EnGen® 突变检测试剂盒 货 号 #E3321SNEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® 突变检测试剂盒                              收藏

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#E3321S
25次反应
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特性

· 基于 T7 核酸内切酶的基因编辑检测

概述

EnGen 基因编辑突变检测试剂盒为检测基因编辑效率提供一整套的试剂。试剂盒操作的第一步,首先使用
Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液从待测细胞中扩增出目的基因组的靶标区域(即通过 CRISPR/Cas9、
TALENs或 ZFN等方法进行了基因编辑的区域),经退火、延伸步骤后,形成异源双链 DNA。在扩增子池中经过多轮循环后,基因插入和缺失(Indels)等造成的突变得到富集。第二步,将退火后的 PCR 产物用 EnGen T7 核酸内切酶 I 进行切割。 EnGen T7 核酸内切酶 I 是一种结构特异性酶,可有效识别大于1个碱基的基因错配。当错配出现时,DNA 分子的两条链被切割从而形成较小的片段。分析片段图谱可以对基因编辑实验的效率进行评估。
 
EnGen 基因编辑突变检测试剂盒包含一组对照模板和引物预混液,可用作 PCR 反应及 T7 核酸内切酶 I 消化实验的对照。对照模板和引物预混液中含有 2 种对照质粒和 1 对对照引物。经 PCR 扩增、变性、退火后,部分会形成含有10个碱基的插入突变,此种异源双链 DNA 正是 T7 核酸内切酶 I 的底物,600 bp 的 DNA 会被切割成 200 bp 和 400 bp 的两个片段;而同源双链 DNA 则不被 T7 核酸内切酶 I 切割。通过琼脂糖凝胶电泳或片段分析设备可以非常方便的分辨出同源(野生型)和异源(突变)片段。
 
试剂盒的实验流程经过优化,通过 Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液扩增得到的 PCR 产物可以不经纯化而直接用 T7 核酸内切酶 I 进行消化。 异源双链DNA 分子只需 15 分钟就可以被完全切割,随后用蛋白酶 K 将反应终止。 此外, Q5 热启动超保真聚合酶 2× 预混液还可以用于优化靶点扩增的实验 。
 
图1: 实验流程

EnGen® 突变检测试剂盒            货   号                  #E3321S

将引物设计在已完成基因编辑位点的两侧,PCR 产物变性、退火后会生成三种结构。其中一种结构能够被 T7 核酸内切酶 I 切割(多于1个碱基错配的双链 DNA),经电泳分离和片段分析后,估算出基因编辑效率。

Engen 突变检测试剂盒组分

– Q5 热启动超保真聚合酶 2X 预混液
– NEBuffer 2
– EnGen T7 核酸内切酶 I
– 对照模板和引物预混液
– 蛋白酶 K.,分子生物级
– Quick-Load® 紫色 2-Log DNA Ladder (0.1 – 10.0 kb)
– 紫色凝胶上样染料 6X,无 SDS

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes 货 号 #E3322SNEB酶试剂 New England Biolabs

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#E3322S
20 rxns
5,139.00

#E3322V
10 rxns
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相关产品

紫色凝胶上样染料 6X
2-Log DNA Ladder(0.1-10.0kb)
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特性:

一个小时甚至更短时间内快速合成微克级的 sgRNA
EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes            货   号                  #E3322S
 

概述

EnGen sgRNA 合成试剂盒, S. pyogenes 能简单快速合成 sgRNA 。利用试剂盒提供的试剂和使用者自己设计的特异性 DNA 序列,单管反应 30 分钟就能获得大量 sgRNA 。
自然界中,S. pyogenes Cas9 的启动 2 种 RNA 有关。及 crRNA 和 trRNA。crRNA 又CRISPR RNA包含大约 20 个核苷酸,位于PAM (Protospacer Adjacent Motif)  NGG 序列的上游,与目标 DNA 反义链同源互补。另一种 tracrRNA  又称  transactivating crRNA tracrRNA 序列的一部分与 crRNA 互补,所形成的互补序列及二级结构可被 Cas9 识别。在实际操作中,将 tracrRNA  和 crRNA 的序列进行整合,形成一条长片段单链指导 RNA ( sgRNA)  , 并与 Cas 9 形成复合体,识别并切割目标 DNA。
在 EnGen 2X sgRNA 反应混合液中,含有能被 S. pyogenes Cas 9 识别并起支架作用的特异性序列,该序列的一部分能与使用者设计的目标特异序列部分重叠。退火形成互补链后由 DNA  聚合酶进行填充。最终生成用于转录的 dsDNA 模板。本试剂盒可在一个反应中完成 dsDNA 的合成及 RNA 转录,生成具有功能的 sgRNA。
 

实验流程:

 EnGen® sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes            货   号                  #E3322S

A.特异目标链包含三个部分,分别是 T7 启动子、~20 nt 目标特异性序列及与 S. pyogenes Cas9 识别支架序列互补的 14 nt 重叠区域(反应混合液中提供)。室温下,混合特异性目标链(或 EnGen sgRNA 调控序列)与 EnGen2X sgRNA 反应预混液(NTPs,dNTPs,S. pyogenes Cas9 识别支架序列)及 EnGen sgRNA 酶预混液(DNA 和 RNA 聚合酶)。B.在 37℃ 条件下,具有 14 nt 互补重叠区域的 2 个片段发生退火。C. DNA 聚合酶从 3´ 端开始延伸,形成一个双链 DNA 模板。D. RNA 聚合酶识别 T7 启动子及其下游的 dsDNA 并开始转录。最终形成的 sgRNA 包含目标特异片段、crRNA 和 tracrRNA。37℃ 条件下,单管反应 30 分钟即可完成所有步骤。

EnGen sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes 组分

– EnGen sgRNA 酶混合液
– EnGen 2X sgRNA 反应混合液,S. pyogenes
– DNase I (RNase-free)
– EnGen sgRNA control Oligo,S. pyogenes

参考文献

关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶 货 号 #M0646MNEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                              收藏

EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M EnGen® Spy Cas9 NLS 核酸酶                货   号                  #M0646M

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#M0646M
2,000 pmol
7,199.00

#M0646T
400 pmol
1,799.00

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特性

· 双链 DNA 位点特异性切割
·    基因组编辑

概述:

EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes, 是一种 RNA 介导的核酸内切酶,可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM(Protospacer Adjacent Motif)序列的 NGG 处,在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后,位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。在 EnGen Cas9 核酸酶 NLS, S. pyogenes 蛋白质的 N-端和 C-端都含有猴病毒40 (SV40) T 抗原的核定位序列 (NLS)。

来源:

 重组 E. coli 菌株,含有克隆自酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)的 Cas9 基因,在其编码蛋白的 N-端和 C-端都含有猿猴病毒 40(SV40)抗原的核定位序列(NLS),N-端同时带有 6X His标签。

反应条件:

1× Cas9 核酸酶反应缓冲液
37℃
孵育
 
 

质保声明:

EnGen Cas9 核酸酶 NLS,S. pyogenes 经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。

详情请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com 查询。

浓度:

20 μM

参考文献

 关于该酶特性和产品应用的参考文献,请登陆www.neb.com 或 www.neb-china.com。

EnGen® Spy Cas9 切刻酶 货 号 #M0650SNEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® Spy Cas9 切刻酶                              收藏

EnGen® Spy Cas9 切刻酶                货   号                  #M0650S EnGen® Spy Cas9 切刻酶                货   号                  #M0650S EnGen® Spy Cas9 切刻酶                货   号                  #M0650S EnGen® Spy Cas9 切刻酶                货   号                  #M0650S

货 号
规 格
价 格(元)
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#M0650S
70 pmol
719.00

#M0650T
400 pmol
1,799.00

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特性

Ÿ   体外切刻 dsDNA

Ÿ   通过直接导入有活性的切刻酶复合物进行基因编辑。

概述

 EnGen ® Spy Cas9 切刻酶是 Cas9 核酸酶的突变体,其在 RuvC 核酸酶结构域中引入了点突变(D10A)。EnGen ® Spy Cas9 切刻酶可以产生切刻,但不能切割 DNA。利用 EnGen Cas9 切刻酶近距离地靶向两个目标位点,产生 DNA 双链断裂,并且降低脱靶效应。与 EnGen sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes NEB #E3322)兼容。

反应条件

 1X NEBuffer™ 3.137 温育

热失活

 65°C5 min

 

 

 

浓度

 1 µM20 µM

质保声明

 EnGen ® Spy Cas9 切刻酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

参考文献

 关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

EnGen® Spy dCas9(SNAP-tag®)核酸酶 货 号 #M0652SNEB酶试剂 New England Biolabs

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EnGen® Spy dCas9(SNAP-tag®)核酸酶                              收藏

EnGen® Spy dCas9(SNAP-tag®)核酸酶               货   号                  #M0652S EnGen® Spy dCas9(SNAP-tag®)核酸酶               货   号                  #M0652S EnGen® Spy dCas9(SNAP-tag®)核酸酶               货   号                  #M0652S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0652S
70 pmol
719.00

#M0652T
400 pmol
1,799.00

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特性

·体外切刻 dsDNA

·通过直接导入有活性的切刻酶复合物进行基因编辑。

概述

 EnGen ® Spy dCas9SNAP-tag 核酸酶是 Cas9 核酸酶的无活性突变体,保留了与 DNA 的结合活性。N SNAP-tag 标签可与荧光基团、生物素和许多其它利于可视化和靶标富集的偶联物共价结合。与 EnGen sgRNA 合成试剂盒,S. pyogenes NEB #E3322)兼容。

反应条件

 1X NEBuffer™ 3.137 温育

浓度

 1 µM20 µM

质保声明

 EnGen ® Spy dCas9SNAP-tag) 核酸酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

参考文献

 关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶 货 号 #M0653SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶                              收藏

EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶               货   号                  #M0653S EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶               货   号                  #M0653S EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶               货   号                  #M0653S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0653S
70 pmoles
839.00

#M0653T
2,000 pmoles
2,999.00

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特性

·   体外切割 dsDNA

·   通过直接导入有活性的核酸酶复合物进行基因编辑。

概述

 EnGen ® Lba Cas12aCpf1 核酸酶识别富含 T TTTN PAM 序列,为基因打靶开辟了额外的基因组区域。所需 gRNA短,仅40-44 个碱基。其有两个核定位信号,提高运输到细胞核的效率。其切割产物为5′ 突出端。该酶的活性温度区间为 16-48℃。与氨基酸球菌(Acidaminococcus)的同源酶相比,在更低温度下活性依然良好,能用于编辑冷血动物基因组,如斑马鱼和非洲爪蟾等。高浓度酶可用于显微注射、电转和脂质体转染.

反应条件

 1X NEBuffer™ 2.137 温育

热失活

 65°C10 min

浓度

 1 µM100 µM

质保声明

 EnGen ® Lba Cas12aCpf1经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

参考文献

 关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

Lba Cas12a(Cpf1) 核酸酶序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

 EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶               货   号                  #M0653S

EnGen® Sau Cas9 核酸酶 货 号 #M0654SNEB酶试剂 New England Biolabs

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产品资料 – 基因编辑 – 应用于CRISPR工作流程中的NEB特色产品

EnGen® Sau Cas9 核酸酶                              收藏

EnGen® Sau Cas9 核酸酶                货   号                  #M0654S EnGen® Sau Cas9 核酸酶                货   号                  #M0654S EnGen® Sau Cas9 核酸酶                货   号                  #M0654S EnGen® Sau Cas9 核酸酶                货   号                  #M0654S

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#M0654S
70 pmol
719.00

#M0654T
400 pmol
1,799.00

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特性

·体外切割 dsDNA
·通过直接导入有活性的核酸酶复合物进行基因编辑

概述

EnGen ® Sau Cas9 核酸酶识别 5′-NNGRRT-3′ PAM 序列,切割位于 PAM 序列上游的第 3 个碱基位置,切割后为平末端。其双端核定位序列(NLS)可提高运输到细胞核的效率。高浓度酶可用于显微注射、电转和脂质体转染。

 

反应条件

 1X NEBuffer™ 3.137 温育

热失活

 65°C5 min

浓度

 1 µM20 µM

质保声明

 EnGen ® Sau Cas9 核酸酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

参考文献

 关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.com www.neb-china.com

Sau Cas9 核酸酶序列识别和 DNA 剪切工作原理示意图

 EnGen® Sau Cas9 核酸酶                货   号                  #M0654S