日本同仁化学死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556

死细胞标记试剂– Deep Red

Dead Cell Makeup Deep Red – Higher Retention than PI

商品信息

储存条件：-20°C，避光

运输条件：常温运输

特点：

● 流式细胞仪检测

● 可固定细胞

● 荧光不会泄露

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选择规格：

100tests

现货

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

产品概述

技术信息

DMSO 储存溶液的保质期

与现有 PI 方法的比较

实验案例：诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

常见问题Q&A

产品概述

该试剂可与细胞表面和细胞内的蛋白质共价结合，对膜受损的死亡细胞进行强染色。此外，染色剂在固定和渗透细胞后不会渗漏。染色后，活细胞和死细胞的荧光强度差异显著，通过流式细胞仪分析，死细胞很容易区分和排除。

技术信息

区分和排除死细胞对使用流式细胞仪 (FCM) 获得准确数据至关重要，近年来，这一过程已成为发表论文时越来越常见的要求。碘化丙啶（PI）可用于区分死细胞，但细胞膜的固定或渗透会导致 PI 从细胞中渗出，从而难以获得准确的数据。这种试剂具有与细胞表面和细胞内部蛋白质共价结合的特性，因此即使细胞被固定或渗透后，染料也不会渗出。此外，染色后活细胞和死细胞的荧光强度差异很大，因此 FCM 可以轻松区分死细胞并将其排除在分析之外。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

DMSO 储存溶液的保质期

本产品的 DMSO 储备溶液可冷冻保存六个月。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

与现有 PI 方法的比较

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

实验案例：诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

MOLT-4 细胞在含有 Ionomycin（500 ng/ml）和 PMA（Phorbol 12-myristate 13-acetate，50 ng/ml）的 RPMI 培养基中刺激 48 小时。死细胞用本品染色，PD-1 表达用免疫染色法检测（一抗：抗 PD-1 小鼠抗体，二抗：抗小鼠抗体-Alexa488）。结果表明，死细胞和活细胞可以清楚地区分开来，而且在只选取活细胞的情况下，受刺激细胞组的 PD-1 表达升高。

实验步骤

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

试验结果

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

常见问题Q&A

Q1：能否测量贴壁细胞？

A1：可对贴壁细胞进行检测。用胰蛋白酶消化细胞或用刮板收集细胞，以制备细胞悬液。

Q2：胰蛋白酶会干扰测量吗？

A2：通过以下实验证实胰蛋白酶对 HeLa 细胞的影响。我们将胰蛋白酶处理与使用刮板进行了比较，确认两种情况下的分析结果没有区别。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

Q3：是否可以用显微镜进行观察？

A3：我们已经证实，可以对染色后的 HeLa 细胞进行成像。用这种染料染色的 HeLa 细胞在固定和膜渗透后的成像结果如下。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

Q4：染色是否会产生细胞毒性？

A4：使用CCK-8 来评估染色对 HeLa 细胞的细胞毒性，结果显示几乎没有细胞毒性。

Q5：染色后能否保存固定的细胞？

A5：不建议保存。由于荧光强度在固定后会随着时间的推移而降低，因此染色后的样本应在当天进行检测。

Q6：DMSO stock solution的稳定性如何？

A6：该产品在 -20°C 下冷冻保存 6 个月是稳定的。本品受潮后会降解；如果考虑长期储存超过 6 个月，请使用未开封且含水量低的DMSO。

此外，如有必要，可将产品分成小份储存

Q7：如何对细胞进行栅极化？

A7：以下是使用 Becton Dickinson (BD) 流式细胞仪的方法。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

日本同仁化学Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06

脂滴荧光检测（深红色）

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

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宣传资料

选择规格：

1set

现货

点击查看更多脂滴荧光选择

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

产品解说

活动进行中

试剂盒内含

概述

原理

特点

实验例

脂肪滴产品选择指南

参考文献

产品解说

活动进行中

订购满5000元，200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.3. Iron Assay Kit -Colorimetric- 组织总铁含量及二价铁含量检测

NO.4. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）

NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

概述

同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢¹⁾，自噬²⁾和细胞衰老³⁾等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

实验例

实验例1：孔板检测实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

参考文献

1. Fujimoto,T.et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits”Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2. Singh,R.et al., “Autophagy regulates lipid metabolism”Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3. Yokoyama, M.et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity”Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

4. Oka, M.et al., “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

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ADP/ATP比率检测试剂盒

日本同仁化学Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）- DOJINDO

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Lipi-Deep Red试剂货号：LD04

脂滴检测（深红色）

Lipi-Deep Red

商品信息

储存条件：冷暗处保存

运输条件：室温

特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可进行组织脂滴成像

● 多种颜色可供选择

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宣传资料

选择规格：

10nmol

期货

点击查看更多脂滴荧光选择

产品解说

概述

原理

脂滴的染色例

与竞争品比较

产品特点

实验例

Lipi系列荧光图谱

脂肪滴产品种类的检测方法

常见问题Q&A

产品解说

概述

Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针，其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。

原理

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

脂滴的染色例

在活细胞状态下，用油酸诱导HeLa细胞后，用不同颜色的Lipi系列荧光探针检测

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

检测条件：

* Lipi-Blue ： Ex： 405 nm, Em： 450–500 nm

* Lipi-Green： Ex： 488 nm, Em：500–550 nm

* Lipi-Red： Ex： 561 nm, Em： 565–650 nm

* Lipi-Deep Red： Ex： 640 nm, Em： 650–700 nm

染色条件：

在HeLa细胞培养基中加入200 μmol/l油酸，过夜培养后，用PBS清洗细胞，并分别加入不同颜色的Lipi探针(Lipi-Blue/Green/Deep Red：0.1 μmol/l、Lipi-Red：1 μmol/l) 染色15 min后观察。

如何制备油酸溶液

请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。

与竞争品比较

Lipi系列荧光探针大幅度地改善了现有脂滴染色试剂存在的问题 (如选择性，滤波器的适应性，荧光滞留性)。而且 Lipi系列荧光探针也适用于多重染色实验，可选颜色更多。

同仁化学试剂

其他品牌（T公司）

Lipi-Blue

Lipi-Green

Lipi-Red

Lipi-Deep Red

Oil Red O

(比色)

Nile Red

试剂B

活细胞染色

〇

固定细胞染色

〇

对脂肪滴的选择性
(低背景)

〇

△

与其他试剂的共染色*1

〇

〇^*2

〇

n.d.

×^*3

〇

活细胞内的滞留性(24h)

〇

n.d.

*1. 与绿色荧光共染时，推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。

*2. 关于共染时推荐的荧光滤光片，您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。

*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。

产品特点

特点1：高特异性定位脂滴

在HeLa活细胞中加入油酸，并用100 nmol/l Lipi-Deep Red 和100 nmol/l Nile Red（T公司）染色。结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

<检测条件>

Lipi-Deep Red： Ex： 640 nm / Em： 650 – 700 nm

Nile Red： Ex： 561 nm / Em： 565 – 650 nm

特点2：荧光在细胞中的滞留时间长

分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞，观察在培养30 min和24 h时的荧光图像。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

实验证实Lipi-Blue和Lipi-Green在培养24 h后虽然荧光强度有所降低，但仍有荧光。而Lipi-Red，Lipi-Deep Red，Nile Red和市售试剂B在培养24 h后几乎无荧光，不适合长时间的实时成像观察。

实验例

实验例1：脂肪细胞的脂滴成像

用Lipi系列染色3T3-L1前脂肪细胞，可以清楚地检测出脂肪细胞中的脂质。

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

<脂肪细胞染色实验例>

(1)将3T3-L1细胞(1.5×10⁴cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板（ibidi）的各孔中，并在37℃ 5% CO₂培养箱内培养。

(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。

(3) 去除上清液，用DMEM（25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红）洗涤两次。

(4)加入用DMEM（25 mmol/l葡萄糖，10％FBS，无酚红）制备的每种染料的工作溶液，并在37℃下培养24 h。

(5)用荧光显微镜观察。

※试剂浓度：各2.5 µmol/l

实验例2：脂肪组织的脂滴成像

用4%PFA固定小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)后用Lipi系列染色，比较幼鼠(6周龄)和老年小鼠(31周龄)的脂滴成像图像，发现肝脏脂肪组织中的脂滴量有很大差异。 Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

<组织样品的染色实验例>

(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS)，在室温下静置5 min。

(2)用PBS清洗后，加入各浓度的Lipi系列working solution（PBS），在4℃下静置24 h。

(3)用PBS清洗后，用落射型荧光显微镜进行荧光观察。

※工作液浓度：2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)

Lipi系列荧光图谱

Lipi-Deep Red试剂货号：LD04 脂滴检测（深红色）

脂肪滴产品种类的检测方法

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

常见问题Q&A

Q1：油酸溶液的制备和加入细胞的方法

A1：我们按照以下步骤制备和使用油酸溶液。
<油酸储存溶液>
必要的试剂
·BSA(牛血清白蛋白)
·油酸
·0.1 mol/l Tris-HCl(pH8.0)
制备步骤
1)在0.1 mol/l Tris-HCl（pH8.0）中加入BSA并溶解（BSA：浓度0.14 g/ml）。
2)在容器(一次性的离心管)中加入油酸后，加入步骤^1）得到的BSA溶液，使用涡旋振荡器进行混合(油酸浓度：4 mmol/l)。*1
3)用孔径为0.22 µm的注射式过滤器(PTFE)过滤步骤²⁾的混合溶液。
4)每次使用后冷藏保存。*2
* 1 油酸和BSA溶液混合可能导致液体混浊，继续摇动让油酸和BSA形成复合物使混浊会消失。
* 2 将所需量的油酸储备溶液加入到实验使用的培养基中，用于将油酸加入到细胞中。
<加入细胞的方法>
1)将细胞在37℃ 5%CO₂培养箱内培养24 h。
2)用加入了油酸储备溶液的培养基(油酸的终浓度200 µmol/L)替换，再培养24 h。
3)然后按照说明书对脂滴进行荧光染色观察。

Q2：共染时推荐的荧光滤光片。

Q3：检测不到荧光信号的应对方法是什么？

Q4如果没有检测到荧光信号，可能会有几个因素。
请确认以下内容，并根据情况考虑优化条件。
1.激发·发射波长与染料的荧光特性不一致。
确认说明书上的荧光图谱和您仪器的激发和发射波长是否匹配。
2.染色条件不是最合适的。
[试剂浓度]
确认工作液的浓度是否在以下范围内。
Lipi-Blue，Lipi-Green：0.1-0.5μmol/l
Lipi-Red：1-5μmol/l
*如果在上述条件下仍未检测到荧光信号，请提高染色浓度。
Lipi-Blue，Lipi-Green：1-2μmol/l
Lipi-Red：10-20μmol/l
[染色时间]
-一般是30min，如没有荧光信号可以延长染色时间至1-2 h。
3.固定条件不适合。
根据细胞种类不同，染色前后的固定操作可能会导致无法染色或灵敏度减弱。
在这种情况下，“请参考Q&A：是否可以对固定细胞进行染色？。
4.脂滴小，难以确认。
根据细胞的不同，可能会有脂滴很小难以确认的情况。
这种情况下，我们建议在高倍率的显微镜下确认，或用油酸处理细胞作为阳性对照进行评估。

Q4：是否可以对固定细胞进行染色?

A4：可以染色，固定细胞的染色步骤有以下注意事项：
※请用多聚甲醛 (PFA) 固定细胞，不建议用甲醇等醇类固定细胞，因为可能会影响脂滴的结构。
※部分细胞种类染色后，如果在固定细胞过程中出现无染色或染色强度不够的情况，需要摸索最佳固定条件。
○细胞染色后固定实验例 (以HepG2细胞为例)
1. 将HepG2细胞接种在µ-Slide 8孔板上，并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基，用PBS清洗2次。
3. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液，在37℃培养箱中培养15 min。
4. 去除上清液，用PBS清洗2次。
5. 加入4% PFA (在PBS中)，在室温固定5 min。
6. 去除上清液，用PBS清洗后，在荧光显微镜下观察。
○细胞染色前固定实验例 (以HeLa细胞为例)
1. 将HeLa细胞接种在µ-Slide 8孔板上，并在37℃ 5% CO2培养箱中过夜培养。
2. 去除培养基，用PBS清洗2次。
3. 加入4% PFA (在PBS中)，在室温固定5 min。
4. 去除上清液，用PBS清洗2次。
5. 在细胞中加入用PBS配制的Lipi工作液，在37℃培养箱中培养30 min。
6. 去除上清液，用PBS清洗后，在荧光显微镜下观察。

关联产品

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒

Lactate Assay Kit-WST试剂盒

乳酸检测试剂盒

Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒

氧消耗量检测试剂盒

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green

葡萄糖摄取检测试剂盒

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

ADP/ATP比率检测试剂盒

日本同仁化学mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

线粒体超氧化物检测用荧光染料

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

商品信息

储存条件：0-5℃，避光

运输条件：室温

特点：

● 对超氧化物的选择性高

● 独特的荧光特性(λex: 540 nm; λem: 670 nm)

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产品文献

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选择规格：

100nmol*1

100nmol*3

现货

线粒体检测方案

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

产品概述

与其他试剂的比较

实验例

常见问题Q&A

产品文献

产品概述

线粒体在生成ATP的同时会生成超氧化物。正常情况下，细胞的抗氧化酶等物质会保护细胞免受活性氧的伤害。但是，当线粒体功能异常时，活性氧过量积累会造成细胞的各种机能紊乱。因此在评价细胞氧化应激水平时，往往需要同时检测线粒体的膜电位和线粒体的活性氧。

与其他试剂的比较

对各种活性氧的反应选择性

mtSOXDeep Red相较于T公司的产品Red，在各种活性氧中，对超氧化物的选择性更高。

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

另外，与其他公司产品所不同的是，mtSOX Deep Red拥有独特的荧光特性(λex: 540 nm; λem: 670 nm)，可以同时进行线粒体膜电位检测试剂(JC-1 货号MT09; MT-1 货号MT13)的共染色实验。

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

实验例

线粒体超氧化物和线粒体膜电位的同时检测

用HBSS清洗HeLa细胞后，使用mtSOX和同仁化学研究所的线粒体膜电位检测试剂(JC-1 货号MT09或MT-1 货号MT13)进行共染色实验，同时观察线粒体ROS和线粒体膜电位。

结果显示，伴随着线粒体ROS的产生，线粒体膜电位也逐渐降低。

<使用JC-1的实验操作>

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

<检测条件>

JC-1:绿Ex=488 nm; Em= 490-520 nm; 红Ex=561 nm; Em= 560-600 nm

mtSOX:Ex=633 nm; Em= 640-700 nm

Scale bar: 10 μm

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

<检测条件>

JC-1:绿Ex=485 nm; Em= 535 nm; 红Ex=535 nm; Em= 595 nm

mtSOX:Ex=550 nm; Em= 675 nm

<使用MT-1的实验操作>

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

<检测条件>

MT-1: Ex=561 nm; Em= 560-600 nm

mtSOX:Ex=633 nm; Em= 640-700 nm

Scale bar: 10 μm

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

<检测条件>

MT-1: Ex=545 nm; Em= 600 nm;

mtSOX:Ex=550 nm; Em= 675 nm

细胞内Total ROS和线粒体超氧化物的同时检测

用HBSS清洗HeLa细胞后，使用mtSOX和同仁化学研究所的细胞内ROS检测试剂(ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- 货号：R252)进行共染色实验，通过线粒体超氧化物诱导剂Antimycin或过氧化氢诱导后进行荧光观察。

结果显示，可以分别观察到细胞内ROS诱导后的荧光增强和线粒体的ROS诱导后的荧光增强。

<实验操作>

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

<Antimycin刺激的结果>

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

<检测条件>

细胞内ROS: Ex=488 nm; Em= 490-520 nm

mtSOX:Ex=633 nm; Em= 640-700 nm

Scale bar: 10 μm

衰老细胞线粒体超氧化物检测

提示：脂褐素内源性荧光最小化

脂褐素对细胞衰老研究的影响

众所周知，衰老细胞会积累被称为脂褐素的氧化损伤蛋白质，这些蛋白质不会被溶酶体降解。线粒体作为溶酶体中的不溶性物质，导致荧光观察过程中背景增加。在细胞衰老研究中，有必要尽量减少脂褐素或其他物质对内源性荧光的影响。

使用升级后的荧光探针

我们分别使用T公司的产品和Dojindo公司的mtSOX Deep Red-线粒体超氧化物检测用荧光染料，检测在增殖期（第2代）和衰老（第14代）TIG-1细胞（人胎肺来源的成纤维细胞）中观察到线粒体超氧化物。

结果显示：在T公司的产品（染色浓度：5 μmol/l）的情况下，除了在增殖细胞和衰老细胞中观察到线粒体荧光外，还观察到很强的荧光背景。从未染色细胞的图像中发现该背景荧光是内源性荧光。另一方面，当使用mtSOX Deep Red（染色浓度：1μmol/l）时，可以观察到线粒体超氧化物产生的荧光，而荧光背景的影响很小。在观察线粒体超氧化物时，重要的是比较灵敏度、波长和通道，然后用合适的荧光探针进行观察，以最大限度地减少内源性荧光的产生。

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

※mtSOX的最佳浓度因细胞而异。关于不同染色浓度下内源性荧光的不同影响的讨论，请参阅”常见问题Q＆A”：解答当我观察衰老细胞时，发现线粒体外的荧光，应该如何处理？。

＜实验数据＞

本实验数据，由东京都老年病学研究所Fujita Yasunori教授友情提供。

＜参考文献＞

Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito and I. Ohsawa, “Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts”, Exp. Gerontol., 2022, 165, 111866.

常见问题Q&A

Q1：mtSOX Deep Red的检测原理是什么？

A1：mtSOX Deep Red被Superoxide特异性氧化后会发出荧光，同时它还可在线粒体处积累，因此可以检测线粒体Superoxide。伴随着Superoxide的增加，线粒体的膜电位消失的话，核小体和细胞质会被染料染色。

Q2：每个试剂盒可以检测多少个样品？

A2：可检测的样品数如下。・ 96-well plate: 1块。

・ ibidi 8-well plate: 6块。

・ 35 mm dish: 5块。

Q3：是否可以用培养基以外的溶液配制Working solution？

A3：可以，可使用HBSS或PBS代替培养基。

Q4：各检测仪器适用的滤光片？

A4：荧光显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪均可检测。

・激光共聚焦显微镜

Ex/Em: 561/640-700 nm (无红色荧光染料共染时)

Ex/Em: 633/640-700 nm (与红色荧光染料共染时)

・荧光显微镜

TxRed Filter

・荧光酶标仪

Ex/Em: 535–565/660–690 nm

Q5：是否可以刺激后再染色？

A5：在线粒体膜电位正常的前提下是有可能的。本染料依赖线粒体膜电位在线粒体处积累，因此如果药物刺激造成线粒体膜电位降低的话，染料将无法在线粒体处积累，影响检测结果。因此推荐先染色再进行药物刺激。

Q6：当我观察衰老细胞时，发现线粒体外的荧光，应该如何处理？

A6：请检查以下两个实验参数

（1）检测条件

制备染色和未染色的细胞，并在内源性荧光最小化的条件下进行观察。

（2）染料浓度

mtSOX的最佳浓度取决于细胞等多因素；可考虑在1-10μmol/l的浓度范围下摸索。

（参考案例）

TIG-1细胞（人胎肺来源的成纤维细胞，传14代）用1、10μmol/l浓度的mtSOX染色并观察。观察到1μmol/l的细胞具有较少的内源性荧光。

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection货号：MT14

＜实验数据＞

本实验数据，由东京都老年病学研究所Fujita Yasunori教授友情提供。

产品文献

1、D. Sun, S. Cui, H. Ma, P. Zhu, N. Li, X. Zhang, L. Zhang, L. Xuan, J. Li , “Salvianolate ameliorates renal tubular injury through the Keap1/Nrf2/ARE pathway in mouse kidney ischemia-reperfusion injury”, 2022, J. Ethnopharmacol., doi:10.1016/j.jep.2022.115331.

2、Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, “Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts”, 2022, Exp. Gerontol., doi:10.1016/j.exger.2022.111866.

3、R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, “Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER”, 2022, iScience, doi:10.1016/j.isci.2022.104603.

4、A. Patel, M. Simkulet, S. Maity, M. Venkatesan, A. Matzavinos, M. Madesh & B. R. Alevriadou, “The mitochondrial Ca2+ uniporter channel synergizes with fluid shear stress to induce mitochondrial Ca2+ oscillations”, 2022, Sci. Rep., doi:10.1038/s41598-022-25583-7.

5、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”，2023, Advanced Science, doi：10.1002/advs.202302136

6、Jiawei Zhou , Lingchao Meng , Ziqi He , Qianlin Song , Junwei Liu , Xiaozhe Su , Chuan Wang , Hu Ke , Caitao Dong , Wenbiao Liao , Sixing Yang ，”Melatonin exerts a protective effect in ameliorating nephrolithiasis via targeting AMPK/PINK1-Parkin mediated mitophagy and inhibiting ferroptosis in vivo and in vitro”，2023, International Immunopharmacology,doi: 10.1016/j.intimp.2023.110801

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线粒体长效荧光探针-深红色

MitoBright LT Red试剂

线粒体长效荧光探针-红色

日本同仁化学MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

线粒体长效荧光探针-深红色

MitoBright LT Deep Red

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 荧光持续时间长

● 可在含血清培养基中染色

● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测

下载说明书

产品文献

线粒体宣传资料

SDS下载

选择规格：

400 μl

现货

荧光长时间存在

可使用含血清培养基

荧光/流式检测

更多线粒体检测方案（点击查看）

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

活动进行中

产品概述

产品特点

实验例

产品论文

荧光特性

常见问题Q&A

规格性状

产品文献

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NO.1. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

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NO.3. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.4. Cellstain- Hoechst 33342 solution 细胞核染色

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

产品概述

细胞内有各种各样的细胞器，承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成ATP 的场所，它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关，因此它是细胞内最重要的细胞器之一。

在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时，通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况，因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。现在市面上销售的小分子荧光探针中，多为含有氯甲基的探针，该探针存在观察时间短，染色时不能使用含血清的培养基，染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT 荧光探针克服了这些问题，可在线粒体内稳定存在一天以上，条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比，染色后的荧光强度更高。本品直接采用DMSO 溶液包装，可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有Green, Red, Deep Red 等多种选择，可满足多重染色等各种各样的实验要求。

产品特点

1.可长时间在细胞内存在

用HBSS 清洗 HeLa 细胞后，分别用 MitoBright LT 和其他公司的试剂进行染色，更换含血清的培养基，培养 4 天后观察线粒体染色情况。其他公司的染色试剂在 4 天后荧光强度大幅降低，而 MitoBrightLT 依然维持着高荧光强度，并且在染色 7 日后依然可以观察到荧光。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

＜检测条件＞

MitoBright LT Green 、（T 公司）Green：Ex：488 nm/Em:500–560 nm

MitoBright LT Red 、（T 公司）Red：Ex 561：nm/Em:560–620 nm

MitoBright LT Deep Red 、（T 公司）Deep Red：Ex：640 nm/Em:650–700 nm

2.可以使用含血清培养基

用MitoBright LT 和其他公司试剂，分别用含有血清和不含血清的培养基染色。其他公司试剂在含有血清的培养基染色时，荧光明显减弱，而 MitoBright LT 在含有血清的培养基条件下，荧光没有减弱，可明显观察到线粒体的染色情况。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

3.线粒体的分裂和融合

用100 nmol/l MitoBrightLT Red将HeLa细胞染色后，换入无血清培养基30分钟后观察线粒体形态。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

＜检测仪器＞

共聚焦显微镜，放大倍率：63倍

＜检测条件＞

Ex:561 nm/Em:560–620 nm

实验例

用流式细胞仪检测

1. 用RPMI 培养基(10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)配制Jurkat 细胞悬液(3.2×10⁵cell/mL)播种于5 cm 培养皿，37℃，5% CO2 培养箱内培养一晚。

2. 去除培养基，加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/L, 5 mL)， 37℃培养30 分钟。

3. 去除溶液，用 5mL 的PRPMI 培养基清洗细胞2 次。

4. 添加RPMI 培养基，持续培养细胞，每隔2 天用流式细胞仪检测。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像

胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。

现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。

<染色条件>

将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上，培养24小时，提取上清液并用HBSS洗涤。

加入100nmol / L的MitoBright LT Green工作溶液，培养30分钟后，提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。

<检测条件>

Ex488 nm，Em 500-560 nm

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

<结果>

现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色，而不受背景影响。

通过超分辨率激光显微镜（STED）观察线粒体内部构造

线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色，用超分辨激光显微镜(STED)观察，证实线粒体嵴结构异常。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

＜实验条件＞

色素：MitoBrightLT Deep Red（100nmol/l）

仪器：Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X

Ex. 640 nm / Em. 650-700 nm

STED激光：775nm

<实验步骤>

1将细胞接种在玻璃培养皿中，培养2天（37℃，5% CO₂）。

2去除培养基后，加入使用L-15培养基（含10%FBS）制备的MitoBrightLT Deep Red（100nmol/l）工作液。

3孵育45分钟（37度，5% CO₂）。

4去除上清液，用HBSS清洗两次。

5加入L-15培养基（含10%FBS），通过超分辨率激光显微镜（Leica TCS SP8 STED）进行观察。

以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。

产品论文

同仁化学研究所开发的线粒体长效染色荧光探针MitoBright LT系列在世界范围内广受科研人员的好评。在上市后的很短时间内，就出现了多篇使用MitoBright LT系列探针的论文，下面收集整理了部分的论文，其中红色字体标记的是使用本产品标记线粒体后，长时间(最长至5天)观察线粒体动态的报道，供感兴趣的科研人员参考。

产品名	检测样品	染色后的观察时间	检测仪器	发表期刊(含原文链接)	影响因子
MitoBright LT Green	细胞 (U251)	立即	荧光显微镜	Pharmaceuticals	4.286
MitoBright LT Green	酵母 (Lipomyces starkeyi)	立即	荧光显微镜	Genes to Cells	1.655
MitoBright LT Green	细胞 (HeLa)	立即	荧光酶标仪	Biomaterials	10.317
MitoBright LT Green	细胞 (Naive CD4+ T cells)	立即	荧光显微镜	Cell Reports	9.423
MitoBright LT Green	细胞 (CT26)	立即	流式细胞仪	Journal of Radiation Research	2.841
MitoBright LT Green	细胞 (C2C12)	5 天	荧光显微镜	Polymers	4.329
MitoBright LT Green	细胞 (BMM)	36 小时 or 3 天	荧光显微镜/ 流式细胞仪	JCI Insights	8.315
MitoBright LT Green	细胞 (mouse erythrocytes)	立即	荧光显微镜	Front. Cell. Infect. Microbiol.	5.293
MitoBright LT Red	细胞 (SH-SY5Y)	立即	荧光显微镜	Free Radical Biol. Med.	7.376
MitoBright LT Red	细胞 (MRC-5)	立即	荧光显微镜	The FEBS Journal	5.542
MitoBright LT Red	细胞 (A11 cells/ P29 cells)	3 天	荧光显微镜	BMC Mol. Cell Biol.	5.293
MitoBright LT Deep Red	细胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7; HCT-116 )	立即	荧光显微镜	Small	13.281
MitoBright LT Deep Red	细胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7 )	8 小时	荧光显微镜	Advanced Therapeutics	–
MitoBright LT Deep Red	细胞 (4T1)	24 小时	荧光显微镜	Advanced Functional Materials	18.808
MitoBright LT Deep Red	细胞 (SW982)	立即	荧光显微镜	Gene	3.368

荧光特性

MitoBright LT 染料的荧光特性

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

常见问题Q&A

Q1：MitoBright LT需要用DMSO溶液配制，反复冻结融化也不会影响试剂质量吗？

A1：我们已经确认可以使用冻融30次的溶液进行染色。

Q2：MitoBright LT和MitoBright的区别。

A2：MitoBright LT是MitoBright具有更强细胞内滞留性性能的产品。另外MitoBright LT是溶于DMSO的产品，可以立即使用，而无需准备染色溶液。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

Q3：用MitoBright LT系列染色后再去极化是否会影响染色效果？

A3：我们确认了去极化和细胞种类对于染色效果的影响，MitoBright LT的每种染料都有不同程度的影响。作为参考，本公司将HeLa细胞用不同的MitoBrightLT试剂进行染色，在以下条件下进行去极化处理，观察荧光染色的变化。

<染色条件>

HeLa细胞用MitoBright LT（100 μmol/l，孵育30分钟）染色，并用HBSS洗涤。

用FCCP（100 μmol/l，孵育60分钟）处理，用HBSS洗涤2次，然后观察荧光。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12线粒体长效荧光探针-深红色

<检测条件>

MitoBright LT Green :Ex 488 nm/Em 500–560 nm

MitoBright LT Red :Ex 561 nm/Em 560–620 nm

MitoBright LT Deep Red :Ex 640 nm/Em 650–700 nm

规格性状

性状：本品是黄色液体

吸光度：0.600～0.800(490 nm附近）

产品文献

1、L. Zhou, Q. Guan, W. Li, Z. Zhang, Y. Li and Y. Dong, “A Ferrocene-Functionalized Covalent Organic Framework for Enhancing Chemodynamic Therapy via Redox Dyshomeostasis”, 2021, doi:10.1002/smll.202101368.

2、Q. Guan, L. Zhou, Y. Dong, “Construction of Nanoscale Covalent Organic Frameworks via Photocatalysis-Involved Cascade Reactions for Tumor-Selective Treatment”, 2021, doi:10.1002/adtp.202100177.

3、X. Chen, X Yin, L. Zhan, J. Zhang, Y. Zhang, Y. Wu, J. Ju, Y. Li, Q. Xue, X. Wang, C. Li, R. R. L. Reis and Y. Wang, “Organelle-Specific Anchored Delivery System Stretching a Reversal of Tumor Hypoxia Microenvironment to a Combinational Chemo-Photothermal Therapy”, 2021, doi:10.1002/adfm.202108603.

4、S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, “In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling”, 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172.

5、Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, “Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts”, 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866.

6、Wenxuan Yang, Satoshi Abe, Yasuhiko Tabata ,”Association with cationized gelatin nanospheres enhances cell internalization of mitochondria efficiency”,2023,doi:10.1016/j.reth.2023.06.011.

关联产品

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

线粒体超氧化物检测用荧光染料

线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit

线粒体膜电位检测试剂盒

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线粒体长效荧光探针-绿色

MitoBright LT Red试剂

线粒体长效荧光探针-红色

日本同仁化学MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

线粒体长效荧光探针-深红色

MitoBright LT Deep Red

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 荧光持续时间长

● 可在含血清培养基中染色

● 荧光显微镜、流式细胞仪均可检测

下载说明书

产品文献

线粒体宣传资料

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选择规格：

400 μl

现货

荧光长时间存在

可使用含血清培养基

荧光/流式检测

更多线粒体检测方案（点击查看）

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产品概述

产品特点

实验例

产品论文

荧光特性

常见问题Q&A

规格性状

产品文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

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NO.4. Cellstain- Hoechst 33342 solution 细胞核染色

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

产品概述

产品特点

1.可长时间在细胞内存在

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

＜检测条件＞

MitoBright LT Green 、（T 公司）Green：Ex：488 nm/Em:500–560 nm

MitoBright LT Red 、（T 公司）Red：Ex 561：nm/Em:560–620 nm

MitoBright LT Deep Red 、（T 公司）Deep Red：Ex：640 nm/Em:650–700 nm

2.可以使用含血清培养基

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

3.线粒体的分裂和融合

用100 nmol/l MitoBrightLT Red将HeLa细胞染色后，换入无血清培养基30分钟后观察线粒体形态。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

＜检测仪器＞

共聚焦显微镜，放大倍率：63倍

＜检测条件＞

Ex:561 nm/Em:560–620 nm

实验例

用流式细胞仪检测

1. 用RPMI 培养基(10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)配制Jurkat 细胞悬液(3.2×10⁵cell/mL)播种于5 cm 培养皿，37℃，5% CO2 培养箱内培养一晚。

2. 去除培养基，加入MitoBright LT Working Solution (0.1 μmol/L, 5 mL)， 37℃培养30 分钟。

3. 去除溶液，用 5mL 的PRPMI 培养基清洗细胞2 次。

4. 添加RPMI 培养基，持续培养细胞，每隔2 天用流式细胞仪检测。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

在胶原蛋白涂覆玻璃板上观察线粒体荧光成像

胶原蛋白涂覆玻璃板通常用于线粒体形态的高倍放大观察。

现有的线粒体染色试剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以在不受背景影响的情况下清楚地对线粒体进行染色。

<染色条件>

将HeLa细胞接种在胶原蛋白涂覆玻璃板上，培养24小时，提取上清液并用HBSS洗涤。

加入100nmol / L的MitoBright LT Green工作溶液，培养30分钟后，提取上清液并用HBSS洗涤后用荧光显微镜观察。

<检测条件>

Ex488 nm，Em 500-560 nm

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

<结果>

现有的线粒体染色剂存在吸附胶原蛋白和升高背景的问题，但是MitoBright LT系列可以清晰地对线粒体染色，而不受背景影响。

通过超分辨率激光显微镜（STED）观察线粒体内部构造

线粒体疾病致突变的Cybrid细胞用MitoBright-LT-Deep Red染色，用超分辨激光显微镜(STED)观察，证实线粒体嵴结构异常。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

＜实验条件＞

色素：MitoBrightLT Deep Red（100nmol/l）

仪器：Leica超分辨率激光显微镜TCS SP8 STED 3X

Ex. 640 nm / Em. 650-700 nm

STED激光：775nm

<实验步骤>

1将细胞接种在玻璃培养皿中，培养2天（37℃，5% CO₂）。

2去除培养基后，加入使用L-15培养基（含10%FBS）制备的MitoBrightLT Deep Red（100nmol/l）工作液。

3孵育45分钟（37度，5% CO₂）。

4去除上清液，用HBSS清洗两次。

5加入L-15培养基（含10%FBS），通过超分辨率激光显微镜（Leica TCS SP8 STED）进行观察。

以上数据由东京都老年学研究所衰老控制研究小组的大澤郁朗博士和藤田泰典博士友情提供。

产品论文

产品名	检测样品	染色后的观察时间	检测仪器	发表期刊(含原文链接)	影响因子
MitoBright LT Green	细胞 (U251)	立即	荧光显微镜	Pharmaceuticals	4.286
MitoBright LT Green	酵母 (Lipomyces starkeyi)	立即	荧光显微镜	Genes to Cells	1.655
MitoBright LT Green	细胞 (HeLa)	立即	荧光酶标仪	Biomaterials	10.317
MitoBright LT Green	细胞 (Naive CD4+ T cells)	立即	荧光显微镜	Cell Reports	9.423
MitoBright LT Green	细胞 (CT26)	立即	流式细胞仪	Journal of Radiation Research	2.841
MitoBright LT Green	细胞 (C2C12)	5 天	荧光显微镜	Polymers	4.329
MitoBright LT Green	细胞 (BMM)	36 小时 or 3 天	荧光显微镜/ 流式细胞仪	JCI Insights	8.315
MitoBright LT Green	细胞 (mouse erythrocytes)	立即	荧光显微镜	Front. Cell. Infect. Microbiol.	5.293
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MitoBright LT Deep Red	细胞 (4T1)	24 小时	荧光显微镜	Advanced Functional Materials	18.808
MitoBright LT Deep Red	细胞 (SW982)	立即	荧光显微镜	Gene	3.368

荧光特性

MitoBright LT 染料的荧光特性

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

常见问题Q&A

Q1：MitoBright LT需要用DMSO溶液配制，反复冻结融化也不会影响试剂质量吗？

A1：我们已经确认可以使用冻融30次的溶液进行染色。

Q2：MitoBright LT和MitoBright的区别。

A2：MitoBright LT是MitoBright具有更强细胞内滞留性性能的产品。另外MitoBright LT是溶于DMSO的产品，可以立即使用，而无需准备染色溶液。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

Q3：用MitoBright LT系列染色后再去极化是否会影响染色效果？

<染色条件>

HeLa细胞用MitoBright LT（100 μmol/l，孵育30分钟）染色，并用HBSS洗涤。

用FCCP（100 μmol/l，孵育60分钟）处理，用HBSS洗涤2次，然后观察荧光。

MitoBright LT Deep Red试剂货号：MT12

<检测条件>

MitoBright LT Green :Ex 488 nm/Em 500–560 nm

MitoBright LT Red :Ex 561 nm/Em 560–620 nm

MitoBright LT Deep Red :Ex 640 nm/Em 650–700 nm

规格性状

性状：本品是黄色液体

吸光度：0.600～0.800(490 nm附近）

产品文献

4、S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, “In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling”, 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172.

6、Wenxuan Yang, Satoshi Abe, Yasuhiko Tabata ,”Association with cationized gelatin nanospheres enhances cell internalization of mitochondria efficiency”,2023,doi:10.1016/j.reth.2023.06.011.

关联产品

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

线粒体超氧化物检测用荧光染料

线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit

线粒体膜电位检测试剂盒

MitoBright LT Green试剂

线粒体长效荧光探针-绿色

MitoBright LT Red试剂

线粒体长效荧光探针-红色

死細胞標識試薬（Deep Red） Dead Cell Makeup Deep Red – Higher Retention than PI 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Dead Cell Makeup Deep Red – Higher Retention than PI

05 細胞染色用色素

Dead Cell Makeup Deep Red – Higher Retention than PI

細胞染色用色素
細胞機能解析
細胞毒性
蛍光色素
顕微鏡
FCM

死細胞標識試薬（Deep Red）

色素が死細胞から漏出しない
ストック溶液は冷凍保存で半年間保存可能
選べる二種類の色調

製品コード

C556　 Dead Cell Makeup Deep Red – Higher Retention than PI

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥39,000	343-10151

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取扱説明書日本語
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技術情報

PI の課題とは ? その解決方法

フローサイトメーター (FCM) を用いて正確なデータを得るためには、死細胞を区別し除外することが重要であり、近年この工程は論文投稿時にも要求されることが増えています。死細胞の区別には Propidium Iodide（PI）が使用されますが、固定化や膜透過処理により PI が細胞から漏れ出てしまい正確なデータが得られない課題があります。本試薬は細胞表面および細胞内のタンパク質と共有結合する性質を持つことから、細胞の固定化、膜透過処理後も色素は漏れ出しません。さらに、染色後の生細胞と死細胞の蛍光強度差は大きく、FCM で容易に死細胞を区別し解析から除外することができます。

よくある質問

Q 接着細胞でも測定できますか？: A

接着細胞でも測定可能です。細胞をトリプシン処理またはスクレーパーを用いて回収し、細胞懸濁液を調製してください。

Q トリプシンは測定に影響を及ぼしますか？: A

HeLa細胞を用いて、トリプシンの影響を確認した実績があります。トリプシン処理とスクレーパーを使用した場合の比較を行い、どちらの場合も解析結果に差がないことを確認しております。

Q 顕微鏡を用いて観察することは可能ですか？: A

イメージングできることを確認しております。本色素で染色した HeLa を固定化・膜透過処理を行い、イメージングした結果を下記に示します。

Q 染色による細胞毒性はありますか？: A

Cell Counting Kit-8を用いて、HeLa細胞における染色の細胞毒性を評価した結果、細胞毒性はほとんどありませんでした。
よって、染色後色素を洗浄し取り除くと、生細胞の培養が可能です。

Q 染色後に固定化した細胞を保存できますか？: A

お勧めしません。固定化後時間を置くと蛍光強度が下がるため、染色したサンプルはその日の内に測定を行ってください。

Q DMSO stock solutionは、どれくらい安定ですか？: A

-20℃の冷凍保存で6ヶ月間安定であることを確認しております。
本製品は水分によって劣化します。6ヶ月を超える長期保存をご検討される場合は、水分量の少ない未開封のDMSOを使用してください。
また、必要に応じて小分けし、保存してください。

Q 細胞のゲーティングの仕方を教えてください。: A

ベクトン・ディッキンソン(BD)社製のフローサイトメーターを使用した方法を記載します。

取扱条件

規格
含量：	試験適合
確認試験：	試験適合

取扱条件
1.保存方法：冷凍 2.吸湿注意

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ミトコンドリア染色用色素 Deep Red MitoBright LT Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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MitoBright LT Deep Red

05 細胞染色用色素

MitoBright LT Deep Red

細胞染色用色素
細胞機能解析
ミトコンドリア関連

ミトコンドリア染色用色素 Deep Red

長時間細胞に滞留する
血清培地中で染色できる
蛍光顕微鏡・フローサイトメーターに対応

製品コード

MT12　 MitoBright LT Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
400 μl	￥12,800	340-92081

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取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

MitoBright LT は、他とココが違う

長時間細胞に滞留する: 染色後4日間継続培養したミトコンドリア

血清培地中で染色できる: 染色後4日間継続培養したミトコンドリア

蛍光顕微鏡・フローサイトメーターに対応: 染色後4日間継続培養したミトコンドリア

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用(リンク)
1	細胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7; HCT-116 )	蛍光顕微鏡	L. Zhou, Q. Guan, W. Li, Z. Zhang, Y. Li and Y. Dong, "A Ferrocene-Functionalized Covalent Organic Framework for Enhancing Chemodynamic Therapy via Redox Dyshomeostasis", 2021, doi:10.1002/smll.202101368.
2	細胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7 )	蛍光顕微鏡	Q. Guan, L. Zhou, Y. Dong, "Construction of Nanoscale Covalent Organic Frameworks via Photocatalysis-Involved Cascade Reactions for Tumor-Selective Treatment", 2021, doi:10.1002/adtp.202100177.
3	細胞 (4T1)	蛍光顕微鏡	X. Chen, X Yin, L. Zhan, J. Zhang, Y. Zhang, Y. Wu, J. Ju, Y. Li, Q. Xue, X. Wang, C. Li, R. R. L. Reis and Y. Wang, "Organelle-Specific Anchored Delivery System Stretching a Reversal of Tumor Hypoxia Microenvironment to a Combinational Chemo-Photothermal Therapy", 2021, doi:10.1002/adfm.202108603.
4	細胞 (SW982)	蛍光顕微鏡	S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, "In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling", 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172.
5	細胞 (AIG-1)	蛍光顕微鏡	Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, "Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts", 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866.

よくある質問

Q MitoBright LT は DMSO溶液ですが、凍結融解を繰り返しても劣化しないのでしょうか？: A

小社では凍結融解を30回繰り返した溶液を用いて、染色が可能であったことを確認しております。

Q MitoBright LTとMitoBrightの違いを教えてください。: A

MitoBright LTはMitoBrightの細胞内滞留性を高めた製品です。また、MitoBright LTはDMSOに溶解した製品であり、染色溶液を調製する手間がなくすぐにお使い頂けます。その他の性能の違いは下記表をご参照ください。

Q MitoBright LTシリーズで染色した後に脱分極すると、染色度合いに影響はありますか？: A

脱分極条件や細胞種などにより影響は確認されます。また、MitoBright LTの各色素で影響の度合は異なります。
参考として小社ではHeLa細胞を各MitoBright LTで染色し、下記条件にて脱分極処理を行って蛍光染色の変化を観察しました。

＜染色条件＞
HeLa細胞をMitoBright LT (100 μmol/l、30分インキュベーション)にて染色しHBSSにて洗浄後
FCCP処理(100μmol/l 、60分インキュベーション)しHBSSにて2回洗浄後観察した。

＜検出条件＞
MitoBright LT Green :Ex 488 nm/Em 500–560 nm
MitoBright LT Red :Ex 561 nm/Em 560–620 nm
MitoBright LT Deep Red :Ex 640 nm/Em 650–700 nm

取扱条件

規格
性状：	本品は、青色液体である。
吸光度：	0.300～0.500(650 nm付近)

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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ミトコンドリアスーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

05 細胞染色用色素

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

細胞染色用色素
細胞機能解析
ミトコンドリア関連

ミトコンドリアスーパーオキサイド検出用蛍光色素

ミトコンドリアスーパーオキサイドを長波長励起(Deep Red)で検出可能
緑色や赤色の蛍光色素と共染色が可能
スーパーオキサイドとの選択性が高い

製品コード

MT14　 mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 nmol	￥21,400	348-09851

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取扱説明書日本語
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技術情報

既存試薬との比較

活性酸素種に対する反応選択性

mtSOX Deep Redと既存品(T社)の各活性酸素種(ROS)に対する反応性を比較しました。既存品と比べてmtSOX Deep Redはスーパーオキサイド選択性が高いことが確認されました。

また、mtSOX Deep Redは既存品よりも長波長の蛍光を発するため、これまで困難であったミトコンドリア膜電位染色色素(JC-1色素MT09, TMRE, MT-1色素MT13)との共染色が可能です。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（ラット腎近位尿細管細胞）	蛍光顕微鏡	D. Sun, S. Cui, H. Ma, P. Zhu, N. Li, X. Zhang, L. Zhang, L. Xuan, J. Li, "Salvianolate ameliorates renal tubular injury through the Keap1/Nrf2/ARE pathway in mouse kidney ischemia-reperfusion injury", 2022, J. Ethnopharmacol., doi:10.1016/j.jep.2022.115331.
2)	細胞 TIG-1 Cell (老化研究用) ヒト胎児肺由来線維芽細胞	蛍光顕微鏡	Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, "Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts", 2022, doi:10.1016/j.exger.2022.111866.
3)	細胞（MIN6-M9）	蛍光顕微鏡	R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, "Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER", 2022, iScience, doi:10.1016/j.isci.2022.104603.
4)	細胞（内皮細胞）	蛍光顕微鏡	A. Patel, M. Simkulet, S. Maity, M. Venkatesan, A. Matzavinos, M. Madesh & B. R. Alevriadou, "The mitochondrial Ca²⁺ uniporter channel synergizes with fluid shear stress to induce mitochondrial Ca²⁺ oscillations", 2022, Sci. Rep., doi:10.1038/s41598-022-25583-7.
5)	細胞（BV2）	蛍光顕微鏡	Y. Yan, R. Zheng, Y. Liu, Y. Ruan, Z. Lin, N. Xue, Y. Chen, B. Zhang, J. Pu , "Parkin regulates microglial NLRP3 and represses neurodegeneration in Parkinson's disease", Aging Cell, 2023, doi:10.1111/acel.13834.
6)	細胞（B細胞）	フローサイトメーター	Y. F. Yazicioglu, E. Marin, C. Sandhu, S. Galiani, I. G. A. Rza, Mohammad Ali, B. Kronsteiner, E. B. Compeer, M. Attar, S. J. Dunachie, M. L. Dustin, A. J. Clarke, "Dynamic mitochondrial transcription and translation in B cells control germinal center entry and lymphomagenesis", Nat. Immunol., 2023, doi:10.1038/s41590-023-01484-3.

よくある質問

Q 使用回数の目安を教えてください。: A

使用回数の目安は以下をご参考ください。
・96-well plate: 1枚
・ibidi 8-well plate: 6枚
・35 mm dish: 5枚

Q mtSOX Deep Redの検出原理を教えてください。: A

mtSOX Deep Redはスーパーオキシド選択的に酸化され発蛍光する色素です。
さらに、本色素は膜電位依存的に細胞内のミトコンドリアに局在するため、ミトコンドリアのスーパーオキシドを特異的に検出することができます。
スーパーオキシド誘導に伴いミトコンドリアの膜電位が消失する場合、反応後の色素は核小体や細胞質に分散します。

Q 培地以外でWorking solutionの調製は可能ですか？: A

可能です。培地以外でしたらHBSSやPBSをご使用いただけます。

Q 検出可能な検出器と適切なフィルターを教えてください。: A

共焦点レーザー顕微鏡、落射型蛍光顕微鏡、プレートリーダーで検出可能です。

・共焦点レーザー顕微鏡
Ex/Em: 561/640-700 nm (赤色色素と共染色しない場合)
Ex/Em: 633/640-700 nm (赤色色素と共染色する場合)

・落射型蛍光顕微鏡
TxRedフィルター
Ex/Em: 540-580/590-670 nm

・プレートリーダー
Ex/Em: 535–565/660–690 nm

Q 刺激後の染色は可能ですか？: A

ミトコンドリア膜電位が低下しない条件であれば可能です。
本色素は膜電位依存的にミトコンドリアに集積します。そのため刺激により膜電位が低下する場合は、刺激後の染色ではミトコンドリアに集積できず正確なスーパーオキシドの検出ができません。
上記特徴から、小社では刺激前染色を推奨しております。

Q 老化細胞を観察するとミトコンドリア以外の蛍光が観察されます。何を気を付ければいいですか？: A

以下の2点をご確認ください。

(1)観察条件
  染色した細胞と未染色の細胞を準備し、自家蛍光が出来るだけ少ない条件で観察してください。

(2)染色濃度
  細胞によってmtSOXの至適濃度が異なります。1～10 μmol/lの範囲を目安にご検討ください。

   (参考)
　TIG-1細胞（ヒト胎児肺由来線維芽細胞,　継代数14）を1, 10 μmol/l mtSOXにて染色し観察したところ、1 μmol/lの方がより自家蛍光の影響が少ない状態で観察できました。



　＜データ提供＞
　地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター　藤田泰典先生

取扱条件

規格
性状：	白色～淡紫色固体
確認試験：	試験適合
含量：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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脂肪滴染色蛍光色素 Lipi-Deep Red 同仁化学研究所

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Lipi-Deep Red

05 細胞染色用色素

Lipi-Deep Red

細胞染色用色素
細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴染色蛍光色素

製品コード

LD04　 Lipi-Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 nmol ^※	￥19,300	342-09631

※ 35 mm dish: 10 ～ 50 枚分

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

脂肪滴は、トリアシルグリセロールやコレステロールエステルなどの中性脂肪が単分層のリン脂質一重膜によって取り囲まれた構造体です。脂肪滴は脂肪細胞のみに存在するわけではなく、すべての細胞に普遍的に存在しています。最近の研究から、脂肪滴はその表面に種々のタンパク質が結合し、体内の脂質代謝制御において重要な役割を担っていることが明らかになってきています¹⁾。近年、脂肪滴とオートファジー²⁾、細胞老化³⁾ といった細胞内現象との関連性も示唆されており、脂肪滴の形成・成長・融合・分解のメカニズムをより詳細に解明するツールが待ち望まれています。

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

よくある質問

Q 共染色時の推奨フィルターを教えてください。

ご使用の色素と励起波長に応じて、下記表を参照のうえ共染色に適したフィルターを選択ください。

励起波長（共染色色素）	405 nm （Hoechst, DAPI etc.）	488 nm （FITC, GFP etc.）	561 nm （Cy3, Rhodamine, RFP etc.）	633 nm （Cy5, mCherry etc.）
Lipi-Blue	Lipi-Blueの蛍光観察	Lipi-Blueは488 nm, 561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Green	Lipi-Greenは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Greenの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Greenの蛍光観察	Lipi-Greenは561 nmおよび633 nmでは励起されません。そのため、何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。
Lipi-Red	Lipi-Redは405 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、400-500 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redは488 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、500-550 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Redの蛍光観察	Lipi-Redは633 nmで若干励起されます。 Lipi-Redの蛍光漏れ込みを抑えるため、650-700 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。
Lipi-Deep Red	Lipi-Deep Redは、405および488 nmでは励起されません。そのため何れの蛍光フィルターでもご使用いただけます。		Lipi-Deep Redは561 nmで若干励起されます。 Lipi-Deep Red由来の蛍光漏れ込みを抑えるため、560-610 nmの範囲内の蛍光フィルターをお勧めします。	Lipi-Deep Redの蛍光観察

Q 固定化細胞への染色は可能ですか？

固定化した細胞でも染色は可能です。固定化細胞の染色手順は、下記を参照ください。

※	固定化処理にはパラホルムアルデヒド(PFA)をご使用ください。メタノール等のアルコール固定は、脂肪滴の構造に影響を及ぼす可能性があるため、お勧めしません。
※	細胞によっては、染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。その際は、固定化条件を検討頂く必要があります。

染色後に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HepG2細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。

染色前に細胞を固定化した例　＜実績細胞 : HeLa細胞＞
①培地を除去し、PBSで二回洗浄した。
②4% PFA (in PBS)で5分間室温でインキュベートした。
③上清を除去し、PBSで二回洗浄した。
④プロトコル記載のWorking solution(in PBS)を細胞に入れ、37℃で30分インキュベートした。
⑤上清を除去し、PBSで洗浄後、観察。
　

Q 蛍光が確認できない場合の対処法は？

蛍光が検出されない場合、幾つか要因が考えられます。
下記に示した項目を確認し、状況によっては最適化条件をご検討ください。

①

励起・蛍光波長が色素の蛍光特性と合致していない。
製品HPに掲載の色素の蛍光スペクトルとお使いのフィルターを確認し、励起・蛍光波長が合致しているかご確認ください。

②	染色条件が最適ではない。
	[試薬濃度]
	–	working solutionの濃度を下記の範囲で検討する。　Lipi-Blue, Lipi-Green：0.1-0.5 μmol/l 　Lipi-Red：1-5 μmol/l 　Lipi-Deep Red：0.1 μmol/l
	※	上記条件でも蛍光が検出されない場合、更に高濃度で染色する。　Lipi-Blue, Lipi-Green：1-2 μmol/l 　Lipi-Red：10-20 μmol/l 　Lipi-Deep Red：0.5 μmol/l
	[インキュベーション時間]
	–	通常は30分ですが、試薬添加後に1-2時間インキュベートする。

③

固定化の条件が適していない。
細胞によっては染色前後の固定化操作により、染色されない又は感度が弱くなる場合があります。
その際は、「Q:固定化細胞への染色は可能ですか？」をご参照ください。

④

脂肪滴が小さくて確認が困難。
細胞によっては脂肪滴が小さく、確認が困難な場合があります。
その際は、高倍率の顕微鏡での確認、又はオレイン酸処理した細胞によるポジティブコントロールを評価されることをお勧めします。

取扱条件

規格
性状：	本品は、濃青色固体である。
純度(HPLC)：	90.0％以上

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リソソーム染色色素 Deep Red LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance

05 細胞染色用色素

LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance

細胞染色用色素
細胞機能解析
顕微鏡
FCM

リソソーム染色色素 Deep Red

リソソームへの特異性が高い
リソソームのpH変化の影響を受けにくい
リソソームを一晩染色できる

製品コード

L264　 LysoPrime Deep Red – High Specificity and pH Resistance

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 tube	￥15,000	342-10001
3 tubes	￥30,000	348-10003

＜使用回数の目安＞ 1 tube あたり、35 mm dish 10 枚、μ-Slide 8 well 10 枚、96-well Plate 2 枚

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

リソソームへの特異性が高い

既存色素とLysoPrime Deep Redのリソソーム局在性をリソソームマーカータンパク LAMP1-GFP発現HeLa細胞を用いて比較しました。既存色素による染色ではリソソーム以外にも分散してバックグラウンドが高くなったのに対し、LysoPrime Deep Redではバックグラウンドが抑えられる結果が得られました（蛍光画像 Merged）。LysoPrime Deep Redは既存色素と比較してリソソームへの局在性が高いことが判りました。

<検出条件>
Green: Ex= 488 nm, Em= 500-570 nm
Deep Red : Ex= 633 nm, Em= 640-700 nm

よくある質問

Q 血清含有培地で染色できますか？: A

染色できません。LysoPrime Deep Redは血清の影響を受けるため必ずHBSSや無血清培地等の血清を含まない溶液でworking solutionを調製してください。

Q リソソームpHに影響を与える薬剤刺激を考えています。LysoPrime Deep Redの染色は、薬剤添加の前と後どちらで行えばいいですか。: A

染色後に刺激を行ってください。LysoPrime Deep Redはリソソームに集積後にpHが変化してもリソソームに滞留し続けます。一方で、あらかじめ薬剤刺激等によりpHが中性付近に変化したリソソームにはLysoPrime Deep Redが集積できないため染色できません。そのため、染色能に影響が少ない染色後の薬剤刺激を行って下さい。

Q リソソーム量とリソソームpHの同時解析を考えています。pHLys Redとの共染色は可能ですか？: A

可能です。ただし、LysoPrime Deep Redの染色はpHLys Red染色前に行ってください。

Q 検出可能な検出器と適切なフィルターを教えてください。: A

共焦点レーザー顕微鏡、落射型蛍光顕微鏡、プレートリーダーで検出可能です。

・共焦点レーザー顕微鏡
Ex = 633 nm, Em = 640-700 nm

・落射型蛍光顕微鏡
Cy5フィルター
Ex = 590 – 650 nm, Em = 660 – 740 nm

・プレートリーダー
Ex = 645 – 655 nm, Em = 690 – 710 nm

・フローサイトメーター
Ex = 640 nm, Em = 650-670 nm

Q 染色条件を検討する場合、LysoPrime Deep Redはどれくらいの濃度で使用すればよいですか？: A

LysoPrime Deep Redの濃度は1,000倍希釈での使用を推奨しておりますが、染色条件を最適化される場合は以下をご参考ください。

　<非特異吸着がみられる場合>

　　2,000～5,000倍希釈の間でご検討ください。

取扱条件

規格
性状：	紫色固体
含量：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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リソソームpH検出キット (Green/Deep Red) Lysosomal Acidic pH Detection Kit-Green/Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Lysosomal Acidic pH Detection Kit-Green/Deep Red

05 細胞染色用色素

Lysosomal Acidic pH Detection Kit-Green/Deep Red

細胞染色用色素
細胞機能解析
蛍光色素

リソソームpH検出キット (Green/Deep Red)

リソソームpHと量の変化を同一サンプルで測定することで正確なpH変化を検出できる
リソソーム酸性化阻害剤同梱のオールインワンキット
蛍光顕微鏡・FCMで検出できる

製品コード

L268　 Lysosomal Acidic pH Detection Kit-Green/Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥38,000	345-10111

＜使用回数の目安＞ 1 kit あたり、35 mm dish 10 枚、μ-Slide 8 well 10 枚、96-well Plate 2 枚

キット内容

1 set	LysoPrime Deep Red pHLys Green Bafilomycin A1	x 1 x 1 x 1

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取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

「pH と量」 2 つの変化で見えること

既存試薬では、単一色素の蛍光輝度の変化で議論するため、リソソームの量が変動したのか、機能（pH）が変動したのかを判別することが困難でした。本キットは、リソソームへの特異性が高くpH に依存的な蛍光の変動を示すpHLys GreenとpH抵抗性のLysoPrime Deep Red[Code:L264]が含まれています。その2種類の色素を使用し、同一サンプルのリソソームpH と量を測定することでリソソーム機能の詳細な解析が可能になります。

よくある質問

Q リソソームpHに影響を与える薬剤刺激を考えています。注意点を教えてください。: A

LysoPrime Deep Redの染色は、必ず薬剤刺激前に行ってください。キット同梱のBafilomycin A1 (リソソーム酸性化阻害剤) を用いた刺激方法は、pHLys Green working solutionにBafilomycin A1を添加し染色と刺激を同時に行うか、pHLys Green working solutionで染色後にBafilomycin A1で刺激を行ってください。

Q 血清含有培地で染色できますか。: A

LysoPrime Deep Redは血清の影響を受けるため染色できません。必ずHBSSや無血清培地等の血清を含まない溶液でworking solutionを作成してください。pHLys Greenは染色可能です。培地以外でしたらHBSSやPBSをご使用いただけます。

Q 染色条件を検討する場合、LysoPrime Deep RedおよびpHLys Greenはどれくらいの濃度で使用すればよいですか？: A

染色条件を最適化される場合は以下をご参考ください。

・LysoPrime Deep Red
　<蛍光強度が弱い場合>
　　500～1,000倍希釈の間でご検討ください。

　<非特異吸着がみられる場合>
　　1,000～5,000倍希釈の間でご検討ください。

・pHLys Green
　<蛍光強度が弱い場合>
　　250～1,000倍希釈の間でご検討ください。

　<非特異吸着がみられる場合>
　　1,000～2,000倍希釈の間でご検討ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意

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エクソソーム膜蛍光染色キット Deep Red ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月16日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red

08 ラベル化剤

ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red

ラベル化剤

エクソソーム膜蛍光染色キット Deep Red

細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
本キットだけで蛍光標識から精製まで可能

製品コード

EX03　 ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 samples	￥26,800	347-09681

精製済エクソソームを染色することができます。

精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。

キット内容

5 samples	・Mem Dye-Deep Red ・Filtration tube	×1 ×5

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

より正確にエクソソームの動態を観察する

エクソソームの膜を染色するためによく用いられている膜染色色素（S 社製品P）には、色素自体が凝集を起こし、エクソソームに由来しない蛍光起点が生じたり、エクソソームの性質変化やバックグラウンドの上昇などを招く課題が挙げられています¹⁾, ²⁾。
ExoSparkler シリーズで用いている色素（Mem Dye-Green, Red, Deep Red）は凝集を起こさず、エクソソームの性質にもほとんど影響を及ぼさないため、より正確にエクソソームの動態を観察することが可能です。

参考文献
1)	Mehdi Dehghani et al., “Exosome labeling by lipophilic dye PKH26 results in significant increase in vesicle size”.bioRxiv., 2019, doi:10.1101/532028.
2)	Pužar Dominkuš P et al., “PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.” Biochim Biophys Acta Biomembr., 2018, doi: 10.1016/j.bbamem.2018.03.013.

技術や使用製品に関する補足

技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。

細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。

参考文献

参考文献を表示する

1) R.Kawata, S.Oda, Y. Koya, H.Kajiyama, T. Yokoi, "Macrophage-derived extracellular vesicles regulate concanavalin A-induced hepatitis by suppressing macrophage cytokine production", Toxicology, 2020, https://doi.org/10.1016/j.tox.2020.152544.

よくある質問

Q 推奨されるエクソソームの精製法はありますか？: A

超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。

なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。

1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。

2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。

Q 標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？: A

未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。

＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10µg)のバッファー溶液または ②バッファーのみを各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×10⁴ cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。

結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。

①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

②バッファーのみをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

■　検出条件

Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

Q 染色後のエクソソームは保存できますか。: A

染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。

Q エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。: A

小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。

なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。

Q 1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。: A

1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 10⁸ 個/sample

Q エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？: A

はい。エクソソームにタンパク質やポリマー*等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
*精製方法によっては、ポリマーが残存する場合があります。

精製方法については「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光

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エクソソームタンパク質蛍光染色キット Deep Red ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月16日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

08 ラベル化剤

ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

ラベル化剤

エクソソームタンパク質蛍光染色キット Deep Red

細胞外で凝集せず、より正確な動態を観察できる
本キットだけで蛍光標識から精製まで可能

製品コード

EX06　 ExoSparkler Exosome Protein Labeling Kit-Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 samples	￥21,400	344-09711

精製済エクソソームを染色することができます。

精製法をお探しの場合は、ExoIsolator Exosome Isolation Kitもご参考ください。

キット内容

5 samples	・Protein Dye-Deep Red ・Filtration tube	×1 ×5

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

このキットだけで蛍光標識から精製まで

ExoSparkler シリーズは、エクソソームの標識に最適化したプロトコルに加え、蛍光標識後の未反応色素を除去できるフィルトレーションチューブを同梱しているため、簡単な操作で蛍光標識エクソソームを調製できます。

精製手法(未反応色素の除去)の比較

ExoSparklarシリーズで未反応色素の除去に使用しているフィルトレーションチューブは、同用途で従来から用いられているゲルろ過法と比較して、高い回収率でエクソソームを精製することが可能です。

	回収率^※
フィルトレーションチューブ(本キット)	50% 程度
ゲルろ過法	10% 程度
※ 小社での実施例：精製前後のエクソソーム粒子数をNTA(ナノ粒子トラッキング解析)で比較

フィルトレーションチューブを用いた精製の有効性確認の蛍光画像をよくある質問：標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？に掲載しています。

技術や使用製品に関する補足

技術情報のデータは京都大学大学院工学研究科高分子化学専攻秋吉一成先生のご支援のもと取得いたしました。

細胞外小胞、エクソソームの特性と機能
小社季刊冊子「DojinNews vol.169」に執筆いただいた記事を掲載しています。

よくある質問

Q 推奨されるエクソソームの精製法はありますか？: A

超遠心法での精製を推奨しておりますが、免疫沈降法や磁気ビーズで精製したエクソソームの染色実績もございます。
また、超遠心法と同等の回収実績のある、ExoIsolator Exosome Isolation Kit(EX10)もご利用いただけます。

なお、ポリマー沈殿法で精製したエクソソームは下記の理由により、残存するポリマーの影響を受けるため、本キットでの染色はできません。

1)未反応色素の精製工程で使用するフィルトレーションチューブにポリマーがつまり、精製できなくなる可能性がございます。

2)ポリマーがエクソソームと相互作用し、エクソソームの膜電位が変わる可能性がございます。膜電位が変わると、細胞取り込みアッセイに標識エクソソームを使用する場合、細胞内動態が変化する恐れがございます。

Q 標識後の精製操作でフィルターは着色していますが、未反応の色素は分離できていますか？: A

未反応の色素はフィルターに保持されるために着色が見られますが、小社では以下の実験でフィルター上の回収物に未反応色素が含まれないことを確認しております。

＜実験条件＞
超遠心法で精製した ①エクソソーム(タンパク質量として10 µg)のバッファー溶液または ②バッファーのみを各キットのプロトコルに従って染色操作したのち、得られた回収物をHeLa細胞(1.25×10⁴ cells)に添加して、4時間後の蛍光画像を観察しました。

結果として、バッファーのみで得られた回収物は細胞へ添加しても蛍光輝点が観察されず、回収物に未反応の色素が残っていないことを確認しました。

①エクソソーム＋バッファーをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

②バッファーのみをキットで処理した場合

　　　　　　　　　　　　　細胞へ添加後(4h)の蛍光画像

■　検出条件
　Green：Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
　Red ：Ex 561 nm / Em 570 – 640 nm
　Deep Red：Ex 640 nm / Em 640 – 760 nm

Q 染色後のエクソソームは保存できますか。: A

染色後のエクソソームの保存は推奨しておりません。
エクソソームの染色後はできるだけ早く実験にご使用ください。

Q エクソソームの取込実験で使用実績のある培地を教えてください。: A

小社では染色後のエクソソームを用いた細胞への取り込み実験において、
MEM（Minimum Essential Medium）ならびにDMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）での実績がございます。

なお、ExoSparklerシリーズは血清含有培地中での取込実験に最適化しているため、
無血清培地中で使用することはお勧めできません。

Q エクソソーム以外に夾雑物が含まれる場合、夾雑物も染色されますか？: A

はい。エクソソーム以外のタンパク質等の夾雑物が含まれると、夾雑物も染色されてしまいます。
そのため、精製したエクソソームをご準備ください。
精製方法については、「推奨されるエクソソームの精製法はありますか？」をご参照ください。

Q 1sampleあたりの染色できるエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)を教えてください。: A

1sampleあたりのエクソソーム量(タンパク質量、粒子数)は以下の通りです。
精製済エクソソーム(超遠心法)として、タンパク質：1-10 μg/sample, 粒子数 10-100x 10⁸ 個/sample

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意

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エクソソーム膜蛍光染色キット Green

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エクソソーム膜蛍光染色キット Red