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C29H22K5N3O14
831.99
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C44H47N3O24
1001.85
特点：
● 双波长激发检测钙离子
● 激光共聚焦，流式细胞仪均可检测
● 荧光强度高
产品性状
规格
性状 ： 本产品为黄色或橙黄色粉末，使用时将固体溶解于无水DMSO中
纯度（HPLC）: 98%以上
荧光光谱图： 符合实验要求
NMR光谱图： 符合实验要求
处理条件
保存方法 ： 避光冷冻
产品概述
Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱，最大激发波长为369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2，从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后，最大激发波长为335 nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同)，最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510 nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340 nm和380 nm。
原理
Fura 2可以和钙离子(Ca2+)结合，结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm和380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。
激发发射波长
Ex ：340～380 nm
Em ：510 nm
操作步骤
1、用HBSS溶液稀释1-5 mmol/l的Fura 2-AM母液，配制成1-5 μmol/l的Fura 2-AM工作液。
（此浓度仅供参考，请根据具体实验要求自行调整）
例如:1 mmol/l母液配制1 ml浓度为5 μmol/l工作液的方法：用1 ml HBSS溶液稀释5μl母液即可。
如果Fura 2-AM进入细胞的效果不好，可使用Pluronic® F-127，后者可以防止Fura 2-AM在缓冲液里
聚合并能促进其进入细胞。
*Pluronic® F-127先用DMSO溶解至浓度为20%（W/V），然后根据实验需要直接加入Fura 2-AM工作液
中至终浓度为0.04-0.05%（此浓度仅供参考，请根据具体实验要求自行调整）。
2、取出预培养的细胞，除去培养基，使用HBSS溶液洗涤细胞3次。
如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM体，从而降低Fura 2-AM进入细胞的效果。
另外含有酚红的培养 基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。
3、加入Fura 2-AM工作液，溶液量以覆盖细胞为准。
4、37℃细胞培养箱孵育10-60分钟，除去Fura 2-AM工作液。关于孵育的时间，如果首次做实验不能定
建议先孵育30分钟，看荧光效果：如果细胞死亡较多，缩短时间；荧光强度太弱，延长时间。
5、用HBSS溶液洗涤细胞3次，以充分去除残留的Fura 2-AM工作液。然后加入HBSS溶液覆盖细胞。
6、37℃培养箱孵育约20-30分钟，以确保AM体在细胞内的完全去酯化作用。如果细胞内酯酶活性较低，
建议严格按照此操作进行；酯酶活性高的细胞实验，可以忽略此步。
7、用流式细胞仪或其它设备检测细胞，激发波长380 nm（Fura 2）和340 nm（钙离子-Fura 2），
发射波长510 nm。
注意事项
1、试剂容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，
开封前，请轻弹管壁几次，以保证粉末落入管底。
2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
3、溶解液DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。
4、母液遇水极易分解，如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成5 μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，
放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
数据处理
Fλ1与Fλ2分别是λ1与λ2激发时的总荧光强度，Sf 1与Sf 2是两种紫外光激发时游离Fura-2 (未结合Ca2+)的荧光系数，
Cf是游离的Fura-2浓度，Sb1与Sb2是相应波长下结合Ca2+后Fura-2的荧光系数，Cb是结合Ca2+的Fura-2浓度
参考文献
1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, “A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, “Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2”, Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, “Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths”, Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, “Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2”, Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, “The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading”, FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, “Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, “Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle”, Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, “Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle”, Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
Q&A
|
Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么，选择什么样的比较好呢？ |
|
A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择，产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的 有很多种相似的试剂，其特点如下： 【Fura 2】 •双波长激发 激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射：λem=500 nm •解离常数：224 nmol/L •因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差 =>細胞内Ca浓度计算。 •该试剂被使用的最多 •必须要更换过滤片、会耽误一些时间。 【Fluo 3】 •单波长激发 激发：λex=508 nm、发射：λem=527 nm •解离常数：400 nmol/L •因为激发光在长波段，所以对细胞的损伤比较小 （不会受到NADH、NADPH的影响） •可以使用Ar激光激发装置。 •不适合切片中钙离子的检测 •【Fluo 4】 •单波长激发 •激发：λex=495 nm、发射：λem=518 nm •解离常数：360 nmol/L •与Fluo3相比对荧光强度更高。 •因为激发光在长波段，所以对细胞的损伤比较小 •（不会受到NADH、NADPH的影响） •可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低 •【Indo 1】 •单波长激发 •激发：λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm) •解离常数：250 nmol/L •由于不需要更换滤光片，可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化 •（需要两台检测仪器） •【Rhod 2】 •单波长激发 •激发：λex=553 nm、发射：λem=576 nm •解离常数：1.0 μmol/L •因为激发光在长波段，所以对细胞的损伤比较小 •（不会受到NADH、NADPH的影响） •可以使用Ar激光激发装置。 •【Quin 2】 •单波长激发 •激发：λex=339 nm、发射：λem=492 nm •解离常数：110 nmol/L •最早开发的产品 |
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C44H47N3O24
1001.85
特点：
● 双波长激发检测钙离子
● 激光共聚焦，流式细胞仪均可检测
● 荧光强度高
产品性状
| 规格
性状 ： 本产品为黄色或橙黄色粉末，使用时将固体溶解于无水DMSO中 纯度（HPLC）: 98%以上 荧光光谱图： 符合实验要求 NMR光谱图： 符合实验要求 处理条件 保存方法 ： 避光冷冻 |
产品概述
Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱，最大激发波长为369 nm，最大发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2，从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后，最大激发波长为335 nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同)，最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510 nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340 nm和380 nm。
原理
Fura 2可以和钙离子(Ca2+)结合，结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm和380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。
激发发射波长
Ex ：340～380 nm
Em ：510 nm
操作步骤
1、用HBSS溶液稀释1-5 mmol/l的Fura 2-AM母液，配制成1-5 μmol/l的Fura 2-AM工作液。
（此浓度仅供参考，请根据具体实验要求自行调整）
例如:1 mmol/l母液配制1 ml浓度为5 μmol/l工作液的方法：用1 ml HBSS溶液稀释5 μl母液即可。
如果Fura 2-AM进入细胞效果不好，可使用Pluronic® F-127后者可以防止Fura 2-AM在缓冲液里聚合
并能促进其进入细胞。
*Pluronic® F-127先用DMSO溶解至浓度为20%（W/V），然后根据实验需要直接加入Fura 2-AM工作液中
至终浓度为0.04-0.05%（此浓度仅供参考，请根据具体实验要求自行调整）。
2、取出预培养的细胞，除去培养基，使用HBSS溶液洗涤细胞3次。
如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会分解AM体,从而降低Fura 2-AM进入细胞的效果。
另外含有酚红的培养 基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。
3、加入Fura 2-AM工作液，溶液量以覆盖细胞为准。
4、37℃细胞培养箱孵育10-60分钟，除去Fura 2-AM工作液。关于孵育的时间，
如果首次做实验不能确定，建议先孵育30分钟，看荧光效果:如果细胞死亡较多，缩短时间；
荧光强度太弱，延长时间。
5、用HBSS溶液洗涤细胞3次，以充分去除残留的Fura 2-AM工作液。然后加入HBSS溶液覆盖细胞。
6、37℃培养箱孵育约20-30分钟，以确保AM体在细胞内的完全去酯化作用。如果细胞内酯酶活性较低，
建议严格按照此操作进行；酯酶活性高的细胞实验，可以忽略此步。
7、用流式细胞仪或其它设备检测细胞，激发波长380 nm（Fura 2）和340 nm（钙离子-Fura 2)
发射波长510 nm。
注意事项
1、试剂容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，
开封前，请轻弹管壁几次，以保证粉末落入管底。
2、第一次使用时, 建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
3、溶解液DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。
4、母液遇水极易分解，如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成5 μl/管，用封口膜封口，
并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
5、建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件
数据处理
Fλ1与Fλ2分别是λ1与λ2激发时的总荧光强度，Sf 1与Sf 2是两种紫外光激发时游离Fura-2 (未结合Ca2+)的荧光系数，
Cf是游离的Fura-2浓度，Sb1与Sb2是相应波长下结合Ca2+后Fura-2的荧光系数，Cb是结合Ca2+的Fura-2浓度
参考文献
1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, “A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, “Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2”, Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, “Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths”, Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, “Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2”, Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, “The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading”, FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, “Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, “Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle”, Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, “Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle”, Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
Q&A
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Q1: 细胞内检测钙离子的试剂种类都有什么，选择什么样的比较好呢？ |
|
A1: 根据检测仪器和检测波长有很多的选择，产品后面标有AM的试剂是可以通过细胞膜的 有很多种相似的试剂，其特点如下： 【Fura 2】 •双波长激发 激发(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、发射：λem=500 nm •解离常数：224 nmol/L •因为是荧光强度的比值、可以有效的减小误差 =>細胞内Ca浓度计算。 •该试剂被使用的最多 •必须要更换过滤片、会耽误一些时间。 【Fluo 3】 •单波长激发 激发：λex=508 nm、发射：λem=527 nm •解离常数：400 nmol/L •因为激发光在长波段，所以对细胞的损伤比较小 （不会受到NADH、NADPH的影响） •可以使用Ar激光激发装置。 •不适合切片中钙离子的检测 •【Fluo 4】 •单波长激发 •激发：λex=495 nm、发射：λem=518 nm •解离常数：360 nmol/L •与Fluo3相比对荧光强度更高。 •因为激发光在长波段，所以对细胞的损伤比较小 •（不会受到NADH、NADPH的影响） •可以使用Ar激光激发装置。 •与Fluo3相比对細胞的毒性低 •【Indo 1】 •单波长激发 •激发：λex= 330 nm、发射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm) •解离常数：250 nmol/L •由于不需要更换滤光片，可以很快地检测细胞内钙离子浓度变化以及像心肌细胞运动中钙离子的变化 •（需要两台检测仪器） •【Rhod 2】 •单波长激发 •激发：λex=553 nm、发射：λem=576 nm •解离常数：1.0 μmol/L •因为激发光在长波段，所以对细胞的损伤比较小 •（不会受到NADH、NADPH的影响） •可以使用Ar激光激发装置。 •【Quin 2】 •单波长激发 •激发：λex=339 nm、发射：λem=492 nm •解离常数：110 nmol/L •最早开发的产品 |
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Calcium Kit – Fura 2
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 10 plates | ￥36,500 | 341-91271 |
| 10 plates | ・Fura 2-AM ・Dimethylsulfoxide ・5% Pluronic@ F-127 ・5% Cremophor@ El ・250 mmol/l Probenecid ・Recording Medium(2X) |
50 μg x10 2 ml x1 2.5 ml x1 2.5 ml x1 1.3 ml x1 100 ml x1 |
|---|
日本語 
蛍光で細胞内Ca を測定したい 
WashとNon Washの測定結果に差はありますか？
ほとんど差はありません。
ただしNon WashタイプはQuenching Bufferを使用するため、細胞や刺激剤によっては、蛍光強度の変化率やレスポンスに違いが見られる可能性があります。
はじめて測定します。Ca2+プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。
はじめて細胞内Ca2+測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca2+プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。
下記リンクよりダウンロード可能です。
「はじめて細胞内Ca2+を測定する方へ －カスタマーサポート担当者の視点から－」
| 保存条件: 冷凍,遮光 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
 |
|---|---|
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
Fura 2
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 mg | ￥32,100 | 347-05421 |
【注意】
本品は、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。
内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。（Free Dial：0120-489-548）
蛍光で細胞内 Ca を測定したい 1 mg/0.25 mL（水）
1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.
10) P. L. Becker, F. S. Fay,"Photobleaching of fura-2 and its effect on determination of calcium concentrations", American Journal of Physiology, 1987, 253, 613.
細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？
測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は
【Fura 2】
・2励起1蛍光
励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
（機器の性能にもよる）
【Fluo 3】
・1励起1蛍光
励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）
【Fluo 4】
・1励起1蛍光
励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。
【Indo 1】
・1励起2蛍光
励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）
【Rhod 2】
・1励起1蛍光
励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
【Quin 2】
・1励起1蛍光
励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ
| 性状： | 本品は、黄色～橙黄色粉末又は固体で水に溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 98.0％ 以上 |
| 蛍光スペクトル： | 試験適合 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
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Fura 2-AM
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 mg | ￥37,200 | 341-08621 |
1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.
細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？
測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は
【Fura 2】
・2励起1蛍光
励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
（機器の性能にもよる）
【Fluo 3】
・1励起1蛍光
励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）
【Fluo 4】
・1励起1蛍光
励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。
【Indo 1】
・1励起2蛍光
励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）
【Rhod 2】
・1励起1蛍光
励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
【Quin 2】
・1励起1蛍光
励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ
はじめて測定します。Ca2+プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。
はじめて細胞内Ca2+測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca2+プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。
下記リンクよりダウンロード可能です。
「はじめて細胞内Ca2+を測定する方へ －カスタマーサポート担当者の視点から－」
| 性状： | 本品は、黄色～橙黄色結晶性粉末または固体でジメチルスルホキシドに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 98.0％ 以上 |
| 蛍光スペクトル： | 試験適合 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
| 保存条件: 冷凍,遮光 |
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
Fura 2-AM solution
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 ml | ￥51,000 | 343-05401 |
蛍光で細胞内 Ca を測定したい 1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.
はじめて測定します。Ca2+プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。
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下記リンクよりダウンロード可能です。
「はじめて細胞内Ca2+を測定する方へ －カスタマーサポート担当者の視点から－」
| 性状： | 本品は、黄色液体である。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 98.0％ 以上 |
| 蛍光スペクトル： | 試験適合 |
| 保存条件: 冷凍,遮光 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
|
|---|---|
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Fura 2-AM special packaging| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 50 μg x 8 | ￥24,200 | 348-05831 |
蛍光で細胞内 Ca を測定したい 
Fura 2-AM 50 μgに適量のDMSOを加え均一に溶解することで、ご希望の濃度に調製いただけます。
下表に加えるDMSO量とFura 2-AM濃度の関係を示しましたので、ご参照ください。
| DMSO (μL) | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 |
| 濃度 (mmol/L) | 5.0 | 2.5 | 1.7 | 1.3 | 1.0 |
※DMSOに溶解後は保存できません。使用直前にFura 2-AM溶液を調製し、速やかにご使用ください。
1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca2+ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca2+ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca2+ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.
はじめて測定します。Ca2+プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。
はじめて細胞内Ca2+測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca2+プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。
下記リンクよりダウンロード可能です。
「はじめて細胞内Ca2+を測定する方へ －カスタマーサポート担当者の視点から－」
| 性状： | 本品は、黄色～橙黄色固体でジメチルスルホキシドに溶ける。 |
|---|---|
| 純度(HPLC)： | 98.0％ 以上 |
| 蛍光スペクトル： | 試験適合 |
| NMRスペクトル： | 試験適合 |
| 保存条件: 冷凍,遮光 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
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|---|---|