日本同仁化学ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31

ICG 标记试剂盒-氨基

ICG Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存,防潮

运输条件：室温

特点：

● 标记的物质可以在大约2个小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 标记的物质可以用所附的保存溶液保存。

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选择规格：

3samples

现货

蛋白抗体标记检测方案

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

ICG标记实验例

荧光特性

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

产品概述

ICG（吲哚菁绿）是一种花青颜料，也用于肝功能和肝储备测试的色素负载测试中，并且在近红外区域具有荧光。激发波长在774nm附近，荧光波长在805nm附近，并且具有即使在体内使用也不容易被血红蛋白干扰的荧光特性。因此，期望将其应用于使用近红外荧光的体内荧光成像。 ICG标记试剂盒-NH₂是用于标记具有氨基基团的蛋白质（尤其是抗体）的试剂盒。套件随附的NH₂-Reactive以及已发布的荧光素标记套件–NH₂（代码：LK01），HiLyte Fluor^TM555标记套件–NH₂（代码：LK14），HiLite Fluor^TM 647标记套件–NH₂（代码：LK15）由于ICG在分子中具有活性酯，因此仅通过与具有氨基的分子混合即可形成稳定的共价键。当将ICG标记在蛋白质上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH₂反应性ICG的低分子量化合物（例如Tris）。对于ICG标记的IgG，荧光波长为774/805nm。

该试剂盒包含标记所需的试剂和用于储存准备好的ICG标记产品的溶液。

原理

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

如果样品中含有分子量>10,000的物质 (多肽、其它蛋白等)，有阻碍标记反应的可能性。在标记前需要先纯化，如果样品是抗体，可用 IgG Purification Kit (AP01，AP02)纯化，如果样品中有小的不溶物质，离心后取上清液来标记。

操作步骤：

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

a) 蛋白溶液量要≤100ul，如果抗体浓度<0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总蛋白量达到50-200ug。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，继续离心5min或提高转速。

c) NH₂-Reactive ICG在管子的底部，加10ul DMSO到管子的底部，用移液器反复吹打溶解。由于NH₂-Reactive ICG会被DMSO中的水分水解，在制备好NH₂-Reactive ICG溶液后马上进行第4步操作。

d) 如果蛋白总量达到200ug，请加入全部NH₂-Reactive ICG溶液。

e) 我们推荐用WS Buffer保存标记产物，但也可以根据下一步实验要求选择合适的缓冲液。

产品优势

1）标记的物质可以在大约2个小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）标记的物质可以用所附的保存溶液保存。

ICG标记实验例

图. 小鼠尾静脉注射ICG抗体的荧光成像图小鼠皮下肿瘤模型在注射了ICG抗体 (50ug) 48h后，有明显的迹象表明抗体在肿瘤中有选择性地聚集。

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

仪器：活体成像仪 (Clairvivo OPT，岛津制作所)

小鼠：BALB/c(nu/nu) 纯合子裸小鼠 (母，11周)

肿瘤细胞：HeLa细胞 (在右腋皮下移植后4周)

检测条件：Ex=785nm，Em=845/55nm

抗体：整合素α2抗体曝光时间：10s

荧光特性

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

常见问题Q&A

Q1: 标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

参考文献

1) M. Ogawa, C. A. S. Regino, J. Seidel, M. V. Green, W. Xi, M. Williams, N. Kosaka, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “Dual-Modality Molecular Imaging Using Antibodies Labeled with Activatable Fluorescence and a Radionuclide for Specific and Quantitative Targeted Cancer Detection”, Bioconjugate Chem., 2009, 20(11), 2177.

2) M. Ogawa, N. Kosaka, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “In vivo Molecular Imaging of Cancer with a Quenching Near-Infrared Fluorescent Probe Using Conjuates of Monoclonal Antibodies and Indocyanine Green”, Cancer Res., 2009, 69(4), 1268.

3) N. Kosaka, M. Ogawa, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “Clinical implications of near-infrared fluorescence imaging in cancer”, Future Oncology, 2009, 5(9), 1501.

4) 伊藤進, 六車直樹, 林重仁, 日下至弘, 多田津昌也, 多田津陽子, 岡本耕一, 井本佳孝, 稲山久美, 坂東輝美, 田岡聡子, 高川真由子, 矢野充保, 伊井邦雄, 長尾善光, 佐野茂樹, 芝村誠一, 島田典昭, 石田和彦, 中村一成, “赤外線蛍光内視鏡の原理と臨床応用”, Biomedical THERMOLOGY, 2003, 23(2), 77.

5) S. Ito, N.Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, T. Bando, K. Inayama, M. Sogabe, T. Okahisa, S. Okamura, H. Shibata, T. Irimura, K. Takesako and S. Shibamura, “Development of Agents for Reinforcement of Fluorescence on Near-infrared Ray Excitation for Immunohistological Staining”, Bioorg. Med. Chem., 1998, 6, 613.

6) S. Ito, N. Muguruma, Y. Kakehashi, S. Hayashi, S. Okamura, H. Shibata, T. Okahisa, M. Kanamori, S. Shibamura, K. Takesako, M. Nozawa, K. Ishida and M. Shiga, “Development of Fluorescence-Emitting Antibody Labeling Substance by Near-Infrared Ray Excitation”, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1995, 5, 2689.

7) K. Inayama, S. Ito, N. Muguruma, Y. Kusaka, T. Bando, Y. Tadatsu, M. Tadatsu, K. Ii, S. Shibamura and K. Takesako, “Basic Study of an Agent for Reinforcement of Near-infrared Fluorescence on Tumor Tissue”, Digestive and Liver Disease, 2003, 35, 88.

8) S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, T. Bando, Y. Kusaka, M. Yano, S. Ichikawa, A. Hiasa, T. Omoya, H. Honda, I. Shimizu, K. Ii, K. Nakamura, K. Takesako, Y. Goto and S. Shibamura, “Visualization of Human Gastric Cancer with a Novel Infrared Fluorescent Labeling Marker of Anti-carcinoembryonic Antigen Antibody in vitro”, Dig. Endosc., 2000, 12, 33.

9) S. Taoka, S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, Y. Kusaka, K. Ii, K. Nakamura, K. Imaizumi, K. Takesako and S. Shibamura, “Reflected Illumination-type Imaging System for the Development of Infrared Fluorescence Endoscopy”, Dig. Endosc.,1999, 11(4), 321.

10) S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, A. Tsutsui, T. Fukuda, T. Okahisa, Y. Ohkita, H. Matsunaga, I. Shimizu, K. Nakamura, K. Imaizumi, K. Takesako and S. Shibamura,”Development of an Imaging System Using Fluorescent Labeling Substances Excited by Infrared Rays”, Dig. Endosc., 1997, 9, 278.

11) S. Ito, N. Muguruma, Y. Kusaka, M. Tadatsu, K. Inayama, Y. Musashi, M. Yano, T. Bando, H. Honda, I. Shimizu, K. Ii, K. Takesako, H. Takeuchi and S. Shibamura, “Detection of Human Ganstric Cancer of Resected Specimens Using a Novel Infrared Fluorescent Anti-Human Carcinoembryonic Antigen Antibody with an Infrared Fluorescence Endoscope in Vitro”, Endoscopy, 2001, 33(10), 849.

12) N. Muguruma, S. Ito, T. Bando, S. Taoka, Y. Kusaka, S. Hayashi, S. Ichikawa, Y. Matsunaga, Y. Tada, S. Okamura, K. Ii, K. Imaizumi, K. Nakamura, K. Takesako and S. Shibamura, “Labeled Carcinoembryonic Antigen Antibodies Excitable by Infrared Rays: a Novel Diagnostic Method for Micro Cancers in the Digestive Tract”, Internal Medicine, 1999, 38(7), 537.

13) T. Bando, N. Muguruma, S. Ito, Y. Musashi, K. Inayama, Y. Kusaka, M. Tadatsu, K. Ii, T. Irimura, S. Shibamura and K. Takesako, “Basic Study on a Labeled anti-mucin Antibody Detectable by Infrared-fluorescence Endoscopy”, J. Gastroenterol., 2002, 37, 260.

14) N. Muguruma, S. Ito, S. Hayashi, S. Taoka, H. Kakehashi, K. Ii, S. Shibamura and K. Takesako, “Antibodies Labeled with Fluorescence-agent Excitable by Infrared Rays”, J. Gastroenterol., 1998, 33, 467.

15) 伊藤進, 六車直樹,“不可視情報の画像化－新しい内視鏡診断学の展望 (5)赤外蛍光を用いた微小癌診断”,　臨牀消化器内科, 1999, 14(8), 1205.

16) W. Aung, A. Tsuji, H. Sudo, A. Sugyo, T. Furukawa, Y. Ukai, Y. Kurosawa and T. Saga, “Immunotargeting of Integrin α6β4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model”, Molecular Imaging, 2016, 15, 1.

日本同仁化学R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26

藻红蛋白标记试剂盒-巯基

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 也可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

下载说明书

宣传资料

SDS下载

选择规格：

3samples

现货

蛋白抗体标记检测方案

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

荧光特性

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

试剂盒内含

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有橙色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，SH-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。

*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)

原理

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

荧光特性

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。

（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。

（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive R-PE并吹打其溶解。

（8）将所得的SH-reactive R-PE溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。

（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。

（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。^d）

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）也可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

*还原剂经过优化，可减少IgG的制备。当使用具有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，标记分子的活性可能会丢失。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

日本同仁化学R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23

藻红蛋白标记试剂盒-氨基

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

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R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基

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产品概述

原理

荧光特性

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

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试剂盒内含

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH₂能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，NH₂-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了包括标记产物的储存液等用于R-PE标记的所需的全部试剂。

*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)

原理

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基

荧光特性

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作概述

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）完成离心后，将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive R-PE中并用移液枪吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive R-PE的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

产品优势

1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) K.R. McCarthy, A. Watanabe, M. Kuraoka, K.T. Do, C.E. McGee, G.D. Sempowski, T.B. Kepler, A.G. Schmidt, G. Kelsoe and S.C. Harrison, “Memory B Cells that Cross-React with Group 1 and Group 2 Influenza A Viruses Are Abundant in Adult Human Repertoires”, Immunity., 2018, 48, (1), 174.

2) K.Y Su, A. Watanabe, C.H. Yeh, G. Kelsoe, M. Kuraoka, “Efficient Culture of Human Naive and Memory B Cells for Use as APCs”, J. Immunol.., 2016, 197, (10), 4163.

3) T. Tsujikawa, T. Yaguchi, G. Ohmura, S. Ohta, A. Kobayashi, N. Kawamura, T. Fujita, H. Nakano, T. Shimada, T. Takahashi, R. Nakao, A. Yanagisawa, Y. Hisa, Y. Kawakami, “Autocrine and paracrine loops between cancer cells and macrophages promote lymph node metastasis via CCR4/CCL22 in head and neck squamous cell carcinoma”, Int. J. Cancer., 2013, 132, (12), 2755.

4) Y. Inaguma, Y. Akahori, Y. Murayama, K. Shiraishi, S. Tsuzuki-Iba, A. Endoh, J. Tsujikawa, A. Demachi-Okamura, K. Hiramatsu, H. Saji, Y. Yamamoto, N. Yamamoto, Y. Nishimura, T. Takahashi, K. Kuzushima, N. Emi, Y. Akatsuka, “Construction and molecular characterization of a T-cell receptor-like antibody and CAR-T cells specific for minor histocompatibility antigen HA-1H”, Gene Ther.., 2014, 21, (6), 575.

5) A. Watanabe, K. R. McCarthy, M. Kuraoka, A. G. Schmidt, Y. Adachi, T. Onodera, K. Tonouchi, T. M.Caradonna, G. Bajic, S. Song, C. E. McGee, G. D. Sempowski, F. Feng, P. Urick, T. B. Kepler, Y. Takahashi, S. C. Harrison, and G. Kelsoe, ‘Antibodies to a Conserved Influenza Head Interface Epitope Protect by an IgG Subtype-Dependent Mechanism.’, Cell.., 2019, 177, (5), 1124.

关联产品

日本同仁化学Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24

藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

Allophycocyanin Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50-200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 可以使用随附的保存溶液保存APC标签。

下载说明书

宣传资料

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选择规格：

3samples

期货

蛋白抗体标记检测方案

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

荧光特性

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

试剂盒内含

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白(APC)是一种藻胆蛋白，它在660nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。Allophycocyanin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被APC标记的IgG，SH-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。

*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)

原理

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

荧光特性

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。

（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。

（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive APC并吹打其溶解。

（8）将所得的SH-reactive APC溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。

（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。

（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。^d）

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50-200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）可以使用随附的保存溶液保存APC标签。

*还原剂针对减少IgG的制备而优化。当使用带有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，可能会失去待标记分子的活性。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

日本同仁化学Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 可以使用附带的保存溶液保存APC标签。

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选择规格：

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蛋白抗体标记检测方案

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

试剂盒内含

产品概述

原理

荧光特性

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白（APC）是一种藻胆蛋白，它在660 nm附近有红色荧光。Allophycocyanin Labeling Kit-NH₂能够简便快速地制备被APC标记的IgG，NH₂-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记产物的Storage buffer等用于APC标记的所需的全部试剂。

*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)

原理

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

荧光特性

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000 g离心10分钟后，加入100μl WS buffer再离心一次。^b）

（3）离心完成后，将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive APC中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive APC的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用枪吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

d）通常，APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）可以使用附带的保存溶液保存APC标签。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) H. Shinohara, T. Yasuda, Y. Aiba, H. Sanjo, M. Hamadate, H. Watarai, H. Sakurai and T. Kurosaki, “PKCβ Regulates BCR-mediated IKK Activatioin by Facilitating the Interaction between TAK1 and CARMA1”, J. Exp. Med., 2005, 202(10), 1423.

2) E. Grace Suto, Y. Mabuchi, N. Suzuki, K. Suzuki, Y. Ogata, M. Taguchi, T. Muneta, I. Sekiya and C. Akazawa, “Prospectively isolated mesenchymal stem/stromal cells are enriched in the CD73+ population and exhibit efficacy after transplantation”, Sci. Rep.., 2017,(7), 4838.

3) H. Fujii, Y. Ikeuchi, Y. Kurata, N. Ikeda, U. Bahrudin, P. Li, Y. Nakayama, R. Endo, A. Hasegawa, K. Morikawa, J. Miake, A. Yoshida, K. Hidaka, T. Morisaki, H. Ninomiya, Y. Shirayoshi, K. Yamamoto, I. Hisatome, “Electrophysiological properties of prion-positive cardiac progenitors derived from murine embryonic stem cells”, Circ. J.., 2012,76, (12), 2875.

日本同仁化学Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13

碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 只需与SH反应性ALP混合即可形成ALP标签。

● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

下载说明书

宣传资料

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选择规格：

3samples

期货

蛋白抗体标记检测方案

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

试剂盒内含

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive ALP能够与含有SH的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive ALP可以和靶分子形成共价键，还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时，SH-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。

* ALP：Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)

原理

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3. 标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。

5. 如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

6. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶SH-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养30分钟。

（6）将100μl Solution B加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液，加入200μl Solution B，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。

（8）将SH-reactive ALP溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（9）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养1小时。

（10）加入150μl Storage buffee并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管，将其储存在0-5℃。^d）

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上被标记上2到4个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常碱性磷酸酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的巯基化合物溶液，^a）并将该溶液加入到SH-reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK13 碱性磷酸酶标记试剂盒-巯基

a）如果巯基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。

d）建议用Storage Buffer来回收标记产物，也可以选择其它合适的缓冲液。

产品优势

1）可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）只需与SH反应性ALP混合即可形成ALP标签。

5）还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

7）带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗？

A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明，回收率通常都超过80%。

Q2:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品来标记。如果分子量<5000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083

Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以，只要它的分子量<5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。

Q4: LK13所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是，在步骤8，使用SH-reactive ALP溶液时，用量缩小为原来的1/5，还是能够标记10 μg的IgG。

Q5: 每个IgG能够标记多少碱性磷酸酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-2个碱性磷酸酶分子。

Q6: 标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管？

A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右，则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合，再把混合液加入到SH-reactive ALP管中即可。

Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。

Q8:我的样品中含有小的不溶物，我该怎么办？

A:低速离心后用上清液来标记。

Q9:标记反应结束后，未标记的SH-reactive ALP是否仍然含有活性马来酰亚胺？

A:不含有。几乎100%的SH-reactive ALP都被用于了IgG或者小分子的标记。

Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

日本同仁化学Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12 碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 只需与NH2反应性ALP混合即可形成ALP标签。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

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选择规格：

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蛋白抗体标记检测方案

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12 碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12 碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的NH₂-reactive ALP能够与含有NH₂的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括储存用缓冲液。NH₂-reactive ALP不需任何活化就可以和靶分子结合。因此，当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时，NH₂-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。

*ALP：Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)

备注：经过同仁化学研究所的长期稳定性考验，代码为LK12的产品在0-5℃未开封的条件下由原来可以保存半年延长至一年。

原理

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12 碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。

5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH₂-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive ALP的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）加入190μl Storage buffer 并吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12 碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基

a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后共轭物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1到3个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常，碱性磷酸酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物溶液，^a）并将该溶液加入到NH₂ -Reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Washing Buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Washing Buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将此溶液转移至微型管中，并储存于0-5℃下 ^d）。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK12 碱性磷酸酶标记试剂盒-氨基

a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c）标记后产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。

d）建议用Storage Buffer来回收标记产物，也可以选择其它合适的缓冲液。

产品优势

1）可以在大约3个小时内制备ALP标记的产品。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）只需与NH₂反应性ALP混合即可形成ALP标签。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）带有ALP标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？

A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。

Q2:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性氨基结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK12来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083

Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以，只要它的分子量<5,000且具有活性氨基。可以参照标记小分子的操作说明。

Q4:LK12所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。

Q5: 每个IgG能够标记多少碱性磷酸酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-2个碱性磷酸酶分子。

Q6:标记反应结束后，未反应的NH2-reactive ALP是否还具有活性？

A:没有了。NHS在反应过程中会完全被水解。

Q7:标记反应过程中，NH2-reactive ALP是否会形成一些低聚物？

A:不会。由于NH2-reactive ALP中的所有活性氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q8:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q9:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

参考文献

1) B. Pandey, A.V. Demchenko, K.J. Stine, “Nanoporous gold as a solid support for protein immobilization and development of an electrochemical immunoassay for prostate specific antigen and carcinoembryonic antigen”, Microchim Acta., 2012, 179, (1-2), 71.

2) M. Watanabe, I. Takemasa, N. Kaneko, Y. Yokoyama, E. Matsuo, S. Iwasa, M. Mori, N. Matsuura, M. Monden, and O. Nishimura, “Clinical significance of circulating galectins as colorectal cancer markers”, Oncol. Rep.., 2011, 25, (5), 1217.

3) Y. Matsumae, Y. Takahashi, H. Shiku and T. Matsue, “Quantitative Real‐Time Monitoring of Antibody‐Induced Internalization of Epidermal Growth Factor Receptor on Single Living Mammalian Cells Using Scanning Electrochemical Microscopy”, ChemElectroChem., 2018, 5, (20), 3096.

日本同仁化学Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51

辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● POD标签可以用随附的保存溶液保存。

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Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH₂-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH₂的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH₂-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH₂-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH₂-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH₂-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。

原理

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

5.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH₂-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。

（7）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积达到或超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常，辣根过氧化物酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，^a）并将该溶液加入到NH₂-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g 离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g 离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

产品优势

1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。

常见问题Q&A

Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？

A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。

Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？

A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？

A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。

Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性伯胺或仲胺结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK11-10来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。

Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。

Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。

参考文献

1) 広田次郎, 清水眞也, “キットを用いたモノクローナル抗体への迅速・簡便なペルオキシダーゼ標識法”, 動物衛生研究所研究報告, 2005, 111, 37.

2) A. Miyagawa-Yamaguchi, N. Kotani, and K. Honke, “Expressed Glycosylphosphatidylinositol-Anchored Horseradish Peroxidase Identifies Co-Clustering Molecules in Individual Lipid Raft Domains”, PLoS ONE., 2014, 9, (3), e93054.

3) J. Zhang, D. Klufas, K. Manalo, K. Adjepong, J.O. Davidson, G. Wassink, L. Bennet, A.J. Gunn, E.G. Stopa, K. Liu, M. Nishibori, and B.S. Stonestreet, “HMGB1 Translocation After Ischemia in the Ovine Fetal Brain”, J. Neuropathol. Exp. Neurol.., 2016, 75, (6), 527.

4) M. Okumura, T. Ozawa, H. Hamana, Y. Norimatsu, R. Tsuda, E. Kobayashi, K. Shinoda, H. Taki, K. Tobe, J. Imura, E. Sugiyama, H. Kishi, and A. Muraguchi, “Autoantibodies reactive to PEP08 are clinically related with morbidity and severity of interstitial lung disease in connective tissue diseases”, Eur. J. Immunol.., 2018, 48, (10), 1717.

5) R. Sugisawa, G. Komatsu, E. Hiramoto, N. Takeda, K. Yamamura, S. Arai, and T. Miyazaki, “Independent modes of disease repair by AIM protein distinguished in AIM-felinized mice”, Sci. Rep.., 2018, 8, 13157.

6) S. Takatsuka, T. Inukai, S. Kawakubo, T. Umeyama, M. Abe, K. Ueno, Y. Hoshino, Y. Kinjo, Y. Miyazaki, and S. Yamagoe, “Identification of a Novel Variant Form of Aspergillus fumigatus CalC and Generation of Anti-CalC Monoclonal Antibodies”, Med Mycol J., 2019, 60, (1), 11.

7) T. Sasaki, K. Liu,T. Agari, T. Yasuhara, J. Morimoto, M. Okazaki, H. Takeuchi, A. Toyoshima, S. Sasada, A. Shinko, A. Kondo, M. Kameda, I. Miyazaki, M. Asanuma, CV. Borlongan, M. Nishibori, and I. Date, “Anti-high mobility group box 1 antibody exerts neuroprotection in a rat model of Parkinson’s disease”, Exp. Neurol.., 2016, 275, 220.

8) T. Tsumuraya, I. Fujii, M. Inoue, A. Tatami, K. Miyazaki, and M. Hirama, “Production of monoclonal antibodies for sandwich immunoassay detection of ciguatoxin 51-hydroxyCTX3C”, Toxicon., 2006, 48, (3), 287.

9) W. Jin, K. Yamada, M. Ikami, N. Kaji, M. Tokeshi, Y. Atsumi, M. Mizutani, A. Murai, A. Okamoto, T. Namikaw, Y. Baba, and M. Ohta, “Application of IgY to sandwich enzyme-linked immunosorbent assays, lateral flow devices, and immunopillar chips for detecting staphylococcal enterotoxins in milk and dairy products”, J. Microbiol. Methods., 2013, 92, (3), 323.

10) W.W.P.N. Weerakoon, M. Sakase, N. Kawate, M.A. Hannan, N. Kohama, and H. Tamada, “Plasma IGF-I, INSL3, testosterone, inhibin concentrations and scrotal circumferences surrounding puberty in Japanese Black beef bulls with normal and abnormal semen”, Theriogenology., 2018, 114, (1), 54.

11) Y. Watanabe, Y. Kazuki, K. Kazuki, M. Ebiki, M. Nakanishi, K. Nakamura, M. Yoshida Yamakawa,H. Hosokawa, T. Ohbayashi, M. Oshimura, and K. Nakashima, “Use of a Human Artificial Chromosome for Delivering Trophic Factors in a Rodent Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis”, Mol Ther Nucleic Acids., 2015, 4, (10), e253.

12) Y.S. Kim, D.H. Jung, I.S. Lee, B.J. Pyun and J.S. Kim, “Osteomeles schwerinae extracts inhibits the binding to receptors of advanced glycation end products and TGF-β1 expression in mesangial cells under diabetic conditions”, Phytomedicine., 2016, 23, (4), 388.

13) S .Kon, M. Honda, K. Ishikawa, M. Maeda and T. Segawa, “Antibodies against nephronectin ameliorate anti-type II collagen-induced arthritis in mice.’, FEBS Open Bio., 2019,10.1002/2211-5463.12758.

日本同仁化学Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基- DOJINDO

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Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09

过氧化物酶标记试剂盒-巯基

Peroxidase Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。

● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● POD标签可与随附的存储溶液一起存储。

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选择规格：

3samples

现货

蛋白抗体标记检测方案

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析（EIA）所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive peroxidase能够与含有巯基的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive peroxidase可以和靶分子形成共价键，还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，SH-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。

原理

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的巯基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。

5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶SH -reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养30分钟。

（6）将100μl Solution B加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液，加入200μl Solution B，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。

（8）将SH-reactive peroxidase溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（9）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养1小时。

（10）将100μl Solution A加入到试管中，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（11）加入200μl Storage buffer并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管，并储存于0-5℃。

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上会被标记上1到2个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常辣根过氧化物酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。另外，还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1 mM的巯基化合物溶液，^a）并将该溶液加入到SH-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10-15次来回收抗体。^c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

a）如果巯基化合物无法在水溶液中溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1到2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

产品优势

1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。

5）还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

7）POD标签可与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗？

A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明，回收率通常都超过80%。

Q2: 能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量.>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用 LK09-10来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083

Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以，只要它的分子量小于5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。

Q4:LK09所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是，在步骤8，使用SH-reactive peroxidase溶液时，用量缩小为原来的1/5，也能够标记10 μg的IgG。

Q5: 每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-2个辣根过氧化物酶分子。

Q6:标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管？

A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右，则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合，再把混合液加入到SH-reactive peroxidase管中即可。

Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q8:我的样品中含有小的不溶物，我该怎么办？

A:低速离心后用上清液来标记。

Q9:标记反应结束后，未标记的SH-reactive peroxidase是否仍然含有活性马来酰亚胺？

A:不含有。几乎100%的SH-reactive peroxidase都被用于了IgG或者小分子的标记。

Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

参考文献

1) 広田次郎, 清水眞也, “キットを用いたモノクローナル抗体への迅速・簡便なペルオキシダーゼ標識法”, 動物衛生研究所研究報告, 2005, 111, 37.

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3) N. Esaki, Y. Ohkawa, N. Hashimoto, Y. Tsuda, Y. Ohmi, R. H. Bhuiyan, N. Kotani, K. Honke, A. Enomoto, M. Takahashi, K. Furukawa, and K. Furukawa, “ASC amino acid transporter 2, defined by enzyme-mediated activation of radical sources, enhances malignancy of GD2-positive small-cell lung cancer.”, Cancer Sci.., 2018, 109, (1), 141.

4) G.W.Zhanga, S.J.Lai, Y.Yoshimura, and N.Isobe, “Messenger RNA expression and immunolocalization of psoriasin in the goat mammary gland and its milk concentration after an intramammary infusion of lipopolysaccharide”, Vet. J.., 2014, 202, (1), 89.

5) G-W. Zhang, S-J. Lai, Y. Yoshimura, and N. Isobe, “Expression of cathelicidins mRNA in the goat mammary gland and effect of the intramammary infusion of lipopolysaccharide on milk cathelicidin-2 concentration”, Vet. Microbiol.., 2014, 170, (1-2), 125.

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7) K. Iizumi, H. Kawasaki, A. Shigenaga, M. Tominaga, A. Otsu, A. Kamo, Y. Kamata, K. Takamori, and F. Yamakura, “Tryptophan nitration of immunoglobulin light chain as a new possible biomarker for atopic dermatitis”, J Clin Biochem Nutr., 2018, 63, (3), 197.

8) K. Morioka, K. Fukai, K. Yoshida, R. Yamazoe, H. Onozato, S. Ohashi, T. Tsuda, and K. Sakamoto, “Foot-and-Mouth Disease Virus Antigen Detection Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Using Multiserotype-Reactive Monoclonal Antibodies”, J. Clin. Microbiol.., 2009, 47, (11), 3663.

9) M. Watanabe, I. Takemasa, N. Kaneko, Y. Yokoyama, E. Matsuo, S. Iwasa, M. Mori, N. Matsuura, M. Monden, and O. Nishimura, “Clinical significance of circulating galectins as colorectal cancer markers”, Oncol. Rep.., 2011, 25, (5), 1217.

10) M. Yasunaga, S. Saijou, S. Hanaoka, T. Anzai, R. Tsumura, and Y. Matsumura, “Significant antitumor effect of an antibody against TMEM180, a new colorectal cancer‐specific molecule”, Cancer Sci.., 2019, 110, (2), 761.

11) N. Esaki, Y. Ohkawa, N. Hashimoto, Y. Tsuda, Y. Ohmi, R. H. Bhuiyan, N. Kotani, K. Honke, A. Enomoto, M. Takahashi, K. Furukawa, and K. Furukawa, “ASC amino acid transporter 2, defined by enzyme‐mediated activation of radical sources, enhances malignancy of GD2‐positive small‐cell lung cancer”, Cancer Sci.., 2018, 109, (1), 141.

12) N. Hashimoto, K. Hamamura, N. Kotani, K. Furukawa, K. Kaneko, K. Honke, and K. Furukawa, “Proteomic analysis of ganglioside‐associated membrane molecules: Substantial basis for molecular clustering”, Proteomics., 2012, 12, (21), 3154.

13) N. Kotani, Y. Ida, T. Nakano, I. Sato, R. Kuwahara, A. Yamaguchi, M. Tomita, K. Honke, and T. Murakoshi, “Tumor-dependent secretion of close homolog of L1 results in elevation of its circulating level in mouse model for human lung tumor”, Biochem. Biophys. Res. Commun.., 2018, 501, (4), 982.

14) R. Yamashita, N. Kotani, Y. Ishiura, S. Higashiyama, and K. Honke, “Spatiotemporally-regulated interaction between β1 integrin and ErbB4 that is involved in fibronectin-dependent cell migration”, J. Biol. Chem.., 2011, 149, (3), 347.

15) T. Noro, E. Oishi, T. Kaneshige, K. Yaguchi, K. Amimoto, and M. Shimizu, “Identification and characterization of haemagglutinin epitopes of Avibacterium paragallinarum serovar C”, Vet. Microbiol.., 2008, 131, (3-4), 406.

16) K. Okada, H. Itoh and M. Ikemotob, “Circulating S100A8/A9 is potentially a biomarker that could reflect the severity of experimental colitis in rats’, Heliyon, 2020, 6, (2), e03470.

日本同仁化学Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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过氧化物酶标记试剂盒-氨基

Peroxidase Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● POD标签可以用随附的保存溶液保存。

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原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

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产品概述

原理

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操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。

（7）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）
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b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，^a）并将该溶液加入到NH₂-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

产品优势

1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。

常见问题Q&A

Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？

A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。

Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？

A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？

A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。

Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。

Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。

Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。

参考文献

1) 広田次郎, 清水眞也, “キットを用いたモノクローナル抗体への迅速・簡便なペルオキシダーゼ標識法”, 動物衛生研究所研究報告, 2005, 111, 37.

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Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01

荧光素标记试剂盒-氨基

Fluorescein Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

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产品概述

原理

产品优势

荧光特性

操作步骤

标记率计算

常见问题Q&A

参考文献

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NO.1. Biotin Labeling Kit – NH2 生物素抗体标记试剂盒-氨基

NO.2. Peroxidase Labeling Kit – NH2 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

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试剂盒内含

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

产品概述

该试剂盒主要用于制备用荧光素标记的蛋白质，如免疫转染中的IgG和胞内蛋白示踪。氨基反应型荧光素是试剂盒的成分之一，它含有琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，包括Storage buffer。每一管荧光素最多能够标记200μg的IgG，每个IgG分子可与4-6个荧光素分子共价结合。该试剂盒还包含一个缓冲液交换系统，因此含有氨基缓冲液的样品也能用此试剂盒来标记。虽然用膜来过滤有时会导致IgG聚集，但是试剂盒中的缓冲液交换系统能够防止标记过程中聚集现象的发生。用该试剂盒标记的抗体在4℃下能够保存至少2个月。被荧光素标记后的IgG的激发和发射波长分别为495nm和520nm。

原理

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

产品优势

1）荧光素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）荧光素标记的物体可以与所附的存储溶液一起存储。

荧光特性

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Fluorescein -IgG标记物始终存在于Filtration tube的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒中）来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH₂-reactive fluorescein放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

a) 样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于1mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。
b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5 min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。
c) NH2-Reactive Fluorescein Dye在管子的底部，向管底加入10μl DMSO，吹打数次使其溶解，如果没有DMSO的话，可以用乙醇来替代。
d) 如果IgG的量为200μg，在步骤4时加入所有的NH2-Reactive Fluorescein Dye溶液。
e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

标记率计算

计算标记率：

1分子蛋白质上结合的荧光素的数量 (标记率) 的计算方法：将标记的蛋白质溶液用5倍的中性缓冲液稀释，分别测定在280nm和各个荧光染料的最大吸收波长处的吸光度，采用以下公式计算。

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

* 如果是IgG，摩尔吸光系数ε=216,000。

* 荧光染料在WS缓冲液中的摩尔吸光系数参见下表：

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK01 荧光素标记试剂盒-氨基

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000。

Q2:标记蛋白之前是否必须使用过滤管？

A:如果蛋白溶液中不含有带有活性氨基的小分子且蛋白浓度在10mg/ml或者70μM左右时，可以不使用过滤管来过滤，只需要将10μl 样品溶液和90μl Reaction Buffer以及8μl NH2-reactive Fluorescein（由步骤3所得）混合并按照操作说明上的方法做从步骤4开始的后续试验。

Q3:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q4:用该试剂盒所能标记的IgG的最小量是多少？

A:IgG的最小量为10μg。IgG的量在10μg-100μg之间时，标记比率是相同的。

Q5:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) M. Hiyoshi, S. Suzu, Y. Yoshidomi, R. Hassan, H. Harada, N. Sakashita, H. Akari, K. Motoyoshi and S. Okada, “Interaction between Hck and HIV-1 Nef Negatively Regulates Cell Surface Expression of M-CSF Receptor”, Blood, 2008, 111(1), 243.

2) W. Aung, A. Tsuji, H. Sudo, A. Sugyo, T. Furukawa, Y. Ukai, Y. Kurosawa and T. Saga, “Immunotargeting of Integrin α6β4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model”, Molecular Imaging, 2016, 15, 1.

3) A. Shinya, K. Yamamoto, M. Kurata, S. Abe-Suzuki, R. Horii, F. Akiyama and M. Kitagawa, “Targeting MCM2 function as a novel strategy for the treatment of highly malignant breast tumors”, Oncotarget., 2015, 6, (33), 34892.

4) K.M. Nishida, T.N. Okada, T. Kawamura, T. Mituyama, Y. Kawamura, S. Inagaki, H. Huang, D. Chen, T. Kodama, H. Siomi and M.C. Siomi, “Functional involvement of Tudor and dPRMT5 in the piRNA processing pathway in Drosophila germlines”, EMBO J.., 2009, 28, (24), 3820.

5) P.G. Sreekumar, R. Kannan, M. Kitamura, C. Spee, E. Barron, S.J. Ryan and D.R. Hinton, “αB crystallin is apically secreted within exosomes by polarized human retinal pigment epithelium and provides neuroprotection to adjacent cells”, PLoS ONE., 2010, 5, (10), e12578.

6) R. Asano, T. Kumagai, K. Nagai, S. Taki, I. Shimomura, K. Arai, H. Ogata, M. Okada, F. Hayasaka, H. Sanada, T. Nakanishi, T. Karvonen, H. Hayashi, Y. Katayose, M. Unno, T. Kudo, M. Umetsu and I. Kumagai, “Domain order of a bispecific diabody dramatically enhances its antitumor activity beyond structural format conversion: the case of the hEx3 diabody”, Protein Eng. Des. Sel.., 2013, 26, (5), 359.

7) R. Asano, I. Shimomura, S. Konno, A. Ito, Y. Masakari, R. Orimo, S. Taki, K. Arai, H. Ogata, M. Okada, S. Furumoto, M. Onitsuka, T. Omasa, H. Hayashi, Y. Katayose, M. Unno, T. Kudo, M. Umetsu and I. Kumagai, “Rearranging the domain order of a diabody-based IgG-like bispecific antibody enhances its antitumor activity and improves its degradation resistance and pharmacokinetics”, MAbs., 2014, 6, (5), 1243.

8) R. Asano, K. Ikoma, I. Shimomura, S. Taki, T. Nakanishi, M. Umetsu and I. Kumagai, “Cytotoxic enhancement of a bispecific diabody by format conversion to tandem single-chain variable fragment (taFv): the case of the hEx3 diabody”, J. Biol. Chem.., 2011, 286, (3), 1812.

9) T. Toyotome, M. Yamaguchi, A. Iwasaki, A. Watanabe, H. Taguchi, L. Qin, H. Watanabe and K. Kamei, “Fetuin A, a serum component, promotes growth and biofilm formation by Aspergillus fumigatus”, Int. J. Med. Microbiol.., 2012, 302, (2), 108.

10) W. Ma, V. Schubert, M. M. Martis, G. Hause, Z. Liu, Y. Shen, U. Conrad, W. Shi, U. Scholz, S. Taudien, Z. Cheng and A. Houben, “The distribution of α-kleisin during meiosis in the holocentromeric plant Luzula elegans”, Chromosome Res.., 2016, 24, (3), 393.

11) Y. Yokoi, K. Nakamura, T. Yoneda, M. Kikuchi, R. Sugimoto, Y. Shimizu and T. Ayabe, “Paneth cell granule dynamics on secretory responses to bacterial stimuli in enteroids”, Sci. Rep.., 2019, 9, 2710.

12) Y.J. Lee, S.R. Han, N.Y. Kim, S.H. Lee, J.S. Jeong and S.W. Lee, “An RNA aptamer that binds carcinoembryonic antigen inhibits hepatic metastasis of colon cancer cells in mice”, Gastroenterology., 2012, 143, (1), 155.

13) C. F.O.Hoya, K. Kushiro, Y. Yamaoka, A. Ryo and M. Takai, ‘Rapid multiplex microfiber-based immunoassay for anti-MERS-CoV antibody detection’, Sens Biosensing Res., 2019,10.1016/j.sbsr.2019.100304.

14) H. Takeuchi, N Sasaki, S. Yamaga, M. Kuboniwa, M. Matsusaki and A. Amano, “Porphyromonas gingivalis induces penetration of lipopolysaccharide and peptidoglycan through the gingival epithelium via degradation of junctional adhesion molecule 1”, PLoS Pathog., 2019, 15, (11), e1008124.

15) Y. Yanase, Y. Matsuo, T. Kawaguchi, K. Ishii, A. Tanaka , K. Iwamoto , S. Takahagi and M.Hide, “Activation of Human Peripheral Basophils in Response to High IgE Antibody Concentrations without Antigens”., Int J Mol Med Sci, 2019, 20, (1), 45.

16) M. Yashiro, M. Ohya, T. Mima, Y. Nakashima, K. Kawakami, T. Sonou, K. Tatsuta, Y. Yamano, S. Negi and T. Shigematsu, “Excessive ADAM17 activation occurs in uremic patients and may contribute to their immunocompromised status.”, Immun Inflamm Dis., 2020, 10.1002/iid3.298.

17) H Fujishiro, H Yamamoto, N Otera, N Oka, M Jinno and S. Himeno, “In vitro Evaluation of The Effects of Cadmium on Endocytic Uptakes of Proteins into Cultured Proximal Tubule Epithelial Cells.”, Toxics, 2020, 8,10.3390/toxics8020024

18) Y. Liu, Y. Liu, X. Zheng, L. Zhao and X. Zhang, “Recapitulating and Deciphering Tumor Microenvironment by Using 3D Printed Plastic Brick–Like Microfluidic Cell Patterning”, Adv Healthc Mater, 2020, 9, (6), 1901713.

日本同仁化学Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01

生物素标记抗体试剂

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)

商品信息

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运输条件：室温

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蛋白质抗体标记检测方案

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

产品概述

水溶性活性酯型生物素化试剂：使用生物素（AC₅）₂Sulfo-OSu用于生物素标记蛋白质游离氨基的试剂盒。它带有用于标记的LVDS3缓冲粉，用于凝胶过滤的柱和用于柱洗脱的PBS片剂，可以纯化标记的蛋白。由于是单次注射型（10毫克x4瓶），因此可以标记4种不同类型的蛋白质。可以通过改变添加的生物素-（AC₅）₂Sulfo-OSu的量来控制标记率。

*标记蛋白的量为1-5 mg。

原理

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

操作步骤

使用注意事项:

1. 本试剂盒请在0-5 ℃储存。

2. Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液需要现配现用 (由于Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu易水解，尽量避免在水溶液的状态保存)。

3. 标记好的蛋白质请在0-5 ℃保存 (加入0.1%的叠氮钠等防腐剂)。

使用步骤:

1. 配制溶液

1) NaHCO₃缓冲液

在含有NaHCO₃粉末的容器中加入10ml超纯水溶解。

2) PBS缓冲液

在100ml容量瓶中加入1片PBS，先用少量超纯水溶解后，再用超纯水补充至100ml，制成10mmol/l的PBS缓冲液。

3) 蛋白质溶液

在样品管中精确称量1.0-5.0mg蛋白质并记录称量值后，用移液器加入500μl操作步骤1)中的NaHCO₃缓冲液。盖上盖子后，用漩涡振荡器等搅拌溶解蛋白质。

4) Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液

在1支含有Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu的管子中加入适量纯水溶解。为了控制标记率，根据不同的标记对象，请参考表1调整Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液的浓度及加入量。

＊由于Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu易水解，溶解后请尽快标记。

2. 生物素标记操作方法

1) 请参考表1在配制好的蛋白质溶液中加入合适浓度和用量的Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液。

2) 盖紧盖子充分混合后，在25 ℃水浴恒温摇床中培养2h。

表1 Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu标记各种蛋白质的标记率

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

以上数据为本公司实际检测的结果，如实验条件变动，

结果有可能改变。标记率是根据HABA法测得。

a) 1mol蛋白质：生物素的摩尔数

b) 1mol蛋白质上所结合的生物素的摩尔数

3. 蛋白质标记后的凝胶过滤纯化

1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。

＊经过层析，生物素标记蛋白质的最终浓度为标记时的1/2。

按照下列公式计算生物素标记蛋白质的最终浓度：

A (mol/l) = (X/MW_protein) × (1,000/Y) × 0.5

X：蛋白质的重量

MW_protein：蛋白质的分子量

Y：溶解蛋白质的NaHCO₃缓冲液体积

常见问题Q&A

Q1:如何存储标记的蛋白质？

A:将标记的蛋白质存放在冰箱中。另外，添加0.1％叠氮化钠作为防腐剂。

Q2:生物素标记试剂在水溶液中稳定吗？

A:试剂盒中使用的生物素-（AC5）2 Slufo-OSu处于水溶液中时，由于它会水解，因此无法存储在水溶液中。使用前请做好准备。另外，即使在粉末状态下，也要注意由于吸湿引起的劣化。

参考文献

1) J. Wormmeester, F. Stiekema and C. Groot, “Immunoselective Cell Separation”, Methods Enzymol., 1990, 184, 314.

2) J. J. Leary and D. J. Ward, “Rapid and Sensitive Colorimetric Method for Visualizing Biotin-labeled DNA Probes Hybridized to DNA or RNA Immoilized on Nitrocelulose: Bio-blots”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, 80, 4045.

3) W. T. Lee and D. H. Conrad, “The Murine Lymphocyte Receptor for IgE II. Characterization of the Multvalent Nature of the B Lymphocyte Receptor for IgE”, J. Exp. Med., 1984, 159, 1790.

4) D. R. Gretch, M. Suter and M. F. Stinski, “The Use of Biotinylated Monoclonal Antibodies and Streptavidin Affinity Chromatography to Isolate Herpesvirus Hydorophobic Proteins or Glycoproteins”, Anal. Biochem., 1987, 163, 270.

5) M. Shimkus, J. Levy and T. Herman, “A Chemically Cleavable Biotinylated Nucleotide: Usefulness in the Recovery of Protein-DNA Complexes from Avidin Affinity Columns”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82, 2593.

6) W. J. LaRochelle and S. C. Froehner, “Immunodhemical Detection of Proteins Biotinylated on Nitrocellulose Replicas”, J. Immunol. Methods, 1986, 92, 65.

7) P. S. Anjaneyulu and J. V. Staros,”Reactions of N-hydroxysulfosuccinimide Active Esters”, Int. J. Pept. Protein Res., 1987, 30, 117.

8) H. M. Ingalls, C. M. Goodloe-Holland and E. J. Luna,”Junctional Plasma Membrane Domains Isolated from Aggregating Dictyostelium Discoideum Amebae”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83, 4779.

9) J. Guesdon, T. Ternyck and S. Avrameas,”The Use of Avidin-Biotin Interaction in Immunoenzymatic Techniques”, J. Histochem. Cytochem., 1979, 27, 1131.

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10

生物素标记试剂盒-巯基

Biotin Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 整个标记过程仅需3个小时

● 整个标记过程在1支过滤管中进行

● 荧光标记抗体回收率高

● 适用于50-200 μg的IgG

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Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

产品概述

生物素标记试剂盒-SH是用于在具有SH基团的蛋白质（尤其是抗体）上标记生物素的试剂盒。由于试剂盒中包含的SH反应性生物素分子中具有马来酰亚胺基团，因此仅通过与具有SH基团的分子混合即可形成稳定的共价键。如果蛋白质具有S-S键，则可以使用连接的还原剂制备游离的SH基团。（但是，由于SS键的断裂，蛋白质的活性可能会丢失。）当用生物素标记高分子量蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））时，可以使用所附的过滤管轻松进行预采样。如果可以进行处理并且将铰链区中的SH基团用于标记，则可以制备生物素标记的还原IgG，而不会损害抗体活性。另外，未反应的SH-反应性生物素可以在反应后通过使用滤管的纯化操作除去。

原理

Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

3. 如果蛋白质溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果蛋白质溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管SH-Reactive Biotin可以标记50-200ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent管中，并用移液器吹打使其溶解。

（4）将100μl Reducing agent溶液转移到过滤管的滤膜上，吹打使IgG在膜上溶解。

（5）37℃培养30分钟。加入100μl Reaction buffer，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（6）将10μl DMSO加入到SH-reactive biotin中，吹打使其溶解。^c）

（7）将100μl Reaction buffer与8μl SH-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。^d）

（8）37℃培养30分钟。将100μl WS buffer加入到过滤管中8,000-10,000g离心10分钟。 ^b）

（9）加入200μl WS buffer，8,000-10,000g离心10分钟。^b）再重复该步骤一次。

（10）加入200μl WS buffer，吹打10-15次来回收标记产物。^e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度<0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400 ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH₂-Reactive Biotin/SH-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果IgG的量为200ug，在步骤4时加入所有的NH₂-ReactiveBiotin溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1、整个标记过程仅需3个小时

2、整个标记过程在1支过滤管中进行

3、荧光标记抗体回收率高

4、适用于50-200 μg的IgG

常见问题Q&A

Q1:样品溶液中的共存会影响反应吗？

A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。
*不仅对于生物素标记试剂盒-SH，而且对于其他标记试剂盒，都需要采取相同的预防措施。

Q2:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q3:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？

A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。（2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。

根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。（回收的抗体/蛋白质的量将减少。）如果上述方法没有帮助，请与公司技术支持联系。

*如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。

替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33）

Q4:该试剂盒可以标记什么？

A:可以标记分子量为“50,000或更高”并且具有[S-S]或[SH]的任何化合物（抗体，蛋白质等）。量为“50-200μg”。
*由于试剂盒中包含的过滤管尺寸为30K，因此无法纯化低分子量化合物。

参考文献

1) E. Terasaka, K. Yamada, P.H. Wang, K. Hosokawa, R. Yamagiwa, K. Matsumoto, S. Ishii, T. Mori, K. Yagi, H. Sawai, H. Arai, H. Sugimoto, Y. Sugita, Y. Shiro and T. Tosha, “Dynamics of nitric oxide controlled by protein complex in bacterial system”, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.., 2017, 114, (37), 9888.

2) J. Hiruma, K. Harada, A. Motoyama, Y. Okubo, T. Maeda, M. Yamamoto, M. Miyai, T. Hibino and R. Tsuboi, “Key component of inflammasome, NLRC4, was identified in the lesional epidermis of psoriatic patients”, J. Dermatol.., 2018, 45, (8), 971.

3) K. Gonda, M. Watanabe, H. Tada, M. Miyashita, Y. Takahashi-Aoyama, T. Kamei, T. Ishida, S. Usami, H. Hirakawa, Y. Kakugawa, Y. Hamanaka, R. Yoshida, A. Furuta, H. Okada, H. Goda, H. Negishi, K. Takanashi, M. Takahashi, Y. Ozaki, Y. Yoshihara, Y. Nakano and N. Ohuchi, “Quantitative diagnostic imaging of cancer tissues by using phosphor-integrated dots with ultra-high brightness”, Sci. Rep.., 2017, 7, (1), 7509.

4) K. Saito, M. Sakaguchi, H. Iioka, M. Matsui, H. Nakanishi, N.H. Huh and E. Kondo, “Coxsackie and adenovirus receptor is a critical regulator for the survival and growth of oral squamous carcinoma cells”, Oncogene., 2014, 33, (10), 127401286.

5) K. Yamamoto, H. Murata, E.W. Putranto, K. Kataoka, A. Motoyama, T. Hibino, Y. Inoue, M. Sakaguchi and N.H. Huh, “DOCK7 is a critical regulator of the RAGE-Cdc42 signaling axis that induces formation of dendritic pseudopodia in human cancer cells”, Oncol. Rep.., 2013, 29, (3), 1073.

6) M. Sakaguchi, H. Murata, K. Yamamoto, T. Ono, Y. Sakaguchi, A. Motoyama, T. Hibino, K. Kataoka and N.H. Huh, “TIRAP, an Adaptor Protein for TLR2/4, Transduces a Signal from RAGE Phosphorylated upon Ligand Binding”, PLoS ONE., 2011, 6, (8), e23132.

7) M. Sakaguchi, H. Murata, Y. Aoyama, T. Hibino, E.W. Putranto, I.M. Ruma, Y. Inoue, Y. Sakaguchi, K. Yamamoto, R. Kinoshita, J. Futami, K. Kataoka, K. Iwatsuki and N.H. Huh, “DNAX-activating Protein 10 (DAP10) Membrane Adaptor Associates with Receptor for Advanced Glycation End Products (RAGE) and Modulates the RAGE-triggered Signaling Pathway in Human Keratinocytes”, J. Biol. Chem.., 2014, 289, (34), 23389.

8) N. Kobayashi, K. Odaka, T. Uehara, K. Imanaka-Yoshida, Y. Kato, H. Oyama, H. Tadokoro, H. Akizawa, S. Tanada, M. Hiroe, T. Fukumura, I. Komuro, Y. Arano, T. Yoshida and T. Irie, “Toward in Vivo Imaging of Heart Disease Using a Radiolabeled Single-Chain Fv Fragment Targeting Tenascin-C”, Anal. Chem.., 2011, 83, (23), 9123.

9) T. Ikeda, R. Shinohata, M. Murakami, K. Hina, S. Kamikawa, S. Hirohata, S. Kusachi, A. Tamura and S. Usui, “A rapid and precise method for measuring plasma apoE-rich HDL using polyethylene glycol and cation-exchange chromatography: a pilot study on the clinical significance of apoE-rich HDL measurements”, Clin. Chim. Acta.,2017, 465, 112.

10) T. Into, M. Inomata, M. Nakashima, K. Shibata, H. Hacker and K. Matsushita, “Regulation of MyD88-Dependent Signaling Events by S Nitrosylation Retards Toll-Like Receptor Signal Transduction and Initiation of Acute-Phase Immune Responses”, Mol. Cell. Biol.., 2008, 28, (4), 1338.

11) W. Nakai, T. Yoshida, D. Diez, Y. Miyatake, T. Nishibu, N. Imawaka, K. Naruse, Y. Sadamura and R. Hanayama, “A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles”, Sci. Rep.., 2016, 6, 33935.

12) Y. Terasaki, T. Akuta, M. Terasaki, T. Sawa, T. Mori, T. Okamoto, M. Ozaki, M. Takeya and T. Akaike, “Guanine Nitration in Idiopathic Pulmonary Fibrosis and Its Implication for Carcinogenesis”, Am. J. Respir. Crit. Care Med.., 2006, 174, (6), 665.

13) I. W. Sumardika, C. Youyi, E. Kondo, Y. Inoue, I. M. W. Ruma, H. Murata, R. Kinoshita, K. Yamamoto, S. Tomida, K. Shien, H. Sato, A. Yamauchi, J. Futami, E. W. Putranto, T. Hibino, S. Toyooka , M. Nishibori and M. Sakaguchi, “β-1,3-Galactosyl-O-Glycosyl-Glycoprotein β-1,6-N-Acetylglucosaminyltransferase 3 Increases MCAM Stability, Which Enhances S100A8/A9-Mediated Cancer Motility.”, Oncol. Res., 2018, 26, (3), 431.

14) J. Iwano, D. Shinmi, K. Masuda, T. Murakami and J. Enokizono, “Impact of Different Selectivity between Soluble and Membrane-bound Forms of Carcinoembryonic Antigen (CEA) on the Target-mediated Disposition of Anti-CEA Monoclonal Antibodies.”, Drug Metab. Dispos., 2019, 47, (1), 1240.

15) D. S. On, P. Chertchinnapa, Y. Shinkai, T. Kojima and H. Nakano, “Development of a dual monoclonal antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of swine influenza virus using rabbit monoclonal antibody by Ecobody technology.”, J. Biosci. Bioeng., 2020, DOI:10.1016/j.jbiosc.2020.03.003.

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55 生物素标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55

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NO.1. Biotin Labeling Kit – NH2 生物素标记-氨基

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NO.4. Fluorescein Labeling Kit – NH2 FITC（488激发）标记-氨基

NO.5. Biotin Labeling Kit – SH 生物素标记-巯基

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03

生物素抗体标记试剂盒-氨基

Biotin Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 只需将NH2反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50-200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。

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NO.3. Fluorescein Labeling Kit – NH2 荧光素标记试剂盒-氨基

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产品概述

生物素标记试剂盒-NH₂是用于用生物素标记带有氨基基团的蛋白质的试剂盒，尤其是抗体，由于该试剂盒中包含的NH₂-反应性生物素分子中具有活性酯基，因此仅通过与生物素混合即可形成稳定的共价键。当生物素标记在蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH₂-反应性生物素的低分子量化合物（例如Tris）。因此，没有必要进行诸如透析和凝胶过滤的处理，并且可以以高回收率获得高纯度的标记化合物。

原理

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项：

1. 用本试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管NH₂-Reactive Biotin可以标记50-200 ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将10μl DMSO加入到NH₂-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。^c）

（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH₂-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。^d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，^b）除去滤液。

（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，^b）重复该步骤一次。

（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。^e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度低于0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的蛋白质聚积量达到50-200ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH₂-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果蛋白质的量为200ug，在操作步骤4时加入所有的NH₂-Reactive Biotin-DMSO溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1）生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）只需将NH₂反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

3）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

4）可以标记50-200μg的蛋白质。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:这个试剂盒可以用于标记其他蛋白质吗？

A:可以。但是如果含有像血清白蛋白或者明胶的蛋白，标记反应可能会受到干扰。用这个试剂盒标记之前，有必要先纯化抗体溶液。如果您想进一步了解纯化过程可以联系我们。

Q2:我只有少量的IgG，可以标记吗？

A:在该试剂盒中，标记所需的IgG量为50至200μg。

在此范围内，性能没有太大差异。

可以用10μg IgG进行标记，但是可能会出现诸如背景升高的问题。

Q3:样品溶液中的共存会影响反应吗？

A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。

<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。

*生物素标记试剂盒-不仅需要对NH2采取相同的预防措施，还需要对其他标记试剂盒采取相同的预防措施。

Q4:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q5:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？

A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。

（2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。（回收的抗体/蛋白质的量将减少。）

*如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。

替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33）

Q6:该试剂盒可以标记什么？

A:可以标记分子量为“ 50,000或更高”和反应性氨基（NH2）的化合物（抗体，蛋白质等）。标记样品量为“50-200μg”。

*当考虑标记“ mg”的量时，也可以使用“生物素化试剂盒（Sulfo-OSu）；同仁产品货号：BK01”。

*由于试剂盒附带的过滤管为30K，因此无法纯化低分子量化合物。

Q7:一个IgG分子能标记多少生物素？

A:每个IgG分子平均能标记7至10个生物素。

Q8:标记产物能保存多久？

A:在0-5℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下 (只要该蛋白可以冷冻) 存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

Q9:能不能用这个试剂盒标记寡核苷酸和寡肽？

A:不能，寡核苷酸和寡肽的分子量太小不能使其保留在过滤膜上。请参照Q4。

Q10:含有生物素标记蛋白质的活细胞怎么处理？

A:我们推荐使用PBS (含2-10% FBS) 制备细胞悬液，保持最佳细胞状态。

Q11:回收缓冲液 (WS Buffer)对活细胞有危害吗？

A:没有。WS Buffer含有表面活性剂，它的浓度控制在对细胞没有毒性的范围内。如果您担心WS Buffer中的添加剂，请您使用常用的缓冲液代替。

参考文献

1) Y. Kubota, Y. Oike, S. Satoh, Y. Tabata, Y. Niikura, T. Morisada, M. Akao, T. Urano, Y. Ito, T. Miyamoto, N. Nagai, G. Y. Koh, S. Watanabe and T. Suda, “Cooperative Interaction of Angiopoietin-like Proteins 1 and 2 in Zebrafish Vascular Development “, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2005, 102(38), 13502.

2) T. Yamabuki, A. Takano, S. Hayama, N. Ishikawa, T. Kato, M. Miyamoto, T. Ito, H. Ito, Y. Miyagi, H. Nakayama, M. Fujita, M. Hosokawa, E. Tsuchiya, N. Kohno, S. Kondo, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Dikkopf-1 as a Novel Serologic and Prognostic Biomarker for Lung and Esophageal Carcinomas”, Cancer Res., 2007, 67, 2517.

3) H. Kohara, Y. Omatsu, T. Suhiyama, M. Noda, N. Fujii and T. Nagasawa, “Development of Plasmacytoid Dendritic Cells in Bone Marrow Stromal Cell niches Requires CXCL12-CXCR4 Chemokine Signaling”, Blood, 2007, 110(13), 4153.

4) N. Ishikawa, A. Takano, W. Yasui, K. Inai, H. Nishimura, H. Ito, Y. Miyagi, H. Nakayama, M. Fujita, M. Hosokawa, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Cancer-testis Antigen Lymphocyte Antigen 6 Complex Locus K is a Serologic Biomarker and a Therapeutic Target for Lung and Esophageal Carcinomas”, Cancer Res., 2007, 67(24), 11601.

5) A. Fukuda, T. Goto, K.N. Kuroishi, K.K. Gunjigake, S. Kataoka, S. Kobayashi and K. Yamaguchi, “Hemokinin-1 competitively inhibits substance P-induced stimulation of osteoclast formation and function”, Neuropeptides., 2013, 47, (4), 251.

6) A. Ogawa , M. Sakatsume, X. Wang, Y. Sakamaki, Y. Tsubata, B. Alchi, T. Kuroda, H. Kawachi, I. Narita, F. Shimizu and F. Gejyo, “SM22alpha: the novel phenotype marker of injured glomerular epithelial cells in anti-glomerular basement membrane nephritis”, Nephron Exp. Nephrol.., 2007, 106, (3), e77.

7) D. Men, T.T. Zhang, L.W. Hou, J. Zhou, Z.P. Zhang, Y.Y. Shi, J.L. Zhang, Z.Q. Cui, J.Y. Deng, D.B. Wang and X.E. Zhang, “Self-Assembly of Ferritin Nanoparticles into an Enzyme Nanocomposite with Tunable Size for Ultrasensitive Immunoassay”, ACS Nano., 2015, 9, (11), 10852.

8) D. Sugahara, Y. Kobayashi, Y. Akimoto, H. Kawakami, “Mouse intestinal niche cells express a distinct α1,2-fucosylated glycan recognized by a lectin from Burkholderia cenocepacia”, Glycobiology., 2017, 27, (3), 246.

9) H. Sasaki-Iwaoka, M. Ohori, A. Imasato, K. Taguchi, K. Minoura, T. Saito, K. Kushima, E. Imamura, S. Kubo, S. Furukawa and T. Morokata, “Generation and characterization of a potent fully human monoclonal antibody against the interleukin-23 receptor”, Eur. J. Pharmacol.., 2018, 828, 89.

10) K. Kaneshiro, M. Watanabe, K. Terasawa, H. Uchimura, Y. Fukuyama, S. Iwamoto, T.A. Sato, K. Shimizu, G. Tsujimoto and K. Tanaka, “Rapid quantitative profiling of N-glycan by the glycan-labeling method using 3-aminoquinoline/α-cyano-4-hydroxycinnamic acid”, Anal. Chem.., 2012, 84, (16), 7146.

11) K.S. Tan, K. Kulkeaw, Y. Nakanishi, D. Sugiyama, “Expression of cytokine and extracellular matrix mRNAs in fetal hepatic stellate cells”, Genes Cells., 2017, 22, (9), 836.

12) M. Tahara, S. Ohno, K. Sakai, Y. Ito, H. Fukuhara, K. Komase, M.A. Brindley, P.A. Rota, R.K. Plemper, K. Maenaka and M. Takeda, “The receptor-binding site of the measles virus hemagglutinin protein itself constitutes a conserved neutralizing epitope”, J. Virol.., 2013, 87, (6), 3583.

13) M. Takahashi, Y. Ishida, D. Iwaki, K. Kanno, T. Suzuki, Y. Endo, Y. Homma and T. Fujita, “Essential role of Mannose-binding lectin-associated serine protease-1 in activation of the complement factor D”, J. Exp. Med.., 2010, 207, (1), 29.

14) N. Hosen, Y. Matsunaga, K. Hasegawa, H. Matsuno, Y. Nakamura, M. Makita, K. Watanabe, M. Yoshida, K. Satoh, S. Morimoto, F. Fujiki, H. Nakajima, J. Nakata, S. Nishida, A. Tsuboi, Y. Oka, M. Manabe, H. Ichihara, Y. Aoyama, A. Mugitani , T. Nakao, M. Hino, R. Uchibori, K. Ozawa, Y. Baba, S. Terakura, N. Wada, E. Morii, J. Nishimura, K. Takeda, Y. Oji, H. Sugiyama, J. Takagi and A. Kumanogoh, “The activated conformation of integrin β7 is a novel multiple myeloma-specific target for CAR T cell therapy”, Nat. Med.., 2017, 23, (12), 1436.

15) R. Nishino, A. Takano, H. Oshita, N. Ishikawa, H. Akiyama, H. Ito, H. Nakayama, Y. Miyagi, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Identification of Epstein-Barr virus–induced gene 3 as a novel serum and tissue biomarker and a therapeutic target for lung cancer”, Clin. Cancer Res.., 2011, 17, (19), 6272.

16) T. Hiono, A. Matsuda, T. Wagatsuma, M. Okamatsu, Y. Sakoda and A. Kuno, “Lectin microarray analyses reveal host cell-specific glycan profiles of the hemagglutinins of influenza A viruses”, Virology., 2019, 527, 132.

17) T. Oshima, S. Sato, J. Kato, Y. Ito, T. Watanabe, I. Tsuji, A. Hori, T. Kurokawa and T. Kokubo, “Nectin-2 is a potential target for antibody therapy of breast and ovarian cancers”, Mol. Cancer., 2013, 12, (60), .

18) T. Yoshida, N. Shiraki, H. Baba, M. Goto, S. Fujiwara, K. Kume and S. Kume, “Expression patterns of epiplakin1 in pancreas, pancreatic cancer and regenerating pancreas”, Genes Cells., 2008, 13, (7), 667.

19) X. Piao, T. Ozawa, H. Hamana, K. Shitaoka, A. Jin, H. Kishi and A. Muraguchi, “TRAIL-receptor 1 IgM antibodies strongly induce apoptosis in human cancer cells in vitro and in vivo”, Oncoimmunology., 2016, 5, (5), e1131380.

20) Y. Shimazaki, Y. Kohno, “Successive analysis of antigen trapping and enzymatic digestion on membrane-immobilized avidin”, Anal. Biochem.., 2012, 422, (1), 55.

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日本同仁化学Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

产品文献

选择规格：

1set

现货

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

活动进行中

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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订购满5000元，200元礼品等你拿

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试剂盒内含

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

操作步骤

　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。 Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

日本同仁化学Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291

Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 适合组织检测

● 配有标准品，可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

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产品文献

选择规格：

50tests

现货

组织/细胞检测

试剂盒配套计算器（点击查看下载）

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

活动进行中

试剂盒内含

产品概述

原理

金属离子选择性

加标回收实验

实验例

参考文献

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NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

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NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.5. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

试剂盒内含

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一，生物体内铁元素的含量虽少，但有着重要的生理作用。近年来，随着铁死亡概念的提出，细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒相比，可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度，即可确定组织样品中的二价铁含量。同时，还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁，以确定总铁含量，进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

金属离子选择性

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

加标回收实验

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

实验例

组织样品中的Fe²⁺和 Fe³⁺的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织。

2. 加入 1 ml冷 PBS，移液器吹打 20次， Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min，去除上清。

3. 将样品转移至研钵，加入液氮充分研磨成粉末后，加入 1.3 ml Assay Buffer，回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。（为防止样品温度上升，每 1 min间隔置于冰浴上 20 s）。

5. 16,000 g离心 10 min，除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液，每管分别加入 400 μl上清液，制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管中加入 Reducer solution。（参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl）。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2，加入至 96孔板中 37 培养 60 min，检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”，自动计算出二价铁和三价铁浓度。

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

参考文献

No.	检测对象	引用 (含链接)	影响因子
1	组织 (小鼠肿瘤组织)	H. Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Self-assembled FeS-based cascade bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger robust cancer immunotherapy”, Acta Pharm. Sin. B, 2021, doi:10.1016/j.apsb.2021.05.005.	7.097
2	细胞 Kasumi-1 (人急性白血病细胞)	L. Zhang, Y. Song, K. Cao, Y. Du, M. Han, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Hepcidin-Based Nanocomposites for Enhanced Cancer Immunotherapy by Modulating Iron Export-Mediated N6-Methyladenosine RNA Transcript”, Adv. Funct. Mater., 2021, doi: 10.1002/adfm.202107195.	18.808
3	细胞 (II型肺泡细胞)	H. Cheng, D. Feng, X. Li, L. Gao, S. Tang, W. Liu, X. Wu, S. Yue, C. Li, Z. Luo, “Iron deposition-induced ferroptosis in alveolar type II cells promotes the development of pulmonary fibrosis”, Biochim. Biophys. Acta, Mol. Basis Dis., 2021, doi: 10.1016/j.bbadis.2021.166204.	5.187
4	细胞 MV4-11; Kasumi-1; NB4 (白血病细胞)	Y. Du, M. Han, K. Cao, Q. Li, J. Pang, L. Dou, S. Liu, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Gold Nanorods Exhibit Intrinsic Therapeutic Activity via Controlling N6‑Methyladenosine Based Epitranscriptomics in Acute Myeloid Leukemia”, ACS Nano, 2021, doi: 10.1021/acsnano.1c05547.	15.881
5	组织 (人软骨组织)	H. Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Contribution of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression”, EBioMedicine, 2022, doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103847.	8.143
6	组织 (小鼠肺、肝脏、肾脏)	T. Wu, X. Wang, M. Chen, X. Zhang, J. Zhang, J. Cheng, L. Kong, M. Tang,”Respiratory exposure to graphene quantum dots causes fibrotic effects on lung, liver and kidney of mice”, Food Chem. Toxicol., 2022, doi: 10.1016/j.fct.2022.112971.	6.023
7	组织 (小鼠海马组织)	T. Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, “Nitrogen‑doped graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium homeostasis in microglia”, Part. Fibre Toxicol., 2022, doi: 10.1186/s12989-022-00464-z.	9.4
8	组织 (宫颈管粘膜)	T. Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and R. Ju, “Persistent ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV infection”, 2022, Cell Death Discovery, doi: 10.1038/s41420-022-01013-5.	5.241
9	组织 (小鼠肺组织)	M. Li, L. Fu, B. Lv, Y. Xiang, H. Xiang, D. Xu, H. Zhao, “Arsenic induces ferroptosis and acute lung injury through mtROS-mediated mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane dysfunction”, Ecotoxicol. Environ. Saf., 2022, doi: 10.1016/j.ecoenv.2022.113595.	6.291
10	细胞 BEL-7402, SMMC-7721 (人肝癌细胞系)	L. Guan, F. Wang, M. Wang, S. Han, Z. Cui, S. Xi, H. Xu and S. Li, “Downregulation of HULC Induces Ferroptosis in Hepatocellular Carcinoma via Targeting of the miR-3200-5p/ATF4 Axis”, 2022, Oxid. Med. Cell. Longevity, doi: 10.1155/2022/9613095.	6.543
11	组织 (小鼠肺部组织)	Z. Zeng, H. Huang, J. Zhang, Y. Liu, W. Zhong, W. Chen, Y. Lu, Y. Qiao, H. Zhao, X. Meng, F. Zou, S. Cai, H. Dong, “HDM induce airway epithelial cell ferroptosis and promote inflammation by activating ferritinophagy in asthma”, FASEB J., 2022, doi: 10.1096/fj.202101977RR.	5.191
12	组织 (大豆叶片)	Y. Cheng, H. Zhang, W. Zhu, Q. Li, R. Meng, K. Yang, Z. Guo, Y. Zhai, R. Ji, H. Peng, D. Dou, M. Jing, “Ferroptosis induced by the biocontrol agent Pythium oligandrum enhances soybean resistance to Phytophthora sojae”, Environ. Microbiol., doi: 10.1111/1462-2920.16248.	5.476
13	组织 (小鼠睾丸组织)	Y. Zhao, H. Zhang, J. Cui, J. Wang, M. Chen, H. Wang, X. Li, J. Li, “Ferroptosis is critical for phthalates driving the blood-testis barrier dysfunction via targeting transferrin receptor”, Redox Biol., 2022, doi: 10.1016/j.redox.2022.102584.	10.787
14	组织 (小鼠结肠组织)	F. Yang, Y. Chen, Y. Xiao, H. Jiang, Z. Jiang, M. Yang, M. Li, Y. Su, Z. Yan, Y. Lin, D. Li, “pH-sensitive Molybdenum (Mo)-based polyoxometalate nanoclusters have therapeutic efficacy in Inflammatory Bowel disease by counteracting ferroptosis”, Pharmacol. Res., 2023, doi: 10.1016/j.phrs.2023.106645.	10.334
15	组织 (小鼠肺部组织)	W. Tang, J. Qin, Y. Zhou, W. Wang, F. Teng, J. Liu, L. Yi, J. Cui, X. Zhu, S. Wang, J. Dong, Y. Wei, “Regulation of ferroptosis and ACSL4-15LO1 pathway contributed to the anti-asthma effect of acupuncture”, Int. Immunopharmacol., 2023, doi: 10.1016/j.intimp.2022.109670.	5.714
16	组织 (小鼠心脏组织)	H. Hu, L. Li, H. Zhang, Y. Zhang, Q. Liu, M. Chen, J. Ning, Y. Pang, W. Hu, Y. Niu, R. Zhang, “Mechanism of YY1 mediating autophagy dependent ferroptosis in PM2.5 induced cardiac fibrosis”, Chemosphere, 2023, doi: 10.1016/j.chemosphere.2023.137749.	8.943
17	细胞 (HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)	L. Kang, D. Wang, T. Shen, X. Liu, B. Dai, D. Zhou, H. Shen, J. Gong, G. Li, Y. Hu, P. Wang, X. Mi, Y. Zhang, X. Tan, “PDIA4 confers resistance to ferroptosis via induction of ATF4/SLC7A11 in renal cell carcinoma”, Cell Death Dis., 2023, doi: 10.1038/s41419-023-05719-x.	9.685
18	细胞 (HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)	C. Dong, C. Song, Z. He, Q. Song, T. Song, J. Liu, Y. Xiong, X. Su, J. Zhou, X. Yang, W. Liao, “Protective efficacy of Schizandrin B on ameliorating nephrolithiasis via regulating GSK3β/Nrf2 signaling-mediated ferroptosis in vivo and in vitro”, 2023, Int. Immunopharmacol., doi:10.1016/j.intimp.2023.110042.	5.714
19	组织 (小鼠肺部组织)	B. Guo, Z. Zuo, X. Di, Y. Huang, G. Gong, B. Xu, L. Wang, X. Zhang, Z. Liang, Y. Hou, X. Liu, Z. Hu, “Salidroside attenuates HALI via IL-17A-mediated ferroptosis of alveolar epithelial cells by regulating Act1-TRAF6-p38 MAPK pathway”, 2022, Cell Commun. Signaling, doi: 10.1186/s12964-022-00994-1.	7.525
20	组织 (小鼠睾丸组织)	J. Ding, B. Lu, L. Liu, Z. Zhong, N. Wang, B. Li, W. Sheng, Q. He, “Guilu-Erxian-Glue alleviates Tripterygium wilfordii polyglycoside-induced oligoasthenospermia in rats by resisting ferroptosis via the Keap1/Nrf2/GPX4 signaling pathway”, Pharm. Biol., 2023, doi:10.1080/13880209.2023.2165114.	3.889
21	细胞 (人髓核细胞)	X. Yang, Y. Chen, J. Guo, J. Li, P. Zhang, H. Yang, K. Rong, T. Zhou, J. Fu, J. Zhao, “Polydopamine Nanoparticles Targeting Ferroptosis Mitigate Intervertebral Disc Degeneration Via Reactive Oxygen Species Depletion, Iron Ions Chelation, and GPX4 Ubiquitination Suppression”, Adv. Sci., 2023, doi:10.1002/advs.202207216.	17.521
22	组织 (小鼠心脏组织)	J. Pan, W Xiong, A. Zhang, H. Zhang, H. Lin, L. Gao, J. Ke, S. Huang, J. ZHang, J. Gu, A. Chang, C. Wang, “The Imbalance of p53–Park7 Signaling Axis Induces Iron Homeostasis Dysfunction in Doxorubicin-Challenged Cardiomyocytes”, Adv. Sci, 2023, doi:10.1002/advs.202206007.	17.521
23	细胞 (H9c2, 4T1)	T. Chen, Y. Qin, Y. Li, Y. Li, J. Luo, L. Fan, M. Feng, Z. Wang and Y. Zhao, “Chiral Polymer Micelles Alleviate Adriamycin Cardiotoxicity via Iron Chelation and Ferroptosis Inhibition”, Adv. Funct. Mater., 2023, doi:10.1002/adfm.202300689.	19.923
24	细胞 (乳腺癌细胞)	Z. ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J. Tang., “GATA3 mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction in breast cancer cells”, Drug Resistance Updates, 2023, doi:10.1016/j.drup.2023.100974.	22.841
25	组织（the brains of 3 × Tg-AD mice）	Xinlu Li, Jianfeng Chen, Wennuo Feng ,Chao Wang, Minyu Chen, Yifan Li, Jinghong Chen, Xinwei Liu, Qiong Liu, Jing Tian,“Berberine ameliorates iron levels and ferroptosis in the brain of 3 × Tg-AD mice”2023, PHYTOMEDICINE, doi:10.1016/j.phymed.2023.154962	7.9
26	组织（Testicular tissues）	Lipeng Li , Zijie Pei , Ruiting Wu , Yaling Zhang , Yaxian Pang , Huaifang Hu , Wentao Hu , Zihan Geng , Tengfei Feng , Yujie Niu , Guimin Hao , Rong Zhang“FDX1 regulates leydig cell ferroptosis mediates PM2.5-induced testicular dysfunction of mice”，Ecotoxicology and Environmental Safety，2023，doi.org/10.1016/j.ecoenv.2023.115309	6.8
27	细胞（macrophage）	Wenlin Yuan , Yuting Yang , Yingming Wei , Xufei Yu , Jiaqi Bao , Jiahui Zhong , Zhongxiu Wang , Lili Chen“Macrophage ferroptosis promotes MMP2/9 overexpression induced by hemin in hemorrhagic plaque”，Thromb Haemost，2023，doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110916	6.7
28	细胞（HT-22）	Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097	7.0

日本同仁化学DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

DNA损伤定量试剂盒

DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

•可以检测基因组DNA样品的碱基位点数量

•采用方便的比色法检测

•检测范围：40个碱基位点/ 1×10⁵ 碱基对DNA

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产品文献

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DNA损伤思维导图

选择规格：

20 samples

现货

DNA损伤检测方案

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

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试剂盒内含

产品概述

原理

技术信息

操作方法

常见问题Q&A

参考文献

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DNA损伤丨从实验思路到检测指标 PDF下载

指标	关联指标干货参考（点击查看）	检测指标（点击查看）
DNA损伤检测	γ-H2AX	DNA损伤检测试剂盒- γH2AX（绿、红、深红）
	AP位点	DNA损伤检测试剂盒（AP位点法）
	核小体	Nucleolus Bright (绿、红）
	细胞周期	Cell Cycle Assay Kit – PI/RNase Staining
DNA损伤关联指标	氧化损伤	DMPO
		BMPO
		TEMP
		SOD Assay Kit
		DPPH Antioxidant Assay Kit
	凋亡	Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit/PI
		Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit/PI
		Cell Cycle Assay Solution Deep Red/Blue
		JC-1 MitoMP Detection Kit
		Caspase-3 Assay Kit
	铁死亡	Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11
		Liperfluo
		GSSG/GSH Quantification Kit II
		Iron Assay Kit
		Mito-FerroGreen
	衰老	Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
		Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
		SPiDER-βGal
	自噬	Mitophagy Detection Kit
		DALGreen – Autophagy Detection
		DAPGreen – Autophagy Detection
		DAPRed – Autophagy Detection

*点击即可跳转至详情页

试剂盒内含

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

产品概述

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基，产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP；N’-氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后，DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法，用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×10⁵个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。

＊本试剂盒仅适用于基因组DNA中无碱基位点 (Abasic Sites)的检测。

原理

DNA损伤在除了复制过程中的DNA聚合酶错误外，保留有机体遗传信息的DNA在体内还受到环境辐射，紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的破坏，接收。如果这些错误和伤害得不到适当的修复，它们将导致突变，从而导致癌症和衰老。

DNA损伤部位有修复结构，其中之一就是去除碱修复。此时，将出现一个称为AP位点的基础位点（apurinic/apyrimidinic位点）。换句话说，AP位点的检测是可以测量DNA损伤位点的有效方法。

ARP（N’-氨基氧基甲基羰基肼基-D-生物素）是已知可以与该AP位点进行生物素特异结合的试剂。-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting-是一种可以通过使用ARP将DNA生物素化并固定在96孔微板上，可以简单地定量样品DNA中的AP 位点的试剂盒。

该试剂盒包含具有与AP位点的标准DNA，并且可以使用HRP标记的链霉亲和素通过生物素检测方法对AP位点进行定量。

使用方法请看实验例。

*冷藏保存中或恢复到室温时，有时会在管状管中看到水滴状的液粒。

这是由干燥防止剂液粒化而成的，产品的性能没有问题。

＊本套装中含有加入了溶液的试剂组件。

溶液可能会粘附在试管或瓶盖的内壁上，因此在打开前应先摇匀

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

技术信息

除试剂盒以外必要的物品

・10μl，200μl，1 ml微量移液器（可变型）

・200μl多通道移液器（可变型）

・培养箱（37℃）

・酶标仪

・0.5 ml，1.5 ml离心管

・离心机

・DNA纯化试剂盒

・纸巾

本公司出售各种DNA纯化试剂盒。

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue(Code：GK03)

关于DNA提纯的问题，请咨询同仁化学。

操作方法

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号：DK02

常见问题Q&A

Q1: 是否可以创建40个以上AP位点/ 100,000个标准溶液？

A1:该试剂盒的标准DNA是0-40个AP位点/ 100,000ARP-DNA。但我们已经准备了多达50个AP站点/ 100,000个的ARP-DNA（暂时没有做到更多）。从理论上讲，可以制备更多的ARP-DNA，但这么做的话我们无法保证和保持校准线的线性程度。

如果要检测更高浓度的碱基损伤，但样品DNA没有相同浓度的损伤，您可以用0AP 位点-DNA（测定范围内稀释）后再进行测定，之后再换算实际AP数比较好。

Q2: AP位点是DNA的一个基本损伤位点，被用作氧化应激的指标，除了AP位点之外，还有其他氧化应激指标吗？

A2：我们创建了一个文档，概述了氧化应激的各种标记物。

从实验者的角度，描述了每种氧化应激标记的特性和检测样品的处理方法，因此请参考以下文档（日文）。

https://www.dojindo.co.jp/technical/beginner/stressmarker.pdf

Q3:建议在DNA的纯度为吸光度为1.8以上进行检测。是否能够测量至1.5？

A3:因为吸光度在1.5内没有做过类似实验，所以暂时无法确认。

我们用吸光度为1.6～1.7的DNA进行检测，但不能看到很大的变化。

所以推荐1.8或更高。

纯度低的话可能意味着蛋白质污染。低纯度蛋白质具有阻断作用，可能使DNA粘附在板上。

请使用尽可能高的纯度，因为它可能会阻止这种情况

Q4:是否可以存储提取的DNA而无需将其转换为ARP？

A4:存储是不可取的，因为这会增加AP位点的数量。（冷藏和冷冻）

如果要在不进行ARP化的情况下进行存储，请使用乙醇沉淀，制粒并冷冻保存。AP站点确实是容易发生剪切的部位。

但是，如果以catallist free的状态保存的话，即使在3’侧有断开也不会影响ARP的检测。

相反，如果提取的DNA储存在非冷冻状态的环境中，

由自然产生的去除碱形成的AP位点是一个更重要的问题。

所以在这种情况下，如果你的样品在正确存储标准DNA是可以进行修饰的。

ARP修饰后AP位点稳定，建议提取后迅速进行APR处理。

Q5:这个试剂盒可以检测什么？

A5：您可以定量DNA中的AP位点。AP位点是[apurinic / appyrimidinic site]的缩写，作用于受损的DNA。一般在去除碱修复过程中会出现。DNA的损伤除了复制时DNA polymerase的错误之外，还受到紫外线，化学物质（如烷基化剂）和代谢物（如活性氧）的影响。

通过测定AP位点可以检测DNA损伤。

Q6:这个试剂盒能测定的样品数量是多少？

A6：20samples为20个样品。

每个Filtration Tube都有20个samples。

因为一个样品一般使用一个Filtration Tube，所以这个Tube的数量即是可测定的样品数。

20samples的测定用的板也是1块板。

Q7:96孔板和过滤管中有溶液剩余，请告诉我废弃的方法

A7:多余的溶液请在确认以下成分信息后，按照政策规定的废弃规则废弃。

<配套试剂成分>

・ARP-DNA standard solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

・ARP solution（稀释后作废，不含有害成分）

・DNA binding solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

・Washing buffer（稀释水后废弃，不含有害成分）

・HRP-Striptavidin（稀释水后废弃，不含有害成分）

・TE buffer（可溶于水，EDA・2NA 0.1%以下）

・Substrate solution（稀释水后废弃，不含有害成分）

参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, “DNA Repair Enzymes”, Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.

2) T. Lindahl and B. Nyberg, “Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid”, Biochemistry, 1972, 11, 3610.

3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, “A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.

4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, “Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA”, Biochemistry, 1990, 29, 1737.

5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, “Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion”, Mutat. Res., 1992, 273, 253.

6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, “The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function”, J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.

7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, “DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes”, J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.

8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, “Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.

9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, “Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury”, Stroke, 2005, 36, 321.

10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, “Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1”, Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.

11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, “A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents”, Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

日本同仁化学超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311- DOJINDO

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超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST

SOD Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 可以检测细胞、组织等多种样品

● 准确性和灵敏度高

● 可以测定100%SOD抑制率

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产品文献

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选择规格：

100tests

现货

氧化应激与自由基检测方案

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产品概述

检测原理

所需设备和材料

操作步骤

抑制曲线

实验例

食品抗氧化能力的检测

常见问题Q&A

参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.4. Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric 细胞凋亡检测

NO.5. DMPO 超氧阴离子和羟自由基检测

产品概述

超氧化物歧化酶 (SOD) 是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子 (O₂^–) 的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑 (氮蓝四唑NitroblueTetrazolium ，简称NBT) 的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是NBT法存在一些缺点，例如生成的甲臜 (Formazan dye) 的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST^®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST^®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O₂^–) 反应生成一种水溶性的染料。WST^®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制 (见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST^®-1反应才能发生)。因此SOD或者SOD类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定。

特点
1)可以测定100%SOD抑制率。
2)不需要甲醛溶解操作，操作简单。
3)一次可以进行多样本的测定。
4)由于灵敏度高，可以提高样品的稀释倍率，所以可以抑制干扰物质带来的影响。

检测原理

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

所需设备和材料

2-20 µl和20-200 µl的可调式移液器、多通道移液器，酶标仪（450 nm）、96孔板、37℃培养箱

操作步骤

用96孔板，制作样品到检测可在1小时内完成

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

抑制曲线

Cu,Zn-SOD的抑制曲线

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

实验例

高知大学的岛村等人对石茶制作的每一步都测定了其SOD活性。据报道，在制造过程中和微生物相关的需氧发酵和厌氧发酵极大地增加了SOD样活性，并且在发酵过程中抗氧化能力随着茶提取物成分的变化而改变。

“ 石茶生产过程中儿茶素含量和超氧阴离子清除活性的变化”，日本食品科学技术学会学报，55（12），640

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

L：新鲜树叶

SL：蒸煮的树叶

PFL：预发酵（有氧条件下发酵几天）树叶

FL：发酵（在厌氧条件下发酵数天）树叶

DL：晒干（数天）树叶

食品抗氧化能力的检测

我们知道，许多由呼吸和各种外在因素产生的活性氧，会降低机体功能，促进各种疾病的发病和老化。
有越来越多对这此类现象的防御机制(抗氧化能力)的文章出现，关于利用食品所具有的抗氧化能力维持健康、预防疾病的研究也备受关注。

常见问题Q&A

Q1：“1 Unit”的定义是什么？

A1：1 Unit是指样品中的还原性染料（如细胞色素C，WST-1，NBT或XTT）与超氧阴离子之间的比色反应，50%被抑制时的点。例如如果不含任何SOD的样品溶液的O.D.值为1.0的话，那么另一个O.D.值为0.5的样品则被定义为具有1个单位的酶活性。可以使用这个单位来确定样品中的

SOD活性。使用不同染料或方法检测SOD活性，它们之间不具有可比性。

Q2：我能使用SOD标准品来确定样品溶液的SOD活性吗？

A2：可以。制备标准曲线，确定样品溶液的SOD活性。SOD Bovine Erythrocytes

（CAS# 9054-89-1，EC 1.15.1.1）能够从Sigma（Catalog# S2525）购得。

Q3：是否可以用动力学法来测定SOD活性？

A3：可以。因为在20分钟内的生色比率是保持一致的，可以测量直线上升阶段5分钟内的斜率来测定SOD活性。

Q4：如果样品自身带有较深的颜色，这样的样品可以使用吗？

A4：可以。稀释样品可以减小干扰，将样品孔的O.D.值减去Blank 2的O.D.值就可以扣除本底的颜色。但是如果样品溶液的SOD活性过低是不能检测出的。

Q5：如何能够制备更多的Dilution Buffer？

A5：Dilution Buffer为PBS。请按以下浓度配制：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，

1.47 mM KH₂PO₄， 8.1 mM Na₂HPO₄，pH 7.4。

Q6：使用该试剂盒能否分别检测Mn-SOD和Cu/Zn-SOD？

A6：可以。要单独检测Mn-SOD活性，可以添加KCN阻断Cu/Zn-SOD活性。向样品中加入

1 mM的KCN可以完全阻断Cu/Zn-SOD活性。要测定Cu/Zn-SOD的活，可以用总的SOD活性减去Mn-SOD活性，就可以得到。

Q7：怎样保存样品？

A7：在-80℃可以保存1年。

Q8：能否使用该试剂盒检测超氧化物阴离子的水平？

A8：不必用这个试剂盒，可以使用WST-1来检测超氧化物。但是必须有一个检测样品溶液中超氧化物量的标准。因为超氧化物不稳定，而且会和其它物质反应，要确定系统中生成的超氧化物的总量是比较困难的。试剂盒中的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以被用作检测每个样品中超氧化物相对生成量的标准。

参考文献

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macrophages and coronary artery disease, European Heart Journal, 2008, 29, 1267-1274

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Atherosclerotic Watanabe Heritable Hyperlipidemic Rabbit Aorta,

Journal of the American College of Cardiology, 2007, 50, 2249-2253

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ACS Nano, 2018, 12(2), 1321-1338

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12. Allelopathic interactions of linoleic acid and nitric oxide increase the competitive ability of Microcystis aeruginosa,

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14. Chemoprevention of Carcinogenic Progression to Esophageal Adenocarcinoma by the Manganese Superoxide Dismutase

Supplementation, Clinical Cancer Research, 2007, 13, 5176-5182

15. Development of insulin resistance and obesity in mice overexpressing cellular glutathione peroxidase,

日本同仁化学Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶，被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素，但在氧化应激中，诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

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Glutamate Assay Kit-WST试剂盒	G269	谷氨酸的定量检测

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。 Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测

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