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日本同仁化学ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX06 外泌体蛋白质染色-深红色- DOJINDO
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ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX06
外泌体蛋白质染色-深红色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
下载说明书
SDS下载
外泌体宣传资料
选择规格：
5samples
现货
多种荧光可选
外泌体的标记和纯化一步到位
试剂盒内含
概述
特点
实验例
常见问题Q&A
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点
特点1：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点2：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green:
Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red:
Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red:
Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
实验例
实验例：确认外泌体的局部存在
将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。
观察条件
Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm
Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm
溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm
实验条件
将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
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日本同仁化学ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX05 外泌体蛋白质染色-红色- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，防潮
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
下载说明书
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外泌体宣传资料
选择规格：
5samples
现货
多种荧光可选
外泌体的标记和纯化一步到位
试剂盒内含
概述
特点
实验例
常见问题Q&A
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非 常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点
特点1：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点2：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green:
Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red:
Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red:
Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
实验例
实验例：确认外泌体的局部存在
将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。
观察条件
Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm
Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm
溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm
实验条件
将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
日本同仁化学ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒货号：EX04 外泌体蛋白质染色-绿色- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒货号：EX04
外泌体蛋白质染色-绿色
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
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外泌体宣传资料
选择规格：
5samples
现货
多种荧光可选
外泌体的标记和纯化一步到位
活动进行中
试剂盒内含
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特点
实验例
常见问题Q&A
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 外泌体膜染色试剂-绿色
NO.2. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 外泌体膜染色试剂-红色
NO.3. ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 外泌体蛋白质染色-绿色
NO.4. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测
NO.5. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
特点
特点1：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点2：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green:
Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red:
Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red:
Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
实验例
实验例：确认外泌体的局部存在
将用ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red(产品名称：EX06，Protein Dye-Deep Red)或ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red(产品名称：EX02，Mem Dye-Red)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，通过与溶酶体染色试剂(绿色)共染确认了外泌体在细胞内的定位。结果证实，用蛋白质或膜染色的外泌体均位于溶酶体中。
观察条件
Protein Dye-Deep Red（紫）：Ex：640 nm / Em：640-760 nm
Mem Dye-Red（红色）：Ex：561 nm / Em：570-640 nm
溶酶体染色试剂（绿）：Ex：488 nm / Em：490-540 nm
实验条件
将用超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为5 µg)用每个外泌体染色试剂盒染色，添加到HeLa细胞(0.75×104cells)中，孵育3.5小时后对溶酶体进行染色，观察洗涤后的荧光图像。
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
日本同仁化学ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX03 外泌体膜染色试剂-深红色- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red试剂盒货号：EX03
外泌体膜染色试剂-深红色
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
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外泌体宣传资料
选择规格：
5samples
现货
荧光染料不会在细胞外聚集
对外泌体的性质几乎没有影响
外泌体的标记和纯化一步到位
活动进行中
试剂盒内含
概述
技术情报
特点
实验例
常见问题Q&A
参考文献
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
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NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.2. Carboxylic acid-SAM Formation Reagent 自组装单分子膜SAM
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. Cellstain- DAPI solution 细胞核染色
NO.5. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 外泌体膜染色试剂-绿色
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
技术情报
更准确地观察外泌体的动态
常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P)，染料本身会引起凝集，产生不来源于外泌体的荧光聚点，导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。
ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。
参考文献
1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.
2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013.
特点
特点1:荧光染料不会在细胞外聚集
将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。
结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。
Mem Dye-Deep Red(紫)：Ex： 640 nm/ Em： 640-760 nm
S公司 P产品(绿)：Ex： 561 nm/ Em： 560-620 nm
S公司 P产品(红)：Ex： 640 nm/ Em： 650-700 nm
实验条件
通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg)，使用不同荧光染料染色后，添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中，孵育24小时，观察清洗后的荧光图像。
通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现，Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象，而P产品（绿色或红色）发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。
*检测装置：LM10-HSBFT 14（Nanosight公司生产）
与Mem-Dye溶液相比，P产品溶液的粒径也发生变化
另外，Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样，也没有发现荧光聚集的现象。
特点2：对外泌体的性质几乎没有影响
比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。
结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。
而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。
对外泌体颗粒直径的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。
结果，用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体，粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左)，但在产品P染色前后，粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
＊检测装置：LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)
对外泌体膜电位的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。
结果证实，使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较，使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多
＊检测装置：Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)
参考文献
Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.
特点3：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点4：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green: Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red: Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red: Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
实验例
外泌体的定位随时间而变化
■实验条件
通过超速离心法纯化的外泌体（蛋白质量为10 µg）用Mem Dye-Deep Red（外泌体膜染色试剂）染色，并加入到用溶酶体染色试剂染色的HeLa细胞（1.25×104细胞）中，在1小时和4小时后观察到荧光图像。
结果表明，随着时间的推移Mem Dye-Deep Red的荧光点(紫色)与溶酶体的定位(绿色)重叠(白色)，外泌体的定位随时间的变化而变化。
观察条件：
Mem Dye-Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
溶酶体染色试剂： Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
参考文献
1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, “Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production”, Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544.
关联产品
外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit
外泌体(Exosomes)提取试剂盒
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒
外泌体膜染色试剂-绿色
AcidSensor Labeling Kit – Endocytic Internalization Assay 细胞内吞作用的内化过程检测
AcidSensor Labeling Kit – 细胞内吞作用的内化过程检测
ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒
ECGreen-Endocytosis Detection
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒
外泌体膜染色试剂-红色
日本同仁化学ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX02 外泌体膜染色试剂-红色- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒货号：EX02
外泌体膜染色试剂-红色
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
下载说明书
SDS下载
外泌体宣传资料
选择规格：
5samples
现货
荧光染料不会在细胞外聚集
对外泌体的性质几乎没有影响
外泌体的标记和纯化一步到位
活动进行中
试剂盒内含
概述
技术情报
特点
常见问题Q&A
参考文献
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测
NO.3. Calcein-AM/PI Double Staining Kit 活死细胞双染
NO.4. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测
NO.5. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
技术情报
更准确地观察外泌体的动态
常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P)，染料本身会引起凝集，产生不来源于外泌体的荧光聚点，导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。
ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。
参考文献
1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.
2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013.
特点
特点1:荧光染料不会在细胞外聚集
将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。
结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。
Mem Dye-Deep Red(紫)：Ex： 640 nm/ Em： 640-760 nm
S公司 P产品(绿)：Ex： 561 nm/ Em： 560-620 nm
S公司 P产品(红)：Ex： 640 nm/ Em： 650-700 nm
实验条件
通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg)，使用不同荧光染料染色后，添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中，孵育24小时，观察清洗后的荧光图像。
通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现，Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象，而P产品（绿色或红色）发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。
*检测装置：LM10-HSBFT 14（Nanosight公司生产）
与Mem-Dye溶液相比，P产品溶液的粒径也发生变化
另外，Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样，也没有发现荧光聚集的现象。
特点2：对外泌体的性质几乎没有影响
比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。
结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。
而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。
对外泌体颗粒直径的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。
结果，用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体，粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左)，但在产品P染色前后，粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
＊检测装置：LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)
对外泌体膜电位的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。
结果证实，使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较，使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多
＊检测装置：Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)
参考文献
Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.
特点3：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点4：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green: Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red: Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red: Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
Fluorescent images at 4 h incubation
Detection conditions
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
参考文献
1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, “Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production”, Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544.
2）Misato Horie, Kurara Takagane , Go Itoh , Sei Kuriyama , Kazuyoshi Yanagihara , Masakazu Yashiro , Michinobu Umakoshi , Akiteru Goto , Junichi Arita and Masamitsu Tanaka，“Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment”molecular oncology.，2023，doi:10.1002/1878-0261.13524.
关联产品
外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit
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ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒
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ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒
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日本同仁化学ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒货号：EX01 外泌体膜染色试剂-绿色- DOJINDO
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商品信息
储存条件：0-5度保存,避光
运输条件：室温
特点：
● 特异性外泌体定位，细胞外不聚集
● 回收率高
● 多种颜色可供选择
下载说明书
SDS下载
外泌体宣传资料
选择规格：
5 samples
现货
荧光染料不会在细胞外聚集
对外泌体的性质几乎没有影响
外泌体的标记和纯化一步到位
活动进行中
试剂盒内含
概述
技术情报
特点
常见问题Q&A
参考文献
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NO.1. ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 外泌体膜染色试剂-红色
NO.2. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 乳酸脱氢酶(LDH)检测
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NO.4. ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 外泌体蛋白质染色-绿色
NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测
试剂盒内含
概述
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关， 外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，然而目前广泛使用的磷脂双分子层的荧光染料存在明显的缺点（1. 染色后外泌体粒径增大。2. 荧光染料自身形成粒子，造成背景增高）。本产品是为了解决这些问题而开发的新型荧光染料，并且有 Green, Red, Deep Red 三种颜色，可满足多重染色在内的各种实验需求。
技术情报
更准确地观察外泌体的动态
常用于染色外泌体的膜染色染料(S公司 产品P)，染料本身会引起凝集，产生不来源于外泌体的荧光聚点，导致外泌体的性质变化和背景上升等问题1)2)。
ExoSparkler系列中使用的染料(Mem Dye-Green，Red，Deep Red)不会引起荧光凝集，也几乎不影响外泌体的性质，因此可以更准确地观察外来体的动力学。
参考文献
1) Mehdi Dehghani et al.,“Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.
2) Pužar Dominkuš P et al.,“PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.”Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013.
特点
特点1:荧光染料不会在细胞外聚集
将使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P(绿色或红色)染色的外泌体添加到HeLa细胞中，并用荧光显微镜观察进入细胞内的外泌体。
结果，在用产品P(绿色或红色)染色的外泌体中，发现了疑似染料聚集的细胞外荧光亮点。
Mem Dye-Deep Red(紫)：Ex： 640 nm/ Em： 640-760 nm
S公司 P产品(绿)：Ex： 561 nm/ Em： 560-620 nm
S公司 P产品(红)：Ex： 640 nm/ Em： 650-700 nm
实验条件
通过超速离心法提取的外泌体(蛋白质量为10 µg)，使用不同荧光染料染色后，添加到HeLa细胞(1.25×104cells)中，孵育24小时，观察清洗后的荧光图像。
通过NTA (Nanoparticle Tacking Analysis)技术检测发现，Dojindo的Mem Dye-Deep Red没有荧光聚集现象，而P产品（绿色或红色）发现了可疑的100-500 nm粒径的粒子。
*检测装置：LM10-HSBFT 14（Nanosight公司生产）
与Mem-Dye溶液相比，P产品溶液的粒径也发生变化
另外，Mem Dye-Green, Red和Mem Dye-Deep Red一样，也没有发现荧光聚集的现象。
特点2：对外泌体的性质几乎没有影响
比较使用Mem Dye-Deep Red和使用产品P（绿色或红色）染色前后的外泌体，通过测定NTA（纳米粒子跟踪分析）和zeta电位以确认外泌体的性质是否变化。
结果，确认使用产品P（绿色或红色）会因染色而引起的外泌体的变化。
而Mem-Dye系列（Green、Red、Deep Red）对外泌体的性质几乎没有影响。
对外泌体颗粒直径的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，对10 µg(蛋白质量)的外泌体进行染色后进行了NTA(纳米粒子跟踪分析)。
结果，用Mem-Dye系列染色的外泌体与未染色的外泌体，粒子数以及粒子直径几乎没有影响(下图左)，但在产品P染色前后，粒子数和粒子直径有明显的变化(下图右)。
＊检测装置：LM10-HSBFT 14 (Nanosight公司生产)
对外泌体膜电位的影响
制备Mem-Dye系列(Green、Red、Deep Red)以及产品P(绿色、红色)的10 µmol/l DMSO溶液，并对10 µg(蛋白质含量)的外泌体进行染色后测定Zeta电位。
结果证实，使用Mem-Dye系列染色与使用产品P染色比较，使用Mem-Dye引起的Zeta电位变化会小很多
＊检测装置：Zetasizer Nano ZSP(Malvern Panalytical公司生产)
参考文献
Takashi Shimomura et al., “New Lipophilic Fluorescent Dyes for Exosome Labeling: Monitoring of Cellular Uptake of Exosomes”.bioRxiv., 2020, doi:10.1101/2020.02.02.931295.
特点3：外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
纯化方法(未反应染料的去除)的比较
ExoSparklar系列中用于除去未反应染料的过滤管，与以往使用的相同用途的凝胶过滤法相比，能够以更高的回收率纯化外泌体。
| 回收率 | |||||
| 过滤管（本试剂盒） | 50% | ||||
| 凝胶过滤法 | 10% | ||||
| ※本公司的实施例：通过NTA技术（纳米颗粒跟踪分析）比较提取前后的外泌体粒子数 | |||||
关于使用过滤管进行纯化的有效性，常见问题是：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？详见Q&A。
特点4：多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■实验条件
超速离心法纯化的外泌体(蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■观察条件
Green: Ex： 488 nm / Em： 490-540 nm
Red: Ex： 561 nm / Em： 570-640 nm
Deep Red: Ex： 640 nm / Em： 640-760 nm
| 产品名称 | 容量 | 货号 | |||
| 外泌体膜荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green | 5 samples | EX01 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red | 5 samples | EX02 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX03 | |||
| 外泌体蛋白荧光染色试剂盒 | |||||
| （绿色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green | 5 samples | EX04 | |||
| （红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red | 5 samples | EX05 | |||
| （深红色）ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red | 5 samples | EX06 | |||
| *纯化的外泌体(超离心法)，蛋白质：1-10 µg/sample，粒子数：10-100×10^8个/sample | |||||
常见问题Q&A
| Q1：纯化外泌体建议用什么方法？ |
| A1：一般我们推荐使用超速离心法纯化外泌体。但是，免疫沉淀法和磁珠法纯化的外泌体也有过成功染色的实例。 目前，聚合物沉淀法纯化的外泌体由于有聚合物的残留会影响外泌体的染色，所以无法使用本试剂盒。 |
| Q2：细胞摄取外泌体时使用的是哪种培养基？ |
| A2：我们公司在做染色后外泌体进入细胞的实验时，使用过MEM（Minimum Essential Medium）和DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）。目前我们公司一直采用的含血清培养基进行外泌体实验，暂时无法推荐无血清培养基。 |
| Q3：染色后的外泌体可以长期保存吗？ |
| A3：染色后的外泌体不建议长期保存。染色后的外泌体最好尽快进行后续实验。 |
| Q4：标记后的纯化操作时，过滤膜上有颜色残留，能否确定未反应的染料彻底分离了？ |
| A5:虽然在过滤膜上可以观察到颜色的残留，但是我们公司通过下面的实验验证了过滤膜上的回收产物里不含未反应的染料。 <实验条件> 超速离心法纯化的①含有外泌体（蛋白质含量10 µg）的缓冲液和②单纯缓冲液，分别按照试剂盒说明书记载的步骤进行染色操作。染色后的产物加入到HeLa细胞中（1.25×104 cells），4小时后进行荧光观察。 结果显示，单纯缓冲液染色后的回收产物加入到细胞后，没有观察到荧光，进而可证明回收产物中没有残留的染料。 |
① Exosome + Buffer
② Only Buffer
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Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
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1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, “Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production”, Toxicology, 2020, doi:10.1016/j.tox.2020.152544.
2) Y. Nakao, T. Fukuda, Q. Zhang, T. Sanui, T. Shinjo, X. Kou, C. Chen, D. Liu, Y. Watanabe, C. Hayashi, H. Yamato, K. Yotsumoto, U. Tanaka, T. Taketomi, T. Uchiumi, A. D. Le, S. Shi, F. Nishiura, “Exosomes from TNF-α-treated human gingiva-derived MSCs enhance M2 macrophage polarization and inhibit periodontal bone loss”, Acta Biomater., 2020, doi:10.1016/j.actbio.2020.12.046.
3）Misato Horie, Kurara Takagane , Go Itoh , Sei Kuriyama , Kazuyoshi Yanagihara , Masakazu Yashiro , Michinobu Umakoshi , Akiteru Goto , Junichi Arita and Masamitsu Tanaka，“Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment”molecular oncology.，2023，doi:10.1002/1878-0261.13524.
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外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit
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ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒
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ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒EX01外泌体膜检测
内体-外泌体
外泌体是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100 nm。尽管外泌体最初在1983年就被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而最近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。 2010年以来与外泌体相关的文献数更是呈现爆发式增长，随着研究的不断深入，外泌体相关的实验在疾病机理、分子诊断、药物递送等领域都有着非常广阔的前景。
外泌体
内体
品名货号用途
| 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit | EX10 | 外泌体提取 |
| ExoIsolator Isolation Filter | EX11 | 外泌体提取 |
| ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒 | EX01 | 外泌体膜检测 |
| ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒 | EX02 | 外泌体膜检测 |
| ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red试剂盒 | EX03 | 外泌体膜检测 |
| ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒 | EX04 | 外泌体蛋白检测 |
| ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒 | EX05 | 外泌体蛋白检测 |
| ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒 | EX06 | 外泌体蛋白检测 |
日本同仁化学内体-外泌体 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit EX10- DOJINDO
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息
内体-外泌体
外泌体是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100 nm。尽管外泌体最初在1983年就被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而最近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。 2010年以来与外泌体相关的文献数更是呈现爆发式增长，随着研究的不断深入，外泌体相关的实验在疾病机理、分子诊断、药物递送等领域都有着非常广阔的前景。
外泌体
内体
品名货号用途
| 外泌体(Exosomes)提取试剂盒—ExoIsolator Exosome Isolation Kit | EX10 | 外泌体提取 |
| ExoIsolator Isolation Filter | EX11 | 外泌体提取 |
| ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green试剂盒 | EX01 | 外泌体膜检测 |
| ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red试剂盒 | EX02 | 外泌体膜检测 |
| ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red试剂盒 | EX03 | 外泌体膜检测 |
| ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green试剂盒 | EX04 | 外泌体蛋白检测 |
| ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red试剂盒 | EX05 | 外泌体蛋白检测 |
| ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red试剂盒 | EX06 | 外泌体蛋白检测 |
| AcidSensor Labeling Kit – Endocytic Internalization Assay 细胞内吞作用的内化过程检测 | A558 | 细胞内吞作用的内化过程检测 |
| ECGreen-Endocytosis Detection试剂盒 | E296 | 细胞内吞作用 |
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> 细胞摄取外泌体研究
染色后的外泌体的应用
近年来研究发现，外泌体作为细胞外囊泡（Extracellular vesicle; EV）的一种，与癌症的恶化与转移密切相关，外泌体相关的研究也逐渐成为了关注的热点。
为了研究通过外泌体的细胞间通信，细胞摄入外泌体时的示踪技术非常重要，因此细胞外囊泡的磷脂双分子层或蛋白质的荧光染色试剂被广泛应用。
同仁化学外泌体膜染色试剂的独特优势
同仁化学外泌体膜染色试剂盒与其他同类染色试剂相比，具有背景低，无团聚，不影响外泌体性质等独特优势。
外泌体的标记和纯化一步到位
ExoSparkler系列已经对外泌体标记的最佳条件进行摸索并做成了操作手册，试剂盒内包含纯化所需的过滤管，可以简单快捷的进行外泌体的标记和纯化。
多种颜色选择
ExoSparkler系列包括膜 (Mem Dye)和蛋白质 (Protein Dye)荧光染色试剂，各三种颜色 (Green, Red, Deep Red)。
■ 实验条件
高速离心法纯化的外泌体 (蛋白质的量为10 μg)经过各试剂染色后，与HeLa细胞(1.25×104 cells)一起培养24 h，清洗后进行荧光观察。
■ 观察条件
Green:
Ex 488 nm/ Em 490-540 nm
Red:
Ex 561 nm/ Em 570-640 nm
Deep Red:
Ex 640 nm/ Em 640-760 nm
エクソソーム 膜蛍光染色キット Green ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
08 ラベル化剤
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
- ラベル化剤
エクソソーム 膜蛍光染色キット Green
- 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
- 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能
-
製品コードEX01 ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples | ￥26,800 | 343-09661 |
精製済エクソソームを染色することができます。
精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。
キット内容
| 5 samples | ・Mem Dye-Green ・Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
より正確にエクソソームの動態を観察する
エクソソームの膜を染色するためによく用いられている膜染色色素（S 社 製品P）には、色素自体が凝集を起こし、エクソソームに由来しない蛍光起点が生じたり、エクソソームの性質変化やバックグラウンドの上昇などを招く課題が挙げられています1), 2)。
ExoSparkler シリーズで用いている色素（Mem Dye-Green, Red, Deep Red）は凝集を起こさず、エクソソームの性質にもほとんど影響を及ぼさないため、より正確にエクソソームの動態を観察することが可能です。
| 参考文献 | |
| 1) | Mehdi Dehghani et al., “Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. |
| 2) | Pužar Dominkuš P et al., “PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.” Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013. |
技術や使用製品に関する補足
|
技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
-
細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | GMSC由来 マクロファージ取り込み |
蛍光顕微鏡 | R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, doi:10.1016/j.tox.2020.152544. |
| 2) | HEK293s由来 HeLa取り込み |
蛍光顕微鏡 | Y. Nakao, T. Fukuda, Q. Zhang, T. Sanui, T. Shinjo, X. Kou, C. Chen, D. Liu, Y. Watanabe, C. Hayashi, H. Yamato, K. Yotsumoto, U. Tanaka, T. Taketomi, T. Uchiumi, A. D. Le, S. Shi, F. Nishiura, "Exosomes from TNF-α-treated human gingiva-derived MSCs enhance M2 macrophage polarization and inhibit periodontal bone loss", Acta Biomater., 2020, doi:10.1016/j.actbio.2020.12.046. |
| 3) | HEK293.2sus由来 磁性ナノゲルと融合 |
フローサイトメーター | R. Mizuta, Y. Sasaki, k. Katagiri, S. Sawada and K. Akiyoshi, "Reversible conjugation of biomembrane vesicles with magnetic nanoparticles using a self-assembled nanogel interface: single particle analysis using imaging flow cytometry", Nanoscale Adv., 2022, doi:10.1039/d1na00834j. |
| 4) | マウス T細胞由来 マウス肝臓、腎臓、足細胞取り込み |
蛍光顕微鏡 | H. Chuang, M. Chen, Y. Chen, Y. Ciou, C. Hsueh, C. Tsai and T. Tan, "Induction of Interferon-γ and Tissue Inflammation by Overexpression of Eosinophil Cationic Protein in T Cells and Exosomes", Arthritis Rheumatol., 2021, doi:10.1002/art.41920. |
| 5) | HeLa; MSC(mesenchymal stem cells)細胞由来 | 蛍光顕微鏡 | N. Kamei, H. Nishimura, A. Matsumoto, R. Asano, K. Muranaka, M. Fujita, M. Takeda, H. Hashimoto, M. Takeda-Morishita, "Comparative study of commercial protocols for high recovery of high-purity mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicle isolation and their efficient labeling with fluorescent dyes,", 2021, doi:10.1016/j.nano.2021.102396. |
| 6) | Lck-BPI Tg T cells-由来 | 蛍光顕微鏡 | H. Chuang, M. Chen, Y. Chen, H. Yang, Y. Ciou, C. Hsueh, C. Tsai, T. Tan, "BPI overexpression suppresses Treg differentiation and induces exosome-mediated inflammation in systemic lupus erythematosus", 2021, doi:10.7150/thno.63743. |
| 7) | Colorectal Cancer細胞由来 | 蛍光顕微鏡 | H. Takakura, T. Nakao, T. Narita, M. Horinaka, Y. Nakao-Ise, T. Yamamoto, Y. Iizumi, M. Watanabe, Y. Sowa, K. Oda, N. Mori, T. Sakai, and M. Mutoh, "Citrus limon L.-Derived Nanovesicles Show an Inhibitory Effect on Cell Growth in p53-Inactivated Colorectal Cancer Cells via the Macropinocytosis Pathway ", 2022, doi:10.3390/biomedicines10061352. |
よくある質問
-
Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
-
A
超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。
-
Q
標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
-
A
未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。
＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×104 cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
■ 検出条件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
-
Q
染色後のエクソソームは保存できますか？
-
A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
-
Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
-
A
小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。
-
Q
1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。
-
A
1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 108 個/sample
-
Q
エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？
-
A
はい。エクソソームにタンパク質やポリマー*等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
*精製方法によっては、ポリマーが残存する場合があります。精製方法については、「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵,遮光 |
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
-
エクソソーム 膜蛍光染色キット Red
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
エクソソーム 膜蛍光染色キット Red ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
08 ラベル化剤
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
- ラベル化剤
エクソソーム 膜蛍光染色キット Red
- 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
- 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能
-
製品コードEX02 ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples | ￥26,800 | 340-09671 |
精製済エクソソームを染色することができます。
精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。
キット内容
| 5 samples | ・Mem Dye-Red ・Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
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マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
より正確にエクソソームの動態を観察する
エクソソームの膜を染色するためによく用いられている膜染色色素（S 社 製品P）には、色素自体が凝集を起こし、エクソソームに由来しない蛍光起点が生じたり、エクソソームの性質変化やバックグラウンドの上昇などを招く課題が挙げられています1), 2)。
ExoSparkler シリーズで用いている色素（Mem Dye-Green, Red, Deep Red）は凝集を起こさず、エクソソームの性質にもほとんど影響を及ぼさないため、より正確にエクソソームの動態を観察することが可能です。
| 参考文献 | |
| 1) | Mehdi Dehghani et al., “Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. |
| 2) | Pužar Dominkuš P et al., “PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.” Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013. |
技術や使用製品に関する補足
|
技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
-
細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用 (リンク) |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞 （RAW264.7） |
蛍光顕微鏡 | 1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544. |
| 2) | 細胞 （ADSCs） |
蛍光顕微鏡 | A. Shimoda R. Miura, H. Tateno, N. Seo, H. Shiku, S. Sawada, Y. Sasaki and K. Akiyoshi, "Assessment of Surface Glycan Diversity on Extracellular Vesicles by Lectin Microarray and Glycoengineering Strategies for Drug Delivery Applications", Small Methods, 2021, doi:10.1002/smtd.202100785. |
| 3) | HEK293T細胞由来 | 蛍光顕微鏡 | Y. Matsuki, T. Yanagawa, H. Sumiyoshi, J. Yasuda, S. Nakao, M. Goto, T. Shibata-Seki, T. Akaike, Y. Inagaki, "Modification of exosomes with carbonate apatite and a glycan polymer improves transduction efficiency and target cell selectivity", 2021, doi:10.1016/j.bbrc.2021.10.063. |
| 4) | Colorectal Cancer細胞由来 | 蛍光顕微鏡 | H. Takakura, T. Nakao, T. Narita, M. Horinaka, Y. Nakao-Ise, T. Yamamoto, Y. Iizumi, M. Watanabe, Y. Sowa, K. Oda, N. Mori, T. Sakai, and M. Mutoh, "Citrus limon L.-Derived Nanovesicles Show an Inhibitory Effect on Cell Growth in p53-Inactivated Colorectal Cancer Cells via the Macropinocytosis Pathway ", 2022, doi:10.3390/biomedicines10061352. |
よくある質問
-
Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
-
A
超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。
-
Q
標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
-
A
未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。
＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×104 cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
■ 検出条件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
-
Q
染色後のエクソソームは保存できますか？
-
A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
-
Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
-
A
小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。
-
Q
1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。
-
A
1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 108 個/sample
-
Q
エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？
-
A
はい。エクソソームにタンパク質やポリマー*等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
*精製方法によっては、ポリマーが残存する場合があります。精製方法については「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意 |
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
-
エクソソーム 膜蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
エクソソーム 膜蛍光染色キット Deep Red ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red
08 ラベル化剤
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red
- ラベル化剤
エクソソーム 膜蛍光染色キット Deep Red
- 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
- 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能
-
製品コードEX03 ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples | ￥26,800 | 347-09681 |
精製済エクソソームを染色することができます。
精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。
キット内容
| 5 samples | ・Mem Dye-Deep Red ・Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
より正確にエクソソームの動態を観察する
エクソソームの膜を染色するためによく用いられている膜染色色素（S 社 製品P）には、色素自体が凝集を起こし、エクソソームに由来しない蛍光起点が生じたり、エクソソームの性質変化やバックグラウンドの上昇などを招く課題が挙げられています1), 2)。
ExoSparkler シリーズで用いている色素（Mem Dye-Green, Red, Deep Red）は凝集を起こさず、エクソソームの性質にもほとんど影響を及ぼさないため、より正確にエクソソームの動態を観察することが可能です。
| 参考文献 | |
| 1) | Mehdi Dehghani et al., “Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028. |
| 2) | Pužar Dominkuš P et al., “PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.” Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013. |
技術や使用製品に関する補足
|
技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
-
細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。
参考文献
参考文献を表示する
1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544.
よくある質問
-
Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
-
A
超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。
-
Q
標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
-
A
未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。
＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×104 cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
■ 検出条件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
-
Q
染色後のエクソソームは保存できますか。
-
A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
-
Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
-
A
小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。
-
Q
1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。
-
A
1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 108 個/sample
-
Q
エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？
-
A
はい。エクソソームにタンパク質やポリマー*等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
*精製方法によっては、ポリマーが残存する場合があります。精製方法については「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵,遮光 |
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
-
エクソソーム 膜蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
08 ラベル化剤
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
- ラベル化剤
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
- 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
- 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能
-
製品コードEX04 ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples | ￥21,400 | 344-09691 |
精製済エクソソームを染色することができます。
精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。
キット内容
| 5 samples | ・Protein Dye-Green ・Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
このキットだけで蛍光標識から精製まで
ExoSparkler シリーズは、エクソソームの標識に最適化したプロトコルに加え、蛍光標識後の未反応色素を除去できるフィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。
 |
精製手法(未反応色素の除去)の比較
ExoSparklarシリーズで未反応色素の除去に使用しているフィルトレーションチューブは、同用途で従来から用いられているゲルろ過法と比較して、高い回収率でエクソソームを精製することが可能です。
| 回収率※ | |
| フィルトレーションチューブ(本キット) | 50% 程度 |
| ゲルろ過法 | 10% 程度 |
| ※ 小社での実施例：精製前後のエクソソーム粒子数をNTA(ナノ粒子トラッキング解析)で比較 | |
フィルトレーションチューブを用いた精製の有効性確認の蛍光画像をよくある質問：標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？に掲載しています。
技術や使用製品に関する補足
|
技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
-
細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。
よくある質問
-
Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
-
A
超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。
-
Q
標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
-
A
未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。
＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10 µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×104 cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
■ 検出条件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
-
Q
染色後のエクソソームは保存できますか。
-
A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
-
Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
-
A
小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。
-
Q
1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。
-
A
1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 108 個/sample
-
Q
エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？
-
A
はい。エクソソーム以外のタンパク質等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
精製方法については、「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵 |
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Red
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
-
エクソソーム 膜蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
-
エクソソーム精製キット
ExoIsolator Exosome Isolation Kit
-
免疫染色用青色蛍光基質
CLAMP F405-Signal Boosting
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Red ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
08 ラベル化剤
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
- ラベル化剤
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Red
- 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
- 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能
-
製品コードEX05 ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Red
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples | ￥21,400 | 347-09701 |
精製済エクソソームを染色することができます。
精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。
キット内容
| 5 samples | ・Protein Dye-Red ・Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
このキットだけで蛍光標識から精製まで
ExoSparkler シリーズは、エクソソームの標識に最適化したプロトコルに加え、蛍光標識後の未反応色素を除去できるフィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。
 |
精製手法(未反応色素の除去)の比較
ExoSparklarシリーズで未反応色素の除去に使用しているフィルトレーションチューブは、同用途で従来から用いられているゲルろ過法と比較して、高い回収率でエクソソームを精製することが可能です。
| 回収率※ | |
| フィルトレーションチューブ(本キット) | 50% 程度 |
| ゲルろ過法 | 10% 程度 |
| ※ 小社での実施例：精製前後のエクソソーム粒子数をNTA(ナノ粒子トラッキング解析)で比較 | |
フィルトレーションチューブを用いた精製の有効性確認の蛍光画像をよくある質問：標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？に掲載しています。
技術や使用製品に関する補足
|
技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
-
細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。
よくある質問
-
Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
-
A
超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。
-
Q
標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
-
A
未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。
＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10 µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×104 cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
■ 検出条件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
-
Q
染色後のエクソソームは保存できますか。
-
A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
-
Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
-
A
小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。
-
Q
1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。
-
A
1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 108 個/sample
-
Q
エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？
-
A
はい。エクソソーム以外のタンパク質等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
精製方法については、「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意 |
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
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エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
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エクソソーム 膜蛍光染色キット Deep Red
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red
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エクソソーム精製キット
ExoIsolator Exosome Isolation Kit
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免疫染色用青色蛍光基質
CLAMP F405-Signal Boosting
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Deep Red ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red
08 ラベル化剤
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red
- ラベル化剤
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Deep Red
- 細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
- 本キットだけで蛍光標識から精製まで可能
-
製品コードEX06 ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 5 samples | ￥21,400 | 344-09711 |
精製済エクソソームを染色することができます。
精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。
キット内容
| 5 samples | ・Protein Dye-Deep Red ・Filtration tube |
×1 ×5 |
|---|
試験成績書
SDSダウンロード
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
技術情報
このキットだけで蛍光標識から精製まで
ExoSparkler シリーズは、エクソソームの標識に最適化したプロトコルに加え、蛍光標識後の未反応色素を除去できるフィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。
 |
精製手法(未反応色素の除去)の比較
ExoSparklarシリーズで未反応色素の除去に使用しているフィルトレーションチューブは、同用途で従来から用いられているゲルろ過法と比較して、高い回収率でエクソソームを精製することが可能です。
| 回収率※ | |
| フィルトレーションチューブ(本キット) | 50% 程度 |
| ゲルろ過法 | 10% 程度 |
| ※ 小社での実施例：精製前後のエクソソーム粒子数をNTA(ナノ粒子トラッキング解析)で比較 | |
フィルトレーションチューブを用いた精製の有効性確認の蛍光画像をよくある質問：標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？に掲載しています。
技術や使用製品に関する補足
|
技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻 秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。 |
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細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。
よくある質問
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Q
推奨されるエクソソームの精製法はありますか？
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A
超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。
1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。
2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。
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Q
標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？
-
A
未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。
＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10 µg)のバッファー溶液 または ②バッファーのみ を各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×104 cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。
①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
②バッファーのみをキットで処理した場合
細胞へ添加後(4h)の蛍光画像
■ 検出条件
Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm
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Q
染色後のエクソソームは保存できますか。
-
A
染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。
-
Q
エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。
-
A
小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。
-
Q
エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？
-
A
はい。エクソソーム以外のタンパク質等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
精製方法については、「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。
-
Q
1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。
-
A
1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 108 個/sample
取扱条件
| 保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意 |
SDSダウンロード
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
-
エクソソーム 膜蛍光染色キット Red
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
-
エクソソーム精製キット
ExoIsolator Exosome Isolation Kit
-
免疫染色用青色蛍光基質
CLAMP F405-Signal Boosting
エクソソーム精製キット ExoIsolator Exosome Isolation Kit 同仁化学研究所
上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
ExoIsolator Exosome Isolation Kit
08 ラベル化剤
ExoIsolator Exosome Isolation Kit
- ラベル化剤
- 細胞機能解析
エクソソーム精製キット
- テクニック不要の操作性
- 超遠心法と同等の回収実績
- フィルターホルダーは再使用可能
-
製品コードEX10 ExoIsolator Exosome Isolation Kit
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 3 tests | ￥78,100 | 340-09931 |
【お知らせ】
・2024年2月1日以降に製造したEX10およびEX11には新しいIsolation Filterが同梱されます。
（新しいIsolation Filterが同梱された製品外装は「NEW FILTER」 シールが貼付されています。）
・従来のIsolation Filterと新しいIsolation Filterでは、取扱方法が異なります。
同梱されたIsolation Filterを必ずご確認の上、専用の取扱説明書および取扱動画をご利用ください。
|
|
||||||
尚、性能は従来のフィルターと変わらないことを確認しております。
キット内容
| 3 tests | ・Filter Holder ・Isolation Filter ・Tweezers |
×1 ×3 ×1 |
|---|
試験成績書
- ご購入方法
- お問い合わせ
技術情報
取扱説明書/取扱動画
同梱のIsolation Filterのラベルをご確認の上、取扱説明書および取扱動画をご参照ください。
-
新しい Isolation Filter の取扱説明書
(2024年2月1日以降に製造)-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
新しい Isolation Filter 専用動画
-
-
従来のIsolation Filter の取扱説明書
(2024年2月1日より前に製造)-
取扱説明書 日本語
-
Manual English
従来の Isolation Filter 専用動画
-
参考文献
参考文献を表示する
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) | 細胞培養上清 Luva Cell (ヒト肥満細胞)由来 |
蛍光顕微鏡 | Y. Wang, A. Chen, "Mast cell-derived exosomal miR-181a-5p modulated trophoblast cell viability, migration, and invasion via YY1/MMP-9 axis", J. Clin. Lab. Anal., 2022, doi:10.1002/jcla.24549. |
よくある質問
-
Q
回収できるサイズを教えてください。
-
A
約100-200 nmのサイズを回収できます。
(参考)
HEK293S細胞の培養上清より回収したエクソソームの粒度分布
-
Q
フィルター1枚の処理可能なサンプル量を教えてください。
-
A
培養上清の場合、25 mlを推奨しています。
試料の体積が増えると吸引ろ過の時間が長くなります。
例えば、HEK293S細胞の培養上清25 ml(タンパク質量11.2 μg)を用いた場合、吸引ろ過に約5-10分間を要します。
また、試料の体積だけでなく、試料に含まれるエクソソームやタンパク質の量に依存して吸引ろ過の時間が変わります。
-
Q
培養上清からどのぐらいの量のエクソソームがとれますか。
-
A
細胞種により分泌されるエクソソーム量が異なりますので、回収できるエクソソーム量も細胞種や培養方法により異なります。一例として、HEK293S細胞(振盪培養にて培養)の培養上清 25 ml からのエクソソームを回収した実績をご紹介します。
回収タンパク質量 (μg)
回収粒子数 (particles)
11.2 (SD±2.09)
6.0E+09 (SD±1.0E+9)
※タンパク質量はBCA法、粒子数はナノ粒子トラッキング解析にて測定しました。
-
Q
ExoIsolator でのエクソソームの回収率を教えてください。
-
A
サンプルによって回収率が変動する可能性がございます。
一例として、市販のウシ生乳由来エクソソームをExoIsolator で再精製して回収率を測定した実績を下記に示します。タンパク質回収率 (%) 粒子回収率 (%) 34.6 (SD±3.9) 38.3 (SD±8.3) ※タンパク質量はBCA法、粒子数はナノ粒子トラッキング解析にて測定しています。
-
Q
血清含有培地で培養した細胞の培養上清からエクソソームを回収できますか。
-
A
血清含有培地の使用は推奨いたしません。細胞培養で使用される血清(FBS 等)にもエクソソームが含まれているため、血清を含む細胞培養上清から回収したエクソソームには血清由来のエクソソームも含有されてしまい、実験結果に影響を及ぼす可能性が考えられます。
-
Q
回収したエクソソームは保存できますか。
-
A
4℃にて1ヶ月から半年間保存できます。長期間保存する場合は、-80℃で保管してください。ただし、凍結融解を極力避けるため、小分けし保存して下さい。
引用：吉岡 祐亮、落谷 孝広(2020)、エクソソーム実験ガイド ISBN: 978-4-7581-2246-7
-
Q
手持ちのアスピレーターの吸引圧がわかりません。どのように確認すればよいですか？
-
A
吸引圧が表示される圧力ゲージを、別途、ご準備頂くと確認できます。
ゲージをご準備できない場合は、PBSのみを吸引ろ過して、その処理時間を目安に吸引圧を調整してください。
フィルターセット後、PBS 25 mlを-25kPaの吸引圧にてろ過した場合、約30秒程度かかります。なお、エクソソームの回収率の再現性を維持するために、吸引圧のご確認をお奨めします。
-
Q
エクソソームがうまく回収できません(回収率が低い)。どのような原因が考えられますか。
-
A
以下の3つが原因として考えられますので、ご確認ください。
１．ろ過の際、アスピレーターの吸引圧が強すぎるとエクソソームがフィルターを通過し、回収量が著しく減少いたします。推奨の吸引圧である-25 kPa またはそれよりも弱い吸引圧でろ過を行ってください。
２．Isolation Filter には表裏があり、間違って表裏を逆転させてフィルターを使用するとエクソソームの回収率が低下します。Isolation Filer の表(光沢のある面)を上にしてご使用ください。詳細は取扱説明書および使用方法の動画をご覧ください。
３．Isolation Filter にトラップされたエクソソームを全て回収するためには、フィルター全体にPBSを万遍なくかけて回収する必要があります。こちらも、取扱説明書および使用方法の動画をご覧ください。
-
Q
吸引ろ過に時間がかかります。フィルターが目詰まりします。どのような原因が考えられますか。
-
A
以下の3つが原因として考えられますので、ご確認ください。
1.サンプルの量が多すぎる、またはサンプル中のタンパク質濃度が高すぎると濾過に時間がかかる場合があります。
【小社実績】HEK293S細胞上清処理時の試料体積とろ過時間
25 ml (タンパク質量11.2 μg): 5-10分
50 ml (タンパク質量22.4 μg): 30-60分2.吸引度が低すぎるとろ過に時間がかかります。
【小社実績】HEK293S細胞上清(25 ml)処理時の吸引圧とろ過時間
吸引圧 -25 kPa: 5-10分
吸引圧 -10 kPa: 10-20分3.エクソソーム以外の夾雑物が多く含まれると、目詰まりを起こす場合があります。
サンプルを予め0.22 μmフィルターで処理していただくことを推奨します。
取扱条件
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
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エクソソーム 膜蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green
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エクソソーム 膜蛍光染色キット Red
ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red
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エクソソーム タンパク質蛍光染色キット Green
ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Green
-
エクソソーム精製キット用フィルター
ExoIsolator Isolation Filter