日本同仁化学线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13- DOJINDO

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线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

线粒体膜电位检测试剂盒

MT-1 MitoMP Detection Kit

商品信息

运输条件：室温

特点：

● 固定后仍可检测

● 荧光滞留性强

● 灵敏度高

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选择规格：

1set

现货

线粒体检测方案

产品解说

产品概述

产品特点

与各种试剂的比较

实验例

常见问题Q&A

参考文献

产品解说

产品概述

线粒体利用氧气合成ATP，从而产生细胞所需的能量，是重要的细胞器之一。线粒体活性低下和机能障碍与癌症、老化、阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性疾病密切相关。因此，线粒体膜电位（MMP）作为线粒体相关疾病的一个有希望的靶点已被广泛研究。

产品特点

解决传统试剂的三个问题

观察线粒体膜电位时，使用JC-1、TMRE、TMRM，但由于PFA不可固定、容易淬灭，数据的再现性等问题。MT-1 MitoMP Detection Kit是克服了这些问题的线粒体膜电位的检测试剂。

并且，通过本试剂盒中包含的Imaging Buffer，可以在抑制了荧光背景和对细胞的损伤的状态下进行观察。

①固定后也可检测

由于微小的细胞状态的变化，也会造成线粒体膜电位发生变化，所以取得数据的重现性需要特别注意。通用的线粒体膜电位检测试剂（JC-1、TMRE）如果对细胞进行固定处理的话会失去荧光，所以需要使用活细胞进行迅速的测定。MT-1即使进行染色后进行PFA固定操作，也能保持荧光，因此可以进行高重复性的实验。

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

②可监控

没有进行药物刺激的细胞通过各种试剂染色，确认了荧光强度的变化。结果，JC-1和TMRE在染色后约10分钟左右荧光强度下降，MT-1仍保持了一定的荧光强度

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

③高灵敏度

线粒体膜电位的细微变化在JC-1中有难以检测的情况，在这种情况下，使用四甲基罗丹明乙酯（TMRE）监测MMP。MT-1可提供与TMRE同等的检测灵敏度。

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

与各种试剂的比较

	Features	Sensitivity	Fixation	Monitoring	Fluorescence change (upon loss of mitochondrial membrane potential)	Detection (ex/em)
JC-1 (JC-1 MitoMP Detection Kit)	Recomended for starting-up	✓			Color change from red to green	Green: 450-490 nm / 500-550 nm Red: 530-560 nm / 570-640 nm
MT-1 (MT-1 MitoMP Detection Kit)	Recommended for more detailed analysis	✓ (High)	✓	✓	Decrease in fluorescence intensity	530-560 nm / 570-640 nm
TMRE	Widely used	✓ (High)			Decrease in fluorescence intensity	530-560 nm / 570-640 nm

实验例

1.通过去极化的实验例

通过线粒体去极化剂的cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP)处理HeLa细胞，用该试剂观察膜电位的变化。

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

结果，确认了FCCP处理的细胞线粒体膜电位下降的情况。

2.凋亡诱导细胞线粒体膜电位的变化

预先在MT-1中染色的HL60细胞中添加Etoposide，诱导凋亡后，与Annexin V、FITC Conjugate一同染色，并通过流式细胞仪检测。

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

结果发现Annexin V-FITC产生的荧光强度变化（绿色荧光强度的增加）确认了凋亡的发生，以及从MT-1产生的荧光强度变化（红色荧光强度的降低）发现了线粒体膜电位的变化。

3.同时评估线粒体超氧化物和膜电位

用 HBSS 冲洗 HeLa 细胞后，用 MT-1 线粒体氧化酶检测试剂盒和线粒体超氧化物检测染料（(mtSOX Deep Red： MT14）共同染色，同时观察线粒体 ROS 和膜电位的产生情况。因此，线粒体膜电位的降低和线粒体 ROS 的产生是同时观察到的。

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

＜成像条件＞（共聚焦显微镜）

MT-1: Ex=561, Em=560-600 nm
mtSOX: Ex=633 nm, Em=640-700 nm

Scale bar: 10 μm

线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

＜检测条件＞（酶标仪）Tecan，Infinite M200 Pro

MT-1: Ex=540-550 nm, Em=590-610 nm (Gain=200)
mtSOX: Ex=545-555 nm, Em = 665-685 nm

常见问题Q&A

Q1:使用荧光显微镜检测时需要注意什么？

A1:请尽量减少激发光照射时间并提高检测灵敏度。

细胞长期暴露于激发光内可能导致细胞损伤和荧光染料降解，请优化检测时间。

Q2：MT-1检测后可以固定吗？

A2：应使用4%多聚甲醛（PFA）固定，且不能与（Triton X-100、NP-40等）一起使用，因为这可能导致染泄漏。

Q3：固定后可以对细胞染色吗？

A3：由于MT-1在线粒体中的积累取决于线粒体膜电位，因此固定后不适用于染色。

Q4：是否需要做阳性对照？

A4：作为阳性对照，可在技术手册中找到使用FCCP（羰基氰化物-对三氟甲氧基苯腙）的实验例。

Q5：优化染色条件时，应使用何种浓度的MT-1染料

A5：MT-1染料的浓度建议稀释1000倍。但在优化染色条件时，请参考以下内容。

<荧光强度弱>

请优化以下浓度：稀释500-1000倍。

<观察到非特异性吸附>

请优化以下浓度：稀释1000至2000倍。

Q6:我可以使用缓冲液来制备MT-1工作溶液吗？

A6:可以使用Hanks的HEPES和HBSS。也可以使用MEM、RPMI和含10%FBS的MEM制备。

Q7：添加MT-1工作液后，可以不清洗直接上机检测吗？

A7：染色后，无需清洗即可观察样品。但我们不建议在不清洗的情况下长期观察它们，因为它们可能具有细胞毒性。

我们建议去除上清液并用培养基替换。

Q8：MT-1染色后，是否可以用PBS代替HBSS来清洗？

A8：我们建议使用HBSS来减少细胞损伤。如果您没有HBSS，我们建议使用培养基来代替清洗。

参考文献

No.	Sample	Instrument	Reference
1	STHdh Cells	Microscope	N. Okada, T. Yako, S. Nakamura, M. Shimazawa, H. Hara, “Reduced mitochondrial complex II activity enhances cell death via intracellular reactive oxygen species in STHdhQ111 striatal neurons Q1 with mutant huntingtin”, J. Pharmacol. Sci., 2021, doi:10.1016/j.jphs.2021.09.001.
2	Panc-1 Cells	Microscope	N. Okuni, Y. Honma, T. Urano, K. Tamura, “Romidepsin and tamoxifen cooperatively induce senescence of pancreatic cancer cells through downregulation of FOXM1 expression and induction of reactive oxygen species/lipid peroxidation”, Mol. Biol. Rep., 2022, doi:10.1007/s11033-022-07192-9.
3	BM Cells	Microscope	Y. Aoyagi, Y. Hayashi, Y. Harada, K. Choi, N. Matsumura, D. Sadato, Y. Maemoto, A. Ito, S. Yanagi, D. Starczynowski, H. Harada, “Mitochondrial Fragmentation Triggers Ineffective Hematopoiesis in Myelodysplastic Syndromes”, Cancer Discovery, 2022, doi:10.1158/2159-8290.CD-21-0032.
4	Flies indirect flight muscle Cells	Microscope	N. Nozawa, M. Noguchi, K. Shinno, M. Tajima, S. Aizawa, T. Saito, A. Asada, T. Ishii, M. Ishizuka, K. Iijima and K. Ando, “5-Aminolevulinic acid and sodium ferrous citrate ameliorate muscle aging and extend healthspan in Drosophila”, FEBS Open Bio, 2022, doi:10.1002/2211-5463.13338.
5	HBME Cells	Microscope	Y. Sakai, M. Taguchi, Y. Morikawa, H. Miyazono, K. Suenami, Y. Ochiai, E. Yanase, T. Takayama, A. Ikari, T. Matsunaga, “Apoptotic mechanism in human brain microvascular endothelial cells triggered by 40-iodo-α-pyrrolidinononanophenone: Contribution of decrease in antioxidant properties”, Toxicol. Lett., 2022, doi:10.1016/j.toxlet.2021.11.018.
6	MIN6-M9 Cells	Microscope	R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, “Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER”, 2022, iScience, doi:10.1016/j.isci.2022.104603.
7	SH-SY5Y Cells	Flow Cytometer	M. Hashimoto, M. Fujimoto, K. Konno, M. L. Lee, Y. Yamada, K. Yamashita, C. Toda, M. Tomura, M. Watanabe, O. Inanami and H. Kitamura, “Ubiquitin-Specific Protease 2 in the Ventromedial Hypothalamus Modifies Blood Glucose Levels by Controlling Sympathetic Nervous Activation”, J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.2504-21.2022.
8	Fibroblasts, ciBAs	Microscope	Y. Takeda and P. Dai, “Chronic Fatty Acid Depletion Induces Uncoupling Protein 1 (UCP1) Expression to Coordinate Mitochondrial Inducible Proton Leak in a Human-Brown-Adipocyte Model”, 2022, doi:10.3390/cells11132038.
9	Sperm cells from C. osakensis queens	Microscope	A. Gotoh, M. Takeshima and K Mizutani, “Near-anoxia induces immobilization and sustains viability of sperm stored in ant queens”, Sci. Rep., 2023, doi:10.1038/s41598-023-29705-7.
10	Nucleus Pulposus Cells	Microscope	K. Suyama, D. Sakai, S. Hayashi, N. Qu, H. Terayama, D. Kiyoshima, K. Nagahori and M. Watanabe, “Bag-1 Protects Nucleus Pulposus Cells from Oxidative Stress by Interacting with HSP70”, Biomedicines, 2023, doi:10.3390/biomedicines11030863.
11	HL60 Cells, KG1a Cells	Flow Cytometer	K. Kamachi, H. Ureshino, T. Watanabe, N. Y. Sakai, Y. F. Kurahashi, K. Kawasoe, T. Hoshiko, Y. Yamamoto, Y. Kurahashi, and S. Kimura , “Combination of a New Oral Demethylating Agent, OR2100, and Venetoclax for Treatment of Acute Myeloid Leukemia”, Cancer Res Commun., 2023, doi:10.1158/2767-9764.CRC-22-0259.
12	RAW264 Cells	Microscope	H. Gu, Y. Zhu, J. Yang, R. Jiang, Y. Deng, A. Li, Y. Fang, Q. Wu, H. Tu, H. Chang, J. Wen and X. Jiang, “Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration”, Adv sci, 2023, doi:10.1002/advs.202302136.

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日本同仁化学线粒体染色线粒体损伤线粒体自噬线粒体氧化应激线粒体呼吸- DOJINDO

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线粒体

线粒体(mitochondrion) 是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。最近越老越多的研究发现线粒体在细胞中的作用远远不止”细胞能量站”。它们参与了各种细胞功能调控，与很多人类疾病存在着莫大的联系。包括细胞信号传导、代谢、自噬、衰老和肿瘤发生都与线粒体的质量和活性相关

线粒体染色

线粒体损伤

线粒体自噬

线粒体氧化应激

线粒体呼吸

品名货号用途

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂	MT15	免疫荧光用线粒体荧光染料Red
MitoBright LT Green试剂	MT10	线粒体长效荧光染色（绿色）
MitoBright LT Red试剂	MT11	线粒体长效荧光染色（红色）
MitoBright LT Deep Red试剂	MT12	线粒体长效荧光染色（深红色）

线粒体膜电位检测试剂盒	MT13	线粒体膜电位检测
线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit	MT09	线粒体膜电位检测
Cellstain- MitoRed试剂	R237	线粒体ATP检测-红色

Mtphagy Dye试剂	MT02	线粒体自噬
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit	MD01	线粒体自噬检测

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection	MT14	线粒体超氧化物检测
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen	M489	线粒体内二价铁离子检测
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂	MT05	线粒体内单线态氧检测
MitoPeDPP试剂	M466	线粒体内脂质过氧化物检测

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒	CK18	ATP活性检测
Glutamine Assay Kit-WST试剂盒	G268	谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒	G269	谷氨酸的定量检测
NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒	N509	NAD/NADH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒	N510	NADP/NADPH检测
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线粒体功能研究

▶ 线粒体呼吸指标一览表

▶ 线粒体染色选择指南

▶ 线粒体自噬检测

▶ 线粒体膜电位选择指南

▶ 代谢相关检测

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▶ 脂质过氧化物积累与细胞衰老、线粒体之间的联系

线粒体质量控制途径

线粒体染色线粒体损伤线粒体自噬线粒体氧化应激线粒体呼吸

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线粒体相关检测指标

线粒体自噬检测

线粒体自噬
试剂	Mtphagy Dye	Keima-Red
原理	线粒体自噬染料是一种PH敏感的荧光探针，该染料聚集在线粒体中，并由溶酶体的酸性条件而发出荧光	这是一种基于PH感应比值的荧光蛋白。该蛋白在溶酶体中具有比较高的荧光比值（如550 nm/440 nm）。
固定细胞染色	–	–
活细胞染色	Yes	Yes
活细胞染色后固定	–	–
染色时间	>30 min	–
Ex/Em	530/700	440,550/620
产品货号	MD01 , MT02	–

线粒体自噬Mitophagy试剂盒【MD01】无需蛋白质表达/转染。添加试剂即可轻松检测线粒体自噬。

线粒体染色线粒体损伤线粒体自噬线粒体氧化应激线粒体呼吸

线粒体膜电位检测

Membrane potential 线粒体膜电位
试剂	JC-1	MT-1	TMRM, TMRE
原理	JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针，依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集，染料伴随聚集过程，荧光从绿色 (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化，红/绿荧光强度比值降低。	由于膜电位，细胞渗透性荧光染料在完整的线粒体中积累。MT-1具有极强的光稳定性，比JC-1更灵敏，可以提供与TMRE相当的检测灵敏度。	该试剂是细胞渗透性荧光染料，由于膜电位在完整的线粒体中积累。探针扩散发生在膜电位降低的受损线粒体中。
固定细胞染色	–	–	–
活细胞染色	Yes	Yes	Yes
活细胞染色后固定	–	Yes	–
染色时间	10- 60 min	30 min	30- 60 min
Ex/Em	Monomer:514/529 J-aggregation: 585/590	530-560 / 570-640	550/575
产品货号	MT09	MT13	–

JC-1、TMRE和TMRM广泛用于监测线粒体膜电位。然而，这些染料具有局限性，例如光稳定性低和醛固定后的保留性差。这些限制导致实验再现性差。

MT-1 MitoMP检测试剂盒具有高光稳定性，即使在染色后用多聚甲醛固定的细胞中。这些特征使得MT-1试剂盒能够产生高度可重复的结果。

此外，该试剂盒中包含的成像缓冲液使背景荧光最小化，并在进行测定时保持细胞活力。

线粒体染色线粒体损伤线粒体自噬线粒体氧化应激线粒体呼吸

线粒体金属离子检测

	Iron ion (Fe²⁺) 亚铁离子	Calcium ion (Ca²⁺) 钙离子
试剂	Mito-FerroGreen	Rhod 2-AM
原理	该试剂是一种细胞通透性探针，其积累在线粒体中，并与线粒体中的亚铁离子发生特异性反应，发出绿色荧光。	该试剂是一种细胞通透性探针，该探针积聚在线粒体中，并与线粒体中的钙离子发生特异性反应，发出红色荧光。
固定细胞染色	–	–
活细胞染色	Yes	Yes
活细胞染色后固定	–	–
染色时间	30 min	30-60 min
Ex/Em	505/535	553/576
产品货号	M489	R002

线粒体荧光染色

Mitochondria staining 线粒体染色
试剂	MitoBright LT series	MitoBright IM Red	MitoTracker series
原理	细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。	细胞渗透性荧光染料，由于膜电位而聚集在完整的线粒体中，并与蛋白质和其他生物分子共价结合。	细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。
固定细胞染色	–	–	–
活细胞染色	Yes	Yes	Yes
活细胞染色后固定	–	Yes	–
染色时间	>10 min	30 min	15 -45 min
Ex/Em	493/508,547/563, 643/663	548/566	490/516~644/665
产品货号	MT10、MT11、MT12	MT15	–

在HeLa细胞中4天后，MitoBright LT仍被证实保留在线粒体中。

线粒体染色线粒体损伤线粒体自噬线粒体氧化应激线粒体呼吸

日本同仁化学MitoPeDPP试剂货号：M466- DOJINDO

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MitoPeDPP试剂货号：M466

3-[4-(Perylenylphenylphosphino)phenoxy]propyltriphenylphosphonium iodide

MitoPeDPP

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 定位线粒体

● 更深层次脂质过氧化探究

下载说明书

产品文献

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铁死亡通路图

选择规格：

5μg*3

铁死亡检测方案

活动进行中

产品概述

检测原理

实验例

参考文献

活动进行中

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产品概述

MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。

聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。由于氧化的MitoPeDPP

(Ox-MitoPeDPP) 的激发和发射波长分别是452 nm和470 nm，可以减小样品的光损伤和自发荧光，因此利用

荧光显微镜MitoPeDPP可以检测活细胞中的脂质过氧化物。

特点

1.特异性的在细胞中线粒体内聚集

2.可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物

3.可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测

* 本产品由福冈大学化学系的Dr. Shioji开发

*由于MitoPeDPP量极少不宜看到，可以通过观察MitoPeDPP DMSO溶液的颜色是否为黄色来判断。

检测原理

MitoPeDPP可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。

MitoPeDPP试剂货号：M466

实验例

1.MitoPeDPP和线粒体染色试剂MitoBright共同染色的实施例

在HeLa细胞中添加t-BHP（氢过氧化叔丁基），检测脂质过氧化物

波长（wavelength/band pass）

MitoPeDPP：470/40（Ex），525/50（Em）

MitoBright DeepRed：600/50（Ex），685/50（Em）

结果证实在HeLa细胞内的线粒体中，MitoPeDPP受t-BHP氧化后会发出荧光。另外通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）的共染色，确认了MitoPeDPP的荧光是定位在线粒体中。

MitoPeDPP试剂货号：M466

2.检测添加Rotenone产生的脂质过氧化物

向HeLa细胞[μ-slide，8孔（由Ibidi制造）]中添加MitoPeDPP之后，添加Rotenone溶液并使用荧光显微镜观察。实验结果证实，添加Rotenone后，检测到细胞中产生了脂质过氧化物。

Rotenone的刺激时间：0 min(左)，90 min(中)，180 min(右)

MitoPeDPP试剂货号：M466

上部）荧光图，下部）明场图

3.神经细胞使用MitoPeDPP的实验例

A.荧光显微镜检测

向NIE-115细胞（小鼠神经芽细胞瘤）添加异黄素，诱导Ca2+流入细胞内，并通过MitoPeDPP的荧光染色来观察线粒体膜内的脂溶性过氧化物的产生。实验结果证实添加了异霉素的实验组相比对照组来说荧光更强。

MitoPeDPP试剂货号：M466

B. 平均荧光强度数据比较

为了量化对照组细胞和添加了离子霉素的细胞的荧光强度，对两组数据进行基于平均荧光强度的比较。

结果证实，加入离子霉素后30分钟的细胞对比对照组的细胞，观察到的荧光强度显着增加。

数据提供（Free Radical Research, in press)

MitoPeDPP试剂货号：M466

参照芝浦工业大学系统理工学院福井浩二副教授、中村沙希[参考文献3]

4.MitoPeDPP反应的选择性

在不含细胞的反应体系中，MitoPeDPP可以与各种过氧化物如H2O2，t-BHP和ONOO- 反应，但是在细胞中，积

累在线粒体中的MitoPeDPP可以被t-BHP氧化而释放出较强荧光 (图3A)，却和其它ROS或RNS反应很弱 (图3B)。

A) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min，然后用100 μmol / l的t-BHP处理。

B) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min后，加入ROS、RNS诱导剂。

分别加入100 μmol / l (H2O2，NO和ONOO-诱导剂)和10 μmol / l PMA（O2-.诱导剂）。

左边为明场图，右边为荧光图

* t-BHP：tert-Butylhydroperoxide; PMA, Phorbol myristate acetate;

SIN-1, 3-(Morpholinyl)sydnonimine, hydrochloride;

NOC 7, 1-Hydroxy-2-oxo-3-(N-methyl-3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazene

波长/带通滤波器：470/40 (Ex), 525 /50 (Em)

MitoPeDPP试剂货号：M466

参考文献

1) K. Shioji K, Y. Oyama, K. Okuma and H. Nakagawa, “Synthesis and properties of fluorescence probe for detection of peroxides in mitochondria.”, Bioorg Med Chem Lett., 2010, 20, (13), 3911.

2) S. Oka, J. Leon, K. Sakumi, T. Ide, D. Kang, F. M. LaFerla and Y. Nakabeppu, “Human mitochondrial transcriptional factor A breaks the mitochondria-mediated vicious cycle in Alzheimer’s disease”, Scientific Reports ., 2016, DOI: 10.1038/srep37889 , .

3) S. Nakamura, A. Nakanishi, M. Takazawa, S. Okihiro, S. Urano and K. Fukui, “Ionomycin-induced calcium influx induces neurite degeneration in mouse neuroblastoma cells: Analysis of a time-lapse live cell imaging system”, Free Radical Research., 2016, 50, (11), 1214.

4) M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, “Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis”, Cell Death Dis., 2018, 9, 804.

5) M. Álvarez-Córdoba, A. Fernández Khoury, M. Villanueva-Paz, C. Gómez-Navarro, I. Villalón-García, J. M. Suárez-Rivero, S. Povea-Cabello, M. Mata, D. Cotán, M. Talaverón-Rey, A. J. Pérez-Pulido, J. J. Salas, E. M. Pérez-Villegas, A. Díaz-Quintana, J. A. Armengol, J. A. Sánchez-Alcázar , “Pantothenate Rescues Iron Accumulation in Pantothenate Kinase-Associated Neurodegeneration Depending on the Type of Mutation.”, Mol. Neurobiol. ., 2019, 56, (5), 3638.

6）Yaxu Li, Qiao Ran, Qiuhui Duan, Jiali Jin, Yanjin Wang, Lei Yu, Chaojie Wang, Zhenyun Zhu, Xin Chen, Linjun Weng, Zan Li, Jia Wang, Qi Wu, Hui Wang, Hongling Tian, Sihui Song, Zezhi Shan, Qiwei Zhai, Huanlong Qin, Shili Chen, Lan Fang, Huiyong Yin, Hu Zho“7-Dehydrocholesterol dictates ferroptosis sensitivity”Nature.626, 411-418（2024）.

日本同仁化学Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248- DOJINDO

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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

细胞脂质过氧化物检测试剂盒

Liperfluo

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，充氮气

运输条件：室温

分子式：

C51H41N2O8P

分子量：

840.85

特点：

● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化

● 比BODIPY C11更适合于胞内定位

● 铁死亡常见指标之一

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规格性状

产品概述

研究领域

原理

荧光特性

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Lipid Peroxidation Probe -BDP 脂质过氧化探针BDP

NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测

NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测

规格性状

性状：深红色结晶粉末或固体。

纯度（HPLC）：90.0%以上

核磁共振谱：符合一致性

<使用次数>每50µg可用5-50次

产品概述

Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

特点：

1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物

2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响

3）高度脂质过氧化物特异性

研究领域

在铁死亡研究中：

作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

细胞种类 (铁死亡诱导剂）	论文信息
人支气管上皮细胞（RSL3）	Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium.
小鼠成纤维细胞(RSL3)	Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis.
HeLa细胞 (添Erastin或Brefeldin A)	Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells.

原理

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

荧光特性

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm

操作步骤

1.在培养皿或孔板中接种细胞。

2.去除上清液，用无血清培养基洗涤细胞1次。

3.加入适量的Liperfluo工作溶液，37℃孵育30 m in。

*根据实验条件等不同因素，Liperfluo的最佳浓度也不同。需要提前摸索条件。

4.去除上清液并用无血清培养基洗涤细胞2次。

5.在荧光显微镜下观察细胞或使用流式细胞仪分析细胞。

实验例

用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种H eLa细胞 (3.0×10 4 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基)，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。

3) 将200 l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo 溶液加入8孔板中，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养30 m in。

4) 去除溶液，用200 l H BSS清洗2次。

5) 均匀地加入200 l用H BSS稀释的500 m ol/l的 t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。

6) 用共聚焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

用流式细胞仪检测HeLa细胞

1) 将H eLa细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基) 接种至6孔板 (Therm o公司) 中，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。

3) 将2 m l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5% 的

C O 2 培养箱中培养30 m in。

4) 去除溶液，用2 m l H BSS清洗2次。

5) 均匀地加入2 m l用H BSS稀释的500 m ol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。

6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的M EM 培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为H BSS。

7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像

1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清D M EM 培养基)，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，加入200 l用无血清D M EM 培养基稀释的50 m ol/l的Erastin溶液，

在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。

3) 去除培养基，用200 l H BSS清洗2次。

4) 去除H BSS，加入200 l用H BSS稀释的5 m ol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中

培养30 m in。

5) 去除溶液，用200 l H BSS清洗2次。

6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。

Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测货号：L248

常见问题Q&A

Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针，哪种方法比较好？

A1: 都可以。

先加Liperfluo再加药

用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

（1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。

（3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

（6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

先加药再加Liperfluo

（1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

（3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

（4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，

在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

（5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

（6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？

A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。

其他的改善方法：

(1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。

(2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。

Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？

A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。

Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？

A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。

(溶解后请务必用铝箔等遮光)。

荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。

因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。

1.增强激发光的强度。

2.延长曝光时间。

Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞

A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。

有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。

参考文献

以下文献根据影响因子由高到低排序：

细胞种类	期刊名	出版年	影响因子	论文题目(含原文链接)
小鼠胚胎成纤维细胞	Nature	2023	69.5	Phase separation of FSP1 promotes ferroptosis
H9C2（大鼠心肌细胞）	Nature	2022	69.504	A non-canonical vitamin K cycle is a potent ferroptosis suppressor
B16细胞(小鼠黑色素瘤细胞); HT-1080(人纤维肉瘤细胞)	Nature	2019	69.504	CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy
MEF(小鼠胚胎成纤维细胞)	Nature Chemical Biology	2016	12.587	Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis
RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)	Nature Chemical Biology	2020	12.587	Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death
Brain slices from LN229TAZ(4SA)(人脑胶质瘤切片)	Nature Communications	2020	12.121	Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression
HBE(人支气管上皮样细胞)	The Journal of Clinical Investigation	2018	11.864	Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium
HL-60(人骨髓细胞白血病细胞)	Cell Death and Differentiation	2020	10.717	Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2
NCI-ADR/Res (NAR) 人卵巢腺癌细胞	Biomaterials	2019	10.317	Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy
4T1细胞(小鼠乳癌细胞)	ACS Applied Materials & Interfaces	2019	8.758	Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation
BV2 Microglial(小鼠小胶质细胞)	Particle and Fibre Toxicology	2020	7.546	Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia
BMDM(小鼠骨髓来源的巨噬细胞)	Particle and Fibre Toxicology	2017	7.546	SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses
HT-22（细胞）	Antioxidants	2023	7.0	Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy
3T3-L1 adipocytes(小鼠脂肪细胞)	Cell Death and Disease	2018	6.304	Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300
OEC-M1(人口腔上皮细胞)	Biomaterials Science	2018	6.183	Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells
Hacat(人永生化角质形成细胞)	Free Radical Biology and Medicine	2017	6.17	Blue light-induced oxidative stress in live skin
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)	Free Radical Biology and Medicine	2015	6.17	New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death
HEI-OC1(耳蜗毛细胞);鼠新生耳蜗毛细胞	Oxidative Medicine and Cellular Longevity	2020	5.076	Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity
Murine T cells(鼠T细胞)	The Journal of Immunology	2019	4.886	Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)	Molecular Neurobiology	2020	4.5	Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells
HEI-OC1(耳蜗毛细胞)	Journal of Cellular and Molecular Medicine	2020	4.486	Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity
PMVECs(肺微血管内皮细胞)	Lung Cellular and Molecular Physiology	2019	4.406	Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury
HepG2(人肝癌细胞)	Journal of Agricultural and Food Chemistry	2019	4.192	Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes
HeLa(人宫颈癌细胞)	Communications Biology	2018	4.165	Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells
THP-1(人髓系白血病单核细胞);(1×105 cells/mL)	Scientific Reports	2016	3.998	Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators
4T1细胞(小鼠乳癌细胞); HT1080(人纤维肉瘤细胞)	Nanotechnology	2016	3.551	WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells
SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)	RSC Advances	2012	3.119	A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells
Burkitt’s Lymphoma(Burkitt淋巴瘤细胞)	Biochemical and Biophysical Research Communications	2019	2.985	Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt’s Lymphoma
THP-1(人髓系白血病单核细胞)	Canadian Journal of Physiology and Pharmacology	2019	1.946	Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction
Horse breed stallions(种马精子)	Animal Reproduction Science	2019	1.66	Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm
Human hair(人头发)	Cosmetics	2018	0.732	Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure

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日本同仁化学铁死亡脂质过氧化铁离子- DOJINDO

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铁死亡

铁死亡是一种主要由铁依赖的氧化损伤所引起的调节性细胞坏死。但这种死亡方式在形态学、生物化学和遗传学等方面与凋亡、坏死、自噬都有较大的差别。下表为铁死亡常用检测指标，各指标检测方法可点击链接查看，其与铁死亡的关系可下拉，获取铁死亡特刊了解。

脂质过氧化

铁离子

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品名货号用途

Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11试剂	L267	脂质过氧化检测
Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测	L248	细胞脂质过氧化物检测
MDA检测试剂盒	M496	检测细胞或组织中的MDA浓度
MitoPeDPP试剂	M466	线粒体内脂质过氧化物检测

铁死亡的发生

在细胞中有大量的脂质组成细胞膜，细胞膜上的脂质会以大量磷脂的形式存在，细胞内的脂质会分为单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，在氧分子和铁离子的存在下，多不饱和脂肪酸的增加容易被氧化而产生脂质过氧化物，有更多的不饱和脂肪酸的情况下，会更容易扩散，引起细胞膜损伤，也就是我们说的铁死亡。但是正常的细胞是可以调控这种细胞膜损伤，也就是我们常说的GPX4通路等等抗氧化系统，所以细胞才能在氧化物质存在的情况下，仍然可以存活。

以上为铁死亡的简要发生原理，我们也整理了较为详尽的铁死亡通路图，点击下方链接可直接下载

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铁死亡脂质过氧化铁离子

如何检测铁死亡发生

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铁死亡脂质过氧化铁离子

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铁死亡的机制及其在疾病中的作用

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铁死亡脂质过氧化铁离子

实验例：Erastin诱导铁死亡发生

Erastin是一种已知的铁死亡诱导剂。通过抑制胱氨酸转运蛋白（xCT），erastin抑制胱氨碱的摄取。胱氨酸是谷胱甘肽的原料。因此，Erastin最终会降低GSH的含量。GSH的降低会导致脂质过氧化物的积累和铁死亡的诱导。

以下实验实例显示了在Erastin刺激下各指标结果的变化情况，各项指标均使用Dojindo试剂进行测量。

使用Erastin处理的A549细胞，我们测量了细胞内Fe2+、ROS、脂质过氧化物、谷胱甘肽、谷氨酸释放到细胞外含量和胱氨酸摄取。结果，观察到Erastin对xCT的抑制，导致谷氨酸的释放和胱氨酸的摄取也减少。此外，Erastin处理后，细胞内谷胱甘肽降低，细胞内Fe2+、ROS和脂质过氧化物增加。

铁死亡脂质过氧化铁离子

更多实验资讯

代谢检测指南	线粒体检测指南	衰老试剂选择指南	细胞增殖/毒性检测

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒ADA Buffer- DOJINDO

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上海金畔生物代理Hampton research品牌蛋白结晶试剂耗材工具等，我们将竭诚为您服务，欢迎访问Hampton research官网或者咨询我们获取更多相关Hampton research品牌产品信息。

Products > Optimize Reagents > Optimize – Buffers > ADA Buffer

ADA Buffer

应用

Crystallization grade ADA buffer for formulating screens or for optimization
用于配制筛选或优化的结晶级 ADA 缓冲液

特征

Sterile filtered 无菌过滤
Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述

ADA (Buffer)

Synonyms: N-(2-Acetamido)iminodiacetic acid;
N-(Carbamoylmethyl)iminodiacetic acid
C₆H₁₀N₂O₅
H₂NCOCH₂N(CH₂CO₂H)₂
M_r 190.16
CAS Number [26239-55-4]
EC Number 247-530-0
Beilstein Registry Number 1787181
Merck 14,147
Purity ≥ 99.0%
MDL Number MFCD00008031
PubChem Substance ID 24845005
pKa = 6.6 at 25°Celsius

Useful pH range of ADA is 5.6 – 7.5

Titrate HR2-507 to the desired pH using NaOH
HR2-817 is titrated to pH 6.5 using NaOH

HR2-507 measured Conductivity range: 23.6 – 28.6 mS/cm at 25°C
HR2-507 measured Refractive Index range: 1.35009 – 1.35044 at 20°C

HR2-817 measured Conductivity range: 42.2 – 50.4 mS/cm at 25°C
HR2-817 measured Refractive Index range: 1.36787 – 1.36913 at 20°C

ADA buffer is used in the Hampton Research MembFac crystallization kit.ADA 缓冲液用于 Hampton Research MembFac 结晶试剂盒。

Total Impurities Insoluble matter, passes filter test总杂质不溶物，通过过滤测试
Al ≤0.0005%
As ≤0.00001%
Ba ≤0.0005%
Bi ≤0.0005%
Ca ≤0.001%
Cd ≤0.0005%
Cl ≤0.1%
Co ≤0.0005%
Cr ≤0.0005%
Cu ≤0.0005%
Fe ≤0.0005%
K ≤0.005%
Mg ≤0.0005%
Mn ≤0.0005%
Mo ≤0.0005%
Na ≤0.05%
Ni ≤0.0005%
Pb ≤0.0005%
SO₄ ≤0.005%
Sr ≤0.0005%
Zn ≤0.0005%

CAT NO

HR2-507

NAME

0.5 M ADA

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$123.00

CAT NO

HR2-817

NAME

1.0 M ADA pH 6.5

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$132.00

SDS

参考

1. Structures of the noncovalent complexes of human and bovine prothrombin fragment 2 with human PPACK-thrombin. Arni, RK; Padmanabhan, K; Padmanabhan, KP; Wu, TP; Tulinsky, A. Biochemistry 32, 4727- 4737, 1993.

2. Structures of Three Crystals Forms of the Sweet Protein Thaumatin. Ko, TP; Day, J; Greenwood, A; McPherson, A. Acta Crystallogr D 50, 813- 825, 1994.

1.人和牛凝血酶原片段2与人PPACK-凝血酶的非共价复合物的结构。阿尼，RK；帕德马纳班，K；帕德马纳班，KP；吴，TP； Tulinsky, A. Biochemistry 32, 4727-4737, 1993。

2. 甜蛋白奇异果甜蛋白的三种晶型结构。高，TP；日，J；格林伍德，一个； McPherson, A. 晶体学学报 D 50, 813-825, 1994。

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒Acetic acid- DOJINDO

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Buffers > Acetic acid

Acetic acid

应用

Crystallization grade Acetic acid for altering drop and reservoir pH
结晶级乙酸，用于改变液滴和储液器的 pH 值

特征

Sterile filtered
Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
无菌过滤
在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Acetic acid

Synonyms: Glacial acetic acid
CAS Number [64-19-7]
CH₃CO₂H
M_r 60.05
Beilstein Registry Number 506007
EC Number 200-580-7
MDL number MFCD00036152
PubChem Substance ID 24859247

See the pdf Using Volatile Buffers for a novel crystallization methodology using acetic acid and ammonium hydroxide to adjust drop pH and induce crystallization.

别名：冰醋酸
CAS 编号 [64-19-7]
CH3CO2H
60.05 先生
贝尔斯坦注册号 506007
欧盟编号 200-580-7
MDL 编号 MFCD00036152
PubChem 物质 ID 24859247

有关使用乙酸和氢氧化铵调节液滴 pH 值并诱导结晶的新型结晶方法，请参阅 pdf 使用挥发性缓冲液。

Acetic acid

CAT NO

HR2-853

NAME

5.2 M Acetic acid

DESCRIPTION

15 mL

PRICE

$24.00

参考

1. Preparation and analysis of protein crystals. Alexander McPherson, 1982, John Wiley and Sons, Inc., printed by Krieger Publishing. Chapter 4, Crystallization.

2. Current approaches to macromolecular crystallization. Alexander McPherson, Eur. J. Biochem. 189, 1-23 (1990).

3. Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of the engrailed homeodomain and of an engrailed homeodomain/DNA complex. Liu et al, Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol. 171, No. 1, 1990, pages 257-259.

4. Changes of pH during Biomacromolecule Crystallization by Vapor Diffusion using Ammonium Sulfate as the Precipitant. Mikol et al, J. Appl. Cryst. (1989). 22, 155-161.

5. A Double Cell for Controlling Nucleation and Growth of Protein Crystals. Maria Przybylska, J. Appl. Cryst. (1989). 22, 115-118

6. Crystallization of butyrate kinase 2 from Thermotoga maritima mediated by vapor diffusion of acetic acid. Diao et al, Acta Cryst. (2003). D59, 1100±1102.

7. The preparation and crystallization of Fab fragments of a family of mouse esterolytic catalytic antibodies and their complexes with a transition-state analogue. Muranova et al, Acta Cryst. (2001). D57, 1192±1195

1. 蛋白质晶体的制备和分析。 Alexander McPherson，1982，John Wiley and Sons, Inc.，由 Krieger Publishing 印刷。第 4 章，结晶。

2. 大分子结晶的当前方法。亚历山大麦克弗森，欧元。 J.生化。 189, 1-23 (1990)。

3. engrailed homeodomain 和 engrailed homeodomain/DNA 复合物的结晶和初步 X 射线衍射研究。刘等人，生化和生物物理研究通讯，卷。 171，第 1 期，1990 年，第 257-259 页。

4. 使用硫酸铵作为沉淀剂通过蒸汽扩散进行生物大分子结晶过程中 pH 值的变化。 Mikol 等人，J. Appl。水晶。（1989 年）。 22, 155-161。

5. 用于控制蛋白质晶体成核和生长的双细胞。 Maria Przybylska, J. Appl.水晶。（1989 年）。 22、115-118

6. 乙酸蒸汽扩散介导的来自海栖热袍菌的丁酸激酶 2 的结晶。刁等人，Acta Cryst。（2003 年）。 D59，1100±1102。

7.小鼠酯水解催化抗体家族的Fab片段及其与过渡态类似物的复合物的制备和结晶。 Muranova 等人，Acta Cryst。（2001 年）。 D57, 1192±1195

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒Ammonium hydroxide- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Buffers > Ammonium hydroxide

Ammonium hydroxide

应用

Crystallization grade Ammonium hydroxide for altering drop and reservoir pH
用于改变液滴和油藏 pH 值的结晶级氢氧化铵

特征

Sterile filtered
Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
无菌过滤
在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Ammonium hydroxide

Synonyms: Ammonia aqueous, Ammonia water
CAS Number [1336-21-6]
NH₄OH
M_r 35.05
Beilstein Registry Number 3587154
EC Number 215-647-6
MDL Number MFCD00066650

See the pdf Using Volatile Buffers for a novel crystallization methodology using acetic acid and ammonium hydroxide to adjust drop pH and induce crystallization.

同义词：氨水、氨水
CAS 编号 [1336-21-6]
NH4OH
35.05 先生
贝尔斯坦注册号 3587154
欧盟编号 215-647-6
MDL 编号 MFCD00066650

有关使用乙酸和氢氧化铵调节液滴 pH 值并诱导结晶的新型结晶方法，请参阅 pdf 使用挥发性缓冲液。

Ammonium hydroxide

CAT NO

HR2-855

NAME

5.2 M Ammonium hydroxide

DESCRIPTION

10 mL

PRICE

$24.00

参考

1. Preparation and analysis of protein crystals. Alexander McPherson, 1982, John Wiley and Sons, Inc., printed by Krieger Publishing. Chapter 4, Crystallization.

2. Current approaches to macromolecular crystallization. Alexander McPherson, Eur. J. Biochem. 189, 1-23 (1990).

4. Changes of pH during Biomacromolecule Crystallization by Vapor Diffusion using Ammonium Sulfate as the Precipitant. Mikol et al, J. Appl. Cryst. (1989). 22, 155-161.

5. A Double Cell for Controlling Nucleation and Growth of Protein Crystals. Maria Przybylska, J. Appl. Cryst. (1989). 22, 115-118.

6. Crystallization of butyrate kinase 2 from Thermotoga maritima mediated by vapor diffusion of acetic acid. Diao et al, Acta Cryst. (2003). D59, 1100±1102.

1. 蛋白质晶体的制备和分析。 Alexander McPherson，1982，John Wiley and Sons, Inc.，由 Krieger Publishing 印刷。第 4 章，结晶。

2. 大分子结晶的当前方法。亚历山大麦克弗森，欧元。 J.生化。 189, 1-23 (1990)。

4. 使用硫酸铵作为沉淀剂通过蒸汽扩散进行生物大分子结晶过程中 pH 值的变化。 Mikol 等人，J. Appl。水晶。（1989 年）。 22, 155-161。

5. 用于控制蛋白质晶体成核和生长的双细胞。 Maria Przybylska, J. Appl.水晶。（1989 年）。 22, 115-118。

6. 乙酸蒸汽扩散介导的来自海栖热袍菌的丁酸激酶 2 的结晶。刁等人，Acta Cryst。（2003 年）。 D59，1100±1102。

7.小鼠酯水解催化抗体家族的Fab片段及其与过渡态类似物的复合物的制备和结晶。 Muranova 等人，Acta Cryst。（2001 年）。 D57，1192±1195。

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒BICINE Buffer- DOJINDO

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Buffers > BICINE Buffer

BICINE Buffer

应用

Crystallization grade BICINE buffer for formulating screens or for optimization
用于配制屏幕或优化的结晶级 BICINE 缓冲液

特征

Sterile filtered
Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
无菌过滤
在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述 BICINE

Synonyms: N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine
C₆H₁₃NO₄
M_r 163.17
CAS Number [150-25-4]
EC Number 205-755-1
Beilstein Registry Number 1769362
Merck 14,1201
RTECS MB9700000
MDL Number MFCD00004295
PubChem Substance ID 24891738
Purity ≥ 99.0%
pKa 8.3 at 20°C, 8.3 at 25°C

Useful pH Range 7.4-9.3
Titrate HR2-509 to useful pH range using NaOH
HR2-509 pH Range: 5.0 – 5.3 at 25°C
HR2-509 Measured Conductivity Range: 100.7 – 167.2 µS/cm at 25°C
HR2-509 Measured Refractive Index Range: 1.35769 – 1.35821 at 20°C

HR2-723 has been titrated to pH 9.0 using NaOH
HR2-723 Measured Conductivity Range: 23.9 – 25.0 mS/cm at 25°C
HR2-723 Measured Refractive Index Range: 1.36054 – 1.36122 at 20°C

同义词： N,N-双（2-羟乙基）甘氨酸
C6H13NO4
163.17先生
CAS 编号 [150-25-4]
欧盟编号 205-755-1
贝尔斯坦注册号 1769362
默克 14,1201
RTECS MB9700000
MDL 编号 MFCD00004295
PubChem 物质 ID 24891738
纯度≥99.0%
pKa 在 20°C 时为 8.3，在 25°C 时为 8.3

有用的 pH 范围 7.4-9.3
使用 NaOH 将 HR2-509 滴定至有用的 pH 范围
HR2-509 pH 范围：25°C 时为 5.0 – 5.3
HR2-509 测量电导率范围：25°C 时为 100.7 – 167.2 µS/cm
HR2-509 测量的折射率范围：20°C 时为 1.35769 – 1.35821

HR2-723 已使用 NaOH 滴定至 pH 9.0
HR2-723 测得的电导率范围：23.9 – 25.0 mS/cm，25°C
HR2-723 测量的折射率范围：20°C 时为 1.36054 – 1.36122

BICINE

CAT NO

HR2-509

NAME

1.0 M BICINE

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$104.00

CAT NO

HR2-723

NAME

1.0 M BICINE pH 9.0

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$104.00

参考

1. Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of a fungal hydrolase from Ophiostoma novo-ulmi. M. N. Isupov, A. A. Brindley, E. J. Hollingsworth, G. N. Murshudov, A. A. Vagin and J. A. Littlechild. Acta Cryst. (2004). D60, 1879-1882.

1. 来自 Ophiostoma novo-ulmi 的真菌水解酶的结晶和初步 X 射线衍射研究。 M. N. Isupov、A. A. Brindley、E. J. Hollingsworth、G. N. Murshudov、A. A. Vagin 和 J. A. Littlechild。晶体学报。（2004 年）。 D60，1879-1882。

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒HEPES Buffer- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Buffers > HEPES Buffer

HEPES Buffer

应用

Crystallization grade HEPES buffer for formulating screens or for optimization
用于配制筛选或优化的结晶级 HEPES 缓冲液

特征

Sterile filtered
Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)无菌过滤
在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述 HEPES

Synonyms: 2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid or 4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid or N-(2-Hydroxyethyl)piperazine-N′-(2-ethanesulfonic acid)
C₈H₁₈N₂O₄S
M_r 238.31
CAS Number [7365-45-9]
EC Number 230-907-9
Beilstein Registry Number 883043
Merck 14,4654
RTECS TL6809000
MDL Number MFCD00006158
PubChem Substance ID 24895616
Purity ≥ 99.5%
pKa 7.5 at 25°C

Useful pH range of HEPES buffer 6.8 – 8.2

别名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazine]ethanesulfonic acid or 4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid or N-(2-Hydroxyethyl)piperazine-N’-(2-ethanesulfonic 酸）
C8H18N2O4S
238.31 先生
CAS 编号 [7365-45-9]
欧盟编号 230-907-9
贝尔斯坦注册号 883043
默克 14,4654
RTECS TL6809000
MDL 编号 MFCD00006158
PubChem 物质 ID 24895616
纯度≥99.5%
pKa 7.5 在 25°C

HEPES 缓冲液的有用 pH 范围 6.8 – 8.2

Titrate HR2-585 to the desired pH between 6.8 – 8.2 using NaOH
HR2-585 Measured pH Range: 5.4 – 5.5 at 25°C
HR2-585 Measured Conductivity Range: 160.1 – 236.9 μS/cm at 25°C
HR2-585 Measured Refractive Index Range: 1.37093 – 1.37131 at 20°C

HR2-785 is titrated to pH 7.0 using NaOH
HR2-785 Measured Conductivity Range: 5.8 – 7.0 mS/cm at 25°C
HR2-785 Measured Refractive Index Range: 1.37133 – 1.37176 at 20°C

HR2-729 is titrated to pH 7.5 using NaOH
HR2-729 Measured Conductivity Range: 11.6 – 13.6 mS/cm at 25°C
HR2-729 Measured Refractive Index Range: 1.37177 – 1.37290 at 20°C

Insoluble Matter 0.01% max
DNase None Detected
RNase None Detected
Protease None Detected
Heavy Metals 1 ppm max
As 5 ppm max
Cu 5 ppm max
Fe 5 ppm max
Pb 5 ppm max
SO₄ 0.005% max

CAT NO

HR2-585

NAME

1.0 M HEPES

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$113.00

CAT NO

HR2-785

NAME

1.0 M HEPES pH 7.0

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$113.00

CAT NO

HR2-729

NAME

1.0 M HEPES pH 7.5

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$113.00

参考

1. Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of native elastase from North Atlantic salmon (Salmo salar). Berglund, GI; Snalas, AO; Hansen, LK. Acta Crystallogr D 51, 393- 394, 1995.

1. 来自北大西洋鲑鱼 (Salmo salar) 的天然弹性蛋白酶的结晶和初步 X 射线晶体学研究。伯格伦德，GI；斯纳拉斯，AO；汉森，LK。晶体学学报 D 51, 393-394, 1995。

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

发表于2024年4月6日由whatman中国官网

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

产品型号：
简单描述
DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK-8试剂盒在国内科研院所、重点大学、*医院被广泛应用，认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，Z高IF38.5分

详细介绍

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：

★灵敏度高，数据可靠，重现性好

★操作简便，省时省力

★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞

★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低

★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用

★适合于高通量药物筛选

DOJINDO同仁CCK-8细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8，在美国，欧洲等国家地区均持有，同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST的注册商标。

2015年版中国药典第三部363页收载了新药：尼妥珠单抗（Nimotuzumab）注射液，是*个以表皮生长因子受体（EGFR）为靶点的单抗药物，也是中国*个治疗恶性肿瘤的人源化单克隆抗体。商品名：泰欣生（百泰药业生产）。
该药的生物学活性测定方法采用H292细胞（人肺癌淋巴结转移细胞）增殖抑制法（通则138页），使用了同仁化学研究所（Dojindo Laboratories）研发的CCK-8试剂。这是CCK-8检测方法*被中国药典收载，表明该方法已经获得国家机构认可。

CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

CCK-8试剂毒性：CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用

CCK-8 P公司产品 R公司产品

（操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询）

日本同仁化学世界，您好！- DOJINDO

发表于2023年8月24日由whatman中国官网

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ADA Buffer

应用

特征

描述

CAT NO

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CAT NO

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Acetic acid

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描述Acetic acid

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Ammonium hydroxide

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描述Ammonium hydroxide

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BICINE Buffer

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描述 BICINE

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HEPES Buffer

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描述 HEPES

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