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特点：
● 可用于SA-β-gal活性的定量和多个样品的评估
● 使用酶标仪检测
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SPiDER-βGal
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 20 μg x 3 | ￥49,100 | 343-09161 |
図1 SPiDER-βGalの細胞染色原理
SPiDER-βGal は生細胞膜を透過した後、細胞中のβ-galactosidaseによる酵素反応を受け、その中間体はタンパク質中の求核性基と共有結合を形成することで細胞内に滞留する。
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用(リンク) |
|---|---|---|---|
| 1 | 細胞・組織 (腸管幹細胞・幼虫の翼盤) |
蛍光顕微鏡 | T. Doura, M. Kamiya, F. Obata, Y. Yamaguchi, T. Y. Hiyama, T. Matsuda, A. Fukamizu, M. Noda, M. Miura, Y. Urano, "Detection of LacZ-Positive Cells in Living Tissue with Single-Cell Resolution.", Angew Chem Int Ed Engl., 2016, doi: 10.1002/anie.201603328. |
| 2 | 細胞 (内分泌細胞) |
蛍光顕微鏡 | H. Omori, S. Ogaki, D. Sakano, M. Sato, K. Umeda, N. Takeda, N. Nakagata, S. Kume, "Changes in expression of C2cd4c in pancreatic endocrine cells during pancreatic development.", FEBS Lett., 2016, doi: 10.1002/1873-3468.12271. |
| 3 | 細胞 (SHIN3; SKOV3; OVCAR3) |
蛍光顕微鏡/フローサイトメーター | Y. Nakamura, A. Mochida, T. Nagaya, S. Okuyama, F. Ogata, P. L. Choyke, H. Kobayashi, "A topically-sprayable, activatable fluorescent and retaining probe, SPiDER-βGal for detecting cancer; Advantages of anchoring to cellular proteins after activation", Oncotarget., 2017, doi: 10.18632/oncotarget.17080. |
| 4 | 組織 (マウス腎臓) |
蛍光顕微鏡 | S. Lu, S. Liu, A. Wietelmann, B. Kojonazarov, A. Atzberger, C. Tang, R. T. Schermuly, H. J. Gröne, S. Offermanns, "Developmental vascular remodeling defects and postnatal kidney failure in mice lacking Gpr116 (Adgrf5) and Eltd1 (Adgrl4)", PLoS ONE., 2017, 10.1371/journal.pone.0183166. |
| 5 | 組織 (マウス脂肪組織) |
蛍光顕微鏡 | T. Sugizaki, S. Zhu, G. Guo, A. Matsumoto, J. Zhao, M. Endo, H. Horiguchi, J. Morinaga, Z. Tian, T. Kadomatsu, K. Miyata, H. Itoh & Y. Oike, "Treatment of diabetic mice with the SGLT2 inhibitor TA-1887 antagonizes diabetic cachexia and decreases mortality", NPJ Aging Mech Dis., 2017, DOI:10.1038/s41514-017-0012-0. |
| 6 | 細胞 (VZ/SVZ) |
フローサイトメーター | Y. Nakatani, H. Kiyonari and T. Kondo, "Ecrg4 deficiency results in extended replicative capacity of neural stem cells in a Foxg1-dependent manner", Development., 2019, doi: 10.1242/dev.168120. |
| 7 | 細胞 (アフリカツメガエル; 卵母細胞) |
蛍光顕微鏡 | A. A.Tokmakov AA and K. I. Sato, "Activity and intracellular localization of senescence-associated β-galactosidase in aging Xenopus oocytes and eggs.", Exp. Gerontol.., 2019, 119, 157. |
| 8 | 細胞 (マウス初代平滑筋細胞) |
蛍光顕微鏡/フローサイトメーター | Y. Han, T. Bedarida, Ye Ding, Q. Wang, P. Song, and M. H. Zou, "β-Hydroxybutyrate Prevents Vascular Senescence through hnRNP A1-Mediated Upregulation of Oct4", Molecular Cell., 2019, 71, 1064–1078. |
| 9 | 細胞 (内皮細胞) |
蛍光顕微鏡 | A. J. Barinda, K. Ikeda, D. B. Nugroho, D. A. Wardhana, N. Sasaki, S. Honda, R. Urata, S. Matoba, K. Hirata and N. Emoto, "Endothelial progeria induces adipose tissue senescence and impairs insulin sensitivity through senescence associated secretory phenotype", Nat. Commun., 2020, 11, 481. |
| 10 | 組織 (マウス筋組織) |
蛍光顕微鏡 | Y. Saito, T. Chikenji, T. Matsumura, M. Nakano, and M. Fujimiya, "Exercise enhances skeletal muscle regeneration by promoting senescence in fibro-adipogenic progenitors", Nat. Commun., 2020, doi:10.1038/s41467-020-14734-x. |
| 11 | 細胞 (ヒト臍帯静脈内皮細胞) |
フローサイトメーター | M. Suda, I. Shimizu, G. Katsuumi, Y. Yoshida, Y. Hayashi, R. Ikegami, N. Matsumoto, Y. Yoshida, R. Mikawa, A. Katayama, J. Wada, M. Seki, Y. Suzuki, A. Iwama, H. Nakagami, A. Nagasawa, R. Morishita, M. Sugimoto, S. Okuda, M. Tsuchida, K. Ozaki, M. Nakanishi-Matsui and T. Minamino, "Senolytic vaccination improves normal and pathological age-related phenotypes and increases lifespan in progeroid mice", Nature Aging, 2021, doi:10.1038/s43587-021-00151-2. |
| 12 | 細胞 (MG63 cells) |
蛍光顕微鏡 | H. Nakashima, M. Yasunaga, M. Yoshida, M. Yamaguchi, S. Takahashi, H. Kajiya, S. Tamaoki, and J. Ohno, "Low Concentration of Etoposide Induces Enhanced Osteogenesis in MG63 Cells via Pin1 Activation", J. Hard Tissue Biol., 2021, doi:10.2485/jhtb.30.175. |
| 13 | 細胞 (マウス筋肉細胞) |
蛍光顕微鏡 | V. Moiseeva, A. Cisneros, V. Sica, O. Deryagin, Y. Lai, S. Jung, E. Andres, J. An, J. Segales, L. Ortet, V. Lukesova, G. Volple, A. Benguria, A. Dopazo, S. Aznar-Benitah, Y. Urano, A. d. Sol, M. A. Esteban, Y. Ohkawa, A. L. Serrano, E. Perdiguer & P. Munoz-Canoves, "Senescence atlas reveals an aged-like inflamed niche that blunts muscle regeneration", Nature, 2022, doi:10.1038/s41586-022-05535-x. |
既存法に対する利点を教えてください。また、既存法との相関性はありますか？
①生細胞に適用できます。同様に生細胞に適用できるGFP融合タンパク質発現細胞を用いて相関性があることを確認しました。
②GFP法と比べて固定化後も蛍光観察ができます。
③既存の低分子β-ガラクトシダーゼ蛍光検出試薬と比較して、「細胞膜透過性」及び「細胞内滞留性」が優れるため、β-ガラクトシダーゼ発現細胞のみを一細胞レベルで染色できます。
Working solutionは、Hanks’ HEPES以外でも調製できますか？
PBS, HBSSなどが使用できます。
Working solutionは、どのくらい安定ですか？
保存できません。調整した日のうちに使用してください。
フローサイトメーターで使用可能ですか？
使用できます。β-ガラクトシダーゼ発現および未発現のHEK細胞の混合試料をフローサイトメーターで測定して、測り分けすることができました。取扱説明書に手順と条件を記載しています。
固定後、試料の染色はできますか？
可能です。 4%パラホルムアルデヒドやメタノールで固定化しても蛍光観察ができます。固定化によりβ-ガラクトシダーゼ活性は低下しますので、固定化条件の検討を行ってください。
推奨フィルターを教えてください。
以下のフィルターを推奨します。
・蛍光顕微鏡： 励起（500-540 nm）, 蛍光（500-540 nm）
・フローサイトメーター： 励起（488 nm）, 蛍光（500-540 nm）
取扱説明書の「励起/蛍光スペクトル」及び「上記フィルターを用いた蛍光顕微鏡測定例」もご参考ください。
染色後、試料の固定はできますか？
可能です。 4%パラホルムアルデヒドやメタノールで固定化しても蛍光観察ができます。
組織染色は可能ですか？
可能です。細胞染色と比べてWorking solution濃度を高くして染色条件をご検討ください（10-20 μmol/Lを目安）。
| 性状： | 本品は赤色～赤紫色固体でアセトニトリル及びジメチルスルホキシドに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 85.0％ 以上 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
| 蛍光スペクトル： | 試験適合 |
| 保存条件: 冷蔵 |
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
DALGreen – Autophagy Detection
Mitophagy Detection Kit
Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST
| GAL4抗体 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 630402 | GAL4 AD Monoclonal Antibody | 25 μg | ￥4,544 |  |
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| Clontech | 630403 | GAL4 DNA-BD Monoclonal Antibody | 25 μg | ￥5,867 | |
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页面更新：2019-12-30 13:24:28
| X-Alpha-Gal | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 630462 | X-alpha-Gal | 100 mg | ￥2,694 ￥2,021 |
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| Clontech | 630463 | X-alpha-Gal | 250 mg | ￥4,453 ￥3,340 |
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*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日
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产品详情请点击： |
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页面更新：2020-09-04 11:26:57
| X-Gal | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Takara | 9031 | X-Gal | 1 g | ￥481 |  |
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| ■ 制品说明 | ||||
| X-Gal是β-半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色。基于这个特点，当pUC系列载体DNA以lacZ缺欠细胞作为宿主进行转化时，或M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在培养基中加入X-Gal和IPTG，由于β-半乳糖苷酶的α-互补性，可以根据是否呈现白色而方便地挑选择出基因重组体。 |
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| ■ 用途 | ||||
| X-Gal是β-半乳糖苷酶 (β-galactosidase) 的底物，水解后呈蓝色。基于这个特点，pUC系列载体DNA以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时，如果在平板培养基中加入X-Gal和IPTG (Code No.: 9030)，由于β-半乳糖苷酶的α-互补性，可以根据是否呈现白色菌落 (或噬菌斑) 而方便地挑选出基因重组体。 |
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| ■ 使用方法 | ||||
| 首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺 (DMF) 溶液，将溶液-20℃避光保存。 (含有X-Gal的培养基4℃避光保存，须在1周内使用。) |
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| ■ 工作浓度 | ||||
| 1) 质粒 · Agar medium; 200 μl/ 100 ml agar medium · Plate (直径9 cm ); 50 μl/ plate 2) 噬菌体 · Top agar; 50 μl/ 3 ml top agar |
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页面更新：2019-08-09 13:53:27
