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AcidSensor Labeling Kit Endocytic Internalization Assay

04 細胞内蛍光プローブ

pHセンサーラベル化キット

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
3 samples	￥45,000	340-10041

サンプル量	50-200 µg
標識部位	-NH₂
検出方法	顕微鏡・FCM
蛍光特性	[Ex:645, Em:666]
・分子量50,000以上のタンパク質が標識できる。・Filtration Tubeを用いた分離操作により高い回収率で標識体が得られる。

キット内容

3 samples	・NH₂-Reactive AcidSensor ・WS Buffer ・Reaction Buffer ・Filtration Tube	3 tubes 4 ml　×1 500 μl×1 3 tubes

試験成績書

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本キットは、未反応の色素を除くために必要なフィルトレーションチューブを同梱しており、標識から精製操作までを行うことができます。^※
また、取扱説明書に沿って実験していただくことで、初めての方でも容易に AcidSensor を標識することが可能です。

※ 抗体やタンパク質は含まれません。
※ DMSO と培地は、別途ご準備ください。

Q サンプル溶液中の共存物は標識反応に影響しますか。: A

共存物の種類により影響することがあります。
溶液中にどのような物質が含まれるかを確認の上、状況に応じて標識に用いるサンプルの精製を行い、ご使用ください。
標識対象以外の分子量 10,000 以上のアミノ基を有する共存物は標識効率を低下させます。
また、アミノ基を持たない化合物でも、高分子の不純物が多いとフィルターの目詰まりの原因になり、標識・精製操作に支障がでる可能性もあります。
反応に使用する前に別途除去操作を行ってください。

Q 標識体を回収するWS buffer に細胞毒性はありますか？: A

WS buffer 中には、細胞毒性をほとんど示さない量の安定化剤(界面活性剤)を含んでいます。もし細胞への影響が気になる場合は、別途任意のバッファーを用いて標識体を回収してください。

Q 血清含有培地で標識体の取込みや観察ができますか？: A

血清成分がAcidSensor の性能に影響を与えることはありませんが、血清タンパク質によりエンドサイトーシス経路の取り込みが阻害される可能性があります。実験に応じて血清を含めるかどうかご検討ください。

Q 標識率はどのように算出すればよいですか。: A

標識体を WS buffer で5倍希釈して500nm と280 nmの吸光度を測定後、以下の式より標識率を算出してください。

A₅₀₀: 500 nm の吸光度

A₂₈₀: 280 nm の吸光度

ε_protein: タンパク質の280nmでのモル吸光係数、

NH₂-Reactive AcidSensor のWS buffer 中における A₅₀₀ のモル吸光係数が 48400 です。

NH₂-Reactive AcidSensor は280nmと500nmに吸収があり、280nm/500nmの比が 0.16です。

標識対象が IgG の場合、はε_protein は216,000 を使用してください。

Q タンパク質1分子あたりにNH₂-Reactive AcidSensor はいくつ標識されますか。: A

Mouse IgG において、1分子あたり平均3つのAcidSensor が標識されることを確認しています。

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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