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sgRNA体外转录和筛选酶试剂盒Takara

发表于由

sgRNA体外转录和筛选
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632635 Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit 50 Rxns ￥8,771
￥7,017 		sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
Clontech 632636 Guide-it Complete sgRNA Screening System 50 Rxns ￥10,701
￥8,561 		sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
Clontech 632639 Guide-it sgRNA Screening Kit 50 Rxns ￥4,810
￥3,848 		sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选
Clontech 632638 Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit 50 Rxns ￥4,439 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选 sgRNA体外转录和筛选

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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sgRNA的体外转录和筛选试剂盒
In Vitro Transcription and Screening Kits for sgRNA
我们的Guide-it in vitro transcription and screening kits for sgRNA 包括四个试剂盒，用于CRISPR/Cas9 研究中单链向导RNAs(single guide RNAs ,sgRNAs)的简单制备、清理和评价。每个试剂盒提供足够 50次反应的材料。
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 被用于通过体外转录制备大量的 sgRNAs。这个试剂盒同样包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638), 被用于快速纯化参与体外转录（vitro transcription，IVT) 反应的sgRNA。从这个试剂盒纯化后的 sgRNA 可以直接被用于转染、电穿孔以及体外剪切实验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639) 可以在Cas9介导的基因编辑相关研究前，先在体外检测不同sgRNAs的效率，这样就不必浪费时间将无效的sgRNAs转入您的细胞了。使用这个试剂盒，首先通过PCR产生包含sgRNA靶点的模板，随后再与您想测试的sgRNA以及重组Cas9核酸酶结合。Cas9 核酸酶剪切模板的效率可以通过使用琼脂糖凝胶电泳检测。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636) 包含以上提到的全部试剂盒组分，可以被用来合成和检测sgRNAs效率。该试剂盒包含了用于体外转录和纯化sgRNAs，以及检测重组Cas9核酸酶对PCR靶向片段剪切效率的所有试剂。
 
■ 产品特点
· 共有4个试剂盒，可用于Cas9介导的基因编辑研究中sgRNA (single guide RNA)的简单制备、清洁以及效率评价。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于产生高滴度病毒。
· 使用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit, Code No. 632638)体外转录和纯化大量sgRNA，用于转染或体外筛选。
· 使用Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638) 对IVT 反应后sgRNA的快速纯化，直接用于转染、电穿孔以及体外剪切试验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)包含高质量的重组Cas9蛋白质。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636)是Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 和 Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)的组合，允许您进行sgRNA制备和对预设靶点体外剪切能力的测试。
 
■ 实验例
sgRNA体外转录和筛选
图1. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening System试剂盒组成和操作流程
 
sgRNA体外转录和筛选
图2. 采用Guide-it试剂盒制备高产量single guide RNA (sgRNA)和重组Cas9蛋白质剪切靶位点检测sgRNA剪切效率操作步骤概要
 
sgRNA体外转录和筛选
图3. Guide-it试剂和同类产品所制备的sgRNA品质比较
采用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的所有sgRNAs均为单一条带，而其他公司同类产品制备的sgRNAs均可观察到杂带，因此Guide-it试剂盒所制备的sgRNAs品质更高。
* 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
sgRNA体外转录和筛选
图4. 以不同基因为靶标制备的sgRNA产量和品质比较
采用Guide-it Complete sgRNA Screening System以多个基因为靶基因制备sgRNA。
Panel A. 将20 μl sgRNA体外转录（IVT）反应液置于37°C孵育4 hr，采用NanoDrop分光光度计检测所制备产生的sgRNA产量。
Panel B. 采用安捷伦生物分析仪分析分析每一个sgRNA IVT反应液，检测sgRNA质量。
 
■ 产品组份
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 50 rxns)
· 1 each Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2 (Code No. 632637; 50 rxns; Not sold separately)
    ○ 50 μl Guide-it Scaffold Template (1 ng/μl)
    ○ 350 μl Guide-it In Vitro Transcription Buffer
    ○ 1 ml RNase Free Water
    ○ 500 μl RNase Free Water
    ○ 150 μl Guide-it T7 Polymerase Mix (33 U/μl)
    ○ 625 μl PrimeSTAR Max Premix (2X)
    ○ 100 μl Recombinant DNase I (RNase-Free) (5 U/μl)
· 1 each Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
    ○ 13 ml RNase Free Water
    ○ 3 ml IVT Binding Buffer
    ○ 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
    ○ 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
    ○ 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
· 13 ml RNase Free Water
· 3 ml IVT Binding Buffer
· 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
· 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
· 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639; 50 rxns)
· 25 μl Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease (500 ng/μl)
· 50 μl 15X Cas9 Reaction Buffer
· 50 μl 15X BSA
· 5 μl Control sgRNA (50 ng/μl)
· 25 μl Control Fragment (20 ng/μl)
· 50 μl Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)
· 1.25 ml 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· 5 ml RNase Free Water
· 5 ml Extraction Buffer 1
· 0.5 ml Extraction Buffer 2

Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636; 50 rxns)
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635)
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)

 
 
 
■ 关联资料
点击查看Guide-it™ sgRNA体外转录和筛选系统宣传页 sgRNA体外转录和筛选
 
 
产品详情请点击：sgRNA体外转录和筛选
 

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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)酶试剂盒Takara

发表于由

重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 3 × 100 μg ￥6,845 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
Clontech 632641 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) 100 μg ￥2,701 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
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Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)（Code No. 632641/632640）产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ，产品内容没有发生变化。（2021年5月）
 
 
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重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) → 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) → 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)            
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降低脱靶效应，可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it™ Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较，脱靶效应受到明显抑制
· NLS（核定位信号）有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明：
Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes，适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低，特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较，避免了残留Cas9基因的持续表达，有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程，C末端的NLS（核定位信号）可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物，sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit（Code No. 632635）或者Guide-it Complete sgRNA Screening System（Code No. 632636）。
 
■ 实验例：
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复（HDR）效率
Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34＋造血干细胞中检测同源重组修复（HDR）效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中，包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析，确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点，因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合，通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞，采用Guide-it Mutation Detection Kit（Code No. 631448）确认突变导入效率，％即表示基因编辑效率。如图所示，Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
－70℃
（注意）避免反复冻融。首次溶解之后，建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品（主要产品）
· 电穿孔装置：
Neon Transfection System（Thermo Fisher Scientific）或者 4-D Nucleofector System（Lonza）
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit（Code No. 632635）：用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System（Code No. 632636）：用于确认制备的sgRNA的有效性
 
 
产品详情请点击：重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
 
 
■ 关联资料
相关资料：
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页面更新：2021-07-19 12:52:26

基因编辑后突变检测酶试剂盒Takara

发表于由

基因编辑后突变检测
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 631443 Guide-it Mutation Detection Kit 100 Rxns ￥5,771
￥4,617 		基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测
Clontech 631448 Guide-it Mutation Detection Kit 25 Rxns ￥2,609
￥2,087 		基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测 基因编辑后突变检测

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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          基因敲除    
          ↗ 基因编辑后突变检测 → 基因编辑后突变检测 → 基因编辑后突变检测
基因编辑后突变检测 → 基因编辑后突变检测 → 基因编辑后突变检测            
  基因敲入        
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Guide-it™突变检测试剂盒可以用于确认由CRISPR/Cas9、锌指核酸酶(ZFNs)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)等工程核酸酶所导入的基因突变。本试剂盒采用简单的PCR方法即可简便快速地检测出基因突变。性能卓越的 Terra™ PCR Direct Polymerase Mix可直接以细胞为起始进行扩增，无需提取基因组DNA。扩增产物经过变性及退火处理后形成不完全匹配DNA，Guide-it解离酶会剪切错配DNA部分，之后通过琼脂糖凝胶电泳确认剪切产物。
 
■ 特点
· 识别哺乳动物细胞中插入或者缺失突变的简便方法
· 可直接以细胞为起始进行PCR扩增，与同类产品相比较更为快速有效
· 完整试剂盒: 包含Guide-it Resolvase、Terra PCR Direct Polymerase和所有缓冲液
· 规格: 可提供100次和25次反应规格，25次反应规格可用于小规模基因编辑实验
· 可用于CRISPR/Cas9、ZFNs、TALENs下游研究突变序列确认
 
■ 操作流程
基因编辑后突变检测
 
■ 实验例
基因编辑后突变检测
 

图1. 比较Guide-it和Surveyor方法。转染表达Cas9核酸酶的质粒和特异作用于AAVS1位点的sgRNA至293T细胞，转染48 hr 后收集细胞，将其与未经转染的细胞按照不同比例*进行混合，分别进行突变导入检测。采用Terra PCR Direct Polymerase Mix扩增含有AAVS1位点的目的片段并纯化其产物，之后分别采用Guide-it解离酶和Cel1酶（Surveyor assay）进行剪切。采用Guide-it解离酶剪切后条带清新易于识别，而Surveyor assay剪切后则显示明显的弥散，这样使得不容易测定突变效率并且低水平突变导入很难检测得到。*泳道1-6 : 100％, 80％, 60％, 40％, 20％, 0％（转染细胞的比例）
 
 
■ 产品组份
  100 次（产品编号 631443） 25 次（产品编号 631448）
 Extraction Buffer 1 5 ml × 4    5 ml
 Extraction Buffer 2      2 ml 500 μl
 Guide-it Resolvase   100 μl  25 μl
 Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)   100 μl  25 μl
 2 × Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP) 1 ml × 3 750 μl
  PCR-Grade Water 1 ml × 5    1 ml
 
■ 保存
－20℃
 
 
产品详情请点击：基因编辑后突变检测
 
 
■ 关联资料
Guide-it™ 突变检测试剂盒宣传页：
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页面更新：2021-03-11 09:21:22

Cas9蛋白质检测抗体酶试剂盒Takara

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Cas9蛋白质检测抗体
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632606 Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody 3 x 100 μl ￥8,005 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
Clontech 632607 Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody 100 μl ￥2,669 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
Clontech 632627 Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1) 3 × 100 μg ￥6,786 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
Clontech 632628 Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1) 100 μg ￥2,511 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体 Cas9蛋白质检测抗体
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Cas9蛋白质检测抗体 → Cas9蛋白质检测抗体 → Cas9蛋白质检测抗体 → Cas9蛋白质检测抗体 → Cas9蛋白质检测抗体
 
 
Cas9蛋白质检测抗体
· 重组Cas9蛋白质检测用单克隆抗体/多克隆抗体
· 多克隆抗体可识别野生型Cas9蛋白质和切口酶突变体（单克隆抗体还未进行测验）
· 高特异性：检测哺乳动物细胞裂解液样品时背景很低
· 高灵敏度：这两种抗体均可检测低于1 ng的重组Cas9蛋白质
 
■ 产品说明：
Takara Bio提供的单克隆抗体和多克隆抗体可用于检测Streptococcus pyogenes来源的重组Cas9蛋白质。
Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1)是以Streptococcus pyogenes来源的全长重组Cas9蛋白质为抗原，采用杂交瘤细胞制备生产的小鼠源抗体。用于Western blot检测时，此抗体可以识别细菌和哺乳动物细胞裂解液样品中低于1 ng的重组Cas9蛋白质。
Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody是用于检测Streptococcus pyogenes来源的重组Cas9蛋白质的兔源抗体。此抗体可以识别Cas9核酸酶的3种突变体：野生型Cas9蛋白质、Cas9切口酶和Cas9核酸酶-缺陷型突变体。此抗体具备高特异性和高灵敏度，检测哺乳动物细胞样品时其背景很低，用于Western blot检测时可识别低至0.5 ng的重组Cas9蛋白质。
 
Cas9蛋白质检测抗体
图1． Western blot评估Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody检测灵敏度
 
0.15-20.0 ng重组Cas9蛋白质（rCas9）电泳后采用Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody(1:1,000稀释)进行Western Blot检测。采用HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody（1:5,000 稀释）作为二抗，ECL作为检测试剂。HT1080、HEK293细胞裂解液作为阴性对照。
 
Lane 1：HT1080細胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 6：rCas9 protein 1.25 ng
Lane 2：HEK293細胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 7：rCas9 protein 2.5 ng
Lane 3：rCas9 protein 0.15 ng
 Lane 8：rCas9 protein 5.0 ng
Lane 4：rCas9 protein 0.30 ng
 Lane 9：rCas9 protein 10.0 ng
Lane 5：rCas9 protein 0.625 ng
 Lane 10：rCas9 protein 20.0 ng
 
Cas9蛋白质检测抗体
图2．Western blot评估Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody检测特异性
 
制备多种未转染细胞和表达Cas9重组蛋白质的HEK 293细胞（CMV启动子）的细胞裂解液，以细胞裂解液为样品通过Western blot方法评估Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody检测特异性。1 ng重组Cas9蛋白质（rCas9）作为阳性对照。Guide-it Cas9 Polyclonal Antibody (1:1,000稀释)作为一抗，HRP-conjugated goat anti-rabbit secondary antibody（1:5,000 稀释）作为二抗，ECL作为检测试剂。
 
Lane 1：HepG2细胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 8：裂解缓冲液
Lane 2：CHO-K1细胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 9：rCas9 protein 1 ng
Lane 3：HeLa细胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 10：Cas9表达HEK293细胞裂解液（2.0×103 cells）
Lane 4：MCF7细胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 11：Cas9表达HEK293细胞裂解液（5.0×103 cells）
Lane 5：HEK293细胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 12：Cas9表达HEK293细胞裂解液（1.0×104 cells）
Lane 6：HT1080细胞裂解液（3.5×104 cells）
 Lane 13：Cas9表达HEK293细胞裂解液（1.5×104 cells）
Lane 7：NIH3T3细胞裂解液（3.5×104 cells）
  
 
Cas9蛋白质检测抗体
图3. Western blot评估Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1) 检测灵敏度
 
A. 1～5 ng重组Cas9蛋白质(rCas9）电泳后采用Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1）（1：3,000稀释）进行Western Blot检测。HEK293细胞裂解液作为阴性对照。
B. 以表达Cas9重组蛋白质的HEK 293细胞的细胞裂解液为样品，采用Guide-it Cas9 Monoclonal Antibody (Clone TG8C1）（1：3,000稀释）进行Western Blot检测。HT1080、HEK293细胞裂解液作为阴性对照。
 
■ 保存
－20℃
 
■ 用途
Western blot（1：1,000～1：5,000稀释）
 
 
产品详情请点击：Cas9蛋白质检测抗体
 
 
 

页面更新：2020-01-02 09:29:12

sgRNA体外转录和筛选酶试剂盒Takara

发表于由

sgRNA体外转录和筛选
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
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sgRNA的体外转录和筛选试剂盒
In Vitro Transcription and Screening Kits for sgRNA
我们的Guide-it in vitro transcription and screening kits for sgRNA 包括四个试剂盒，用于CRISPR/Cas9 研究中单链向导RNAs(single guide RNAs ,sgRNAs)的简单制备、清理和评价。每个试剂盒提供足够 50次反应的材料。
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 被用于通过体外转录制备大量的 sgRNAs。这个试剂盒同样包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638), 被用于快速纯化参与体外转录（vitro transcription，IVT) 反应的sgRNA。从这个试剂盒纯化后的 sgRNA 可以直接被用于转染、电穿孔以及体外剪切实验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639) 可以在Cas9介导的基因编辑相关研究前，先在体外检测不同sgRNAs的效率，这样就不必浪费时间将无效的sgRNAs转入您的细胞了。使用这个试剂盒，首先通过PCR产生包含sgRNA靶点的模板，随后再与您想测试的sgRNA以及重组Cas9核酸酶结合。Cas9 核酸酶剪切模板的效率可以通过使用琼脂糖凝胶电泳检测。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636) 包含以上提到的全部试剂盒组分，可以被用来合成和检测sgRNAs效率。该试剂盒包含了用于体外转录和纯化sgRNAs，以及检测重组Cas9核酸酶对PCR靶向片段剪切效率的所有试剂。
 
■ 产品特点
· 共有4个试剂盒，可用于Cas9介导的基因编辑研究中sgRNA (single guide RNA)的简单制备、清洁以及效率评价。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于产生高滴度病毒。
· 使用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 包括Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit, Code No. 632638)体外转录和纯化大量sgRNA，用于转染或体外筛选。
· 使用Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638) 对IVT 反应后sgRNA的快速纯化，直接用于转染、电穿孔以及体外剪切试验。
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)包含高质量的重组Cas9蛋白质。
· Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636)是Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635) 和 Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)的组合，允许您进行sgRNA制备和对预设靶点体外剪切能力的测试。
 
■ 实验例
sgRNA体外转录和筛选
图1. Guide-it sgRNA In Vitro Transcription and Screening System试剂盒组成和操作流程
 
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图2. 采用Guide-it试剂盒制备高产量single guide RNA (sgRNA)和重组Cas9蛋白质剪切靶位点检测sgRNA剪切效率操作步骤概要
 
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图3. Guide-it试剂和同类产品所制备的sgRNA品质比较
采用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的所有sgRNAs均为单一条带，而其他公司同类产品制备的sgRNAs均可观察到杂带，因此Guide-it试剂盒所制备的sgRNAs品质更高。
* 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
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图4. 以不同基因为靶标制备的sgRNA产量和品质比较
采用Guide-it Complete sgRNA Screening System以多个基因为靶基因制备sgRNA。
Panel A. 将20 μl sgRNA体外转录（IVT）反应液置于37°C孵育4 hr，采用NanoDrop分光光度计检测所制备产生的sgRNA产量。
Panel B. 采用安捷伦生物分析仪分析分析每一个sgRNA IVT反应液，检测sgRNA质量。
 
■ 产品组份
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 50 rxns)
· 1 each Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Components v2 (Code No. 632637; 50 rxns; Not sold separately)
    ○ 50 μl Guide-it Scaffold Template (1 ng/μl)
    ○ 350 μl Guide-it In Vitro Transcription Buffer
    ○ 1 ml RNase Free Water
    ○ 500 μl RNase Free Water
    ○ 150 μl Guide-it T7 Polymerase Mix (33 U/μl)
    ○ 625 μl PrimeSTAR Max Premix (2X)
    ○ 100 μl Recombinant DNase I (RNase-Free) (5 U/μl)
· 1 each Guide-it IVT RNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
    ○ 13 ml RNase Free Water
    ○ 3 ml IVT Binding Buffer
    ○ 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
    ○ 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
    ○ 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Clean-Up Kit (Code No. 632638; 50 rxns)
· 13 ml RNase Free Water
· 3 ml IVT Binding Buffer
· 50 IVT RNA Clean-Up Spin Columns
· 2 x 6 ml IVT Wash Buffer
· 50 Collection Tubes (2 ml)

Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639; 50 rxns)
· 25 μl Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease (500 ng/μl)
· 50 μl 15X Cas9 Reaction Buffer
· 50 μl 15X BSA
· 5 μl Control sgRNA (50 ng/μl)
· 25 μl Control Fragment (20 ng/μl)
· 50 μl Terra PCR Direct Polymerase Mix (1.25 U/μl)
· 1.25 ml 2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg2+, dNTP)
· 5 ml RNase Free Water
· 5 ml Extraction Buffer 1
· 0.5 ml Extraction Buffer 2

Guide-it Complete sgRNA Screening System (Code No. 632636; 50 rxns)
· Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635)
· Guide-it sgRNA Screening Kit (Code No. 632639)

 
 
 
■ 关联资料
点击查看Guide-it™ sgRNA体外转录和筛选系统宣传页 sgRNA体外转录和筛选
 
 
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页面更新：2020-03-05 10:01:24

重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)酶试剂盒Takara

发表于由

重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Clontech 632640 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) 3 × 100 μg ￥6,845 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
Clontech 632641 Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μ) 100 μg ￥2,701 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
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Guide-it Recombinant Cas9 (Electroporation Ready)（Code No. 632641/632640）产品名称变更为Guide-it Recombinant Cas9 (3 μg/μl) ，产品内容没有发生变化。（2021年5月）
 
 
          基因敲除    
          ↗ 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) → 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) → 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) → 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl) → 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)            
  基因敲入        
          ↘ 重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)        
 
 
降低脱靶效应，可用于in vivo基因编辑实验
Guide-it™ Recombinant Cas9 (3 μg/μl)
· 适用于电穿孔方法的低甘油含量、高浓度的Cas9蛋白质溶液
· 与质粒导入系统相比较，脱靶效应受到明显抑制
· NLS（核定位信号）有助于实现快速高效突变导入
· 与Guide-it Complete sgRNA Screening System组合使用实现高效率的基因编辑
 
■ 产品说明：
Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）是来源于野生型酿脓链球菌Streptococcus pyogenes，适用于CRISPR/Cas9基因编辑实验的重组Cas9蛋白质溶液。
高浓度Cas9蛋白质溶液中甘油浓度比其他公司低，特别适用于电穿孔导入方法。与借助质粒导入Cas9基因序列方法相比较，避免了残留Cas9基因的持续表达，有效抑制了脱靶效应。
无需经过蛋白质转录·翻译·表达过程，C末端的NLS（核定位信号）可以实现快速有效的突变导入。
Cas9导入细胞首先需要形成Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物，sgRNA制备推荐使用Guide-it sgRNA In VitroTranscription Kit（Code No. 632635）或者Guide-it Complete sgRNA Screening System（Code No. 632636）。
 
■ 实验例：
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图1. AAVS1或者CXCR4基因同源重组修复（HDR）效率
Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）和修复模板复合物通过电穿孔的方式导入至CD34＋造血干细胞中检测同源重组修复（HDR）效率。将包含Hind III酶切位点的修复模板插入至AAVS1 基因中，包含Hind III和BamH I酶切位点的修复模板插入至CXCR4基因中。之后通过对细胞内靶基因进行PCR扩增和限制酶剪切分析，确认突变导入效率。基因编辑效率标注在凝胶阳性孔处。在基因编辑前野生型CXCR4基因已包含1处BamH I位点，因此BamH I剪切CXCR4基因后额外多显示一条条带。
 
重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
图2. 不同公司Cas9产品在hiPS細胞中基因敲除效率比较
剪切后电泳条带的强弱可以半定量估计发生基因编辑细胞的百分数。Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）与Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit制备的sgRNA相结合，通过电穿孔的方法导入Cellartis hiPSC-18细胞，采用Guide-it Mutation Detection Kit（Code No. 631448）确认突变导入效率，％即表示基因编辑效率。如图所示，Guide-it Recombinant Cas9（3 μg/μl）在多数靶基因位点均显示有效的基因编辑。
  * 比较结果来自于Takara Bio USA, Inc.
 
 
■ 浓度
3 μg/μl
 
■ 保存
－70℃
（注意）避免反复冻融。首次溶解之后，建议按照使用量分装保存。
 
■ 所需要的其它产品（主要产品）
· 电穿孔装置：
Neon Transfection System（Thermo Fisher Scientific）或者 4-D Nucleofector System（Lonza）
*各装置的导入条件请阅读使用说明书。

· sgRNA制备及筛选
Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit（Code No. 632635）：用于sgRNA制备及纯化
Guide-it Complete sgRNA Screening System（Code No. 632636）：用于确认制备的sgRNA的有效性
 
 
产品详情请点击：重组Cas9蛋白质 (3 μg/μl)
 
 
■ 关联资料
相关资料：
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