日本同仁化学Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04

脂滴检测（深红色）

Lipi-Deep Red

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

下载说明书

宣传资料

选择规格：

10nmol

期货

点击查看更多脂滴荧光选择

产品解说

概述

原理

脂滴的染色例

与竞争品比较

产品特点

实验例

Lipi系列荧光图谱

脂肪滴产品种类的检测方法

常见问题Q&A

产品解说

概述

Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针，其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢¹⁾，自噬²⁾和细胞衰老³⁾等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下，用油酸诱导HeLa细胞后，用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

检测条件：

* Lipi-Blue ： Ex： 405 nm, Em： 450–500 nm

* Lipi-Green： Ex： 488 nm, Em：500–550 nm

* Lipi-Red： Ex： 561 nm, Em： 565–650 nm

* Lipi-Deep Red： Ex： 640 nm, Em： 650–700 nm

染色条件：

在HeLa细胞培养基中加入200 μmol/l油酸，过夜培养后，用PBS清洗细胞，并分别加入不同颜色的Lipi探针(Lipi-Blue/Green/Deep Red：0.1 μmol/l、Lipi-Red：1 μmol/l) 染色15 min后观察。

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

Lipi系列荧光探针大幅度地改善了现有脂滴染色试剂存在的问题 (如选择性，滤波器的适应性，荧光滞留性)。而且 Lipi系列荧光探针也适用于多重染色实验，可选颜色更多。

同仁化学试剂

其他品牌（T公司）

Lipi-Blue

Lipi-Green

Lipi-Red

Lipi-Deep Red

Oil Red O

(比色)

Nile Red

试剂B

活细胞染色

〇

固定细胞染色

〇

对脂肪滴的选择性
(低背景)

〇

△

与其他试剂的共染色*1

〇

〇^*2

〇

n.d.

×^*3

〇

活细胞内的滞留性(24h)

〇

n.d.

*1. 与绿色荧光共染时，推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*2. 关于共染时推荐的荧光滤光片，您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1：高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸，并用100 nmol/l Lipi-Deep Red 和100 nmol/l Nile Red（T公司）染色。结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

<检测条件>

Lipi-Deep Red： Ex： 640 nm / Em： 650 – 700 nm

Nile Red： Ex： 561 nm / Em： 565 – 650 nm

特点2：荧光在细胞中的滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞，观察在培养30 min和24 h时的荧光图像。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

实验证实Lipi-Blue和Lipi-Green在培养24 h后虽然荧光强度有所降低，但仍有荧光。而Lipi-Red，Lipi-Deep Red，Nile Red和市售试剂B在培养24 h后几乎无荧光，不适合长时间的实时成像观察。

实验例

实验例1：脂肪细胞的脂滴成像

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞，可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×10⁴cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板（ibidi）的各孔中，并在37℃ 5% CO₂培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3) 去除上清液，用DMEM（25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红）洗涤两次。

(4)加入用DMEM（25 mmol/l葡萄糖，10％FBS，无酚红）制备的每种染料的工作溶液，并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度：各2.5 µmol/l

实验例2：脂肪组织的脂滴成像

用4%PFA固定小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)后用Lipi系列染色，比较幼鼠(6周龄)和老年小鼠(31周龄)的脂滴成像图像，发现肝脏脂肪组织中的脂滴量有很大差异。 Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS)，在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后，加入各浓度的Lipi系列working solution（PBS），在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后，用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度：2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

Lipi系列荧光图谱

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

脂肪滴产品种类的检测方法

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

常见问题Q&A

Q1：油酸溶液的制备和加入细胞的方法

A1：我们按照以下步骤制备和使用油酸溶液。
<油酸储存溶液>
必要的试剂
·BSA(牛血清白蛋白)
·油酸
·0.1 mol/l Tris-HCl(pH8.0)
制备步骤
1)在0.1 mol/l Tris-HCl（pH8.0）中加入BSA并溶解（BSA：浓度0.14 g/ml）。
2)在容器(一次性的离心管)中加入油酸后，加入步骤^1）得到的BSA溶液，使用涡旋振荡器进行混合(油酸浓度：4 mmol/l)。*1
3)用孔径为0.22 µm的注射式过滤器(PTFE)过滤步骤²⁾的混合溶液。
4)每次使用后冷藏保存。*2
* 1 油酸和BSA溶液混合可能导致液体混浊，继续摇动让油酸和BSA形成复合物使混浊会消失。
* 2 将所需量的油酸储备溶液加入到实验使用的培养基中，用于将油酸加入到细胞中。
<加入细胞的方法>
1)将细胞在37℃ 5%CO₂培养箱内培养24 h。
2)用加入了油酸储备溶液的培养基(油酸的终浓度200 µmol/L)替换，再培养24 h。
3)然后按照说明书对脂滴进行荧光染色观察。

Q2：共染时推荐的荧光滤光片。

Q3：检测不到荧光信号的应对方法是什么？

Q4如果没有检测到荧光信号，可能会有几个因素。
请确认以下内容，并根据情况考虑优化条件。
1.激发·发射波长与染料的荧光特性不一致。
确认说明书上的荧光图谱和您仪器的激发和发射波长是否匹配。
2.染色条件不是最合适的。
[试剂浓度]
确认工作液的浓度是否在以下范围内。
Lipi-Blue，Lipi-Green：0.1-0.5μmol/l
Lipi-Red：1-5μmol/l
*如果在上述条件下仍未检测到荧光信号，请提高染色浓度。
Lipi-Blue，Lipi-Green：1-2μmol/l
Lipi-Red：10-20μmol/l
[染色时间]
-一般是30min，如没有荧光信号可以延长染色时间至1-2 h。
3.固定条件不适合。
根据细胞种类不同，染色前后的固定操作可能会导致无法染色或灵敏度减弱。
在这种情况下，“请参考Q&A：是否可以对固定细胞进行染色？。
4.脂滴小，难以确认。
根据细胞的不同，可能会有脂滴很小难以确认的情况。
这种情况下，我们建议在高倍率的显微镜下确认，或用油酸处理细胞作为阳性对照进行评估。

Q4：是否可以对固定细胞进行染色?

A4：可以染色，固定细胞的染色步骤有以下注意事项：
※请用多聚甲醛 (PFA) 固定细胞，不建议用甲醇等醇类固定细胞，因为可能会影响脂滴的结构。
※部分细胞种类染色后，如果在固定细胞过程中出现无染色或染色强度不够的情况，需要摸索最佳固定条件。
○细胞染色后固定实验例 (以HepG2细胞为例)
1. 将HepG2细胞接种在µ-Slide 8孔板上，并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基，用PBS清洗2次。
3. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液，在37℃培养箱中培养15 min。
4. 去除上清液，用PBS清洗2次。
5. 加入4% PFA (在PBS中)，在室温固定5 min。
6. 去除上清液，用PBS清洗后，在荧光显微镜下观察。
○细胞染色前固定实验例 (以HeLa细胞为例)
1. 将HeLa细胞接种在µ-Slide 8孔板上，并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基，用PBS清洗2次。
3. 加入4% PFA (在PBS中)，在室温固定5 min。
4. 去除上清液，用PBS清洗2次。
5. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液，在37℃培养箱中培养30 min。
6. 去除上清液，用PBS清洗后，在荧光显微镜下观察。

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日本同仁化学Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Lipi-Red试剂货号：LD03

脂滴检测（红色）

Lipi-Red

商品信息

储存条件：在冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

下载说明书

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100nmol

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点击查看更多脂滴荧光选择

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活动进行中

概述

原理

脂滴的染色例

与竞争品比较

产品特点

实验例

Lipi系列荧光图谱

脂肪滴产品种类的检测方法

常见问题Q&A

参考文献

产品解说

活动进行中

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概述

Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针，其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下，用油酸诱导HeLa细胞后，用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

检测条件：

* Lipi-Blue ：Ex：405 nm, Em：450–500 nm

* Lipi-Green：Ex：488 nm, Em：500–550 nm

* Lipi-Red：Ex：561 nm, Em：565–650 nm

* Lipi-Deep Red：Ex：640 nm, Em：650–700 nm

染色条件：

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

同仁化学试剂

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Lipi-Blue

Lipi-Green

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Oil Red O

(比色)

Nile Red

试剂B

活细胞染色

〇

固定细胞染色

〇

对脂肪滴的选择性
(低背景)

〇

△

与其他试剂的共染色*1

〇

〇^*2

〇

n.d.

×^*3

〇

活细胞内的滞留性(24h)

〇

n.d.

*1. 关于共染色时推荐的荧光滤光片，您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*2. 与绿色荧光共染色时，推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1：与抗体检测方法高度相关

用4％PFA固定HepG2细胞后，用1 μmol/l Lipi-Red 染色。然后在脂滴膜上用抗ADFP抗体荧光标记，免疫染色，该抗体可以特异性标记脂滴膜上的蛋白质 (Adipophilin; ADFP)。实验证明Lipi-Red 与脂滴上蛋白质ADFP的定位高度相关。

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

<检测条件>

Lipi-Red：Ex: 405 nm / Em: 450-500 nm，

抗ADFP抗体(Alexa Fluor 647)：Ex: 640 nm / Em: 650-700 nm

特点2：高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸，并用1μmol/L Lipi-Red和100 nmol/l Nile Red（T公司）染色。该结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

<检测条件>

Lipi-Red： Ex: 561 nm / Em: 565 – 650 nm

Nile Red：Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

特点3：光谱范围更窄，不易串色(Lipi-Red vs Nile Red)

在单通道情况下，Lipi Red和Nile Red（T公司）染色HepG2会用G激发观察红色荧光。而在多重染色情况下，可能会用B激发观察绿色荧光，此时Nile Red会出现串色现象。

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

在用Lipi-Red染色的细胞中，确认了由于G激发引起的红色荧光，并且没有确认由于B激发引起的绿色荧光泄漏。另一方面，在用尼罗红染色的细胞中，观察到由于G激发引起的红色荧光，但是由于B激发而观察到绿色荧光的泄漏。

特点4：荧光在细胞中的滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞，观察在培养30 min和24 h的荧光图像。

实验例

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞，可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×10⁴cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板（ibidi）的各孔中，并在37℃ 5% CO₂培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3) 去除上清液，用DMEM（25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红）洗涤两次。

(4)加入用DMEM（25 mmol/l葡萄糖，10％FBS，无酚红）制备的每种染料的工作溶液，并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度：各2.5 µmol/l

实验例2：脂肪组织的脂滴成像

用4%PFA固定小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)后用Lipi系列染色，比较幼鼠(6周龄)和老年小鼠(31周龄)的脂滴成像图像，发现肝脏脂肪组织中的脂滴量有很大差异。

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS)，在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后，加入各浓度的Lipi系列working solution（PBS），在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后，用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度：2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

实验例3：使用细胞成像仪进行定量分析

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HepG2细胞中，并比较脂滴的变化。在分析中，我们使用共聚焦定量细胞成像仪(横河电机株式会社 CQ1)获得每个细胞脂滴数量和面积的数据。

脂肪滴和细胞核的成像

使用共聚焦定量细胞成像仪在617/73 nm处拍摄脂滴图像，在447/60 nm处拍摄细胞核图像，在分析软体CellPathfinder中识别单个脂滴和细胞核，并计算其数量和面积。

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96 well plate，物镜：20倍

激发波长：405 nm (DAPI)：)：蓝色、561 nm (Lipi-Red)：红色

紫框线：细胞核、黄框线：脂滴

脂滴数量及面积的分析

根据细胞核和脂滴的检测数据，每个细胞的脂滴的数量和面积如图所示。结果，加入油酸的脂滴增加了7-13倍，而加入Triacsin C抑制了脂滴的形成，脂滴数量减少到Control组的60%。

细胞处理及脂滴染色条件

将HepG2细胞(1×10³cells)接种到96孔板中过夜培养。除去培养上清液后，加入未处理（仅含FBS的DMEM培养基）、油酸（含200 μmol/l油酸和FBS的DMEM培养基）或Triacsin C（含5 μmol/l Triacsin C和FBS的DMEM培养基）过夜培养。之后用PBS 清洗2次，用4%的PFA在室温下固定5 min后，用PBS 清洗2次。最后，加入1 μmol/l Lipi-Red working solution 在室温、避光下染色2 h后，用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析。

Lipi系列荧光图谱

Lipi-Red试剂货号：LD03 脂滴检测（红色）

脂肪滴产品种类的检测方法

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

常见问题Q&A

Q1：油酸溶液的制备和加入细胞的方法

Q2：共染时推荐的荧光滤光片。

Q3：检测不到荧光信号的应对方法是什么？

Q4：是否可以对固定细胞进行染色?

Q5：绿色滤光片会有荧光泄露吗。

A5：与市场上的Nile Red相比，Lipi-Red的泄漏较少，但根据滤光片的种类和激发光的强度，荧光又可能会泄漏到绿色滤光片中。在观察带有不同染料的绿色滤光片时，请注意以下几点。

·选择550 nm以下绿色荧光滤光片。

·一边调整激发光的强度，一边检测荧光。

参考文献

1) Y. Tatenaka, H. Kato, M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, H. Nishitoh and Y. Ueno, “Monitoring Lipid Droplet Dynamics in Living Cells by Using Fluorescent Probes”, Biochemistry., 2019, DOI: 10.1021/acs.biochem.8b01071 .

2) M. Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

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ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

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日本同仁化学Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）- DOJINDO

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Lipi-Green试剂货号：LD02

脂滴检测（绿色）

Lipi-Green

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运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

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选择规格：

10nmol

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产品解说

活动进行中

概述

原理

脂滴的染色例

与竞争品比较

产品特点

实验例

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脂肪滴产品种类的检测方法

常见问题Q&A

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概述

Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针，其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下，用油酸诱导HeLa细胞后，用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

检测条件：

* Lipi-Blue ：Ex： 405 nm, Em： 450–500 nm

* Lipi-Green：Ex： 488 nm, Em：500–550 nm

* Lipi-Red：Ex： 561 nm, Em： 565–650 nm

* Lipi-Deep Red：Ex： 640 nm, Em： 650–700 nm

染色条件：

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

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Lipi-Blue

Lipi-Green

Lipi-Red

Lipi-Deep Red

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〇

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〇

对脂肪滴的选择性
(低背景)

〇

△

与其他试剂的共染色*1

〇

〇^*2

〇

n.d.

×^*3

〇

活细胞内的滞留性(24h)

〇

n.d.

*1. 关于共染色时推荐的荧光滤光片，您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*2. 与绿色荧光共染色时，推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1：与抗体检测方法高度相似

用4％PFA固定HepG2细胞后，用100 nmol/l Lipi-Green染色。然后在脂滴膜上用抗ADFP抗体荧光标记，免疫染色，该抗体可以特异性标记脂滴膜上的蛋白质 (Adipophilin; ADFP)。实验证明Lipi-Green与脂滴上蛋白质ADFP的定位高度相关。

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

<检测条件>

Lipi-Green：Ex：405 nm / Em:450-500 nm，

抗ADFP抗体(Alexa Fluor 647)：Ex：640 nm / Em:650-700 nm

特点2：高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸，并用100 nmol/l Lipi-Green和100 nmol/l Nile Red（T公司）共染。右下图中黄色荧光部分为Lipi-Green 和Nile Red共染上的部分，结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

<检测条件>

Lipi-Green： Ex: 488 nm / Em: 500 – 550 nm

Nile Red：Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

特点3：荧光在细胞中滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞，观察在培养30 min和24 h时的荧光图像。

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

实验例

实验例1：脂肪细胞的脂滴成像

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞，可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×10⁴cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板（ibidi）的各孔中，并在37℃ 5% CO₂培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3)去除上清液，用DMEM（25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红）洗涤两次。

(4)加入用DMEM（25 mmol/l葡萄糖，10％FBS，无酚红）制备的每种染料的工作溶液，并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度：各2.5 µmol/l

实验例2：脂肪组织的脂滴成像

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS)，在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后，加入各浓度的Lipi系列working solution（PBS），在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后，用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度：2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

实验例3：利用高内含成像技术对药物引起的脂质性肝脏毒性的研究

将普萘洛尔（交感神经β受体阻断剂）加入人肝癌细胞系（HepG2细胞）后，用荧光显微镜观察脂肪滴的变化。通过荧光图像中脂肪滴的数量、面积和荧光强度的变化分析脂肪滴的积累情况。

脂肪滴的荧光成像

分别用0,10,30μmol/l的普萘洛尔(Propranolol)作用于HepG2细胞后，用LipiGreen染色脂肪滴，Hoechst33342染色细胞核，然后用荧光显微镜(Ti2-E道理显微镜)观察。结果显示，随着普萘洛尔浓度的增加，脂肪低也呈现增加的趋势。

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

<检测条件>

细胞核(Blue)：Ex.385nm/Em.460 nm
脂肪滴 (Green)：Ex.475 nm/Em.535 nm

药物处理对脂肪滴积累的分析

通过分析荧光图像中的细胞数量和脂肪滴的面积、数量和荧光强度来了解细胞积累脂肪滴的情况。结果显示，脂肪滴的数量和面积随着普萘洛尔浓度的增加而上升，在浓度超过20μmol/l的条件下，脂肪滴的形成非常明显。DS-Qi2荧光显微镜可在一次拍摄中捕捉到广泛的细胞区域，而NIS-Elements软件的EDF模块可对所有脂肪滴进行更详细的定量数据统计分析。

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

<检测仪器>

高内涵成像系统(HTC)

(尼康：https://www.microscope.healthcare.nikon.com/zh_CN/products/high-content-imaging)

“有关染色操作、详细的分析方法等请参考尼康网站的 “Application Notes: Hepatotoxicity test of drug-induced lipidosis using high-content imaging”。

Lipi系列荧光图谱

Lipi-Green试剂货号：LD02 脂滴检测（绿色）

脂肪滴产品种类的检测方法

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

常见问题Q&A

Q1：油酸溶液的制备和加入细胞的方法

Q2：共染时推荐的荧光滤光片。

Q3：检测不到荧光信号的应对方法是什么？

Q4：是否可以对固定细胞进行染色?

Q5：Lipi-Green可以用流式细胞仪检测吗？

A5：Lipi-Green不能用于流式，但Lipi-Blue或Lipi-Deep Red可以用。

我们还特别准备了可以便于定量检测的试剂盒。

产品名称货号

Lipid Droplet Assay Kit – Blue LD05

Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red LD06

参考文献

日本同仁化学Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

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宣传资料

选择规格：

10 nmol

现货

点击查看更多脂滴荧光选择

产品解说

概述

原理

脂滴的染色例

与竞争品比较

产品特点

实验例

Lipi系列荧光图谱

脂肪滴产品种类的检测方法

常用问题Q&A

参考文献

产品解说

概述

Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针，其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下，用油酸诱导HeLa细胞后，用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

检测条件：

* Lipi-Blue ：Ex：405 nm, Em：450–500 nm

* Lipi-Green：Ex：488 nm, Em：500–550 nm

* Lipi-Red：Ex：561 nm, Em：565–650 nm

* Lipi-Deep Red：Ex：640 nm, Em：650–700 nm

染色条件：

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

同仁化学试剂

其他品牌（T公司）

Lipi-Blue

Lipi-Green

Lipi-Red

Lipi-Deep Red

Oil Red O

(比色)

Nile Red

试剂B

活细胞染色

〇

固定细胞染色

〇

对脂肪滴的选择性
(低背景)

〇

△

与其他试剂的共染色*1

〇

〇^*2

〇

n.d.

×^*3

〇

活细胞内的滞留性(24h)

〇

n.d.

*1. 与绿色荧光共染时，推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*2. 关于共染时推荐的荧光滤光片，您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1：与抗体检测方法高度相似

4％PFA固定HepG2细胞后，用100 nmol/l Lipi-Blue染色。然后在脂滴膜上用抗ADFP抗体荧光标记，免疫染色，该抗体可以特异性标记脂滴膜上的蛋白质 (Adipophilin; ADFP)。实验证明Lipi-Blue与脂滴上蛋白质ADFP的定位高度相关。

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

<检测条件>

Lipi-Blue：Ex：405 nm / Em：450-500 nm，

抗ADFP抗体(Alexa Fluor 647)：Ex：640 nm / Em：650-700 nm

特点2：高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸，并用100 nmol/l Lipi-Blue和100 nmol/l Nile Red（T公司）染色。该结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

<检测条件>

Lipi-Blue：Ex：405 nm / Em：450-500 nm，

Nile Red：Ex：561 nm / Em：565-650 nm

特点3：荧光在细胞中滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞，观察在培养30 min和24 h时的荧光图像。

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

实验例

实验例1：脂肪细胞的脂滴成像

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞，可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×10⁴cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板（ibidi）的各孔中，并在37℃ 5% CO₂培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3) 去除上清液，用DMEM（25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红）洗涤两次。

(4)加入用DMEM（25 mmol/l葡萄糖，10％FBS，无酚红）制备的每种染料的工作溶液，并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度：各2.5 µmol/l

实验例2：脂肪组织的脂滴成像

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS)，在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后，加入各浓度的Lipi系列working solution（PBS），在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后，用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度：2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

实验例3：使用细胞成像仪进行定量分析

脂肪滴和细胞核的成像

使用共聚焦定量细胞成像仪在447/60 nm处拍摄脂滴图像，在525/50 nm处拍摄细胞核图像，在分析软件CellPathfinder中识别单个脂滴和细胞核，并计算其数量和面积。

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96 well plate，物镜：20倍

激发波长：405 nm (Lipi-Blue)：蓝色、488 nm (SYBR Green)：绿色

黄框线：细胞核、红框线：脂滴

脂滴数量及面积的分析

根据细胞核和脂滴的检测数据，每个细胞的脂滴的数量和面积如图所示。结果，加入油酸的脂滴增加了7-10倍，而加入Triacsin C抑制了脂滴的形成，脂滴数量减少到Control组的50-60%。

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

细胞处理及脂滴染色条件

将HepG2细胞(1×10³cells)接种到96孔板中过夜培养。除去培养上清液后，加入未处理（仅含FBS的DMEM培养基）、油酸（含200 μmol/l油酸和FBS的DMEM培养基）或Triacsin C（含5 µmol/l Triacsin C和FBS的DMEM培养基）过夜培养。之后用PBS 清洗2次，用4%的PFA在室温下固定5 min后，用PBS 清洗2次。最后，加入0.5 μmol/l Lipi-Blue working solution在室温、避光下染色2 h后，用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析。

Lipi系列荧光图谱

Lipi-Blue试剂货号：LD01 脂滴检测（蓝色）

脂肪滴产品种类的检测方法

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

常用问题Q&A

Q1：油酸溶液的制备和加入细胞的方法

Q2：共染时推荐的荧光滤光片。

Q3：检测不到荧光信号的应对方法是什么？

Q4：是否可以对固定细胞进行染色?

参考文献

脂肪滴染色蛍光色素 Lipi-Blue 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Lipi-Blue

05 細胞染色用色素

Lipi-Blue

細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴染色蛍光色素

製品コード

LD01　 Lipi-Blue

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 nmol ^※	￥19,900	345-09361

本製品の測定原理と使用例を示した論文を公開!!

※ 35 mm dish: 10 ～ 50 枚分

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

脂肪滴は、トリアシルグリセロールやコレステロールエステルなどの中性脂肪が単分層のリン脂質一重膜によって取り囲まれた構造体です。脂肪滴は脂肪細胞のみに存在するわけではなく、すべての細胞に普遍的に存在しています。最近の研究から、脂肪滴はその表面に種々のタンパク質が結合し、体内の脂質代謝制御において重要な役割を担っていることが明らかになってきています¹⁾。近年、脂肪滴とオートファジー²⁾、細胞老化³⁾ といった細胞内現象との関連性も示唆されており、脂肪滴の形成・成長・融合・分解のメカニズムをより詳細に解明するツールが待ち望まれています。

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

参考文献

参考文献を表示する

1) Y. Tatenaka, H. Kato, M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, H. Nishitoh and Y. Ueno, "Monitoring Lipid Droplet Dynamics in Living Cells by Using Fluorescent Probes", Biochemistry., 2019, DOI: 10.1021/acs.biochem.8b01071 .
2) S. W. Kima, C. R. Rho, J. Kim, Y. Xie, R. C. Prince, K. Mustafa, E. O. Potma, D. J. Brown, J. V. Jester, "Eicosapentaenoic acid (EPA) activates PPARγ signaling leading to cell cycle exit, lipid accumulation, and autophagy in human meibomian gland epithelial cells (hMGEC)", The Ocular Surface, 2020, DOI: 10.1016/j.jtos.2020.04.012.

よくある質問

Q オレイン酸溶液の調製方法と細胞への導入方法を教えてください。

小社では以下の手順でオレイン酸溶液を調製して使用しました。

<オレイン酸ストック溶液>
必要な試薬
　・BSA (ウシ血清アルブミン)
　・オレイン酸
　・0.1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0)

調製手順
1）	0.1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0)にBSAを添加し溶解する(BSA: 濃度 0.14 g/mL)。
2）	容器（ディスポーザブルの遠沈管など）にオレイン酸を入れた後、１）のBSA溶液を加えて回転振盪器を用いて混合する（オレイン酸濃度: 4 mmol/L）。*1
3）	2）の混合溶液を、ポアサイズが0.22 µmのシリンジフィルター（PTFE製)でろ過する。
4）	冷蔵保存して、都度、使用する。*2
	1オレイン酸とBSA溶液を混合すると液体中に曇りを生じる場合がありますが、振盪を続けるとオレイン酸とBSAの複合体が形成され曇りが消失します。 2実験で用いる培地にオレイン酸ストック溶液を必要量を添加して、細胞へのオレイン酸導入に使用してください。

<細胞への導入方法>
1）	細胞を 5% CO₂インキュベーター（37℃）内で、24時間培養する。
2）	オレイン酸ストック溶液を添加した培地（オレイン酸の終濃度 200 μmol/L）に置換して、更に、24時間培養する。
3）	その後、取扱説明書に従って、脂肪滴を蛍光染色して観察する。

Q 共染色時の推奨フィルターを教えてください。

ご使用の色素と励起波長に応じて、下記表を参照のうえ共染色に適したフィルターを選択ください。

励起波長（共染色色素）	405 nm （Hoechst, DAPI etc.）	488 nm （FITC, GFP etc.）	561 nm （Cy3, Rhodamine, RFP etc.）	633 nm （Cy5, mCherry etc.）
Lipi-Blue	Lipi-Blueの蛍光観察	Lipi-Blueは488 nm, 561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Green	Lipi-Greenは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Greenの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Greenの蛍光観察	Lipi-Greenは561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため、何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Red	Lipi-Redは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redは488 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、500-550 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redの蛍光観察	Lipi-Redは633 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、650-700 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。
Lipi-Deep Red	Lipi-Deep Redは、405および488 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。		Lipi-Deep Redは561 nmで若干励起されます。 Lipi-Deep Red由来の蛍光漏れ込みを抑えるため、560-610 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Deep Redの蛍光観察

Q 蛍光が確認できない場合の対処法は？: A

蛍光が検出されない場合、幾つか要因が考えられます。
下記に示した項目を確認し、状況によっては最適化条件をご検討ください。

①励起・蛍光波長が色素の蛍光特性と合致していない。
製品HPに掲載の色素の蛍光スペクトルとお使いのフィルターを確認し、励起・蛍光波長が
合致しているかご確認ください。

②染色条件が最適ではない。
[試薬濃度]
– working solutionの濃度を下記の範囲で検討する。
Lipi-Blue, Lipi-Green：0.1-0.5 μmol/L
Lipi-Red：1-5 μmol/L

※上記条件でも蛍光が検出されない場合、更に高濃度で染色する。
Lipi-Blue, Lipi-Green：1-2 μmol/L
Lipi-Red：10-20 μmol/L

[インキュベーション時間]
– 通常は30分ですが、試薬添加後に1-2時間インキュベートする。

③固定化の条件が適していない。
細胞によっては染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。
その際は、「Q:固定化細胞への染色は可能ですか？」をご参照ください。

④脂肪滴が小さくて確認が困難。
細胞によっては脂肪滴が小さく、確認が困難な場合があります。
その際は、高倍率の顕微鏡での確認、又はオレイン酸処理した細胞によるポジティブコントロールを
評価されることをお勧めします。

Q 固定化細胞への染色は可能ですか？: A

固定化した細胞でも染色は可能です。固定化細胞の染色手順は、下記を参照ください。
※固定化処理にはパラホルムアルデヒド(PFA)をご使用ください。メタノール等のアルコール固定は、脂肪滴の構造に影響を及ぼす可能性があるため、お勧めしません。
※細胞によっては、染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。その際は、固定化条件を検討頂く必要があります。

○染色後に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HepG2細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で15分インキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

○染色前に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HeLa細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

取扱条件

規格
性状：
純度(HPLC)：	85.0％以上

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脂肪滴染色蛍光色素 Lipi-Green 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Lipi-Green

05 細胞染色用色素

Lipi-Green

細胞染色用色素
細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴染色蛍光色素

製品コード

LD02　 Lipi-Green

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 nmol ^※	￥19,900	342-09371

本製品の測定原理と使用例を示した論文を公開!!

※ 35 mm dish: 10 ～ 50 枚分

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

参考文献

参考文献を表示する

1) Y. Tatenaka, H. Kato, M. Ishiyama, K. Sasamoto, M. Shiga, H. Nishitoh and Y. Ueno, "Monitoring Lipid Droplet Dynamics in Living Cells by Using Fluorescent Probes", Biochemistry., 2019, DOI: 10.1021/acs.biochem.8b01071 .
2) M. Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, "Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes", Cells., 2019, 8, (4), 373.
3) A. Matsuda, I Mitsui, Y. Shimizu, T. Kanda, A. Ohnishi, M. Miyabe and Y. Itoh, "Establishment and characterization of a canine sebaceous epithelial cell line derived from an eyelid mass", J. Vet. Med. Sci., 2020, DOI: 10.1292/jvms.20-0179.

よくある質問

Q オレイン酸溶液の調製方法と細胞への導入方法を教えてください。

小社では以下の手順でオレイン酸溶液を調製して使用しました。

<オレイン酸ストック溶液>
必要な試薬
　・BSA (ウシ血清アルブミン)
　・オレイン酸
　・0.1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0)

調製手順
1）	0.1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0)にBSAを添加し溶解する(BSA: 濃度 0.14 g/mL)。
2）	容器（ディスポーザブルの遠沈管など）にオレイン酸を入れた後、１）のBSA溶液を加えて回転振盪器を用いて混合する（オレイン酸濃度: 4 mmol/L）。*1
3）	2）の混合溶液を、ポアサイズが0.22 µmのシリンジフィルター（PTFE製)でろ過する。
4）	冷蔵保存して、都度、使用する。*2
	1オレイン酸とBSA溶液を混合すると液体中に曇りを生じる場合がありますが、振盪を続けるとオレイン酸とBSAの複合体が形成され曇りが消失します。 2実験で用いる培地にオレイン酸ストック溶液を必要量を添加して、細胞へのオレイン酸導入に使用してください。

<細胞への導入方法>
1）	細胞を 5% CO₂インキュベーター（37℃）内で、24時間培養する。
2）	オレイン酸ストック溶液を添加した培地（オレイン酸の終濃度 200 μmol/L）に置換して、更に、24時間培養する。
3）	その後、取扱説明書に従って、脂肪滴を蛍光染色して観察する。

Q 共染色時の推奨フィルターを教えてください。

ご使用の色素と励起波長に応じて、下記表を参照のうえ共染色に適したフィルターを選択ください。

励起波長（共染色色素）	405 nm （Hoechst, DAPI etc.）	488 nm （FITC, GFP etc.）	561 nm （Cy3, Rhodamine, RFP etc.）	633 nm （Cy5, mCherry etc.）
Lipi-Blue	Lipi-Blueの蛍光観察	Lipi-Blueは488 nm, 561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Green	Lipi-Greenは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Greenの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Greenの蛍光観察	Lipi-Greenは561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため、何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Red	Lipi-Redは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redは488 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、500-550 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redの蛍光観察	Lipi-Redは633 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、650-700 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。
Lipi-Deep Red	Lipi-Deep Redは、405および488 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。		Lipi-Deep Redは561 nmで若干励起されます。 Lipi-Deep Red由来の蛍光漏れ込みを抑えるため、560-610 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Deep Redの蛍光観察

Q 蛍光が確認できない場合の対処法は？: A

蛍光が検出されない場合、幾つか要因が考えられます。
下記に示した項目を確認し、状況によっては最適化条件をご検討ください。

①励起・蛍光波長が色素の蛍光特性と合致していない。
製品HPに掲載の色素の蛍光スペクトルとお使いのフィルターを確認し、励起・蛍光波長が
合致しているかご確認ください。

②染色条件が最適ではない。
[試薬濃度]
– working solutionの濃度を下記の範囲で検討する。
Lipi-Blue, Lipi-Green：0.1-0.5 μmol/L
Lipi-Red：1-5 μmol/L

※上記条件でも蛍光が検出されない場合、更に高濃度で染色する。
Lipi-Blue, Lipi-Green：1-2 μmol/L
Lipi-Red：10-20 μmol/L

[インキュベーション時間]
– 通常は30分ですが、試薬添加後に1-2時間インキュベートする。

③固定化の条件が適していない。
細胞によっては染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。
その際は、「Q:固定化細胞への染色は可能ですか？」をご参照ください。

④脂肪滴が小さくて確認が困難。
細胞によっては脂肪滴が小さく、確認が困難な場合があります。
その際は、高倍率の顕微鏡での確認、又はオレイン酸処理した細胞によるポジティブコントロールを
評価されることをお勧めします。

Q 固定化細胞への染色は可能ですか？: A

固定化した細胞でも染色は可能です。固定化細胞の染色手順は、下記を参照ください。
※固定化処理にはパラホルムアルデヒド(PFA)をご使用ください。メタノール等のアルコール固定は、脂肪滴の構造に影響を及ぼす可能性があるため、お勧めしません。
※細胞によっては、染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。その際は、固定化条件を検討頂く必要があります。

○染色後に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HepG2細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で15分インキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

○染色前に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HeLa細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

Q Lipi-Greenはフローサイトメーターでも使用できますか？: A

Lipi-Greenではフローサイトでは使用できませんが、Lipi-BlueやLipi-Deep Redでは測定可能です。
数値化に便利な下記のキットもご用意いたしております。

品名製品コード
Lipid Droplet Assay Kit – Blue LD05
Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red LD06

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄橙色～橙色固体である。
純度(HPLC)：	85.0％以上

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脂肪滴染色蛍光色素 Lipi-Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Lipi-Red

05 細胞染色用色素

Lipi-Red

細胞染色用色素
細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴染色蛍光色素

製品コード

LD03　 Lipi-Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 nmol ^※	￥19,900	349-09381

本製品の測定原理と使用例を示した論文を公開!!

※ 35 mm dish: 10 ～ 50 枚分

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

参考文献

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2) M. Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, "Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes", Cells., 2019, 8, (4), 373.

よくある質問

Q オレイン酸溶液の調製方法と細胞への導入方法を教えてください。

小社では以下の手順でオレイン酸溶液を調製して使用しました。

<オレイン酸ストック溶液>
必要な試薬
　・BSA (ウシ血清アルブミン)
　・オレイン酸
　・0.1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0)

調製手順
1）	0.1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0)にBSAを添加し溶解する(BSA: 濃度 0.14 g/mL)。
2）	容器（ディスポーザブルの遠沈管など）にオレイン酸を入れた後、１）のBSA溶液を加えて回転振盪器を用いて混合する（オレイン酸濃度: 4 mmol/L）。*1
3）	2）の混合溶液を、ポアサイズが0.22 µmのシリンジフィルター（PTFE製)でろ過する。
4）	冷蔵保存して、都度、使用する。*2
	1オレイン酸とBSA溶液を混合すると液体中に曇りを生じる場合がありますが、振盪を続けるとオレイン酸とBSAの複合体が形成され曇りが消失します。 2実験で用いる培地にオレイン酸ストック溶液を必要量を添加して、細胞へのオレイン酸導入に使用してください。

<細胞への導入方法>
1）	細胞を 5% CO₂インキュベーター（37℃）内で、24時間培養する。
2）	オレイン酸ストック溶液を添加した培地（オレイン酸の終濃度 200 μmol/L）に置換して、更に、24時間培養する。
3）	その後、取扱説明書に従って、脂肪滴を蛍光染色して観察する。

Q 共染色時の推奨フィルターを教えてください。

ご使用の色素と励起波長に応じて、下記表を参照のうえ共染色に適したフィルターを選択ください。

励起波長（共染色色素）	405 nm （Hoechst, DAPI etc.）	488 nm （FITC, GFP etc.）	561 nm （Cy3, Rhodamine, RFP etc.）	633 nm （Cy5, mCherry etc.）
Lipi-Blue	Lipi-Blueの蛍光観察	Lipi-Blueは488 nm, 561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Green	Lipi-Greenは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Greenの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Greenの蛍光観察	Lipi-Greenは561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため、何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Red	Lipi-Redは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redは488 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、500-550 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redの蛍光観察	Lipi-Redは633 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、650-700 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。
Lipi-Deep Red	Lipi-Deep Redは、405および488 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。		Lipi-Deep Redは561 nmで若干励起されます。 Lipi-Deep Red由来の蛍光漏れ込みを抑えるため、560-610 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Deep Redの蛍光観察

Q 蛍光が確認できない場合の対処法は？: A

蛍光が検出されない場合、幾つか要因が考えられます。
下記に示した項目を確認し、状況によっては最適化条件をご検討ください。

①励起・蛍光波長が色素の蛍光特性と合致していない。
製品HPに掲載の色素の蛍光スペクトルとお使いのフィルターを確認し、励起・蛍光波長が
合致しているかご確認ください。

②染色条件が最適ではない。
[試薬濃度]
– working solutionの濃度を下記の範囲で検討する。
Lipi-Blue, Lipi-Green：0.1-0.5 μmol/L
Lipi-Red：1-5 μmol/L

※上記条件でも蛍光が検出されない場合、更に高濃度で染色する。
Lipi-Blue, Lipi-Green：1-2 μmol/L
Lipi-Red：10-20 μmol/L

[インキュベーション時間]
– 通常は30分ですが、試薬添加後に1-2時間インキュベートする。

③固定化の条件が適していない。
細胞によっては染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。
その際は、「Q:固定化細胞への染色は可能ですか？」をご参照ください。

④脂肪滴が小さくて確認が困難。
細胞によっては脂肪滴が小さく、確認が困難な場合があります。
その際は、高倍率の顕微鏡での確認、又はオレイン酸処理した細胞によるポジティブコントロールを評価されることをお勧めします。

Q 固定化細胞への染色は可能ですか？: A

固定化した細胞でも染色は可能です。固定化細胞の染色手順は、下記を参照ください。
※固定化処理にはパラホルムアルデヒド(PFA)をご使用ください。メタノール等のアルコール固定は、脂肪滴の構造に影響を及ぼす可能性があるため、お勧めしません。
※細胞によっては、染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。その際は、固定化条件を検討頂く必要があります。

○染色後に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HepG2細胞＞
　①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
　②プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で15分インキュベートした。
　③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
　④4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
　⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

○染色前に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HeLa細胞＞
　①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
　②4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
　③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
　④プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
　⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

Q 緑色フィルターに漏れ込みはありますか？: A

Lipi-Redは、市販品のNile Redに比べると漏れ込みは少ないですが、フィルター種や
励起光の強度によっては、緑色フィルターに蛍光が漏れ込む場合があります。

緑色フィルターを別色素で評価する際には、下記の点に注意してお使い下さい。
・緑色の蛍光フィルターは550 nm以下を選択する。
・励起光の強度を調整しながら、蛍光を検出する。

取扱条件

規格
性状：	本品は、黒紫色～黒褐色固体である。
純度(HPLC)：	85.0％以上

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脂肪滴染色蛍光色素 Lipi-Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Lipi-Deep Red

05 細胞染色用色素

Lipi-Deep Red

細胞染色用色素
細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴染色蛍光色素

製品コード

LD04　 Lipi-Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 nmol ^※	￥19,300	342-09631

※ 35 mm dish: 10 ～ 50 枚分

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お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

よくある質問

Q 共染色時の推奨フィルターを教えてください。

ご使用の色素と励起波長に応じて、下記表を参照のうえ共染色に適したフィルターを選択ください。

励起波長（共染色色素）	405 nm （Hoechst, DAPI etc.）	488 nm （FITC, GFP etc.）	561 nm （Cy3, Rhodamine, RFP etc.）	633 nm （Cy5, mCherry etc.）
Lipi-Blue	Lipi-Blueの蛍光観察	Lipi-Blueは488 nm, 561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Green	Lipi-Greenは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Greenの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Greenの蛍光観察	Lipi-Greenは561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため、何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Red	Lipi-Redは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redは488 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、500-550 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redの蛍光観察	Lipi-Redは633 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、650-700 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。
Lipi-Deep Red	Lipi-Deep Redは、405および488 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。		Lipi-Deep Redは561 nmで若干励起されます。 Lipi-Deep Red由来の蛍光漏れ込みを抑えるため、560-610 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Deep Redの蛍光観察

Q 固定化細胞への染色は可能ですか？

固定化した細胞でも染色は可能です。固定化細胞の染色手順は、下記を参照ください。

※	固定化処理にはパラホルムアルデヒド(PFA)をご使用ください。メタノール等のアルコール固定は、脂肪滴の構造に影響を及ぼす可能性があるため、お勧めしません。
※	細胞によっては、染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。その際は、固定化条件を検討頂く必要があります。

染色後に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HepG2細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

染色前に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HeLa細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。
　

Q 蛍光が確認できない場合の対処法は？

蛍光が検出されない場合、幾つか要因が考えられます。
下記に示した項目を確認し、状況によっては最適化条件をご検討ください。

①

励起・蛍光波長が色素の蛍光特性と合致していない。
製品HPに掲載の色素の蛍光スペクトルとお使いのフィルターを確認し、励起・蛍光波長が合致しているかご確認ください。

②	染色条件が最適ではない。
	[試薬濃度]
	–	working solutionの濃度を下記の範囲で検討する。　Lipi-Blue, Lipi-Green：0.1-0.5 μmol/l 　Lipi-Red：1-5 μmol/l 　Lipi-Deep Red：0.1 μmol/l
	※	上記条件でも蛍光が検出されない場合、更に高濃度で染色する。　Lipi-Blue, Lipi-Green：1-2 μmol/l 　Lipi-Red：10-20 μmol/l 　Lipi-Deep Red：0.5 μmol/l
	[インキュベーション時間]
	–	通常は30分ですが、試薬添加後に1-2時間インキュベートする。

③

固定化の条件が適していない。
細胞によっては染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。
その際は、「Q:固定化細胞への染色は可能ですか？」をご参照ください。

④

脂肪滴が小さくて確認が困難。
細胞によっては脂肪滴が小さく、確認が困難な場合があります。
その際は、高倍率の顕微鏡での確認、又はオレイン酸処理した細胞によるポジティブコントロールを評価されることをお勧めします。

取扱条件

規格
性状：	本品は、濃青色固体である。
純度(HPLC)：	90.0％以上

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Lipi-Green

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技術情報

脂肪滴とその機能

参考文献

よくある質問

取扱条件

関連製品

過酸化脂質検出蛍光試薬

脂肪滴測定キット

オートファジー（オートファゴソーム）の検出試薬

老化細胞検出キット

乳酸測定キット

Lipi-Red

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参考文献

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過酸化脂質検出蛍光試薬

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Lipi-Deep Red

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過酸化脂質検出蛍光試薬

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