GSH Quantification Kit II G263- DOJINDO

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氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II G263

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶，被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素，但在氧化应激中，诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II	G263	氧化型/还原型谷胱甘肽定量
Total Glutathione Quantification Kit试剂盒	T419	总谷胱甘肽检测
DTNB试剂	D029	氧化应激检测
2-PDS试剂	P016	总谷胱甘肽GSH检测
4-PDS试剂	P017	总谷胱甘肽GSH检测

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。

日本同仁化学氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号：G263- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号：G263

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒

GSSG/GSH Quantification Kit II

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 细胞、组织样品均可检测

● 操作更加简单

● 试剂盒稳定性高

下载说明书

选择规格：

100tests

氧化应激与自由基检测方案

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号：G263

活动进行中

概述

优势

操作步骤

注意事项

其他材料

常见问题Q&A

参考文献

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概述

谷胱甘肽 (γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸) 是体内的一种三肽化合物，它参与抗氧化和药物代谢的过程，还是谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶、巯基转移酶等的底物。谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在，但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GSSG)。因此GSH/GSSG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。

优势

1）可以进行氧化型谷胱甘肽（GSSG）、还原型谷胱甘肽（GSH）的分类定量。

2）操作简单，且可以同时检测多个样品。

操作步骤

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号：G263

详见说明书

注意事项

试剂开封后各溶液的保存方法及保存时间

Substrate Working Solution：溶解后在-20℃可保存2个月

GSH Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月

GSSG Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月

Enzyme Working Solution：稀释后在4℃可保存2个月

Coenzyme Working Solution：用超纯水溶解后在-20℃可保存2个月

Masking Solution：用乙醇溶解后在4℃可保存2个月

其他材料

酶标仪（405或415 nm）、20 µl和200 µl移液器，多通道移液器、 96孔板、 5-磺基水杨酸 (SSA) 溶液（点击购买）、乙醇

常见问题Q&A

Q1:如何计算GSH浓度？

A1:根据标准曲线得到总谷胱甘肽（GSH+GSSG）的浓度，使用以下公式计算GSH浓度。
GSH浓度=总谷胱甘肽浓度-GSSG浓度×2
GSSG（氧化型谷胱甘肽）相当于两分子的GSH（还原型谷胱甘肽）。
因此，通过将GSSG浓度加倍从而得到GSH浓度。

Q2:是否可以通过添加Masking Reagent来掩盖源自GSSG的GSH？

A2:加入酶/辅酶之后，由GSSG产生的GSH先与DTNB反应，而还原为GSSG。GSSG生成的GSH不会被屏蔽。

Q3:本试剂盒与谷胱甘肽定量试剂盒（货号：T419）有什么区别？

A3:本试剂盒可以分别检测GSSG和GSH，而总谷胱甘肽定量试剂盒（T419）则无法实现。作为氧化应激指标的GSH和GSSG的比例更加受引研究人员关注。

Q4:显色效果弱怎么办？

A4:考虑以下原因：

原因1）本试剂盒的测量范围是0.5 μmol/l及以上，测量样品中所含的谷胱甘肽的量可能小于该值。

对策）本试剂盒无法测量不符合测量范围的样品，请考虑其他方法检测。例如HPLC方法。

也可以通过降低预处理的稀释率或增加样品量来增加检测样品的浓度。

注意：为了加强显色效果而延长显色时间，则无法获得标准曲线。

原因2）可能含有抑制荧光的物质。例如：与SH基团反应的化合物（马来酰亚胺）会干扰测量结果。

对策）由于无法通过预处理等去除这些化合物，因此请在不含有此类物质的情况下再检测。

原因3）反应中的pH值低，有可能抑制显色。

对策）1、测量时，请确保SSA浓度为1％或更低。当SSA浓度为1％或更高时，会抑制显色效果。

2、如果含有其他酸性物质，则在测量前用三乙醇胺等将其中和至pH 7，或将它们稀释至约1％或更低的酸浓度下进行反应。

Q5:该试剂盒可以检测多少样品？

A5:本试剂盒可以进行100次检测（使用1块96孔板）
当n=3时，可以检测9个样品。（样品未染色）
如果仅测量谷胱甘肽的总量，可以检测25个样品。
样品的布局例：通道1～6是GSSG浓度测定，通道7～12是总谷胱甘肽浓度测定。

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号：G263

Q6:样品中有大量谷胱甘肽，如何稀释样品？

A6:用0.5％5-磺基水杨酸（SSA）水溶液稀释。
测量时样品中的SSA浓度应为0.5至1％。
如果SSA浓度高，则反应过程中的pH值会呈酸性，这可能会影响吸光度。

Q7:通过测量GSSG与GSH的比例可以得到什么？

A7:谷胱甘肽通常在体内以还原形式（GSH）存在，
因为它通过刺激（例如氧化应激）转化为氧化形式（GSSG）
GSH与GSSG之比是氧化应激的指标。

参考文献

1) ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development,Cancer Cell,2014,26, 331–343

2) Rhythmic oscillations of the microRNA miR-96-5p play a neuroprotective role by indirectly regulating glutathione levels,Nature Communications,2014,5,3823

3) Phospholipid methylation controls Atg32-mediated mitophagy and Atg8 recycling,The EMBO Journal,2015,34(21),2703–2719

4) Administering xCT inhibitors based on circadian clock improves antitumor effects,Cancer Research,2017,77(23),6603-6613

5) Cold stress-induced ferroptosis involves the ASK1-p38 pathway,EMBO reports,2017,18(11),2067-2078

6) Chloroplast DNA Replication Is Regulated by the Redox State Independently of Chloroplast Division in Chlamydomonas reinhardtii,Plant Physiology,2013,161,2102–2112

7) Oxidative stress inhibits healthy adipose expansion through suppression of SREBF1-mediated lipogenic pathway,Diabetes,2018,67(6),1113-1127
8）Endogenous reactive oxygen species cause astrocyte defects and neuronal dysfunctions in the hippocampus: a new model for aging brain,Aging Cell,2017,16,39–51

9) Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice,Antioxidants & Redox Signaling,2014,20(16),2606-2620

10) Skeletal muscle-specific eukaryotic translation initiation factor 2α phosphorylation controls amino acid metabolism and fibroblast growth factor 21-mediated non-cell-autonomous energy metabolism,

The FASEB Journal,2016,30(2),798-812

11) Riluzole exerts distinct antitumor effects from a metabotropic glutamate receptor 1-specific inhibitor on breast cancer cells,Oncotarget,2017,8(27),44639-44653

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グルタチオン定量キット GSSG/GSH Quantification Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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GSSG/GSH Quantification Kit

02 酸化ストレス関連試薬

GSSG/GSH Quantification Kit

酸化ストレス関連試薬
酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

グルタチオン定量キット

製品コード

G257　 GSSG/GSH Quantification Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
200 tests	￥62,300	342-09011

キット内容

200 tests	・ Enzyme Solution ・ Coenzyme ・ Buffer Solution ・ Substrate (DTNB) ・ Standard GSH ・ Standard GSSG ・ Masking Reagent	50 μl x1 x2 60 ml x1 x4 x1 x1 20 μl x1

試験成績書

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お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

特長

1)酸化型グルタチオン(GSSG)、還元型グルタチオン(GSH)の分別定量が可能である。
2)短時間で簡便に多検体の測定が可能である。

参考文献

参考文献を表示する

1) M. E. Anderson, "Determination of Glutathione and Glutathione Disulfide in Biological Samples", Methods in Enzymol., 1985, 113, 548.
2) M. A. Baker, G. J. Cerniglia and A. Zaman, "Microtiter Plate Assay for the Measurement of Glutathione and Glutathione Disulfide in Large Numbers of Biological Samples", Anal. Biochem., 1990, 190, 360.
3) C. Vandeputte, I. Guizon, I. Genestie-Denis, B. Vannier and G. Lorenzon, "A Micrototer Plate Assay for Total Glutathione and Glutathione Disulfide Contents in Cultured/isolated Cells: Performance Study of a New Miniaturized Protocol", Cell Biol. Toxicol., 1994, 10, 415.
4) S. A. McGrath-Morrow and J. Stahl, "Inhibition of Glutamine Synthetase in A549 Cells During Hyperoxia", Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2002, 27, 99.
5) T. Sato, K. Seyama, Y. Sato, H. Mori, S. Souma, T. Akiyoshi, Y. Kodama, T. Mori, S. Goto, K. Takahashi, Y. Fukuchi, N. Maruyama and A. Ishigami, "Senescence Marker Protein-30 Protects Mice Lungs from Oxidative Stress, Aging, and Smoking", Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2006, 174, 530.
6) M. L. Mulhern, C. J. Madson, A. Danford, K. Ikesugi, P. F. Kador and T. Shinohara, "The Unfolded Protein Response in Lens Epithelial Cells from Galactosemic Rat Lenses", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2006, 47(9), 3951.
7) N. Miura, Y. Yanagiba, K. Ohtani, M. Mita, and M. Togawa, "Diurnal Variation of Cadmium-induced Mortality in Mice", J. Toxicol. Sci., 2012, 37(1), 191.
8) K. Okabayashi, T. Narita, Y. Takahashi and H. Sugiya, "Effrct of Oxidative Stress on Secretory Function in Salivary Gland Cells", Oxidative Stress-Environmental Induction and Dietary Antioxidants, V. Lushchak, InTech, 2012, 189.
9) G. Tian, J. Sawashita, H. Kubo, S. Nishio, S. Hashimoto, N. Suzuki, H. Yoshimura, M. Tsuruoka, Y. Wang, Y. Liu, H. Luo, Z. Xu, M. Mori, M. Kitano, K. Hosoe, T. Takeda, S. Usami and K. Higuchi, "Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice", Antioxid. Redox Signal., 2014, 20(16), 2606.
10) H. Nakagawa, A. Umemura, K. Taniguchi, J. Font-Burgada, D. Dhar, H. Ogata, Z. Zhong, M. A. Valasek, E. Seki, J. Hidalgo, K. Koike, R. J. Kaufman and M. Karin, "ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development", Cancer cell, 2014, 26(3), 331.
11) M. Sueyoshi, M. Fukunaga, M. Mei, A. Nakajima, G. Tanaka, T. Murase, Y. Narita, S. Hirata, and D. Kadowaki, "Effects of lactulose on renal function and gut microbiota in adenine-induced chronic kidney disease rats", Clinical and Experimental Nephrology., 2019,doi: 10.1007/s10157-019-01727-4.
12) S. Shiromizu, T. Yamauchi, N. Kusunose, N. Matsunaga, S. Koyanagi and S. Ohdo, Dosing Time-Dependent Changes in the Anti-tumor Effect of xCT Inhibitor Erastin in Human Breast Cancer Xenograft Mice', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, (11), 1921-1925.
13) K. Ogawa, A. Noda, J. Ueda, T. Ogata, R. Matsuyama, Y. Nishizawa, S. Qiao, S. Iwata, M. Ito, Y. Fujihara, M. Ichihara, K. Adachi, Y. Takaoka and T. Iwamoto, "Forced expression of miR-143 and -145 in cardiomyocytes induces cardiomyopathy with a reductive redox shift", Cell. Mol. Biol. Lett., 2020, doi:10.1186/s11658-020-00232-x.

よくある質問

Q どのようなサンプルが測れますか？: A

組織、血漿、赤血球、細胞のサンプルが測れます。
但し、血漿の場合はグルタチオン量が少ないため、検体によっては測り分けが困難な場合があります。

Q このKitで何サンプル測定できますか？: A

本キットは200testsです（96wellプレート2枚分）。

n=3とした場合、18サンプルの測り分けが可能です〈サンプルに着色がない場合）。

測り分けない場合（総グルタチオン量のみを測定する場合）は、50サンプル測定できます。

※サンプルに着色がある場合は、サンプルブランクの測定が必要です。

　サンプルブランクの測定方法は、FAQ 「サンプルに着色がある場合の測定方法」をご参照下さい。

※サンプルのレイアウト例：レーン1～6はGSSG濃度測定、レーン7～12は総グルタチオン濃度測定

Q サンプルに着色がある場合は、どうすればいいですか？: A

サンプルに着色がある場合、以下の2つの方法のどちらかでサンプルブランクを差し引くことが可能です。
①Kinetic methodで測定を行う。

　　※検量線の傾きで検量線を作成する為、サンプルブランクの影響を受けない。

②グルタチオン濃度算出の際、O.D.blankを引く代わりに、別途、測定したO.D. sample blankを引く。

　　グルタチオン（GSH, GSGG) = (O.D. sample – O.D. sample blank) / 検量線の傾き

　　＜O.D. sample blankの測定方法＞

　　　　　取扱説明書　「4. 測定」に従い、吸光度を測定する。

　　　　　その際、Coenzyme working solution, Enzyme working solutionを添加せず、

　　　　　Buffer solutionと純水を添加する。

Q GSSGとGSHの比率を測定することで、何が分かるのですか？: A

グルタチオンは通常、生体内で還元型（GSH）として存在していますが、
酸化ストレスなどの刺激によって酸化型（GSSG）に変換される為、

GSHとGSSGの比率が酸化ストレスの指標となります。

Q GSH濃度はどのように求めるのですか？: A

検量線を基に求めた総グルタチオン（GSH＋GSSG)濃度とGSSG濃度より、

下式を用いてGSH濃度を算出します。

　GSH濃度＝総グルタチオン濃度－[GSSG濃度]×2

　※GSSG（酸化型グルタチオン）はGSH（還元型グルタチオン）２分子に相当します。

　　そのため、GSSG濃度を２倍にすることでGSH濃度に換算しています。

Q 推奨する5-スルホサリチル酸のメーカーやグレードはありますか？: A

特にメーカーの推奨はしておりません。試薬グレードの製品をご利用ください。

Q Masking reagentは、GSSG由来のGSHもマスキングしないのでしょうか？: A

酵素・補酵素添加後に、GSSGから生じたGSHは、マスキング剤と反応するより先にDTNBと反応してGSSGに戻るため、
GSSGから生じたGSHまでマスキングされることはありません。

Q マスキングの時間（37℃、1時間）が長くなってしまっても問題ありませんか？: A

多少長くなっても構いません。2時間まで測定実績がございます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) と何が違うのでしょうか？: A

今回のGSSG/GSH Quantification Kit（G257）はTotal Glutathione Quantification Kit(T419)では出来なかったGSSGとGSHの測り分けができます。
酸化ストレスの指標として、GSHとGSSGの比率は注目されています。

Q サンプル中のグルタチオン量が多いです。サンプルの希釈はできますか？: A

0.5％スルホサリチル酸（SSA)水溶液で希釈してください。
測定時のサンプル中SSA濃度は.0.5～1%にする必要があります。

SSA濃度が高いと反応時のpHが低くなり、吸光度に影響することが懸念されます。

Q 総グルタチオン量のみ測定する場合、マスキングの時間（37℃、1時間）は省略してよいですか？: A

省略可能です。
尚、本キットはGSSGとGSHの測り分けが可能な設計となっております。
測り分けが必要ない場合は、Total Glutathione Quantification Kit (同仁品コード：T419) もご利用いただけます。

※マスキングの時間とは、Technical Manual 「測定方法」４．測定 3)にある「37℃で1時間インキュベートする。」の操作を指します。

Q 発色が弱い場合は、どうすればいいですか？: A

以下の3つが要因として考えられます。

1. 本キットでの測定範囲は 0.5 μmol/l 以上です。測定試料に含まれるグルタチオン量が、それよりも少ない可能性があります。
  測定範囲外の測定試料は、本キットでは測定できませんので、HPLC法など他の方法をご検討下さい。
  可能であれば、前処理の希釈倍率を下げる、サンプル量を増やすなど、測定試料の濃度を測定範囲以上にして下さい。
  ※発色を強める為に、発色の時間を長くすると検量線の直線性が得られなくなりますので、ご注意下さい。

2. 発色を阻害する物質が含まれている可能性があります。例えば、SH基と反応する化合物（マレイミド類）などは測定に影響を及ぼします。
  これらの化合物は前処理等で除くことができませんので、測定試料中に混在させない系で再度測定して下さい。

3.反応時のpHが低く、発色阻害が起こっている可能性があります。
   測定時にSSA濃度が1%以下になってるか、ご確認下さい。SSA濃度が1%以上の場合、発色阻害が起こります。
他の酸を用いた場合にはトリエタノールアミン等でpH7程度に中和するか、酸濃度が1％程度以下になるように希釈してから測定して下さい。

Q 測定値がマイナスになります。どのような要因がありますか。: A

以下の3つが要因として考えられます。

１．サンプル中のグルタチオン量が少ない可能性があります。
　　サンプルの量を増やして、ご検討ください。
　　なお、血漿はグルタチオン量が少なく、測定が困難な場合がございます。

2. サンプルの前処理中にGSHがアミノ基と副反応を起こして減少した可能性があります。
　　GSHは、中性条件で以下のような副反応により減少することが報告されています
（Methods in Enzymology, 1985, 113, 548）。
　　そのため、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。　　

　　GSH + amino acid ⇔　γ-Glu-amino acid +CysH-Gly (アミノ基転移)
　 GSH + H2O → Glu +CysH-Gly (加水分解)
　 GSH + GSH ⇔　γ-Glu-GSH +CysH-Gly (アミノ基転移)

３. サンプルの前処理中にGSHが酸化してGSSGとなった可能性があります。
　　2と同様、サンプルの前処理(5%SSA処理）を素早く行ってください。

Q 酸化ストレスの指標としてグルタチオンが測定されますが、他の酸化ストレスマーカーはありますか？: A

酸化ストレスマーカーに関する資料をご参考ください。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しております。

下記URLよりダウンロード可能です。
「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」