Assay Buffer
・ATP Standard
10 μl×1
×1
5.5 ml×1
×1
200 tests ・Enzyme Solution
・Substrate
・Assay Buffer
・ATP Standard
20 μl×2
×2
11 ml×2
×1

  • ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所
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    ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所
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技術情報

ATPの測定原理

ATP Assay Kit-Luminescenceは、培養細胞中のアデノシン三リン酸(ATP)量をホタル・ルシフェラーゼ発光法で定量するキットです。
本キットではマイクロプレートを用いた多検体測定が可能です。

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

参考文献

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文献No. 対象サンプル 装置    引用(リンク)
1) 細胞
DLD-1 (ヒト結腸腺癌)
プレートリーダー

G. Enkhbat, A. Nakanishi, Y. Miki, "The BRCA2 missense mutation K2497R suppressed self-degradation and increased ATP production and cell proliferation", 2021, doi:10.1016/j.bbrc.2021.12.073.

よくある質問

Q

1キットで測定可能なサンプル数を教えて下さい

A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、以下のサンプル数を測定できます。
96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照ください。
 ・50 tests :8サンプル
 ・200 tests:48サンプル(96 ウェルプレート2枚で検量線を2回測定した場合)

Q

発光シグナルはどの程度安定ですか?

A

発光シグナルは3時間安定です。ただし、温度と光が発光に影響しますので、すぐに測定できない場合は、遮光し温度を一定(25℃付近)に保てる場所で静置してください。

Q

測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか?

A

測定はできますが、ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。
また、透明プレートの場合はブランクが高くなりますので、白色プレートを推奨しております。

Q

測定試料は保存できますか?

A

ATPが不安定なため保存できません。実験後は直ぐにWorking solutionを添加し、3時間以内に測定してください。

Q

Working solutionは保存できますか?

A

冷凍(-20℃)で30日間の保存が可能です。
凍結融解を繰り返すことは試薬の劣化を招く恐れがありますので、その場合はあらかじめ小分けしてから保存することをお勧めします。

Q

組織を用いた実験例はありますか?

A

マウス肝臓組織を用いてATPおよびNAD/NADH量を測定した事例がございます。
実験操作の詳細は下記をご参照ください。

アルカリ抽出法による肝臓サンプルからの代謝指標の抽出

1. マウス肝臓100 mgあたり500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液を入れる。
 *使用する組織は必ず灌流操作等で十分に脱血してください。血液の残存は測定に影響を与えます。

2. ダウンス型ホモジナイザーで組織を破砕する。
 *氷浴上で行ってください。

3. サンプルを回収し、サンプルチューブに移す。破砕に使用した容器を500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液で共洗いし、チューブ内のサンプルと合わせる。
 (全量 1 ml)

4. 冷えた超純水 1 mlをサンプルチューブに加え、よく混合し氷上で5分間静置する。(全量 2 ml)
 *溶液の粘性が高いと、次操作の遠心後の分離が困難になる場合があります。その際は、シリンジに25 G(針のゲージ数)程度の細い針を付け、サンプル溶液をシリンジでスムーズに出し入れができるまで(20-30回)混合してください。

5. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清を900 µlずつ二つのサンプルチューブに回収する。
 *1本をATP測定、もう1本をNAD/NADH測定に使用。ATPのみを測定する場合は900 μlx1本のみで構いません。

 

ATP測定用サンプルの調製
6. 上記5. で調製した900 µlのサンプルに200 µl の1 mol/l KH2PO4水溶液を入れ中和し、よく混合後氷上で5分間静置する。

7. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清1 mlをサンプルチューブに回収し測定用サンプルとする。

 

<測定時の注意点>
*操作5、7で得たサンプルは保存できません。その日のうちに測定してください。
*スタンダード、サンプルの希釈には希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH2PO4水溶液を9:5の比率で混合したものを使用してください。

<測定例>
NASH誘導マウス肝臓組織におけるATP量の変化

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

 

Q

発光測定の波長を教えてください。

A

本キットには、ホタルルシフェリンを使用しているため、発光測定の波長は556nmとなります。

ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所 ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 吸湿注意
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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

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