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E.coli HST08 Premium Competent Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年1月8日由whatman中国官网

E.coli HST08 Premium Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9128	E.coli HST08 Premium Competent Cells	100 μl × 10	￥401

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■ 制品内容 E.coli HST08 Premium Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:     2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出具有很高转化效率的E. coli HST08 Premium Competent Cells。另外，E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA (这些基因是大肠杆菌切除外源甲基化DNA所必需的基因) 缺失的菌株，这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及亚克隆。当和较大质粒一起使用时，也可维持较高转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和基因文库构建时，可与TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。 *：与其他相同基因型的感受态细胞相比较。 对于pUC系列质粒，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选阳性克隆。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ-

■ 保存

-80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

[1] 转化效率 转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入不超过10 ng的高纯度DNA样品。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，转化效率可能会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O，用1 N KOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

·L-plates： 10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

6. 当使用X-Gal 时，按照以下操作进行：

将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml 的比例加入到agar media中。

7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-08-07 16:23:37

E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年1月8日由whatman中国官网

E.coli HST04 dam–/dcm– Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9129	E.coli HST04 dam–/dcm– Competent Cells	100 μl × 10	￥407

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■ 制品内容 E.coli HST04 dam–/dcm– Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 plasmid (0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:      2%   Ttryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara公司在Hanahan’s method基础上进行了改良，制备出E. coli HST04 dam–/dcm– Competent Cells，当用1 ng pUC19转化100 μl细胞时，转化效率＞1×106 cfu/μg。 E.coli HST04 dam–/dcm–是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，使DNA不被甲基化。使用本菌株转化所得到的质粒，可以被对dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。 另外，dam、recA双重突变的菌株是致死的，本菌株为recA+菌株。因此，易与带有同源序列的外源DNA发生重组。本制品只适用于转化已经构筑好的质粒, 而不适用于常规的克隆转化。

■ 细胞浓度

1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HST04 dam–/dcm–： F–, ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15], rpsL( str), thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrA, dam, dcm

■ 保存

-80℃。 注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 106 colonies/μg pUC19 plasmid

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度质粒DNA不要超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，转化效率可能会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O，用1 N KOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

·L-plates： 10 g Tryptone，5 g Yeast extract，5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

6. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-12-14 14:12:25

E.coli HST08 Premium Electro-Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年1月8日由whatman中国官网

E.coli HST08 Premium Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9028	E.coli HST08 Premium Electro-Cells	50 μl × 10	￥636

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■ 制品内容 E.coli HST08 Premium Electro-Cells 50 μl × 10 pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:       2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E. coli HST08 Premium Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞内的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E.coli HST08是mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA缺失的菌株，这使得其可广泛应用于甲基化质粒的制备、基因文库的制作以及BAC文库的构建。即便转化较大的质粒，也可维持较高的转化效率和菌落生长率*。10 kb以上长片段DNA克隆和构建基因文库时，可与Takara DNA Ligation Kit LONG (Code No. : 6024) 一起使用，效果很好。 *：与其他相同基因型的感受态细胞相比较。 对于pUC系列质粒，可通过β-半乳糖苷酶的α-互补性，在培养基中添加X-gal进行蓝白筛选，以筛选阳性克隆。 X-Gal：5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli HST08 Premium： F-, endA1 , supE44 , thi -1 , recA1 , relA1, gyrA96 , phoA , Φ80d lacZ ΔM15,Δ(lacZYA - argF)U169 , Δ(mrr - hsdRMS - mcrBC), ΔmcrA , λ-

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

[1] 转化效率 转入10 pg 的pUC19，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 colonies/μg pUC19 plasmid [2] β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-agar plate上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，高纯度样品DNA添加量不要超过10 ng，否则会降低转化效率。

3. 当使用50 μl Electro-cells时，DNA溶液添加量不要超过5 μl，否则会降低转化效率。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，但转化效率会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl/1 L water，用1 N NaOH调整pH7.5左右并高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MgSO4·7H2O/1 L water，用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。

6. 当使用X-Gal时，按照以下操作进行：

·将20 mg /ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到agar media中。

7. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-12-31 12:14:07