SARS-CoV-2假病毒包装系统酶试剂盒Takara

发表于2024年2月4日由whatman中国官网

SARS-CoV-2假病毒包装系统
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	632668	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)	12 Rxns	￥12,496
Clontech	632669	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)	12 Rxns	￥12,496
Clontech	631292	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)	12 Rxns	￥12,710
Clontech	632670	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)	12 Rxns	￥12,496
Clontech	632671	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)	12 Rxns	￥12,496
Clontech	631293	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)	12 Rxns	￥12,710
Clontech	631295	Lenti-X™ SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)	16 Rxns	￥13,404
Clontech	632672	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length)	12 Rxns	￥10,004
Clontech	632673	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length)	12 Rxns	￥10,004
Clontech	631290	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length)	12 Rxns	￥10,219
Clontech	632674	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated)	12 Rxns	￥10,004
Clontech	632675	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated)	12 Rxns	￥10,004
Clontech	631291	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated)	12 Rxns	￥10,219
Clontech	632676	Lenti-X^™ SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control)	6 Rxns	￥4,844

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开发COVID-19疗法的一个共同目标就是要证明对SARS-CoV-2病毒的感染具有抑制作用。基于安全措施考虑，目前研究人员大多使用带有SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein）的假病毒（Ni et al. 2020, Shang et al. 2020）替代SARS-CoV-2活病毒开展研究。我们对Lenti-X包装系统进行了优化，这样可以很方便地制备高滴度的spike-假慢病毒，为这些研究工作提供支持。

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots是一种假型慢病毒包装系统，用于简便制备具有SARS-CoV-2刺突蛋白作为包膜蛋白的假型慢病毒，有两种类型产品可供选择。

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)使您能够轻松灵活地制备任何所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白变体的高滴度假型慢病毒。只需将任意所需的SARS-CoV-2刺突蛋白变体序列克隆到所提供的表达载体中，用灭菌水稀释所选择的表达载体，然后将混合物添加到试剂盒中提供的单次反应管中。然后，将重组后的转染混合物添加至10 cm培养皿培养的包装细胞中。为方便使用，我们提供分别编码截短的SARS-CoV-2刺突蛋白变体D614G、B.1.1.7和B.1.351的三个质粒。使用提供的刺突蛋白变体序列作为模板和pEmpty载体，通过简便的一步In-Fusion Snap Assembly反应可以轻松构建所需要的SARS-CoV-2刺突蛋白变体。

其它Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots试剂盒包括：含有Xfect转染试剂和慢病毒包装质粒的冻干混合物，慢病毒包装质粒携带四种不同刺突蛋白变体中的其中一种；表达绿色荧光蛋白质ZsGreen1和荧光素酶报告基因的转移载体；制备缺少包膜蛋白慢病毒粒子的转染混合物（通常用作阴性对照）。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots试剂盒，通过简便的一步法即可获得高滴度SARS-CoV-2假病毒：只需将含有您选择的转移载体的水溶液添加至单管中，然后使用重组后的转染混合物转染培养在10厘米培养皿中的包装细胞Lenti-X 293T Cell Line（Code No. 632180）。转染后48–72小时收集病毒上清液。

有多种包装系统可供选择，可制备带有6种不同SARS-CoV-2刺突蛋白变体的病毒粒子：

· WT Spike, Full Length—野生型（全长），来源于新型冠状病毒SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1分离株 (NC_045512.2) , 我们对密码子进行了优化，可以在哺乳动物细胞中表达
· D614G Spike, Full length—D614G变异型（全长），刺突蛋白编码序列包含D614G突变; 自COVID-19爆发以来，这种变异型的流行性迅速上升 (Isabel et al. 2020)
· B.1.351 Spike，Full Length—B.1.351变异型（全长），最初在南非确定的变异株，WHO划分为β型。
· WT Spike, Truncated—野生型（Truncated）
· D614G Spike，Truncated—D614G变异型（Truncated）
· B.1.351 Spike，Truncated—B.1.351变异型（Truncated）
截短的野生型和D614G、B.1.351变异型刺突蛋白编码序列，去除了C-端19个氨基酸。这种截短处理，提高了所制备病毒粒子上刺突蛋白的丰度，提高了病毒粒子的感染性 (Johnson et al. 2020)。

为方便起见，Lenti-X SARS-CoV-2 packaging mixes也可以单独购买。
也可以提供需要配套使用的宿主细胞Human ACE2 293T Cell Line（Code No.631289）。

■ 概述

· 高性能包装系统有助于始终获得高病毒滴度：避免在试剂优化上花费时间，让您可以专注于下游分析
· 便捷的单管形式可大大减少动手时间和出错的可能性：操作简便，只需要将含有所选择转移质粒的水溶液，添加至包装细胞培养液中即可
· 包装混合物可以单独购买，也可以打包购买：节约资源，按需购买
· 提供中和试验对照：可使用试剂盒中的包装混合物，制备缺少包膜蛋白的慢病毒粒子，用作阴性对照
· 提供配套宿主细胞ACE2 cell line

■ 实验例

图1. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备假病毒操作流程。

图2. Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)操作流程。

图3. 使用SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性细胞。Panel A. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备表达WT (Wuhan-Hu-1) 或者D614G变体刺突蛋白，同时也表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的假慢病毒粒子。每种病毒制剂取100 μl，转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在含有6 μg/ml polybrene 的48孔板中。转导后6天通过流式细胞术测定每个样品的转导效率。Panel B. 使用表达萤火虫荧光素酶的假病毒分别转导ACE2-阳性和不表达ACE2的HEK293T细胞（用于提供荧光素酶活性分析背景信号）。转导后6天测定荧光素酶活性。

图4. 测定使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots获得的功能滴度。Panel A.使用SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性HEK293T细胞，通过分析ZsGreen1荧光标记的表达情况测定功能滴度。Panel B. 感染后72小时，ACE2-阳性细胞的显微图像。

图5. 可溶性ACE2蛋白对携带SARS-CoV-2刺突蛋白变体假病毒的中和活性。Panels A and B. 梯度稀释融合IgG Fc结构域的可溶性ACE2蛋白（ACE2-Fc），与SARS-CoV-2假病毒作用于ACE2 HEK293T细胞。感染后3天检测荧光素酶表达水平，作为病毒感染性读数。数据以相对于仅病毒对照感染的中和作用百分比表示。数值为平均值±标准差，每个实验重复三次。

图6. 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备D614G和B.1.351变异型SARS-CoV-2假病毒，测定其转导效率和感染滴度。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots（B.1.351或D614G，全长或截短）制备表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒。按照标准操作指导，使用Lenti-X Concentrator将病毒液浓缩50倍（B.1.351全长）或20倍（B.1.351截短和D614G），取不同体积病毒液转导HEK293T细胞，此细胞在48孔板中培养，含有6 μg/ml聚凝胺，能稳定表达人ACE2受体。在转导后6天通过流式细胞仪测定每个样品的转导效率（Panel A），并计算功能滴度（Panel B）。

图7. 使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制备的SARS-CoV-2假病毒转导ACE2-阳性细胞。使用Lenti-X Packaging Single Shots (Universal)制备表达截短的B.1.1.7 SARS-CoV-2刺突蛋白，同时也表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质(Panel A)或者萤火虫荧光素酶(Panel B)的假型慢病毒粒子。Panel A. 使用浓缩后的病毒上清液(20X; 30 or 10 μl)转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在48孔板中，polybrene含量为6 μg/ml。转导后6天通过流式细胞术测定每个样品的转导效率。Panel B. 使用浓缩后的病毒上清液(20X; 30, 20, or 10 μl)分别转导稳定表达人ACE2受体的HEK293T细胞，HEK293T细胞培养在48孔板中，polybrene含量为6 μg/ml。转导缺少ACE2转基因的HEK293T细胞，以测定背景发光水平（NC，阴性对照）。转导后6天测定每个样品的发光值。

图8. 表达萤火虫荧光素酶的B.1.351 SARS-CoV-2假病毒转导ACE2 HEK293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 spike, 全长或截短)制备表达萤火虫荧光素酶的假病毒。按照标准操作指导，使用Lenti-X Concentrator将病毒液浓缩20倍，取不同体积病毒液转导HEK293T细胞，此细胞在48孔板中培养，含有6 μg/ml聚凝胺，能稳定表达人ACE2受体。同时平行转导不表达ACE2受体的HEK293T细胞以确定背景发光水平，因为在缺乏ACE2受体的情况下，SARS-CoV-2假病毒无法感染HEK293T细胞。在转导3天后测定每个样品的发光值。

■ 制品内容

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Full Length)（Code No. 632668）

·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) （Code No. 632672）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix（No-Envelope Control) （Code No. 632676）
·Lenti-X Reporter Vector Set^＊1＊2

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Full Length)（Code No. 632669）

·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) （Code No. 632673）
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) （Code No. 632676）
·Lenti-X Reporter Vector Set^＊1＊2

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Full Length)（Code No. 631292）

·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set^＊1＊2

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (WT Spike, Truncated)（Code No. 632670）

·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) （Code No. 632674)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set^＊1＊2

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (D614G Spike, Truncated)（Code No. 632671）

·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) （Code No. 632675)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set^＊1＊2

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (B.1.351 Spike, Truncated)（Code No. 631293）

·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)
·Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) (Code No. 632676)
·Lenti-X Reporter Vector Set^＊1＊2

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots (Universal)（Code No. 631295）^＊³

·Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)^＊1
·pEmpty Vector＊1（500 ng/μl）		20 μl
·Lenti-X Reporter Vector Set^{＊1 *2}
·Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set^＊1
	pSpike D614G Truncated Vector（500 ng/μl）	20 μl
	pSpike B.1.1.7 Truncated Vector（500 ng/μl）	20 μl
	pSpike B.1.351 Truncated Vector（500 ng/μl）	20 μl

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Full Length) （Code No. 632672）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Full Length) （Code No. 632673）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Full Length) (Code No. 631290)
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (WT Spike, Truncated) （Code No. 632674）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (D614G Spike, Truncated) （Code No. 632675）
Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (B.1.351 Spike, Truncated) (Code No. 631291)

	各12管（冷冻干燥品）
	※1管用于1个10 cm培养皿病毒包装使用

Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix (No-Envelope Control) （Code No. 632676）

	6管（冷冻干燥品）
	※1管用于1个10 cm培养皿病毒包装使用

＊1 不单独销售。

＊2 Lenti-X Reporter Vector Set

	pEmpty Vector＊1（500 ng/μl）	20 μl
	pLVXS-Luciferase-Puro Vector（500 ng/μl）	20 μl
	不单独销售。请使用大肠杆菌扩增以获得充足数量的质粒。

＊3 我们还提供不包含Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的产品。在不需要Lenti-X SARS-CoV-2 Spike Vector Set的场合下，请选择Lenti-X Packaging Single Shots (Envelope-Free)（Code No. 631294）。

■ 保存

－20℃
（各Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Mix保存在装有干燥剂的箔袋内）

参考文献

1. Detection of SARS-CoV-2-Specific Humoral and Cellular Immunity in COVID-19 Convalescent Individuals. Ni, L. et al. Immunity. (2020) 52, 971–977.
2. Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2. Shang, J. et al. Proc Natl Acad Sci USA. (2020) 117, 11727–11734.
3. Evolutionary and structural analyses of SARS-CoV-2 D614G spike protein mutation now documented worldwide. Isabel, S. et al. Sci Rep. (2020) 10, 14031.
4. Optimized Pseudotyping Conditions for the SARS-COV-2 Spike Glycoprotein. Johnson, MC. et al. J Virol. (2020) 94, e01062-20.

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页面更新：2022-07-13 16:27:16

SARS-CoV-2假病毒宿主细胞酶试剂盒Takara

发表于2024年2月4日由whatman中国官网

SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	631289	Human ACE2 293T Cell Line	1 ml	￥27,106

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SARS-CoV-2进入宿主细胞是由刺突蛋白与ACE2受体之间的相互作用所介导的。为了助力病毒与受体相互作用研究和COVID-19疗法开发，我们开发了在CMV启动子控制下稳定表达ACE2的HEK细胞。已证实，经过多次传代该细胞依然可持续高水平表达ACE2，并可被使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备的SARS-CoV-2假病毒高效转导。

ACE2是一种含锌金属酶，位于内皮细胞和其他类型细胞的表面。这种跨膜蛋白可将血管紧张素I转化为血管紧张素1-9(一种在心肌细胞中起抗肥厚作用的9-氨基酸肽)，并将血管紧张素II转化为血管紧张素1-7，这是一种有益的血管扩张剂和防扩散剂。

Human ACE2 293T Cell Line由编码ACE2的慢病毒转导HEK细胞构建而成。通过RT-qPCR方法证实，该细胞经亚克隆能高效表达ACE2。

■ 概述

· 由CMV启动子控制，组成型表达ACE2的HEK细胞
· 经多次传代证实，ACE2可持续高效表达
· 可被SARS-CoV-2假病毒
(e.g., 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备)高效转导

■ 应用

· SARS-CoV-2假病毒中和研究
· 病毒-受体相互作用和病毒侵入分析

■ 实验例

图1 通过流式细胞术分析ACE2表达情况。使用与Alexa Fluor 488共轭抗ACE2抗体(R&D Systems, Code No. FAB9332G)检测表达在人ACE2 293T细胞表面的ACE2，未被标记的细胞作为阴性对照。

图2 不同代次细胞中ACE2稳定表达的情况。使用One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A)通过RT-qPCR方法，测定人ACE2 293T连续细胞代次中ACE2 mRNA相对表达水平。以三个重复测定的管家基因ACTB Ct值为标准对ACE2表达的Ct值进行归一化处理。通过计算2^(-ΔΔCt)，确定相对于293T细胞，稳转细胞中ACE2的表达情况。

图3 使用表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（截短形式）并表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的慢病毒粒子。Panel A为感染72小时后被转导细胞的显微图像。Panel B为在转导6天后，通过流式细胞仪测定的每个样品的转导效率。

图4 使用表达荧光素酶的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（全长或者截短形式）并表达萤火虫荧光素酶的慢病毒粒子。取10 μl 浓缩病毒液（21倍）转导人ACE2 293T细胞。转导6天后测定荧光素酶活性，以不表达包膜蛋白的病毒作为对照，测定荧光素酶活性背景值。

图5 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以非人灵长类动物恢复期混合血清作为阻断剂。野生型（截短形式）SARS-CoV-2假病毒与梯度稀释的恢复期血清(BEI Resources，Code. NR-52401)孵育后转导人ACE2 293T细胞。感染3天后测定荧光素酶水平，作为病毒感染读数。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。阴性对照组添加健康猕猴血清作为阻断剂。

图6 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以可溶性ACE2蛋白作为阻断剂。Panels A和B梯度稀释与IgG (ACE2-Fc)Fc结构域相融合的可溶性ACE2蛋白，和SARS-CoV-2假病毒一起转导人ACE2 293T细胞。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。

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SARS-CoV-2假病毒包装系统酶试剂盒Takara

SARS-CoV-2假病毒宿主细胞酶试剂盒Takara

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