日本同仁化学Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

葡萄糖检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

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代谢宣传资料

葡萄糖乳酸检测

选择规格：

50 tests

200 tests

现货

代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

产品解说

活动进行中

试剂盒内含

概述

原理

操作步骤

制作葡萄糖标准曲线

实验例

常见问题Q&A

参考文献

产品解说

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

试剂盒内含

	50 tests	200 tests
Dye Mixture	×1	×1
葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖)	150 μl×1	600 μl×1
酶(绿盖)	×1	×1
Assay Buffer	3.5 ml×1	14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖)	350 μl×1	1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液^＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×10⁵ cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×10⁶ cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？

A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。

Q2：Working Solution的稳定性如何？

A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。

Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？

A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。

Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例?

A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。

Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？

A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」

（1）将细胞^*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液^*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×10⁵cells以上，Jurket细胞需要2×10⁶ cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。

A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

96孔板排列示意图（n=3）

Q7:可以测量L-Glucose吗？

A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。

参考文献

No	检测对象	文献
1	小鼠血清	Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2	链霉菌	Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3	HCT116细胞	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4	P388白血病细胞	2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5	小鼠精子细胞	Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9

*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。

日本同仁化学Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

葡萄糖摄取检测试剂盒

葡萄糖代谢、葡萄糖摄取

商品信息

储存条件：0-5°C

运输条件：常温

特点：

● 检测灵敏度高

● 操作简便，用时短

● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选

● 荧光染料泄露少，数据重现性高

下载说明书

葡萄糖摄取检测

选择规格：

1 set

现货

数据重现性高

葡萄糖检测试剂盒（点击查看）

产品解说

产品概述

产品优势

相关产品区别

实验例

常见问题Q&A

规格性状

产品解说

产品概述

细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Red是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

产品优势

与传统方向相比的优势！ 4大特征

Glucose Uptake Probe-Red是红色荧光染料，可以与红色野外其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 与其他荧光染料的共染色

可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Red与脂肪滴(绿色：Lipi-Green货号LD02)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

<观测条件>

细胞： 3T3-L1

检测条件：

Glucose Uptake Probe-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

Lipi-Green：Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测

Glucose Uptake Probe-Red除了荧光显微镜和流式细胞仪以外还可以用荧光酶标仪进行检测。下面是A549细胞的葡萄糖摄取能力的检测结果，可以明显观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Red摄入的抑制作用。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

细胞：A549

检测条件

Glucose Uptake Assay Kit-Red：Ex = 545 nm, Em = 605 nm

③ 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

④ 减少荧光染料的泄漏

使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。

与传统法的比较

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。

相关产品区别

与Glucose Assay Kit的不同点

Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。

1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。

Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。

2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。

Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。

详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02 的页面。

实验例

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM（0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

常见问题Q&A

Q1: Glucose Uptake Probe-Red具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？

A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。

Q2: Glucose Uptake Probe-Red被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？

A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。

Q3: Glucose Uptake Probe-Red被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？

A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。

Q4: 用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗？

A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。

Q5:Probe working solution可以长期保存吗？

A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。

Q6: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？

A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。

Q7: 荧光背景高的时候，应该怎么办？

A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。

Q8: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？

A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。

Q9: 可以对葡萄糖进行定量检测吗？

A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。

Q10: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？

A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。

Q11: 如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？

A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞） Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。

2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞)

1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。

2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。

3.清洗细胞两次。

4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育在培养箱(37°C)中培养15 min。

5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育在培养箱(37°C)中培养15 min。

6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。

7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。

8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。 9.荧光显微镜下观察细胞。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red货号：UP03

Q12: 目前有过检测实例的细胞有哪些?

Q13: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。

规格性状

Glucose Uptake Probe-Red ×1

WI Solution (50X) 5 ml ×1

供参考的可测次数

每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板

日本同仁化学Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

葡萄糖摄取检测试剂盒

葡萄糖代谢、葡萄糖摄取

商品信息

储存条件：0-5°C

运输条件：常温

特点：

● 检测灵敏度高

● 操作简便，用时短

● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选

● 荧光染料泄露少，数据重现性高

下载说明书

产品文献

代谢宣传资料

相关产品区别

实验例

常见问题Q&A

规格性状

参考文献

产品解说

活动进行中

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Viability Assay Kit – Luminescent Detection 细胞增殖/毒性检测-发光法(CCK-L)

NO.2. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. DALGreen – Autophagy Detection 细胞自噬检测

NO.5. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

产品概述

细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Green是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

产品优势

与传统方向相比的优势！ 4大特征

由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 高灵敏度

2-NBDG在水中的荧光强度很低，而本试剂盒采用的荧光染料可以进行高灵敏度的葡萄糖摄取能力检测。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

<观测条件>

细胞： A549细胞

检测仪器：荧光显微镜

检测滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

② 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Green，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便

③ 荧光酶标仪的多样品检测

2-NBDG很难用于荧光酶标仪的检测，而本试剂盒可用于荧光酶标仪的高通量筛选实验。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

<检测条件>

细胞：A549细胞

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

④ 减少荧光染料的泄漏

使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。

使用HBSS清洗细胞时

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

使用WI Solution清洗细胞时

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：A549细胞

检测仪器：荧光显微镜

检测滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

与传统法的比较

Glucose Uptake Probe-Green和2-NBDG都可以用于荧光显微镜和流式细胞仪的检测。而相比较于2-NBDG的激发波长，Glucose Uptake Probe-Green对于488 nm的激发光以及GFP, FITC滤光片的适用度更高。

产品名

荧光

显微镜

荧光

酶标仪

流式

细胞仪

染料滞留时间

荧光特性

Glucose Uptake Assay Kit-Green

〇

1 h※

λex: 507 nm, λem: 518 nm

2-NBDG

〇

30 min以下※

λex: 465 nm, λem: 540 nm

※A549细胞的检测结果，不同的细胞种类，染料的滞留时间可能会有差异。

相关产品区别

与Glucose Assay Kit的不同点

Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。

1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消耗量。

Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。

2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。

Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。

Glucose Assay Kit-WST与本试剂盒的差别，通过下面的检测实例来说明。

实验例：用葡萄糖摄取抑制剂(Cytochalasin B)处理的HepG2细胞的葡萄糖消费量和葡萄糖摄取能力的检测。

实验的流程和检测结果：

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

实验例

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察以及数值化的检测。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

荧光酶标仪

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

<检测条件>

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

荧光酶标仪检测

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

<检测条件>

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

※由于脂肪细胞的特性，很难在孔板上均匀分布，所以实验数据会有一些孔间差。

<实验操作>

1.脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中，过夜培养。

2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后，加入不含葡萄糖的培养基(0 or 1 μmol/l Insulin)。

3.在37℃下培养15 min。

4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution， 37℃下培养15 min。

5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后，再次添加WI Solution(4℃)。

6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。

实验例3：前脂肪细胞和细胞脂肪细胞的葡萄糖摄取能力的比较

使用本试剂盒对前脂肪细胞(preadipocyte)和脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：preadipocyte, adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)

荧光酶标仪检测

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

<检测条件>

Ex: 488 nm; Em: 520 nm

※由于脂肪细胞的特性，很难在孔板上均匀分布，所以实验数据会有一些孔间差。

<实验操作>

1.前脂肪细胞和脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中，过夜培养。

2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后，加入不含葡萄糖的培养基。

3.在37℃下培养15 min。

4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution， 37℃下培养15 min。

5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后，再次添加WI Solution(4℃)。

6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。

实验例4：饥饿培养引起的细胞自噬和葡萄糖摄取变化

用自噬体染料DAPRed和自噬溶酶体染料DALGreen染色HeLa细胞后，用不含氨基酸的培养基培养3小时诱导细胞自噬。通过DAPRed和DALGreen的荧光强度增高确认细胞发生了细胞自噬，另外通过使用Glucose Uptake Probe-Blue发现细胞摄取葡萄糖的能力上升。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

(Scale Bar: 50 μm)

<检测条件>

荧光显微镜

Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm

Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm

常见问题Q&A

Q1: Glucose Uptake Probe-Green具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的?

A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。

Q2：目前有过检测实例的细胞有哪些?

A：目前的检测实例细胞系请参考下表：

细胞种类		Probe stock solution 的稀释倍率	染色时间
人肺腺癌细胞	A549	x 500	15 min
人肝癌细胞	HepG2	x 500	15 min
前脂肪细胞	preadipocyte(3T3-L1)	x 500	15 min
脂肪细胞	adipocyte(3T3-L1)	x 500	15 min
恶性黑色肿瘤细胞	MO5	x 500	15 min
小鼠成肌细胞	C2C12	x 500	5 min
人星形胶质瘤细胞	U-251 MG	x 500	15 min
人子宫颈癌细胞	HeLa	x 500	15 min
小鼠肺癌细胞	3LL	x 50000	15 min
T细胞	CD4⁺ T cell	x 50, x500	15 min
小鼠巨噬细胞	J774.1	x 500	15 min
线虫	N2	x 500	90 min

Q3：Glucose Uptake Probe-Green被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗?

Q4：Glucose Uptake Probe-Green被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗?

A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。

Q5：用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗?

A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。

Q6：Probe working solution可以长期保存吗?

A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。

Q7：无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办?

A：预实验的时候可以先从稀释浓度(x250~x1,000)、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。

Q8：荧光背景高的时候，应该怎么办?

A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。

Q9：Glucose Uptake Probe-Green对细胞有毒性吗?

A：使用同仁化学研究所的Cell Counting Kit-8(货号:CK04)对A549细胞的Glucose Uptake Probe-Green细胞毒性进行了检验，没有发现细胞毒性的产生。

Q10：用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间?

A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。

Q11：可以对葡萄糖进行定量检测吗?

Q12：可以对被细胞摄入的染料进行定量吗?

A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。

Q13：如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？

A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞） Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。

2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞)

1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。

2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。

3.清洗细胞两次。

4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育在培养箱(37°C)中培养15 min。

5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育在培养箱(37°C)中培养15 min。

6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。

7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。

8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。

9.荧光显微镜下观察细胞。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green货号：UP02

Q14: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。

规格性状

Glucose Uptake Probe-Green ×1

WI Solution (50X) 5 ml ×1

供参考的可测次数

每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板

参考文献

编号	文献	年	IF
1	Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin, Chemical Engineering Journal,2022,434:134686	2022	13.3
2	Genetically engineered probiotics as catalytic glucose depriver for tumor starvation therapy	2023	10.8
3	Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes	2022	9.9
4	Simple Fluorescence Assay for Cystine Uptake via the xCT in Cells Using Selenocystine and a Fluorescent Probe, ACS Sensors,2021, 6(6):2125-2128	2021	7.7
5	N-Caffeoyltryptophan enhances adipogenic differentiation in preadipocytes and improves glucose tolerance in mice	2023	3.7

日本同仁化学Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

葡萄糖摄取检测试剂盒

葡萄糖代谢、葡萄糖摄取

商品信息

储存条件：0-5°C

运输条件：常温

特点：

● 检测灵敏度高

● 操作简便，用时短

● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选

● 荧光染料泄露少，数据重现性高

下载说明书

葡萄糖摄取检测

选择规格：

1 set

期货

数据重现性高

葡萄糖检测试剂盒（点击查看）

产品解说

产品概述

产品优势

相关产品区别

实验例

常见问题Q&A

规格性状

产品解说

产品概述

细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Blue是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

产品优势

与传统方向相比的优势！ 4大特征

Glucose Uptake Probe-Blue是蓝色荧光染料，可以轻松得与其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 与其他荧光染料的共染色

可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Blue与脂肪滴(红色：Lipi-Red 货号LD03)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

<观测条件>

细胞： 3T3-L1

检测条件：

Glucose Uptake Probe-Blue：Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Lipi-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测

下面是分别使用不含葡萄糖的培养基以及高葡萄糖浓度的培养基培养A549细胞并用Glucose Uptake Probe-Blue进行染色的实验结果。可以观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Blue摄入的抑制作用。结果分别用荧光显微镜和流失细胞仪进行检测。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

细胞：A549

检测条件

Glucose Uptake Assay Kit-Blue：Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

③ 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

④ 减少荧光染料的泄漏

与传统法的比较

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。

相关产品区别

与Glucose Assay Kit的不同点

Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。

1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。

Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。

2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。

Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。

详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。

实验例

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例：饥饿培养诱导细胞自噬以及葡萄糖摄取能力的变化

用自噬体染色试剂DAPRed和自噬溶酶体染色试剂DALGreen染色HeLa细胞后，再用不含氨基酸的培养基饥饿培养3小时诱导细胞自噬。通过荧光显微镜观察发现DAPRed和DALGreen的荧光强度增强，证明细胞自噬的发生，另外通过Glucose Uptake Probe-Blue观察到细胞摄取葡萄糖的能力上升。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

<检测条件>

Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm

Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm

Scale bar: 50 μm

常见问题Q&A

Q1:Glucose Uptake Probe-Blue具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的？

A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。

Q2：Glucose Uptake Probe-Blue被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗？

Q3: Glucose Uptake Probe-Blue被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗？

A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。

Q4：Probe working solution可以长期保存吗？

A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。

Q5: 无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办？

A：预实验的时候可以先从稀释浓度（x250~x1,000）、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。

Q6：荧光背景高的时候，应该怎么办？

A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。

Q7: 用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间？

A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。

Q8：可以对葡萄糖进行定量检测吗？

Q9: 可以对被细胞摄入的染料进行定量吗？

A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。

Q10: 如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？

A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞） Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。

2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞)

1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。

2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。

3.清洗细胞两次。

4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育在培养箱(37°C)中培养15 min。

5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育在培养箱(37°C)中培养15 min。

6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。

7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。

8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。

9.荧光显微镜下观察细胞。

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue货号：UP01

Q11: 目前有过检测实例的细胞有哪些?

Q12: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。

规格性状

Glucose Uptake Probe-Blue ×1

WI Solution (50X) 5 ml ×1

供参考的可测次数

每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板

GIBCO DMEM高糖培养基（High Glucose）11965-092

发表于2024年3月30日由whatman中国官网

GIBCO DMEM高糖培养基（High Glucose）

产品型号： 11965-092
简单描述
GIBCO DMEM高糖培养基（High Glucose）规格：500ml英文名：DMEM, High Glucose现货*！

详细介绍

GIBCO DMEM高糖培养基（High Glucose）

描述：

DMEM培养基（DMEM）是一种广泛使用的培养基为支持许多不同的哺乳动物细胞的生长。在DMEM培养成功的细胞包括成纤维细胞、神经元、神经胶质细胞、内皮细胞、平滑肌细胞，以及细胞如Hela细胞，293，7，PC-12。LIFE公司提供各种试剂®DMEM修改一系列的细胞培养中的应用。

GIBCO DMEM高糖培养基（High Glucose）

成分规格：

This DMEM is modified as follows:

With	Without
• High Glucose	• Sodium Pyruvate
• L-glutamine	• HEPES
• Phenol Red

Serum Supplementation:	Standard Serum Supplementation
HEPES Buffer:	No HEPES
Sodium Pyruvate Additive:	No Sodium Pyruvate
Product Size:	500 mL
Volume (Metric):	500 ml
Glucose Concentration:	4500 mg/L
Shipping Condition:	Room Temperature

订购信息：

11965-092 500ml

11965-084 1000ml

11965-118 500ml*10瓶

11965-175 10L

グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットBlue

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
蛍光顕微鏡やフローサイトメーターで測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP01　 Glucose Uptake Assay Kit-Blue

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥42,800	342-09871

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Blue WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Blueは青色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Blueはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO₂
インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Blueは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Blueを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q Probe solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を一度行ってください。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Green

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Green

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットGreen

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
プレートリーダーを用いて測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP02　 Glucose Uptake Assay Kit-Green

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥40,700	347-09821

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well plate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Green WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

高輝度の色素を採用したことにより、既存法(2-NBDG)よりも高感度かつ短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

No.	Sample	Publication
1)	細胞 (HeLa)	W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
2)	菌 (B. licheniformis; P. stutzeri)	M. Jiang, Q. Li, S. Hu, P. He, Y. Chen, D. Cai, Y. Wu, S. Chen, "Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin", 2022, doi:10.1016/j.cej.2022.134686.
3)	細胞 (分化した3T3-L1脂肪細胞)	Y. Liu, Y. Le, M. Xu, W. Wang, H. Chen, Q. Zhang, C. Wang, " Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes", Environ. Pollut., 2022, doi:10.1016/j.envpol.2022.119287.

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Greenはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
悪性黒色腫	MO5
マウス筋芽細胞(未分化)	C2C12
マウス筋管	C2C12
アストロサイト―マ	U-251 MG
ヒト子宮頸癌由来細胞	HeLa
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell
マウスマクロファージ様株化細胞	J774.1
線虫	N2

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。下記例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、
5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Greenは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Greenを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？: A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe working solutionは保存できません。Probe stock solutionは冷凍保存が一か月間可能です。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。マニュアルの洗浄操作6-7を繰り返してください。

Q Glucose Uptake Probe-Greenに細胞毒性はありますか？: A

弊社製品のCell Counting Kit-8 (CK04)を用いてA549細胞におけるプローブの細胞毒性を調査した結果、細胞毒性は確認されませんでした。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Red

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットRed

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
プレートリーダーやフローサイトメーターでも測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP03　 Glucose Uptake Assay Kit-Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥42,800	349-09881

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Red WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

Glucose Uptake Probe-Redは赤色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。
また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

No.	Sample	Publication
1)	菌 (OP50-1)	Y. Suzuki, K. Kikuchi, K. Numayama-Tsuruta and T. Ishikawa, "Reciprocating intestinal flows enhance glucose uptake in C. elegans", Sci. Rep., 2022, doi:10.1038/s41598-022-18968-1.

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Redはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO₂
インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Redは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Redを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？: A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を行ってください。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

SDSダウンロード

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

グルコース測定キット

細胞培養上清のグルコースを測定可能
マイクロプレートを使った多検体処理が可能

製品コード

G264　 Glucose Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥19,900	342-09413
200 tests	￥41,900	346-09411

キット内容

50 tests	・Dye Mixture ・Glucose Standard ・Enzyme ・Assay Buffer ・Reconstitution Buffer	×1 150 μl×1 ×1 3.5 ml×1 350 μl×1
200 tests	・Dye Mixture ・Glucose Standard ・Enzyme ・Assay Buffer ・Reconstitution Buffer	×1 600 μl×1 ×1 14 ml×1 1.4 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

Glucose Assay Kit-WST の使い方

技術情報

グルコースの検出原理

本キットは、グルコース量に応じ発色したWSTホルマザンを吸光度測定することで、細胞培養上清^＊のグルコースを検出することができます。またキットにはグルコース標準液が含まれており、標準曲線を作成しサンプル中のグルコース濃度を測定することができます。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所
*細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問　培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

学会発表ポスター

WSTを用いた細胞の代謝解析

グルコース及び乳酸の測定例

グルコーストランスポーター阻害剤である Phloretin をJurkat 細胞に加えた際の代謝活性の変化をGlucose Assay Kit-WST 及びLactate Assay Kit-WST にて確認しました。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点：細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正（ノーマライゼーション）が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットはこちらから

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	血清（マウス）	M. Shinohara, Y. Tashiro, M. Shinohara, J. Hirokawa, K. Suzuki, M. O. Takeya, M. Mukouzono, S. Takeda, T. Saito, A. Fukumori, T. C. Saido, R. Morishita and N. Sato, "Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes”, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2)	微生物（Streptomyces albulus ）	K. Yamanaka, Y. Hamano and T. Oikawa, "Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus.”, J. Biosci. Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3)	細胞（HCT116）	K. Ohshima, S. Nojima, S. Tahara, M. Kurashige, K. Kawasaki, Y. Hori, M. Taniguchi, Y. Umakoshi, D. Okuzaki, N. Wada, J. Ikeda, E. Fukusaki and E. Morii, "Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine”, Nat Metab, 2020, 2(1), 81
4)	細胞（P388白血病）	T. Matsuo, Y. Konya, E. Hirayama and Y. Sadzuka , "2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cells”, Oncol Lett , 2020, 20(1), 962-966
5)	細胞（マウス:精子）	M. Hashimoto, S. Kimura, C. Kanno, Y. Yanagawa, T. Watanabe, J. Okabe, E. Takahashi, M. Nagano and H. Kitamura, "Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm”, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9
6)	細胞（マクロファージ）	N. Saeki and Y. Imai, "Reprogramming of synovial macrophage metabolism by synovial fbroblasts under infammatory conditions ”, Cell Commun Signal, 2020, 18, 188

　＊細胞培養上清以外のサンプルについては、よくある質問細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。をご確認ください。

よくある質問

Q 測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、下記表に記載のサンプル数を測定頂けます。

※検量線作成：8点（0, 0.00785, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 mmol/l）をn=3で評価。

Glucose standard solutionとサンプルのレイアウト例(n=3)

Q 450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか？: A

490 nmのフィルターでも使用できます。
ただし、吸光度の値は450 nmで測定した場合よりも低くなります。

Q 細胞培養上清以外で実績のあるサンプルを教えてください。: A

細胞内のグルコースを測定した実績がございます。
操作の詳細は、よくある質問「細胞内グルコース測定はできますか？」をご参照ください。
その他のサンプルについては実績がございません。

Q 細胞内のグルコース測定はできますか？

細胞内グルコース測定は可能です。
「0.1% Triton X-100 水溶液」と「限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)」が必要です。
下記のサンプル調製手順を参照ください。

(1)	細胞*¹を1.5 mlマイクロチューブに回収する。 ※測定に必要な細胞数は、細胞種により検討が必要です。HepG2細胞およびJurkat細胞での測定実績を下記図に示しておりますので参照ください。
(2)	300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(3)	冷PBS 300 µlを加え、ピペッティングにより懸濁後、300 x gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(4)	細胞溶解液*²(0.1% Triton X-100 水溶液)を250 µlを加え、ピペッティングにより細胞を溶解した後、 12,000 x gで5分間遠心する。
(5)	操作(4)の上清200 µlを限外ろ過膜フィルター(分画分子量：10K)に移し、12,000x gで10分間遠心する。 ※測定用サンプルはn=3で測定する場合、合計150 µl以上は必要です(1ウェルあたり50 µl×3ウェル分)。 ※遠心後の濾液が150 µl以上ない場合は、遠心時間を延長して下さい。
(6)	操作(5)で得られた濾液を測定サンプルとする。その後、キット付属の取扱説明書に従い、グルコース濃度を測定する。 ※測定試料は、検量線範囲内(0-0.5 mmol/l)に入るように適宜細胞溶解液で希釈し、測定に用いて下さい。

*¹0.02 mmol/l以上のグルコースを検出するためにはHepG2細胞の場合、1×10⁵ cells以上、
Jurkat細胞の場合、2×10⁶ cells以上必要。
*²細胞溶解液にSDSを含むと発色を阻害するため、SDSを含むバッファーの使用はできません。

グルコース測定キット Glucose Assay Kit-WST 同仁化学研究所

Q 2-Deoxy-D-glucoseも検出されますか？: A

本キットでは、2-Deoxy-D-glucoseもグルコースとして検出されます。

Q L-Glucoseの測定はできますか？: A

本製品はβ-D-Glucose測定用となりますので、L-Glucoseの測定はできません。

Q Working solutionはどのくらい安定ですか？: A

Working solutionは保存できないので、用時調製して下さい。
Working solutionは光に不安定なため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温にて4時間安定です。
（Working solutionを光に暴露させると溶液の色が赤色から橙色に変化し、バックグラウンドが上昇します）

Q 還元物質を含むサンプルは測定できますか？: A

サンプル中に還元性の物質が含まれると、色素（WST）が誤発色して正確なグルコース濃度を測定できません。
還元性を持つ薬剤を培地に添加して実験を行う場合は、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地」＋「薬剤のみ」を同時に評価し、検量線およびサンプルの吸光度から試薬ブランクとして差し引いてください。

Q 発色反応が進まない場合の原因を教えて下さい。: A

測定試料に含まれるグルコース濃度が、0.02 mmol/lより低い可能性があります。
グルコース濃度が0.02 mmol/l以下の測定試料は本キットでは定量できませんので、LC-MSなど他の方法をご検討下さい。
なお、測定試料を希釈している場合は、希釈倍率を下げ、グルコース濃度を定量可能範囲以上に調整してください。

Q 測定試料は保存できますか?: A

保存できます。
細胞培養上清サンプルの場合、冷凍(-20℃)で３週間、細胞ライセートサンプルの場合は、冷凍(-20℃)で1ヶ月保存可能であることを確認しております。
ただし、細胞ライセートサンプルの場合は、除タンパク処理 *を行って下さい。
( *よくある質問「細胞内のグルコース測定はできますか？」操作5)の溶液を保存してください。)

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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Gibco DMEM高糖培养基（High Glucose）11995-065500ml

发表于2024年3月13日由whatman中国官网

Gibco DMEM高糖培养基（High Glucose）11995-065

产品型号： 500ml
简单描述
Gibco DMEM高糖培养基（High Glucose）11995-065DMEM, High Glucose, Pyruvate描述含有 4500 mg/L D-葡萄糖、L-谷氨酰胺和 110 mg/L 丙酮酸钠。

详细介绍

Gibco DMEM高糖培养基（High Glucose）11995-065

DMEM, High Glucose, Pyruvate
描述：含有 4500 mg/L D-葡萄糖、L-谷氨酰胺和 110 mg/L 丙酮酸钠。

详细说明

Gibco DMEM高糖培养基（ High Glucose）11995-065

常用规格

Form:	Liquid
Volume:	500 ml
Glucose:	High Glucose
Glutamine:	L-Glutamine
HEPES Buffer:	No HEPES
Product Size:	500 ml
Phenol Red Indicator:	Phenol Red
Serum Supplementation:	Standard Serum Supplementation
Sodium Pyruvate Additive:	Sodium Pyruvate

Gibco DMEM高糖培养基（DMEM, High Glucose）11995-065

Storage conditions: 2-8° C. Protect from light
Shipping conditions: Ambient
Shelf life: 12 months from date of manufacture

This DMEM is modified as follows:

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

グルコース取り込み検出キットBlue

マニュアル

技術情報

既存法よりココが良い！4つの特徴

よくある質問

取扱条件

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MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

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Glucose Uptake Assay Kit-Green

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技術や使用製品に関する補足

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老化細胞検出キット

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