日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒Quartz Capillaries- DOJINDO

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Quartz Capillaries

应用

X-ray data collection
Liquid-liquid diffusion crystallization
Gel acupuncture crystallization
X 射线数据采集
液-液扩散结晶
凝胶针刺结晶

特征

Thin walled – 10 micron
Quartz Glass 0620
薄壁 – 10 微米
石英玻璃 0620

描述

Crystal Clear Quartz capillaries that are extremely thin walled (approximately 10 micron wall thickness). The length of the capillary has a well defined diameter, with one end having a funnel shape and the other end closed. Quartz capillaries have a wall thickness of 0.01 mm and an overall length of 80 mm +/-5 mm. Quartz capillaries are available in a wide range of outside diameters from 0.1 mm to 5.0 mm. They are designed to mount, hold, and store small molecule and biological macromolecular crystals for x-ray data collection. Capillaries can also be used for crystal density measurements and crystal growth experiments. The capillaries can be sealed tightly against moisture and gases using wax, epoxy, or other sealing materials.

In determining what glass or quartz capillary is right for you, please refer to the “Linear Absorption Coefficient µ cm-1” table. This table indicates the amount of radiation that is absorbed by the capillary during x-ray data collection.

For 0.1 mm to 2.5 mm capillaries the open end capillary tube base size is 3.0 +/- 0.2 mm OD x 0.2 +/- 0.15 mm Wall thickness. For 3.0 and 3.5 mm capillaries the open end capillary base size is about 4.4 mm OD x 0.25 mm Wall thickness. For 4.0 and 5.0 mm capillaries the open end capillary based size is about 6.0 x 0.25 mm.

The Diameter is measured about 30 to 40 mm from the closed end (measuring instrument: LaserMicrometer LS 7500) The tolerances are as follows.

晶莹剔透的石英毛细管，壁厚极薄（壁厚约 10 微米）。毛细管的长度具有明确定义的直径，一端为漏斗形，另一端封闭。石英毛细管的壁厚为 0.01 mm，总长度为 80 mm +/-5 mm。石英毛细管的外径范围很广，从 0.1 mm 到 5.0 mm。它们旨在安装、固定和存储小分子和生物大分子晶体，用于 X 射线数据收集。毛细管也可用于晶体密度测量和晶体生长实验。可以使用蜡、环氧树脂或其他密封材料将毛细管紧密密封以防潮气和气体。

在确定适合您的玻璃或石英毛细管时，请参阅“线性吸收系数 µ cm-1”表。该表显示了在 X 射线数据采集过程中被毛细管吸收的辐射量。

对于 0.1 mm 至 2.5 mm 毛细管，开口端毛细管底座尺寸为 3.0 +/- 0.2 mm OD x 0.2 +/- 0.15 mm 壁厚。对于 3.0 和 3.5 mm 毛细管，开口端毛细管底座尺寸约为 4.4 mm OD x 0.25 mm 壁厚。对于 4.0 和 5.0 mm 毛细管，基于开口端毛细管的尺寸约为 6.0 x 0.25 mm。

直径从封闭端测量约 30 至 40 毫米（测量仪器：LaserMicrometer LS 7500）公差如下。

Diameter Tolerance Minimum Diameter Maximum Diameter

0.1 mm       +/-0.05 mm          0.05 mm                     0.15 mm
0.2 mm       +/-0.05 mm          0.15 mm                     0.25 mm
0.3 mm       +/-0.05 mm          0.25 mm                     0.35 mm
0.4 mm       +/-0.05 mm      0.35 mm                     0.45 mm
0.5 mm       +/-0.05 mm          0.45 mm                     0.55 mm
0.6 mm       +/-0.05 mm          0.55 mm                     0.65 mm
0.7 mm       +/-0.05 mm      0.65 mm                     0.75 mm
0.8 mm       +/-0.05 mm          0.75 mm                     0.85 mm
0.9 mm       +/-0.05 mm          0.85 mm                     0.95 mm
1.0 mm       -0.05 +0.25 mm    0.95 mm                     1.25 mm
1.5 mm       +/-0.25 mm          1.25 mm                     1.75 mm
2.0 mm       +/-0.25 mm          1.75 mm                     2.25 mm
2.5 mm       +/-0.05 mm          2.25 mm                     2.55 mm
3.0 mm +/-0.25 mm          2.75 mm                     3.25 mm
3.5 mm       +/-0.25 mm          3.25 mm                     3.75 mm
4.0 mm       +/-0.25 mm          3.75 mm                     4.25 mm
5.0 mm       +/-0.25 mm          4.75 mm                     5.25 mm

Quartz Specifications
Glass type Fused silica / quartz glass
Density 2.2 g/cm³
Transformation temperature Tg= 1075 – 1210 degrees Celsius
Strain point approximately 1075 degrees Celsius
Annealing point approximately 1180 degrees Celsius
Softening point approximately 1730 degrees Celsius
Working point 1700 – 2100 degrees Celsius
Refractive index 1.46 589.3nm
Mohs hardness 5.5 – 6.5
Hydrolytic resistance, class 1 (DIN 12 111)
Acid resistance, class 1 (DIN 12 116)
Alkalai resistance, class 1 (DIN 52 322)
Chemical composition SiO₂ 99.99%
Trace elements
Al 16.00 ppm
Ca 0.80 ppm
Fe 0.80 ppm
K 0.90 ppm
Li 0.70 ppm
Na 0.90 ppm
Ti 1.50 ppm
Mg 0.10 ppm
Cu <0.05 ppm
Cr <0.05 ppm

Capillaries have only been tested at atmospheric pressure (760 mmHg (torr), 29.92 inHg, 14.696 psi). Use at other pressures has not been tested.

HR6-128 Quartz Capillary 0.1 mm

Tolerances for Capillaries

Quartz Technical Data Sheet

日本同仁化学MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口- DOJINDO

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MitoBright LT Green试剂货号：MT10

线粒体长效荧光探针-绿色

MitoBright LT Green

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

特点：

● 荧光持续时间长

● 可在含血清培养基中染色

● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测

选择规格：

20 μl

400 μl

荧光长时间存在

可使用含血清培养基

荧光/流式检测

更多线粒体检测方案（点击查看）

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.3. DALGreen – Autophagy Detection 细胞自噬检测

NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

产品概述

细胞内有各种各样的细胞器，承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成ATP的场所，它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关，因此它是细胞内最重要的细胞器之一。

在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时，通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况，因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。现在市面上销售的小分子荧光探针中，多为含有氯甲基的探针，该探针存在观察时间短，染色时不能使用含血清的培养基，染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT荧光探针克服了这些问题，可在线粒体内稳定存在一天以上，条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比，染色后的荧光强度更高。本品直接采用DMSO溶液包装，可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有Green, Red, Deep Red等多种选择，可满足多重染色等各种各样的实验要求。

产品特点

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

1.可长时间在细胞内存在

用HBSS清洗HeLa细胞后，分别用MitoBright LT和其他公司的试剂进行染色，更换含血清的培养基，培养4天后观察线粒体染色情况。其他公司的染色试剂在4天后荧光强度大幅降低，而MitoBright LT依然维持着高荧光强度，并且在染色7日后依然可以观察到荧光。

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

＜检测条件＞

MitoBright LT Green 、（T公司）Green：Ex 488 nm/Em 500–560 nm

MitoBright LT Red 、（T公司）Red：Ex 561 nm/Em 560–620 nm

MitoBright LT Deep Red 、（T公司）Deep Red：Ex 640 nm/Em 650–700 nm

2.可以使用含血清培养基

用MitoBright LT和其他公司试剂，分别用含有血清和不含血清的培养基染色。其他公司试剂在含有血清的培养基染色时，荧光明显减弱，而MitoBright LT在含有血清的培养基条件下，荧光没有减弱，可明显观察到线粒体的染色情况。

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

实验例

实时荧光观察

HeLa细胞用CCCP处理，并与线粒体检测试剂（Mtphagy Dye）和线粒体染色试剂（MitoBright LT Green）共同染色，并经过一段时间（6小时）后进行检测。

<检测条件>

设备：LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM)

(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)

激发波长：

MitoBright LT Green 488 nm

Mtphagy Dye 555 nm

物镜：63x

拍摄时间：6小时

拍摄间隔：15秒

用流式细胞仪检测

1. 用RPMI培养基(10% Fetal Bovine Serum, 1% Penicillin-Streptomycin)配制Jurkat细胞悬液(3.2×10⁵cell/ml)接种于5 cm培养皿中，在37℃，5% CO₂培养箱内过夜培养。

2. 去除培养基，加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/l, 5 ml)，在37℃培养30分钟。

3. 去除溶液，用 5 ml的PRPMI培养基清洗细胞2 次。

4. 更换RPMI培养基，持续培养细胞，每隔2 天用流式细胞仪检测。

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

MitoBright LT Green MitoBright LT Red MitoBright LT Deep Red

Excitation: 488 nm Excitation: 488 nm Excitation: 633 nm

Emission: 515-545 nm Emission: 564-604 nm Emission: 650-670 nm

在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像

胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。

现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。

<染色条件>

将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上，培养24小时，提取上清液并用HBSS洗涤。

加入100 nmol/l的MitoBright LT Green工作溶液，培养30分钟后，提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。

<检测条件>

Ex 488 nm，Em 500-560 nm

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

<结果>

现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色，而不受背景影响。

通过超分辨率激光显微镜（STED）观察线粒体内部构造

线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色，用超分辨激光显微镜(STED)观察，证实线粒体嵴结构异常。

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

＜实验条件＞

色素：MitoBrightLT Deep Red（100 nmol/l）

仪器：Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X

Ex. 640 nm / Em. 650-700 nm

STED激光：775nm

<实验步骤>

1将细胞接种在玻璃培养皿中，培养2天（37℃，5% CO₂）。

2去除培养基后，加入使用L-15培养基（含10%FBS）制备的MitoBrightLT Deep Red（100 nmol/l）工作液。

3孵育45分钟（37度，5% CO₂）。

4去除上清液，用HBSS清洗两次。

5加入L-15培养基（含10%FBS），通过超分辨率激光显微镜（Leica TCS SP8 STED）进行观察。

以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。

产品文献

同仁化学研究所开发的线粒体长效染色荧光探针MitoBright LT系列在世界范围内广受科研人员的好评。在上市后的很短时间内，就出现了多篇使用MitoBright LT系列探针的论文，下面收集整理了部分的论文，其中红色字体标记的是使用本产品标记线粒体后，长时间(最长至5天)观察线粒体动态的报道，供感兴趣的科研人员参考。

产品名	检测样品	染色后的观察时间	检测仪器	发表期刊(含原文链接)	影响因子
MitoBright LT Green	细胞 (U251)	立即	荧光显微镜	Pharmaceuticals	4.286
MitoBright LT Green	酵母 (Lipomyces starkeyi)	立即	荧光显微镜	Genes to Cells	1.655
MitoBright LT Green	细胞 (HeLa)	立即	荧光酶标仪	Biomaterials	10.317
MitoBright LT Green	细胞 (Naive CD4+ T cells)	立即	荧光显微镜	Cell Reports	9.423
MitoBright LT Green	细胞 (CT26)	立即	流式细胞仪	Journal of Radiation Research	2.841
MitoBright LT Green	细胞 (C2C12)	5 天	荧光显微镜	Polymers	4.329
MitoBright LT Green	细胞 (BMM)	36 小时 or 3 天	荧光显微镜/ 流式细胞仪	JCI Insights	8.315
MitoBright LT Green	细胞 (mouse erythrocytes)	立即	荧光显微镜	Front. Cell. Infect. Microbiol.	5.293
MitoBright LT Red	细胞 (SH-SY5Y)	立即	荧光显微镜	Free Radical Biol. Med.	7.376
MitoBright LT Red	细胞 (MRC-5)	立即	荧光显微镜	The FEBS Journal	5.542
MitoBright LT Red	细胞 (A11 cells/ P29 cells)	3 天	荧光显微镜	BMC Mol. Cell Biol.	5.293
MitoBright LT Deep Red	细胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7; HCT-116 )	立即	荧光显微镜	Small	13.281
MitoBright LT Deep Red	细胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7 )	8 小时	荧光显微镜	Advanced Therapeutics	–
MitoBright LT Deep Red	细胞 (4T1)	24 小时	荧光显微镜	Advanced Functional Materials	18.808
MitoBright LT Deep Red	细胞 (SW982)	立即	荧光显微镜	Gene	3.368

荧光特性

MitoBright LT 染料的荧光特性

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

常见问题Q&A

Q1：MitoBright LT需要用DMSO溶液配制，反复冻结融化也不会影响试剂质量吗？

A1：我们已经确认可以使用冻融30次的溶液进行染色。

Q2：MitoBright LT和MitoBright的区别。

A2：MitoBright LT是MitoBright具有更强细胞内滞留性性能的产品。另外MitoBright LT是溶于DMSO的产品，可以立即使用，而无需准备染色溶液。

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

Q3：用MitoBright LT系列染色后再去极化是否会影响染色效果？

A3：我们确认了去极化和细胞种类对于染色效果的影响，MitoBright LT的每种染料都有不同程度的影响。作为参考，本公司将HeLa细胞用不同的MitoBrightLT试剂进行染色，在以下条件下进行去极化处理，观察荧光染色的变化。

<染色条件>

HeLa细胞用MitoBright LT（100 μmol/l，孵育30分钟）染色，并用HBSS洗涤。

用FCCP（100 μmol/l，孵育60分钟）处理，用HBSS洗涤2次，然后观察荧光。

MitoBright LT Green试剂,MT10,同仁化学Dojindo日本原装进口

<检测条件>

MitoBright LT Green :Ex 488 nm/Em 500–560 nm

MitoBright LT Red :Ex 561 nm/Em 560–620 nm

MitoBright LT Deep Red :Ex 640 nm/Em 650–700 nm

规格性状

性状：本品是黄色液体

吸光度：0.600～0.800(490 nm附近）

日本同仁化学MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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MitoBright IM Red for Immunostaining试剂货号：MT15

免疫荧光用线粒体荧光染料

MitoBright IM Red for Immunostaining

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

特点：

● 标记稳定性强、特异性高

● 可用于免疫荧光共染色

选择规格：20μl 20μl*3

可在含血清的培养基中染色

更多线粒体检测方案（点击查看）

规格性状

产品概述

实验例：与内质网标记物KDEL的共染色

MitoBright IM Red与其他试剂的不同

与传统试剂的对比

可检测的次数

荧光特性

常见问题Q&A

规格性状

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

产品概述

线粒体不仅是细胞中产生能量的场所，也是与癌症、衰老、神经退行性疾病（例如，阿尔茨海默症、帕金森症）等密切相关的最重要的细胞器之一。

近年来，随着显微镜技术的发展，有关细胞器的研究正在由原来的“单独研究线粒体的机能””逐渐向“线粒体与其他细胞器之间的相互作用”的方向转移。因此，对于线粒体的更详细的形态观察需求越来越大。

MitoBright IM Red克服了其他染料的靶向标记稳定性差的问题，是一种可以用于免疫荧光共染色线粒体荧光探针。

实验例：与内质网标记物KDEL的共染色

用MitoBrightIM Red标记HeLa细胞的线粒体，经固定化和膜透性处理后再用内质网标记物KDEL的抗体进行免疫共染色。并且在左图的箭头所示范围内进行了荧光强度的检测。从荧光图像可以清晰的观察线粒体与附近的内质网的形态。

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

<检测条件>

MitoBright IM Red (红) Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm

KDEL抗体-Alexa488 (绿) Ex: 488 nm, Em= 490-550 nm

Scale bar: 10 μm

MitoBright IM Red与其他试剂的不同

传统的小分子荧光染料在染色后的固定化操作或透膜剂处理后，往往会失去靶向性。而MitoBright IM Red与其他染料相比，提高了靶向稳定性，可以抑制免疫荧光实验时固定化操作造成的荧光强度减弱等问题。

・荧光强度差的比较

MitoBright IM与(T公司的)传统荧光染料相比，在活细胞线粒体染色后的固定化处理和透膜剂处理后的荧光强度如下图所示。固定化处理和透膜剂处理后，荧光强度都有一定的下降，但是MitoBright IM比传统染料的靶向标记稳定性更高，因此可以观察到更清晰的线粒体染色情况。

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

<检测条件>

Ex=561 nm; Em= 560-620 nm

・荧光背景的比较

使用线粒体标记物TOM20抗体比较MitoBrightIM和传统试剂的免疫染色后的线粒体定位情况。用MitoBrightIM和传统试剂对HeLa细胞进行染色，然后用TOM20抗体进行二抗免疫荧光染色。结果显示，用MitoBrightIM或现有试剂对HeLa细胞进行染色，然后用TOM20抗体进行二抗染色。结果显示，传统试剂有扩散到线粒体以外区域的情况，导致背景很高，而MitoBrightIM的背景更低，而且定位与TOM20抗体一致。

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

<检测条件>

Ex=561 nm; Em= 560-620 n

与传统试剂的对比

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

可检测的次数

MitoBright IM Red 规格	荧光显微镜
MitoBright IM Red 规格	（35 mm dish, working solution 2 ml/dish时)
20 μl	10 枚
20 µl x3	30 枚

荧光特性

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

激发波长(λex) ： 548 nm
发射波长(λem) ： 566 nm

常见问题Q&A

Q: MitoBright IM Red出厂就是是DMSO溶液状态，反复冻融是否会影响染色结果？

我们做过反复冻融5次的稳定性实验，染色结果正常。如果长时间保存时需要反复冻融，保险起见建议提前分装，分开保存。

Q：先药物刺激再进行MitoBright IM染色时，发现有荧光辉斑产生，请问是否有好的解决办法？

A：请在药物刺激前进行MitoBright IM的染色。由于本试剂是依靠线粒体膜电位在线粒体处积累的，如果线粒体膜电位大幅降低，会导致试剂无法在线粒体处聚集。

(参考实验)

分别采用“先FCCP刺激后染色” 和“先染色后FCCP刺激” 的方法对HeLa细胞进行实验并观察荧光。

先进行MitoBright IM染色再FCCP刺激的实验组很顺利的观察到了荧光，而相反的实验组没有观察到荧光。

MitoBright IM Red for Immunostaining试剂,MT15,Dojindo同仁化学

日本同仁化学DiBAC4(3)试剂货号：D545 C27H39N4NaO6- DOJINDO

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DiBAC4(3)试剂货号：D545

Bis(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol, sodium salt

DiBAC4(3)

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

分子式：

C₂₇H₃₉N₄NaO₆

分子量：

538.61

特点：

● 可用于流式细胞仪、共聚焦显微镜

● 操作简便

SDS下载

选择规格：

25mg

现货

荧光探针

性质

参考文献

规格性状

性质

它是Bis-oxonol型阴离子膜电位敏感染料，随着细胞膜去极化，其在细胞质中的分布增加，荧光增强。据报道，在BICR / M1R-k细胞（大鼠乳腺癌细胞）中，在-25至-90mV的膜电位范围内获得了约1％/ mV的荧光强度变化。与电势变化相关的响应遵循一阶速率方程，其速率常数为0.1至0.8 / min。

由于可以被Ar激光（488nm）激发，因此可以用于流式细胞术，共聚焦显微镜等。除膜电位测量外，还有在细胞活力和离子通道活性评估中应用的实例。它也可以用于高通量筛选（HTS）细胞反应。

*有关使用方法，请参照操作说明书。

参考文献

1) D. E. Epps, M. L. Wolfe and V. Groppi, “Characterization of the Steady-state and Dynamic Fluorescence Properties of the Potential-sensitive Dye Bis-(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol(Dibac4(3)) in Model Systems and Cells”, Chem. Phys. Lipids, 1994, 69, 137.
2) T. Braner, D. F. Hulser and R. J. Strasser, “Comparative Measurements of Membrane Potentials with Microelectrodes and Voltage-sensitibe Dyes”, Biochim. Biophys. Acta, 1984, 771, 208.
3) T. T. Rohn, A. Sauvadet, C. Pavoine and F. Pecker, “Xanthine Affects [Ca²⁺]_i and Contractile Responses of Ventricular Cardiocytes to Electrical Stimulation”, Am. J. Physiol., 1997, 273, C909.
4) D. J. Mason, R. Allman, J. M. Stark and D. Lloyd, “Rapid Estimation of Bacterial Antibiotic Susceptibility with Flow Cytometry”, J. Microsc., 1994, 176, 8.
5) U. Langheinrich and J. Daut, “Hyperpolarization of Isolated Capillaries from Guinea-pig Heart Induced by K⁺ Channel Openers and Glucose Deprivation”, J. Physiol., 1997, 502, 397.
6) V. Dall’Asta, R. Getti, G. Orlandini, P. A. Rossi, B. M. Rotoli, R. Sala, O. Bussolati and G. C. Gazzola, “Membrane Potential Changes Visualized in Complete Growth Media through Confocal Laser Scanning Microscopy of bis-Oxonol-loaded Cells”, Exp. Cell Res., 1997, 231, 260.
7) K. S. Schroeder and B. D. Neagle, “FLIPR: A New Instrument for Accurate, High Throughput Optical Screening”, J. Biomol. Screening, 1996, 1, 75.

规格性状

规格性状：

本品为橙红色至红色粉末。

纯度（HPLC）：98.0％或更高

二甲基亚砜可溶：测试合格性

摩尔消光系数：140,000或更高（约493 nm）

红外光谱：测试合格

处理条件

1.保存方法：冷藏

日本同仁化学MQAE试剂货号：M024- DOJINDO

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MQAE试剂货号：M024

N-Ethoxycarbonylmethyl-6-methoxyquinolinium bromide

MQAE

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 高水溶性

● 膜渗透性好

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50mg

期货

荧光探针检测方案

性质

溶解例

参考文献

规格性状

性质

氯离子通过细胞膜的运输，涉及很多细胞方面的生理功能，并且是生物学上非常重要的研究课题。此处介绍的MQAE是一种高灵敏度的荧光试剂，其荧光强度会被Cl-降低。 MQAE对Cl-的消光系数约为SPQ的两倍，并且Cl-对浓度变化的敏感性也优于SPQ。 MQAE的荧光波长为λex= 355 nm和λem= 460 nm，荧光强度与SPQ相似，可检测的Cl离子浓度为0至50 mmol / l。

此外，MQAE具有高水溶性和膜通透性，可以很容易地引入到细胞膜中。 MQAE的荧光强度不受其他体内阴离子，pH等的影响，[Cl-]的变化可通过荧光强度进行跟踪。

溶解例

3 mg/mL（水：乙腈= 1：1）

参考文献

1) A. S. Verkman, M. C. Sellers, A. C. Chao, T. Leung and R. Ketcham, “Synthesis and Characterization of Improved Chloride-sensitive Fluorescent Indicators for Biological Applications”, Anal. Biochem., 1989, 178, 355.
2) M. Inoue, M. Hara, X.-T. Zeng, T. Hirose, S. Ohnishi, T. Yasukura, T. Uriu, K. Omori, A. Minato and C. Inagaki, “An ATP-driven Cl^– Pump Regulates Cl^– Concentrations in Rathippocampal Neurons”, Neurosci. Lett., 1991, 134, 75.
3) T. Nakamura, H. Kaneko and N. Nishida, “Direct Measurement of Chloride Concentration in Newt Olfactory Receptors with the Fluorescent Probe”, Neurosci. Lett., 1997, 237, 5.

规格性状

规格性状

性状：本品为淡黄色至黄色粉末。

纯度（HPLC）：95.0％或更高

红外光谱：测试合格

处理条件

1.保存方法：冷藏

日本同仁化学SulfoBiotics- SSP4试剂货号：SB10- DOJINDO

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SulfoBiotics- SSP4试剂货号：SB10

3′,6′-Di(O-thiosalicyl)fluorescein

SulfoBiotics- SSP4

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₃₄H₂₀O₇S₂

分子量：

604.65

特点：

● 荧光背景低

● 灵敏度高

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产品文献

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硫化氢

日本同仁化学FSB solution试剂货号：F308- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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FSB solution试剂货号：F308

1-Fluoro-2,5-bis(3-carboxy-4-hydroxystyryl)benzene, 1% DMSO solution

FSB solution

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

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100μl

期货

细胞染色

概述

产品使用步骤

病理切片染色实例

参考文献

常见问题Q&A

概述

淀粉样变性病被卫生部门确定为一种特殊的疾病，是一种具有β折叠结构的称为淀粉样物质的不正常蛋白质，它聚集成纤维，并沉淀在内部器官和系统的外面，抑制这些器官和系统的功能。日本人中这样的疾病包括免疫细胞淀粉样变性病 (AL 淀粉样变性病)、敏感性AA淀粉样变性病、家族性淀粉样多发性神经病 (FAP) 和透析淀粉样变性病(DRA)，并且据估计在日本有几百个这样的患者。淀粉样变性病大致可分为两类：沉积在全身各器官内的淀粉样物质[系统性淀粉样变性病]，例如上文中提到的病症；以及淀粉样物质沉积于特定器官中的 [局部淀粉样变性病]，例如在阿尔茨海默病中淀粉样物质沉积于大脑中。

1-溴-2,5-双(3-羧基-4-羟基苯乙烯基)苯 (BSB)用于检测淀粉样变性病，因为它与β-淀粉样肽 (Aβ)—与阿尔茨海默病相关的淀粉样物质，具有高亲和力。Skovronsky 证实，在静脉注射 BSB 18 小时之后，该染料在转基因小鼠 Tg2576 脑组织的老年斑中积累，该种转基因小鼠表达Aβ的淀粉样前体蛋白 (APP)。1) 不仅限于Aβ，Ando 以及其他研究者已宣布各种系统性淀粉样变性病 (AA、AL、ATTR、Ascr 及 Aβ2M) 中沉积的淀粉样物质用BSB比用刚果红 (一种常用于β折叠染色的染料) 染色更敏感。BSB的荧光强度是刚果红的两倍。此外，BSB 不仅是染色的染料，还能够阻断FAP的淀粉样物质前体TTR形成淀粉样物质。

产品使用步骤

样品的固定法

乙醇固定或福尔马林固定

染色操作方法

＊本品是由 1 %w/vDMSO 溶液制成可配制 0.01%浓度溶液 10 ml,可配制 0.000 1%浓度溶液 1000 ml

1. FSB染色液配制

向产品中加入50 %的乙醇并稀释成浓度为0.01-0.0001 %的 FSB溶液

2. 染色

将切片在 FSB 中浸泡 30 min。再浸入饱和碳酸锂中然后用50%乙醇洗涤

3. 检测

紫外光(V 激发) 下检测染色区域

＊如果使用 MRI 法参考如下文献

M. Higuchi, N. Iwata, Y. Matsuba, K. Sato, K. Sasamoto, T. C.Saido, 19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo, Nature Neuroscience, 2005, 8(4), 527-33

病理切片染色实例

1、一个患有阿尔茨海默病患者的前皮质截面染色图。该组织用乙醇固定。发光部分为淀粉样物质。

Sub-adjacent 切片图中的数字对应于每个老年斑。

FSB solution试剂货号：F308

(图片由日本理化学研究所脑科学综合研究中心 Higuchi博士和 Saido 博士慷慨提供)

2、患有AL淀粉样变性病患者的心脏组织切片(刚果红是赤褐色的，BSB和FSB的发光部分为淀粉样物质)。Sub-adjacent切片。可以用FSB检测良好的部分，并且这些部分与淀粉样沉淀部分的对比是清晰的。

FSB solution试剂货号：F308

(图像由Ando博士慷慨提供：熊本大学医学院，实验医学部)

3、FSB在静脉内注射，通过 in vivo MRI图像技术，检测患阿尔茨海默病小鼠脑部照片，可观察到淀粉样沉淀物 (老年斑)。

图像 A：19F-MRI图像、图像B:1H-MRI T2 放大图像、图像C：荧光显微镜下的荧光图像 (exvivo) 图像B中可观查到老人斑低信号 (黑) 部分。FSB的分布情况可在荧光显微镜下确认 (图像C)，但相同检测部位通过19F-MRI现象检测 (图像A)，可以更清晰的检测出 (图像B) 中检测不到或不清晰的部分。

FSB solution试剂货号：F308

注意事项：购买后根据自己的用量分装保存

参考文献

1. 19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo, Nature Neuroscience, 2005, 8(4), 527-33

2. An aberrant sugar modification of BACE1 blocks its lysosomal targeting in Alzheimer’s disease,

EMBO Molecular Medicine, 2015, 7, 175-189

3. Imaging of Peripheral Benzodiazepine Receptor Expression as Biomarkers of Detrimental versus Beneficial Glial Responses in

Mouse Models of Alzheimer’s and Other CNS Pathologies, The Journal of Neuroscience, 2008, 28(47), 12255-12267

4. Longitudinal, quantitative assessment of amyloid, neuroinflammation, and anti-amyloid treatment in a living mouse model of

Alzheimer’s disease enabled by positron emission tomography, The Journal of Neuroscience, 2007, 27(41), 10957-10968

常见问题Q&A

Q1：FSB荧光观察时的激发波长和发射波长。

A1：激发波长：390 nm, 发射波长：511 nm

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细胞膜染色试剂—绿色

Cellstain- CFSE试剂

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

日本同仁化学Cellstain- CFSE试剂货号：C375- DOJINDO

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Cellstain- CFSE试剂货号：C375

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

CAS号：150347-59-4

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

分子式：

C₂₉H₁₉NO₁₁

分子量：

557.46

特点：

● 可用于细胞增殖检测

● 长效荧光染色，最长三周可见

● 可用于流式细胞仪检测

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现货

细胞染色检测方案

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规格性状

产品概述

原理

荧光特性

操作说明

文献

常见问题Q&A

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.2. Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.3. Calcein-AM 细胞质染色

NO.4. Cell Viability Assay Kit 细胞增殖/毒性检测

NO.5. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

规格性状

规格

特性：该产物为无色至微黄色固体，可溶于二甲基亚砜和乙腈。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料 CFSE(CFDA-SE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE 是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFSE 在结构上将酚羟基部位改造成 AM 体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，进入细胞内的 CFSE 的 AM 部位能被细胞内酯酶水解发出绿色荧光。CFSE 的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE 进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。

在细胞分裂增殖过程中，CFSE 的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。另外，CFSE 标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。有报道证实 CFSE 毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

原理

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

荧光特性

荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm

操作说明

＊建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。

配制试剂：

1、从冰箱中取出CFSE试剂，放至室温后再打开。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，让粉末充分落入管底，必要时可采用离心的方法。

2、取0.9 ml DMSO^a)加到CFSE管中溶解，配制成2 mM的CFSE母液^b)（加入DMSO后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全）。

3、用PBS(-)或适当的缓冲液将其稀释成100 μM或其它浓度（如果采用载玻片观察法，建议浓度为20 μM的工作液^c))。

a) DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。

b) 由于CFSE母液遇水极易分解，所以建议分装保存，例如分装成5 μl/管。

方法：分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

c) CFSE工作液应现配现用，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。

* PBS(-)：不含钙和镁离子的PBS。

细胞染色(仅供参考)：

例1 培养板观察法

1、准备细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基^a)调整细胞浓度至约10⁷个／ml。

2、取1ml细胞悬液至试管中，加入适量CFSE工作液，轻轻搅拌混匀（建议CFSE的终浓度参考相关论文或做个预实验：分别设定终浓度为0.5,1,2,5,10,20 μM…,以确定最佳染色浓度^b)）。

3、在37℃培养箱中培养15-30分钟。

4、离心后去上清，加入2 ml PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。

5、加入合适的培养基制成细胞悬液。

6、取500 μl的细胞悬液加在培养孔中，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量^c)进行实验。

例2 载玻片观察法

1、准备1 ml细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基^a)调整细胞浓度至约10⁷个／ml。

2、取30 μl细胞悬液至试管中，加入10 μl浓度为20 μM的CFSE工作液（终浓度为5μM），轻轻搅拌混匀^b)。

3、在37 ℃培养箱中培养15-30分钟。

4、滴10 μl的细胞悬液在载玻片上，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量^C)进行实验。

＊如果背景高的话，第3步之后需要洗去多余的CFSE：

离心后去上清，加入90 μl PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。

a)尽可能用不含血清的培养基，血清中的酶和蛋白质会分解CFSE，可能会影响染色效果。

b)如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果细胞毒性大或背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。

c)根据不同的实验目的和要求，采用稀释的方法调整细胞数量。

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

文献

1) M. Bronner-Fraser, “Alterations in Neural Crest Migration by a Monoclonal Antibody That Affects Cell Adhesion”, J. Cell Biol., 1985, 101, 610.

2) A. Nose and M. Takeichi, “A Novel Cadherin Cell Adhesion Molecule:Its Expression Patterns Associated WithImplantation and Organogenesis of Mouse Embryos”, J. Cell Biol., 1986, 103, 2649.

3) S. A. Weston and C. R. Parish, “New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy”, J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.

4) C. K. Raymond, P. J. O’hara, G. Eichinger, J. H. Rothman and T. H. Stevens, “Molecular Analysis of the Yeast VPS3 Gene and the Role of Its Product in Vacuolar Protein Sorting and Vacuolar Segregation during the Cell Cycle”, J. Cell Biol., 1990, 111, 877.

5) G. Radcliff, R. Waite, J. Lefevre, M. D. Poulik and D. M. Callewaert, “Quantification of Effector/Target Conjugation Involving Natural Killer(NK) or Lymphokine Activated Killer(LAK) Cells by Two-color Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1991, 139, 281.

6) S. A. Weston and C. R. Parish, “Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph Nodes”, Cytometry, 1992, 13, 739.

7) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, “Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function”, J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

常见问题Q&A

Q1 请告诉我如何使用CFSE。

A1：参考文献[1]中的描述如下所示。

杀死7-10周大的CBA / H小鼠，去除脾脏（或其他目标器官），然后浸入F15培养基（1％FCS）中。

然后，通过金属网获得细胞悬液，并通过离心除去红细胞，死细胞等。

将纯化的淋巴细胞悬浮在pH 7.0的PBS中至50,000,000细胞/ mL。

加入5.0μM浓度的CFSE，并在37°C下标记15分钟。悬浮在冰冷却的F15培养基（1％FCS）中并离心

用（350g，5分钟，20℃）洗涤两次。悬浮在F15培养基中。

静脉注射到CBA / H小鼠中。一定时间后，杀死鼠标并去除脾脏（或其他目标器官）。

切除淋巴细胞并分离并通过流式细胞仪分析。

参考文献[2]是关于钙黄绿素-AM的，但也通过与[1]相同的步骤将其与CFSE进行了比较。

【参考文献】

1. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, J. Immunol. Methods, 133, 87 (1990).

2. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, Cytometry, 13, 739 (1992).

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- CFSE试剂货号：C375

Q3:细胞染色试剂Cellstain的哪些活细胞染色染料可以在细胞中长时间停留？

A3: “就细胞内保留而言，“ CFSE”可以在细胞中停留最长时间。尽管荧光强度降低，但是已经证实细胞中存在荧光染料达8周。用“ Calcein-AM”和“ BCECF-AM”观察到荧光达3天。也有报道称“钙蛋白-AM”在6小时内在细胞中保留了90％”

・S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)

・H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)”

但是，“钙调蛋白-AM”和“ BCECF-AM”对细胞毒活性没有影响。

・L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)

还要注意的一点是，原始的基本骨架是荧光素，因此由于激发光而褪色由于容易发生，因此可能难以通过长期激发来观察荧光。

（尽管最好使用防褪色剂等）

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细胞染色

荧光化合物的使用使得细胞显影为细胞功能的分析提供了广泛的信息。细胞的各种活动和结构可成为荧光化合物的染色目标。最常染色的细胞组份为细胞膜、蛋白质和核苷。

线粒体

细胞膜

细胞活死双染

细胞质

细胞核

β-淀粉样物质

组织染色

品名货号用途

线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit	MT09	线粒体膜电位检测
MitoBright LT Green试剂	MT10	线粒体长效荧光染色（绿色）
MitoBright LT Red试剂	MT11	线粒体长效荧光染色（红色）
MitoBright LT Deep Red试剂	MT12	线粒体长效荧光染色（深红色）

染料名	检测法	荧光色	λex (nm)	λem (nm)	染色参考
BCECF-AM	荧光	绿	490	526	进入细胞内AM体分解
Calcein-AM	荧光	绿	490	515	进入细胞内AM体分解
CFSE	荧光	绿	496	516	结合细胞内的蛋白质
FDA	荧光	绿	488	530	細胞内加水分解
PI	荧光	红	530	620	只能染色死細胞（蓝色）
AO	荧光	绿	502	526	细胞核染色
DAPI	荧光	兰	360	460	结合死细胞的核酸
Hoechst 33258	荧光	兰	350	461	结合活细胞/死细胞核酸
Hoechst 33342	荧光	兰	352	461	结合死细胞的核酸
MitoRed	荧光	红	560	580
Rh123	荧光	绿	507	529
MitoBright LT Green	荧光	绿	493	508	线粒体染色
MitoBright LT Red	荧光	红	548	564	线粒体染色
MitoBright LT Deep Red	荧光	深红	644	666	线粒体染色

细胞膜

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂	P505	细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂	P504	细胞膜染色试剂—绿色

细胞活死双染

死细胞标记试剂–Blue	C555	死细胞染色
死细胞标记试剂– Deep Red	C556	死细胞染色
Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒	C542	细胞染色

细胞质

活细胞质染色-绿色——Calcein-AM	C326	细胞质
Cellstain- CFSE试剂	C375	细胞质
CFSE试剂	C309	细胞质
FDA试剂	F209	细胞染色
BCECF-AM试剂	B262	pH荧光探针

细胞核

Nucleolus Bright Green试剂	N511	核仁荧光染色试剂-绿色
Nucleolus Bright Red试剂	N512	核仁荧光染色试剂-红色
Cellstain- PI试剂	P346	细胞核
Cellstain- PI solution试剂	P378	细胞核
Cellstain- DAPI试剂	D212	细胞染色
Cellstain- DAPI solution试剂	D523	细胞染色
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂	H342	细胞染色
-Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂	H341	细胞染色
Cellstain- AO solution试剂	A430	细胞核

组织染色

FSB solution试剂	F308	细胞染色

组织染色

品名货号用途

DAB试剂	D006	染色试剂

日本同仁化学Isothiocyanobenzyl-NTA试剂货号：I279- DOJINDO

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Isothiocyanobenzyl-NTA试剂货号：I279

N-[5-(4-Isothiocyanatobenzyl)amido-1-carboxypentyl]iminodiacetic acid

Isothiocyanobenzyl-NTA

商品信息

储存条件：-20度保存，充氮气

运输条件：室温

分子式：

C₁₉H₂₃N₃O₇S

分子量：

437.47

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选择规格：

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期货

蛋白抗体标记

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生物素标记试剂盒-氨基

Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒

荧光素标记试剂盒-氨基

Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂

Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）

在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

日本同仁化学NOR 3试剂 N390 NO供体- DOJINDO

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NOR 3试剂 N390 NO供体

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶，被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素，但在氧化应激中，诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

NOR 3试剂	N390	NO供体
S-Nitrosoglutathione试剂	N415	NO供体
Carboxy-PTIO试剂	C348	NO检测
2,3-Diaminonaphthalene(for NO detection)试剂	D418	NO研究
DTCS Na试剂	D465	NO研究

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。 NOR 3试剂 N390 NO供体

日本同仁化学超氧阴离子和羟自由基检测（EPR）—DMPO D048- DOJINDO

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超氧阴离子和羟自由基检测（EPR）—DMPOD048超氧阴离子和羟自由基检测

氧化应激与自由基

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

超氧阴离子和羟自由基检测（EPR）—BMPO	B568	超氧阴离子和羟自由基检测
超氧阴离子和羟自由基检测（EPR）—DMPO	D048	超氧阴离子和羟自由基检测
单线态氧检测（EPR）—TEMP	T511	单线态氧检测

日本同仁化学MDA检测试剂盒 M496 检测细胞或组织中的MDA浓度- DOJINDO

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氧化应激与自由基

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

MDA检测试剂盒	M496	检测细胞或组织中的MDA浓度
ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-	R253	耐光型活性氧检测
ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂	R252	ROS检测

日本同仁化学DTSSP试剂 D630 交联剂- DOJINDO

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DTSSP试剂 D630 交联剂

蛋白抗体标记

简单、迅速的标记试剂盒 Dojindo Labeling Kits是一系列包含了活性试剂以及特制的过滤管，可以简便标记抗体等蛋白质的试剂盒。样品预处理-反应-纯化的整个过程都在一支过滤管中完成，3个小时内就能获得标记产物。1次可以标记50-200 μg的样品。使用本试剂盒的过滤管来纯化样品，与凝胶过滤和透析法相比，回收率要高很多，适合用于标记一些比较贵重的抗体。试剂盒中包含了标记产物的保存溶液，标记产物在保存溶液中能够稳定保存。Dojindo Labeling Kits能够标记分子量在50,000以上的大分子。其中辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶标记试剂盒还可以标记分子量在5,000以下的小分子。标记方法有两种：一种是氨基标记法，另一种是巯基标记法。氨基标记法采用带有N-hydroxysuccinimide (NHS) 基的活化试剂，能够标记抗体等样品上的氨基。巯基标记法采用带有Maleimide基的活化试剂，能够标记还原抗体等样品上带有巯基的化合物。根据样品的特性可以选择不同的标记方法。

生物素

荧光标记

酶标记物

螯合标记

藻胆蛋白

ICG标记

IgG纯化分离

交联剂

品名货号用途

DTSSP试剂	D630	交联剂
BS3试剂	B574	交联剂
DSP试剂	D629	交联剂
EMCS试剂	E018	交联剂
GMBS试剂	G005	交联剂
SPDP试剂	S291	交联剂
Sulfo-SMCC试剂	S330	交联剂

日本同仁化学Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂 M030 螯合标记- DOJINDO

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Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂 M030 螯合标记

蛋白抗体标记

生物素

荧光标记

酶标记物

螯合标记

藻胆蛋白

ICG标记

IgG纯化分离

交联剂

品名货号用途

Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂	M030	螯合标记
Isothiocyanobenzyl-NTA试剂	I279	蛋白抗体标记
FeBABE试剂	F279	蛋白抗体标记
AB-NTA free acid试剂	A459	螯合标记
Maleimido-C3-NTA试剂	M035	N-[5-(3′-马来酰亚胺丙烷基氨基)-1-戊基羧基]亚氨基二乙酸, 二钠盐, 一水合物
DTPA anhydride试剂	D033	螯合标记

日本同仁化学代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢- DOJINDO

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代谢

细胞内代谢系统(糖酵解系统，TCA回路和电子转移系统)的分析对于理解细胞状态非常重要。

糖代谢

脂质代谢

线粒体呼吸

氨基酸代谢

品名货号用途

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit	G272	糖酵解(乳酸生成量)和线粒体膜电位(JC-1)同时检测
糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit	G270	方便快捷的检测糖酵解能、细胞代谢途径转移、细胞对糖酵解途径和氧化磷酸化途径的依赖程度
Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue	UP01	葡萄糖摄取能力检测（蓝色荧光）
Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green	UP02	葡萄糖摄取能力检测（绿色荧光）
Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red	UP03	葡萄糖摄取能力检测（红色荧光）
Glucose Assay Kit-WST试剂盒	G264	葡萄糖含量检测
Lactate Assay Kit-WST试剂盒	L256	乳酸检测试剂盒
α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric	K261	对细胞内的α-KG进行定量检测

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit	UP07	脂肪酸摄取检测
Lipi-Blue试剂	LD01	脂滴检测（蓝色）
Lipi-Green试剂	LD02	脂滴检测（绿色）
Lipi-Red试剂	LD03	脂滴检测（红色）
Lipi-Deep Red试剂	LD04	脂滴检测（深红色）
Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂	LD05	脂滴荧光检测（蓝色）
Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂	LD06	脂滴荧光检测（深红色）

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence	A552	检测细胞中ADP与ATP的比率
Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒	E297	氧消耗量检测
Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒	CK18	ATP活性检测
Glutamine Assay Kit-WST试剂盒	G268	谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒	G269	谷氨酸的定量检测
NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒	N509	NAD/NADH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒	N510	NADP/NADPH检测

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit	UP04	检测细胞摄取氨基酸的能力
胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit	UP05	胱氨酸摄取能力检测

各项代谢指标完全解读

糖酵解氧化磷酸化代谢关联指标

脂质代谢关联指标

氨基酸代谢关联指标

线粒体相关指标

衰老相关指标

当试图了解细胞状态时，分析各种细胞内代谢途径【例如糖酵解系统、三羧酸（TCA）循环、电子运输链等】非常重要。代谢产物和能量来源，【例如葡萄糖、乳酸和NAD（P）+/NAD（P）H】都是用于分析细胞内代谢的指标。

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

细胞代谢与疾病

近年来，针对癌症、糖尿病等疾病模型的细胞内代谢研究受到了广泛关注。下面是不同疾病的代谢指标变化的详细介绍。

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

癌症

癌细胞在无限增殖的同时保持着活跃的细胞代谢，不断吸收大量的营养物质进行蛋白质、核酸、能量（如ATP）的合成。即使在不利的环境下(低氧气、低营养)，癌细胞仍然可以通过改变代谢途径而存活下来。近年来，针对癌细胞的代谢途径的研究也越来越多。

糖代谢有两种途径：线粒体氧化磷酸化和糖酵解(Glycolysis)。正常哺乳动物细胞在有氧条件下，糖酵解被抑制。而癌细胞即使在氧气充足的情况下，糖酵解仍然十分活跃(瓦格博效应，Warburg effect)。因此，癌细胞大量的摄取糖分并在亢进的糖酵解作用下大量产生乳酸。由于糖酵解途径在生成ATP时并不需要氧气，所以即使在低氧环境下，癌细胞仍然可以增殖。另一方面，癌细胞的线粒体利用氨基酸和脂肪产生NADH，NADH除了用于产生ATP以外，还主要用于抵御氧化还原作用。癌细胞的线粒体有着异常的机能，这会引起线粒体膜电位的上升（过极化）以及过剩的活性氧的产生。因此需要产生大量的谷胱甘肽来维持胞内的氧化还原平衡。而谷氨酰胺 (Glutamine)和胱氨酸(Cystine)是谷胱甘肽合成的必要来源，癌细胞不断的过量摄入这些氨基酸。另外，由于需要 NADPH来维持还原型谷胱甘肽，癌细胞会不断利用从糖酵解、戊糖磷酸途径(pentose phosphate pathway)以及线粒体产生的NADH来维持高浓度的NADPH。

*请注意，上述内容是概括性的癌细胞代谢特征的描述。随着癌细胞种类的不同和环境的变化会有一定差别。

参考文献

下面是一些癌细胞代谢的综述性文献，供初次接触这一领域的研究人员参考。

1) 糖酵解：M. G. Vander Heiden, L. C. Cantley, and C. B. Thompson, “Understanding the Warburg Effect: The Metabolic Requirements of Cell Proliferation”, Science, 2009, 324, 1029.

2) 氨基酸代谢、ROS：P. Koppula, Y. Zhang, and B. Gan, “Amino Acid Transporter SLC7A11/xCT at the Crossroads of Regulating Redox Homeostasis and Nutrient Dependency of Cancer”, Cancer Commun., 2018, 38, 12.

3) 氨基酸代谢：E. L. Lieu, T. Nguyen, S. Rhyne, and J. Kim, “Amino Acids in Cancer”, Exp. Mol. Med., 2020, 52, 15.

4) 线粒体、ROS、NADPH：F. Ciccarese and V. Ciminale, “Escaping Death: Mitochondrial Redox Homeostasis in Cancer Cells”, Front. Oncol. 2017, 7, 117.

5) NADH：A. Chiarugi, C. Dolle, R. Felici, and M. Ziegler, “The NAD Metabolome-A Key Determinant of Cancer Cell Biology”, Nat. Rev. Cancer, 2012, 12, 741.

⚫ 葡萄糖(Glucose)代谢障碍与抗癌作用

⚫ 氨基酸代谢障碍和抗癌作用

⚫ 1个试剂盒，匀浆和非匀浆自由选择

⚫ 癌细胞免疫与代谢

抑制葡萄糖代谢和抗癌作用

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

癌细胞主要使用糖酵解系统产生ATP，因此针对糖酵解系统的抗癌药物的开发已经进行了很长时间。目前还没有开发出有效的抗癌药物，但糖酵解仍然是癌细胞的主要药物靶点。因此，糖酵解是了解癌细胞代谢的最重要途径。

葡萄糖转运蛋白（GLUT）是药物发现中糖酵解靶蛋白的一个例子。由于癌细胞通过葡萄糖转运蛋白摄取大量的糖，因此可以通过直接抑制葡萄糖转运蛋白来抑制糖酵解。另外，抑制葡萄糖饥饿的活性、糖酵解系统的酶 (己激酶：HK、乳酸脱氢酶：LDH等) ，和抑制糖酵解系统的最终产物乳酸向细胞外的流出也是有效的手段。

各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

产品用途	产品名称	货号
葡萄糖检测试剂盒	Glucose Assay Kit-WST	G264
乳酸检测试剂盒	Lactate Assay Kit-WST	L256
NAD/NADH 检测试剂盒	NAD/NADH Assay Kit-WST	N509
NADP/NADPH 检测试剂盒	NADP/NADPH Assay Kit-WST	N510
JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒	JC-1 MitoMP Detection Kit	MT09

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

抑制氨基酸代谢与癌症治疗

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

在增殖活跃的癌细胞中，氨基酸是蛋白质和核酸合成所必需的营养素。由于癌细胞中来自糖酵解系统的乙酰CoA的供给降低，因此积极利用氨基酸

作为TCA循环的营养源。研究表明，癌细胞通过氨基酸转运蛋白的表达量增加，吸收大量氨基酸。特别是谷氨酰胺是谷胱甘肽的原料和TCA循环中必需的α-酮戊二酸的来源，并且针对谷氨酰胺的摄取和代谢（谷氨酰胺分解）的药物开发备受关注。此外，我们发现与许多必需氨基酸摄取有关的氨基酸转运蛋白LAT(L-type amino acid transporter)在许多癌细胞中过度表达，并有望作为新的药物发现目标。
与其他氨基酸不同，氧化还原控制所需的半胱氨酸主要由胱氨酸转运蛋白xCT吸收到细胞中。癌细胞会产生大量的活性氧，从而增加抗氧化剂谷胱甘肽的产生，维持氧化还原平衡。因此，通过抑制谷胱甘肽产生的途径，可以改变细胞内氧化还原平衡，并诱导细胞死亡，如铁吞作用。此外，谷胱甘肽还有助于耐药性，因此涉及谷胱甘肽产生的途径是药物发展的主要目标。特别是最近，长期用作抗炎药的磺胺沙拉嗪和癌症的分子靶向治疗药物索拉非尼布抑制了xCT，通过xCT抑制的铁吞作用引起了人们的关注。

各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

关联产品

产品用途	产品名称	货号
NAD/NADH 检测试剂盒	NAD/NADH Assay Kit-WST	N509
JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒	JC-1 MitoMP Detection Kit	MT09
谷氨酰胺检测试剂盒	Glutamine Assay Kit-WST	G268
谷氨酸检测试剂盒	Glutamate Assay Kit-WST	G269
GSSG/GSH检测试剂盒	GSSG/GSH Quantification Kit	G263
脂质过氧化物检测试剂	Liperfluo	L248
线粒体过氧化物检测试剂	MitoPeDPP	M466
自噬检测试剂	DAPGreen – Autophagy Detection	D676

抑制脂肪酸代谢和抗癌作用

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

细胞增殖活跃的癌细胞当然需要大量的脂质。因此，细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取是很活跃的。因此，许多癌细胞增加了脂质滴的积累。针对癌细胞的治疗目标主要是与脂肪酸的产生相关的途径，并开发了许多抑制剂。

另一方面，癌细胞利用脂肪酸的β氧化来有效地产生能量，以补充糖酵解系统低效能量的产生。因此，以脂肪酸的β氧化为目标的药剂开发也在进行中。

各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献

关联产品

产品用途	产品名称	货号
脂滴检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue/Deep Red	LD05/LD06
脂滴荧光染料	Lipi-Blue/Green/Red/Deep Red	LD01/LD02/LD03/LD04
NADP/NADPH 检测试剂盒	NADP/NADPH Assay Kit-WST	N510
GSSG/GSH检测试剂盒	GSSG/GSH Quantification Kit	G263

癌症免疫治疗与细胞代谢

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

T细胞在消除癌细胞的免疫系统中起着核心的作用。近年来发现，T细胞的分化和活化等调节机制也与细胞内的代谢有关，因此癌症免疫相关的代谢研究也越发活跃起来。癌细胞需要吸收大量营养才能维持增殖活性，而活化的T细胞同样需要大量营养(尤其是葡萄糖)才能消除癌细胞。所以，活化的T细胞与癌细胞存在局部的“葡萄糖竞争”。众所周知，癌细胞可以通过表达活性化T细胞表面的免疫检查点PD-1来抑制T细胞的活性。而且，最近的研究发现，在这个相互作用中，T细胞的葡萄糖摄取也会受到抑制。癌细胞通过抑制免疫细胞的代谢来获得免疫逃逸，因此癌症免疫方面的研究并不局限于癌细胞，对免疫细胞的代谢研究也十分重要。

参考文献

1) Z. Yin, L. Bai, W. Li, T. Zheng, H. Tian, and J. Cui, “Targeting T cell metabolism in the tumor microenvironment: an anti-cancer therapeutic stratety”, J. Exp. Clin. Cancer Res. 2019, 38, 403.

2) L. Almeida, M. Lochner, L. Berod, and T. Sparwasser, “Metabolic pathways in T cell activation and linear differentiation”, Semin. Immunol. 2016, 28(5), 514.

3) A. Kumar and K. Chamoto, “Immune metabolism in PD-1 blockage-based cancer immunotherapy”, Int. Immunol., 2020 Jul 5;dxaa046.

4) D. G. Franchina, F. He, and D. Brenner, “Survival of the fittest: Cancer challenges T cell metabolism”, Cancer Lett., 2018, 412, 216.

5) N. Patsoukis, K. Bardhan, P. Chatterjee, D. Sari, B. Liu, L. N. Bell, E. D. Karoly, G. J. Freeman, V. Petkova, P. Seth, L. Li, and V. A. Boussiotis, “PD-1 alters T-cell metabolic reprogramming by inhibiting glycolysis and promoting lipolysis and fatty acid oxidation”, Nat. Commun., 2015, 6, 6692.

各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献

关联产品

产品用途	产品名称	货号
葡萄糖检测试剂盒	Glucose Assay Kit-WST	G264
乳酸检测试剂盒	Lactate Assay Kit-WST	L256
谷氨酰胺检测试剂盒	Glutamine Assay Kit-WST	G268
谷氨酸检测试剂盒	Glutamate Assay Kit-WST	G269

糖尿病

抑制葡萄糖代谢和抗癌作用

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

在高血糖状态下，细胞内葡萄糖浓度升高，多元醇途径代谢增强。这会过度消耗NADPH，减少还原型谷胱甘肽(GSH)。其结果是，氧化应激增加，促进细胞损伤。

参考文献

M. Brownlee, “The pathobiology of diabetic complications: a unifying mechanism”, DIABETES, 2005, 54, 1615.

关联产品

产品用途	产品名称	货号
NAD/NADH检测试剂盒	NAD/NADH Assay Kit-WST	N509
NADP/NADPH 检测试剂盒	NADP/NADPH Assay Kit-WST	N510
谷胱甘肽检测试剂盒	GSSG/GSH Quantification Kit	G263

衰老

⚫ 衰老相关疾病与乳酸、NAD+的关系

⚫ DNA损伤引发的细胞衰老

⚫ 谷氨酰胺代谢与细胞衰老

衰老相关疾病与乳酸、NAD +的关系

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

近年来，NAD+与衰老之间的关系引起了人们的关注。单个小鼠的衰老模型中，在肝脏等中观察到的NAD+量减少1)，并且据报道，抑制NAD +合成酶会导致衰老细胞功能下降2）。此外，NAD+量的减少导致线粒体功能下降3)，而线粒体功能的降低表明NAD+量减少，从而导致衰老细胞的功能下降4)。

DNA损伤引发的细胞衰老

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

在衰老的细胞中，由于线粒体功能下降，主要由厌氧的糖酵解通路产生ATP，因此乳酸的产生量增加7）。 DNA损伤是细胞衰老导致线粒体功能障碍的原因之一。 DNA损伤的积累会激活 DNA修复机制并增加NAD+消耗。 NAD+量的减少会降低SIRT1活性，这是维持线粒体功能的重要因素，导致线粒体功能的降低（电子转移的抑制→ATP产生/ NAD+量的减少）3),8)。

谷氨酰胺代谢和细胞衰老

抑制肿瘤的menin通过靶向依赖mTORC1的代谢激活来预防效应CD8T细胞功能障碍9)。

Menin是一种肿瘤抑制因子，在预防衰老和疲劳等T细胞功能障碍中起着重要作用。当Menin缺乏时， mTORC1被激活，并通过糖酵解系统和谷氨酰胺降解增强氧化磷酸化，导致CD8T细胞功能障碍。此外，谷氨酰胺代谢中间产物α酮戊二酸有助于维持mTORC1激活和促进细胞衰老(SA-β-gal活性增强)。谷氨酰胺-α-酮戊二酸通路在诱导CD8T细胞功能障碍中发挥重要作用，并发现Menin有抑制T细胞衰老的可能性。

代谢糖代谢脂质代谢线粒体呼吸氨基酸代谢

关联产品

产品用途	产品名称	货号
细胞衰老检测试剂盒 (荧光显微镜 / 流式细胞仪用)	Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal	SG03
细胞衰老检测试剂盒 (荧光酶标仪用)	Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal	SG05
JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒	JC-1 MitoMP Detection Kit	MT09

日本同仁化学MitoPeDPP试剂货号：M466- DOJINDO

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MitoPeDPP试剂货号：M466

3-[4-(Perylenylphenylphosphino)phenoxy]propyltriphenylphosphonium iodide

MitoPeDPP

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 特异性的在细胞中线粒体内聚集

● 可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物

● 可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测

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选择规格：

5μg*3

现货

铁死亡检测方案

产品概述

检测原理

实验例

参考文献

产品概述

MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。

聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。由于氧化的MitoPeDPP

(Ox-MitoPeDPP) 的激发和发射波长分别是452 nm和470 nm，可以减小样品的光损伤和自发荧光，因此利用

荧光显微镜MitoPeDPP可以检测活细胞中的脂质过氧化物。

特点

1.特异性的在细胞中线粒体内聚集

2.可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物

3.可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测

* 本产品由福冈大学化学系的Dr. Shioji开发

*由于MitoPeDPP量极少不宜看到，可以通过观察MitoPeDPP DMSO溶液的颜色是否为黄色来判断。

检测原理

MitoPeDPP可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。

MitoPeDPP试剂货号：M466

实验例

1.MitoPeDPP和线粒体染色试剂MitoBright共同染色的实施例

在HeLa细胞中添加t-BHP（氢过氧化叔丁基），检测脂质过氧化物

波长（wavelength/band pass）

MitoPeDPP：470/40（Ex），525/50（Em）

MitoBright DeepRed：600/50（Ex），685/50（Em）

结果证实在HeLa细胞内的线粒体中，MitoPeDPP受t-BHP氧化后会发出荧光。另外通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）的共染色，确认了MitoPeDPP的荧光是定位在线粒体中。

MitoPeDPP试剂货号：M466

2.检测添加Rotenone产生的脂质过氧化物

向HeLa细胞[μ-slide，8孔（由Ibidi制造）]中添加MitoPeDPP之后，添加Rotenone溶液并使用荧光显微镜观察。实验结果证实，添加Rotenone后，检测到细胞中产生了脂质过氧化物。

Rotenone的刺激时间：0 min(左)，90 min(中)，180 min(右)

MitoPeDPP试剂货号：M466

上部）荧光图，下部）明场图

3.神经细胞使用MitoPeDPP的实验例

A.荧光显微镜检测

向NIE-115细胞（小鼠神经芽细胞瘤）添加异黄素，诱导Ca2+流入细胞内，并通过MitoPeDPP的荧光染色来观察线粒体膜内的脂溶性过氧化物的产生。实验结果证实添加了异霉素的实验组相比对照组来说荧光更强。

MitoPeDPP试剂货号：M466

B. 平均荧光强度数据比较

为了量化对照组细胞和添加了离子霉素的细胞的荧光强度，对两组数据进行基于平均荧光强度的比较。

结果证实，加入离子霉素后30分钟的细胞对比对照组的细胞，观察到的荧光强度显着增加。

数据提供（Free Radical Research, in press)

MitoPeDPP试剂货号：M466

参照芝浦工业大学系统理工学院福井浩二副教授、中村沙希[参考文献3]

4.MitoPeDPP反应的选择性

在不含细胞的反应体系中，MitoPeDPP可以与各种过氧化物如H2O2，t-BHP和ONOO- 反应，但是在细胞中，积

累在线粒体中的MitoPeDPP可以被t-BHP氧化而释放出较强荧光 (图3A)，却和其它ROS或RNS反应很弱 (图3B)。

A) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min，然后用100 μmol / l的t-BHP处理。

B) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min后，加入ROS、RNS诱导剂。

分别加入100 μmol / l (H2O2，NO和ONOO-诱导剂)和10 μmol / l PMA（O2-.诱导剂）。

左边为明场图，右边为荧光图

* t-BHP：tert-Butylhydroperoxide; PMA, Phorbol myristate acetate;

SIN-1, 3-(Morpholinyl)sydnonimine, hydrochloride;

NOC 7, 1-Hydroxy-2-oxo-3-(N-methyl-3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazene

波长/带通滤波器：470/40 (Ex), 525 /50 (Em)

MitoPeDPP试剂货号：M466

参考文献

1) K. Shioji K, Y. Oyama, K. Okuma and H. Nakagawa, “Synthesis and properties of fluorescence probe for detection of peroxides in mitochondria.”, Bioorg Med Chem Lett., 2010, 20, (13), 3911.

2) S. Oka, J. Leon, K. Sakumi, T. Ide, D. Kang, F. M. LaFerla and Y. Nakabeppu, “Human mitochondrial transcriptional factor A breaks the mitochondria-mediated vicious cycle in Alzheimer’s disease”, Scientific Reports ., 2016, DOI: 10.1038/srep37889 , .

3) S. Nakamura, A. Nakanishi, M. Takazawa, S. Okihiro, S. Urano and K. Fukui, “Ionomycin-induced calcium influx induces neurite degeneration in mouse neuroblastoma cells: Analysis of a time-lapse live cell imaging system”, Free Radical Research., 2016, 50, (11), 1214.

4) M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, “Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis”, Cell Death Dis., 2018, 9, 804.

5) M. Álvarez-Córdoba, A. Fernández Khoury, M. Villanueva-Paz, C. Gómez-Navarro, I. Villalón-García, J. M. Suárez-Rivero, S. Povea-Cabello, M. Mata, D. Cotán, M. Talaverón-Rey, A. J. Pérez-Pulido, J. J. Salas, E. M. Pérez-Villegas, A. Díaz-Quintana, J. A. Armengol, J. A. Sánchez-Alcázar , “Pantothenate Rescues Iron Accumulation in Pantothenate Kinase-Associated Neurodegeneration Depending on the Type of Mutation.”, Mol. Neurobiol. ., 2019, 56, (5), 3638.

关联产品

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

线粒体超氧化物检测用荧光染料

线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit

线粒体膜电位检测试剂盒

MitoBright LT Green试剂

线粒体长效荧光探针-绿色

MitoBright LT Deep Red试剂

线粒体长效荧光探针-深红色

日本同仁化学铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489- DOJINDO

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铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489

铁死亡荧光试剂 (Fe2+荧光法)

Mito-FerroGreen

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 对二价铁离子的高度选择性和高灵敏度

● 适用于通用滤光片

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产品文献

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选择规格：

50μg*2

现货

铁死亡检测方案

产品概述

测定原理

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实验例

参考文献

常见问题Q&A

规格性状

产品概述

研究证实铁是生物体内量最多的过渡金属元素。其参与多种生理活动。近几年，细胞内的游离铁离子由于具有很高的反应性，和细胞损伤、死亡有一定的关联而得到了越来越多的关注。在细胞内游离铁离子以稳定的Fe2+和 Fe3+形式存在。从细胞内的还原环境，金属转运体及Fe2+的水溶性考虑，认为揭示细胞内Fe2+的行为比Fe3+更重要。Mito-FerroGreen是一种新型荧光探针，用于检测线粒体 (铁硫簇和血红素蛋白的合成场所) 内亚铁离子Fe2+。

该产品已在岐阜药科大学药物化学实验室的永澤秀子和平山祐博士的指导下开发。Mito-FerroGreen和Fe²⁺反应后的荧光强度上升不可逆，与Fluo-3（货号：F019）这类可以实时监测钙离子的荧光探针有所不同。

测定原理

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489

产品特点

铁离子检测试剂的选择

可以根据自己的实验方法和实验仪器选择检测试剂

	FerroOrange	Mito-FerroGreen
细胞内分布	细胞内	线粒体
荧光特性	λex : 543 nm、λem : 580 nm	λex : 505 nm、λem : 535 nm
检测仪器	荧光显微镜	荧光显微镜（FITC、GFP）
（滤镜）	荧光显微镜	荧光显微镜（FITC、GFP）
检测对象	活细胞	活细胞
染色次数	24 μg可染色35 mm dish 17块板	50 μg可染色35 mm dish 5块板
染色次数	（终浓度 1 μmol/l時）	（终浓度 5 μmol/l時）

实验例

1.线粒体定位

为了确认Mito-FerroGreen的是否特异性地在线粒体内定位，与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red※）一同进行染色，实验结果证实了Mito-FerroGreen选择性地染色在线粒体内。

向HeLa细胞中添加5μmol/ l的Mito-FerroGreen和200 nmol/l的线粒体染色探针MitoBright Deep Red，并在CO2培养箱中培养30分钟，然后添加100μmol/ l的硫酸铁铵（II），并将混合后的细胞溶液在CO2培养箱中培养1小时后通过观察荧光。

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489

Mito-FerroGreen

激发波长：488 nm

发射波长：500-565 nm

MitoBright Deep Red

激发波长：640 nm

发射波长：656-700 nm

2.线粒体内的铁离子荧光成像

在含有血清的MEM培养基中接种HeLa细胞，并加入Mito-FerroGreen，通过荧光检测HeLa细胞众线粒体内的二价铁（左图）。而在添加了铁离子的HeLa细胞中，观察到了Mito-FerroGreen的荧光明显增强（中间图）。在添加了铁螯合剂的细胞中，几乎未观察到Mito-FerroGreen的荧光（右图）。以这种方式，证实了线粒体中铁含量的差异和荧光强度的差异是成相关性的。

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489

3.对二价铁离子的高度选择性和高信号

向1ml 50mmol/l HEPES Buffer（pH7.4）中加入2μl 1mol/l Mito-FroGreen、2μl 10mmol/l各种金属以及20μl 1mg/ml酯化酶，在室温下反应1小时后测定荧光强度。

激发波长：500 nm

发射波长：535 nm

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489

4.适用于通用滤光片

Mito-FerroGreen的激发波长为488nm，最大激发波长可达505nm。

向3ml 50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 中加入 6μl 1mol/l Mito-FroGreen、6μl 10mmol/l硫酸铵铁（Ⅱ）以及20μl 1mg/ml酯化酶。在37℃下反应1小时后检测荧光强度。

激发波长：500 nm

发射波长：535 nm

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号：M489

参考文献

1) T. Hirayama, S. Kadota, M. Niwa and H. Nagasawa, “A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)”, Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B

2) T. Issitt, E. Bosseboeuf, N. Winter, N. Dufton, G. Gestri, V. Senatore, A. Chikh, A. Randi, C. Raimondi, “Neuropilin-1 controls endothelial homeostasis by regulating mitochondrial function and iron-dependent oxidative stress via ABCB8”, iScience., 2018,DOI: 10.1016/j.isci.2018.12.005 .

3) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, “Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 “, J Physiol Sci., 2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.

4) M. Fujimaki, N. Furuya, S. Saiki, T. Amo, Y. Imamichi and N. Hattori, “Iron supply via NCOA4-mediated ferritin degradation maintains mitochondrial functions”, Mol. Cell. Biol.., 2019,doi: 10.1128/MCB.00010-19.

5) K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, “MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.”, Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.

6) Y. Wang and M. Tang, “PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance”, Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.

7) KF. Yambire, C. Rostosky, T. Watanabe, D. Pacheu-Grau, S. Torres-Odio,A. Sanchez-Guerrero,O. Senderovich, EG. Meyron-Holtz,I.Milosevic, J. Frahm, AP. West and N. Raimundo, “Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency and inflammation in vivo.”, Elife, 2019, 3, (8), doi:10.7554/eLife.51031.

8) H. Nishizawa, M. Matsumoto, T. Shindo, D. Saigusa, H. Kato, K. Suzuki, M. Sato, Y. Ishii, H. Shimokawa and K. Igarashi, “Ferroptosis is controlled by the coordinated transcriptional regulation of glutathione and labile iron metabolism by the transcription factor BACH1″, J. Biol. Chem., 2019,doi: 10.1074/jbc.RA119.009548.

9)Y. akashima, A. Hayano and B. Yamanaka, Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells.”, Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.

常见问题Q&A

Q1：是否可以对酵母进行染色吗？

A1：我们公司有酵母染色的实验例，染色的具体实验步骤请联系我们公司的销售人员。

Q2：推荐使用的滤光片波长是多少？

A2：检测时推荐的滤光片如下：

激发波长：450~500 nm

发射波长：515~550 nm

规格性状

性状：本品溶于乙腈、甲醇、二甲醇。

纯度（HPLC）：90.0%以上

荧光光谱：适合测试

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日本同仁化学Mtphagy Dye试剂货号：MT02- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Mtphagy Dye试剂货号：MT02

Mtphagy Dye

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮，充氮气

运输条件：室温

特点：

● 只需添加小分子量荧光试剂即可轻松检测线粒体

● 可以使用荧光显微镜进行活细胞成像

● 可以与附着的溶酶体染色剂同时染色

选择规格：

5μg*3

期货

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日本同仁化学Cellstain- MitoRed试剂货号：R237- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

9-[2-(4′-MethylcoumariN-7′-oxycarbonyl)phenyl]-3,6-bis(diethylamino)xanthylium chloride

Cellstain- MitoRed

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

分子式：

C₃₈H₃₇ClN₂O₅

分子量：

637.17

特点：

● 基于膜电位对线粒体染色

● 红色荧光

● 激发和发射波长分别为560 nm和580 nm

SDS下载

选择规格：

50μg*8

期货

线粒体检测方案

规格性状

产品概述

荧光特性

操作说明

文献

常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产物为品红色至紫棕色固体，可溶于二甲基亚砜和甲醇。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验适合

产品概述

MitoRed为基于罗丹明的可透过细胞膜的染料。它集中于线粒体内并发出红色荧光。MitoRed与线粒体的相互作用取决于线粒体的膜电位。

可用20-200 nM MitoRed对线粒体染色。MitoRed的激发和发射波长分别为560 nm和580 nm。

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

荧光特性

λex=560 nm, λem=580 nm

操作说明

染色步骤

1. 将50 µg MitoRed溶解到78 µl DMSO中制备成1 mM MitoRed-DMSO溶液。

2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×10⁴-5×10⁵个/ml。

3. 孵育该载玻片，用PBS或Hank’s液洗涤细胞。

4. 用培养基稀释1 mM MitoRed溶液以制备20-200 nM MitoRed缓冲液。

5. 将MitoRed缓冲液^a) 加入载玻片并在37℃下孵育30分钟至1小时。

6. 去除MitoRed缓冲液并用培养基洗涤细胞。^b)

7. 用带有罗丹明滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a) 加入细胞前将MitoRed缓冲液放在37℃下孵育。

b) 洗涤细胞后为了固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15-20分钟，接着用PBS洗涤。

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

文献

1) R. Ikeda, T. Sugita, E. S. Jacobson and T. Shinoda, “Effects of Melanin upon Susceptibility of Cryptococcus to Antifungals”, Microbiol. Immunol., 2003, 47(4), 271.

常见问题Q&A

Q1:如何使用Mito Red。

A1：

下面显示了一个使用HeLa细胞的示例。

*根据细胞类型和观察条件，有必要检查试剂浓度和染色条件。

<试剂>

-Cellstain®-MitoRed

二甲基亚砜

用DMSO 78μL→1 mmol / L溶液溶解MitoRed 50μg（1瓶）

<操作方法>

1.培养小室玻片上的细胞，以使细胞密度合适。

（1×105至1×106细胞/ mL）

2.除去培养基，并轻轻洗涤（培养基，PBS，Hank溶液等）。

用中等浓度将3.1 mmol / L的MitoRed溶液稀释至最终浓度为20-200 nmol / L。

（最好先将其在37°C的温度下保温，然后再添加到细胞中）

将稀释的MitoRed溶液加入孔中，并在培养条件下孵育大约30分钟至1小时。

4.除去MitoRed溶液，并用中性溶液洗涤。

5.在荧光显微镜G激发下观察。

（Λex= 560 nm，λem= 580 nm）

固定电池时，请执行以下（3）之后的操作。

4.除去MitoRed溶液并洗涤。

（无血清培养基，PBS，Hank溶液等）

5.用5.10％中性福尔马林缓冲液固定15至20分钟。

6.用PBS清洁。

7.在荧光显微镜下观察。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- MitoRed试剂货号：R237

Q3：不管是活细胞还是死细胞，它都会染色细胞内线粒体吗？

A3:仅活细胞。它不能用于死细胞，因为线粒体的膜电位会丢失。

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应用

特征

描述

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