ISOGEN 石蜡包埋组织RNA提取试剂盒
ISOGEN PB Kit
ISOGEN 石蜡包埋组织RNA提取试剂盒
ISOGEN PB Kit
◆原理
ISOGEN PB kit是从石蜡包埋切片中萃取RNA的试剂盒，脱石蜡后从用Proteinase K处理过的组织中用ISOGEN-LS萃取出RNA大概只需要2小时。萃取出的RNA能用于RT-PCR。
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 315-06421 | ISOGEN PB Kit ISOGEN 石蜡包埋组织RNA提取试剂盒 |
for 20tests | – | – |
ISOGEN with Spin Column
RNA提取试剂
ISOGEN with Spin Column
ISOGEN with Spin Column 50次用量
ISOGEN with Spin Column是总RNA提取试剂ISOGEN与硅胶膜内封离心柱的组合产品。
使用ISOGEN溶解样品，通过液相分离提取RNA。去除混杂物时，使用Nippon Gene自主设计的离心柱，仅1个小时左右即可提取更高纯度的总RNA。该产品的原理（Boom technology）是在离液离子条件下，使核酸吸附于二氧化硅膜。
◆特点
• 可提取高纯度全RNA 无需酒精沉淀 从混杂物较多的植物也可提取高纯度全RNA
◆产品列表
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ISOGEN with Spin Column （10次用量、50次用量） |
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产品 |
容量（10次用量） |
容量（次用量） |
备注 |
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ISOGEN |
10 ml x 1 |
50 ml x 1 |
保存于阴暗处 |
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IsoWash I |
9 ml x 1 |
30 ml x 1 |
可室温保存 |
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IsoWash II |
7 ml x 1 |
30 ml x 1 |
可室温保存 |
|
TE (pH8.0) |
1 ml x 1 |
5 ml x 1 |
可室温保存 |
|
Spin Column |
10瓶 |
50瓶 |
|
保存方法
冷藏保存（2～10°C）
运输方法
本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。
◆使用案例
操作流程
Data 1: RNA取量的基准
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样本 |
RNA取量的基准 |
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动物组织 |
脑 |
0.5 µg RNA/mg tissue |
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肝脏 |
3 µg RNA/mg tissue |
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肾脏 |
2 µg RNA/mg tissue |
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|
精巢 |
2 µg RNA/mg tissue |
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培养细胞 |
Jurkat细胞 |
4 µg RNA/1 x 106 cells |
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HeLa细胞 |
4 µg RNA/1 x 106 cells |
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植物 |
卷心菜(幼苗) |
0.3 µg RNA/mg tissue |
|
水稻 (叶子) |
0.3 µg RNA/mg tissue |
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大豆种子 |
0.5 µg RNA/mg tissue |
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玉米种子 |
0.5 µg RNA/mg tissue |
|
|
卷心菜种子 |
0.3 µg RNA/mg tissue |
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郁金香球茎 |
0.2 µg RNA/mg tissue |
|
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水稻(稻谷) |
0.2 µg RNA/mg tissue |
|
Data 2： 提取的RNA的吸光光谱与电泳结果（与旧方法比较）
按照操作步骤，从小鼠肝脏（50 mg）及冷冻粉碎后的植物样本（各25 mg）提取RNA，进行吸光色谱检测。同时使用以往的方法（ISOGEN提取后使用异丙醇沉淀纯化）进行同样的检测。
|
动物样本：小鼠肝脏 |
植物样本：郁金香球茎 |
 |
 |
▶ 根据各RNA溶液的吸光值计算出0.5 µg的RNA，使用甲醛变性琼脂糖凝胶进行电泳。
 |
Lane 1: 小鼠肝脏（旧方法） Lane 2: 小鼠肝脏（离心柱法） |
| 1% gel Agarose S, EtBr 染色 |
使用动物组织提取的RNA纯度与使用以往方法一样高（将培养细胞作为样本的结果也一样）。使用离心柱法（本产品）植物样本（尤其是球茎、稻谷等）可提取高纯度RNA，且不含在230 nm附近吸收波长最多的多糖类等混杂物。根据电泳结果也可得出这一结论。
◆注意事项
• 如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。
• ISOGEN 是非医疗用医剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。
• 使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
• 操作场所保持通风，以免吸入蒸汽。
• 如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。
• 请按照说明书进行操作。
• 对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。
◆备注
本产品是实验研究用试剂，请勿用作医疗用途。
◆相关产品
· RNA提取试剂 ISOGEN
· 缓冲剂 ddWater, TE(pH 8.0)
· Collection Tube（收集管单品套装）
· ISOSPIN Plant RNA （从植物组织提取RNA）
· ISOSPIN Cell & Tissue RNA （从动物细胞、动物组织提取RNA）
· ISOSPIN Blood & Plasma DNA （从血液、血清、血浆提取DNA）
· Deoxyribonuclease（RT Grade）for Heat Stop
· Deoxyribonuclease（RT Grade）
· DNase I (RNase free)
◆资料 Data Sheet
产品手册
· ISOGEN with Spin Column 产品说明书第三版 (PDF 368KB)
SDS(Safety Data Sheet)
· ISOGEN with Spin Column 安全标签 (PDF)
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 314-07513 | ISOGEN with Spin Column | 10次用量 | – | – |
| 318-07511 | ISOGEN with Spin Column | 50次用量 | – | – |
ISOGEN/ISOGEN-LS 总RNA 精制Poly(A+)RNA
ISOGEN/ISOGEN-LS Poly(A)+ Isolation Pack
ISOGEN/ISOGEN-LS 总RNA 精制Poly(A+)RNA
ISOGEN/ISOGEN-LS Poly(A)+ Isolation Pack
◆原理
本产品是由ISOGEN和Poly A+ ISOLATION Kit From Total RNA组合而成的Poly A+ RNA萃取试剂盒。本产品能够在短时间内得到高纯度的Poly A+ RNA，而且，本产品还附有Ethachinmate,能够简单地对得到的Poly A+ RNA进行浓缩
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 314-05651 | ISOGEN Poly(A)+ Isolation Pack ISOGEN 总RNA 精制Poly(A+)RNA |
20次用 | – | – |
| 311-05661 | ISOGEN/ISOGEN-LS Poly(A)+ Isolation Pack ISOGEN/ISOGEN-LS 总RNA 精制Poly(A+)RNA |
ISOGEN II RNA抽提试剂
ISOGEN II
ISOGEN II RNA抽提试剂
ISOGEN II
从动物组织和培养细胞中高效分离纯化含有小RNA的总RNA
◆原理
ISOGEN II是从动物组织和培养细胞中总RNA和小RNA的抽提试剂。本品是含有苯酚和胍的均相液体，根据与细胞成分的相互作用，能单一地分离RNA。
使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质化之后，再添加水，因为DNA、蛋白质、多糖类等会形成不溶性沉淀，进行离心分离后可以去除。用乙醇沉淀并洗涤、溶解得到上清之后，能分离出高纯度的RNA。
◆优点・特色
● 不需使用氯仿分离RNA
● 比起旧产品（ISOGEN等），小RNA的抽提效率更高
● 可以把大RNA（>200bases）和小RNA（<200bases〉分离（同时提供不分离的方案）
● DNA污染少，抽提的RNA可以直接用于RT-PCR和RT-qPCR上
● 约1 h可完成RNA的抽提
内容和保存条件
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产品名称 |
构成 |
|
|
ISOGEN II |
ISOGEN II |
100mL |
|
使用手册 |
1本 |
|
|
ISOGEN II（with Ethachinmate） |
ISOGEN II |
10mL |
|
Ethachinmate |
0.03mL |
|
|
使用手册 |
1本 |
|
冷藏保存
请在购买日起6个月内使用
本品可在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用
产品安全数据图表（MSDS）
ISOGEN II MSDS
ISOGEN II(with Ethachinmate) MSDS
使用手册
ISOGEN II 手册（第一版）
ISOGEN II(with Ethachinmate)手册（第一版）
◆案例・应用
操作流程
使用例子
Data 1 抽提得到的RNA电泳
根据ISOGEN和ISOGEN II的方案抽提RNA，进行电泳
M：RNA Ladder (Code No.311-06261）
Lane1：ISOGEN 抽提总 RNA（2μg）
Lane2：ISOGEN II 抽提总RNA（2μg）
Lane3：ISOGEN II 抽提高分子RNA（2μg）
Lane4：ISOGEN II 抽提小RNA（0.2μg）
1.2%Agarose S（甲醛变性）EtBr染色
Lane1：ISOGEN 抽提总RNA（5μg）
Lane2：ISOGEN II 抽提总RNA（5μg）
Lane3：ISOGEN II 抽提高分子RNA（5μg）
Lane4：ISOGEN II 抽提小RNA（0.5μg）
12%聚丙烯酰胺（Urea变性）EtBr染色
ISOGEN II 能抽提和ISOGEN同等的总RNA
ISOGEN II 能对200base以上的高分子RNA和10~200base的小RNA进行分离
Data 2 ISOGEN和ISOGEN II抽提的总RNA用“3D-Gene”Human miRNA Oligo chip（东来株式会社）分析。
ISOGEN II比ISOGEN能更完整地抽提miRNA
Data 3 RT-PCR
用ISOGEN和ISOGEN II从HeLa细胞中提取出RNA并定性，再用PT-PCR检测出β-Actin基因。同时进行没有经过RT反应的对照实验。
1：模板RNA量 500ng
2：模板RNA量 100ng
3：模板RNA量 20mg
M：Gene Ladder 100
实验证明以ISOGEN II抽提的RNA与以ISOGEN抽提的RNA相比，DNA残留更少。
Data 4 RNA提取量的参考值
分别用 “大RNA的提取”和“总RNA的提取”方案得到的RNA的提取量的参考值如下：
|
试剂 |
大RNA的提取 |
总RNA的提取 |
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|
组织 |
肝脏 |
5~7 g RNA/mg tissue |
6~8 μg RNA/mg tissue |
|
肾脏、脾脏 |
3~4 g RNA/mg tissue |
3~4 μg RNA/mg tissue |
|
|
骨骼肌、脑、肺 |
0.5~1.5 g RNA/mg tissue |
0.5~1.5 μg RNA/mg tissue |
|
|
胎盘 |
1~3 g RNA/mg tissue |
1~3 μg RNA/mg tissue |
|
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培养细胞 |
上皮细胞 |
5~8 g RNA/108 cells |
5~10 μg RNA/106 cells |
|
成纤维细胞 |
3~5 g RNA/108 cells |
4~6 μg RNA/106 cells |
|
◆注意事项
● 本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解。
请不要使用。
● 因为 ISOGEN II是医药用外有害物质（苯酚制剂），所以请小心操作。
● 使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
● 请不要吸入蒸汽，进行充分的通风。
● 如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗至少15分钟，并前往医院就诊。
● 本品的操作请按照手册记载的内容进行
● 对于和手册记载内容不同的操作带来的事故，日本基因不负任何责任。
◆相关产品
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
备注 |
|
315-02504 |
ISOGEN |
10mL |
RNA抽提用试剂 医药用外有害物质 |
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317-02503 |
50mL |
||
|
311-02501 |
100mL |
||
|
– |
200mL |
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|
317-02623 |
ISOGEN-LS |
10mL |
|
|
311-02621 |
100mL |
|
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
备注 |
|
298-68001 |
Target mRNA Cloning Kit Wako |
10次用 |
miRNA的目标mRNA克隆试剂盒 |
|
291-70201 |
microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 |
10次用 |
Argonaute（Ago）根据免疫沉淀的microRNA特异纯化试剂盒 |
|
292-66701 |
microRNA Isolation Kit, Human Ago2 |
10次用 |
|
|
292-67301 |
microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2 |
10次用 |
|
|
297-70301 |
microRNA Isolation Kit, Human Ago3 |
10次用 |
|
|
015-22411 |
Anti Ago1, Monoclonal Antibody (2A7) |
50μL |
抗Argonaute（Ago）抗体 |
|
014-22023 |
Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody |
50μL |
|
|
018-22021 |
100μL |
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|
011-22033 |
Anti Human Ago2, Monoclonal Antibody |
50μL |
|
|
015-22031 |
100μL |
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|
290-66501 |
microRNA Cloning Kit Wako |
8次用 |
含热稳定ligase高效小RNA克隆试剂盒 |
参考文献
| 1. |
Chomczynski, P. Reagents and methods for isolation of purified RNA, US and International Patents Pending. |
| 2. |
Chomczynski, P. and Sacchi, N:Single step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol- chloroformextraction”, Anal. Biochem., 162, 156-159（1987） |
| 3. |
Chomczynski, P.:A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples”, Biotechniques, 15, 532-537(1993) |
| 4. |
Wilfinger, W., Mackey, K. and Chomczynski, P.:Effect of pH and ionic strength on thespectrophotometric assessment of nucleic acid purity”, Biotechniques, 22, 474-481(1997) |
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 311-07361 | ISOGEN Ⅱ 总RNA及小RNA提取试剂 |
100mL | 医药用外有害物质 | – |
| 314-07351 | ISOGEN II（with Ethachinmate） | 10mL | 医药用外有害物质 | – |
ISOGEN、ISOGEN-LS
RNA提取试剂
ISOGEN、ISOGEN-LS 
RNA提取试剂
ISOGEN
（从左到右200 ml,100 ml, 50 ml）
ISOGEN
ISOGEN是从人、动物、植物及细菌提取RNA试剂。可通过液相分离方法从同一样本中分离DNA及蛋白质。可通过一系列的操作分离RNA、DNA、蛋白质，有助于分析珍贵的样本。操作简单，便于样本数量较多的检测。
适用样本：组织、细胞、植物、细菌
ISOGEN-LS
ISOGEN-LS是从血液或血清等容量较大（＞100 µl：使用1.5 ml塑料（离心）管进行处理），难以浓缩的液体样本中提取RNA的试剂。是将ISOGEN针对液体试剂进行改良。除了加入到样本的ISOGEN-LS量比不一样以外，得到的结果与使用 ISOGEN时一样。
适用样本： 全血、液体样本
◆原理
本产品是含有苯酚及硫氰酸胍的均一液体。往样本加入ISOGEN或ISOGEN-LS后使其溶解或均匀化，再加入氯仿进行离心分离，匀浆就会分离成水相、中间相及有机相。水相中只有RNA，DNA及蛋白质存在于中间相及其以下。首先，取出水相，加入异丙醇使RNA沉淀。往剩余的中间相及有机相里加入乙醇使DNA沉淀，加入异丙醇使蛋白质沉淀，从而依次分离出RNA、DNA及蛋白质。
◆特点
・主要成分为苯酚及硫氰酸胍的均一溶液
・便于液层分离的染色溶液（ISOGEN : 蓝色、ISOGEN-LS : 红色）
・可通过一系列的操作分离RNA、DNA、蛋白质
・操作简单、迅速 （RNA分离用时: 约1个小时、DNA : +2小时、蛋白质: +2.5小时）
・高回收率、组织及培养细胞样本请使用ISOGEN
・血液等容量大，难以浓缩的液体样本请使用ISOGEN-LS
◆产品列表
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ISOGEN （10 ml、50 ml、100 ml、200 ml） |
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产品 |
容量 |
保存 |
备注 |
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ISOGEN |
1瓶 |
2～10°C |
非医疗用，剧毒物 |
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ISOGEN-LS （10 ml、100 ml） |
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产品 |
容量 |
保存 |
备注 |
|
ISOGEN-LS |
1瓶 |
2～10°C |
非医疗用，剧毒物 |
运输方法
本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。
◆使用案例
操作步骤
|
RNA分离 |
DNA分离 |
蛋白质分离 |
|
操作流程1-1 RNA分离 |
操作流程2 DNA分离 |
操作流程3 蛋白质分离 |
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操作流程1-2 微量样本RNA分离 |
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|
操作流程1-3 植物样本RNA分离 |
ISOGEN及ISOGEN-LS的操作流程请参考产品说明。
实验数据一览
· 取量的标准
· ＜ISOGEN＞ISOGEN法与硫氰酸胍-氯化铯（GT-CsCl）超速离心法比较
· ＜ISOGEN＞ISOGEN法分离总RNA电泳
· ＜ISOGEN＞ISOGEN法分离RNA、DNA及蛋白质Northern、Southern、Western印迹法
· ＜ISOGEN-LS＞ISOGEN法分离hepatitis C viral （HCV） RNA的RT-PCR
◆注意事项
· 如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。
· ISOGEN及ISOGEN-LS是非医疗用医剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。
· 使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
· 如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。
· 请按照说明书进行操作。
· 对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。
◆备注
本产品是实验研究用试剂，请勿用作医疗用途。
◆资料 Data Sheet
产品手册
· ISOGEN,ISOGEN-LS 产品说明书（H18年7月修订版） （PDF 92KB）
SDS（Safety Data Sheet）
· ISOGEN 安全标签（PDF）
· ISOGEN-LS 安全标签（PDF）
◆相关产品
· ISOGEN II total RNA及small RNA抽提试剂
· ISOGEN with Spin Column RNA抽提试剂
· Ethachinmate 用于从微量样本抽提RNA的酒精沉淀共沉淀剂
· 缓冲剂
· Deoxyribonuclease（RT Grade）for Heat Stop
· Deoxyribonuclease（RT Grade）
· DNase I (RNase free)
Q: 从革兰氏阳性菌提取RNA的方法
A: 总体来说，革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，普通的操作流程回收到的RNA的量比革兰氏阴性菌少。因此，使用玻璃珠（0.1 – 0.15 mm）破坏革兰氏阳性菌的细胞壁后，用ISOGEN提取RNA。
使用ISOGEN从革兰氏阳性菌抽提RNA – CN.pdf
Q: 从酵母提取RNA的方法
A: 酵母的细胞壁较厚，仅仅进行普通的ISOGEN/ISOGEN-LS处理，难以回收RNA。因此，使用作用于β -1,3结合的葡萄糖聚合物的Zymolyase对细胞壁进行溶解，提取RNA。
使用ISOGEN／ISOGEN-LS从酵母抽提RNA -CN.pdf
Q: 从骨头提取RNA的方法
A: 使用ISOGEN从大鼠脊椎提取总 RNA，并检测其回收量及纯度。
使用ISOGEN从骨头抽提RNA – CN.pdf
Q: 可以分开提取小RNA和高分子RNA吗？
A: 本产品无法分开回收小RNA和高分子RNA，但是本产品的升级产品ISOGEN II可以分开回收高分子RNA（＞200 bases）和小RNA（＜200 bases）。
分离操作流程（前往ISOGEN II 产品页面链接）
[ 1 ] Chomczynski, P. and Sacchi, N.: Anal.Biochem., 162, 156 （1987）
[ 2 ] Chomczynski, P.: BioTechniques, 15, 532 （1993）
[ 3 ] Chomczynski, P., Bowser-Finn, R. and Sabatini, N.: The Jounal of NIH Research, 6,83 （1994）
[ 4 ] Chomczynski, P. and Mackey, K., BioTechniques, 19, 942-945 （1995）
License
Licensed by Molecular Research Center, Inc.
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 | 产品价格 |
| 315-02504 | ISOGEN | 10 ml | – | – |
| 317-02503 | ISOGEN | 50 ml | – | – |
| 311-02501 | ISOGEN | 100 ml | – | – |
| – | ISOGEN | 200 ml | – | – |
| 317-02623 | ISOGEN-LS | 10 ml | – | – |
| 311-02621 | ISOGEN-LS | 100 ml | – | – |