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E.coli DH5α Competent Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年1月8日由whatman中国官网

E.coli DH5α Competent Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9057	E.coli DH5α Competent Cells	100 μl × 10	￥300

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■ 制品内容 E.coli DH5α Competent Cells 100 μl × 10 pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:       2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

Takara在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)，通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac lq，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1 - 2×109 bacteria/ml

■ Genotype

E.coli DH5α : F-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44 , λ-, thi -1, gyrA96 , relA1

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化效率将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量控制

1. 转化效率

转入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 108 transformants/μg pUC19

2. β-半乳糖苷酶的α-互补性

当使用pUC19 plasmid进行转化时，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth : Ingredient per liter water     Tryptone 10 g     Yeast extract 5 g     NaCl 5 g       用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。     ·φ b-broth: Ingredient per liter water     Tryptone 20 g     Yeast extract 5 g     MgSO4·7H2O 5 g       用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。

6. 当加入X-Gal时，按照以下操作进行：

·将 20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200-300 μl/100 ml的比例加入到 agar培养基中。

7. DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。

8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-05-22 14:26:31

E.coli DH5α Electro-Cells酶试剂盒Takara

发表于2024年1月8日由whatman中国官网

E.coli DH5α Electro-Cells
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	9027	E.coli DH5α Electro-Cells	50 μl × 10	￥433

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■ 制品内容 E.coli DH5α Electro-Cells 50 μl × 10 pUC19 plasmid ( 10 pg/μl) 10 μl SOC Medium* 1 ml × 10

*SOC Medium:      2%   Tryptone  0.5%   Yeast extract  10 mM   NaCl  2.5 mM   KCl   10 mM   MgSO4 10 mM   MgCl2  20 mM   Glucose

■ 制品说明

E. coli DH5α Electro-Cells是Takara Bio特别制备的适用于电穿孔法的制品。用高电压脉冲电流瞬间击穿细胞的细胞质膜，从而使外源DNA转入宿主细胞的转化方法称为电穿孔法。通过此种方法制备的感受态细胞转化效率高、产量大，尤其适合在短时间内将少量样品转入大肠杆菌内。 E.coli DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性) ，应用蓝白斑方法可以很容易鉴别重组体菌株。由于菌株无lacl q，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。 X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

>1×1010 bacteria/ml

■ Genotype

E. coli DH5α：F-, φ80dlacZ Δ M15, Δ ( lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK-, mK+), phoA , supE44 , λ-, thi -1 , gyrA96 , relA1

■ 保存

-80℃。 注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

1. 转化效率 转入10 pg 的pUC19，涂于含有A+ 的选择培养基进行筛选。 转化效率 : >1 x 109 transformants /μg pUC19 2. β-半乳糖苷酶的α-互补性 转化pUC19 DNA时，含有100 μg/ml ampicilin 和 60 μg/ml X-Gal的L-琼脂平板上出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将Electro-Cells从-80℃取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 当使用50 μl Electro-Cells时，添加不多于10 ng的高纯度样品DNA。否则会降低转化效率。

3. 导入分子量较大的DNA (＞7 kb) 时，转化效率降低。

4. 当改变实验规模时，适当改变反应条件。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth:      Ingredient   per liter water  Tryptone   10 g  Yeast extract   5 g  NaCl   5 g

用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。

·φb-broth:      Ingredient   per liter water  Tryptone   20 g  Yeast extract   5 g  MgSO4·7H2O   5 g

用1 N KOH调整pH7.5左右并高压灭菌。

6. 稀释时，使用“使用方法4”中加入的SOC培养基。

7. 当使用X-Gal时：

·将20 mg/ml X-Gal (溶解于二甲基甲酰胺) 按200～300 μl/100 ml的比例加入到agar medium中。

8. DH5α可作为M13mp载体的复制。但由于不携带F因子，因而不能形成菌斑。

9. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

页面更新：2020-04-30 14:30:57