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日本同仁化学Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18 细胞活性（ATP检测）- DOJINDO

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18 细胞活性（ATP检测）
ATP Assay Kit-Luminescence
商品信息
储存条件：0-5°C
运输条件：常温

特点：

 

● 操作简便，检测仅需10分钟

● 灵敏度高，微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格：
200 tests
600 tests
1000 tests
2000 tests

现货

不可定量检测（无标准品）

代谢相关产品

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18 细胞活性（ATP检测）

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18 细胞活性（ATP检测）

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产品原理
实验注意事项
实验操作步骤
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

 

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源，在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用，甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸（ATP）的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板，10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外，本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18 细胞活性（ATP检测）

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法：多功能酶标仪

检测结果：化学发光值

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18 细胞活性（ATP检测）

注意：该试剂盒只能比较实验组对照组结果，但是不能完全定量检测

（试剂盒内不含标准品）

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中，每孔加入 100 μl 细胞悬液（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl 细胞悬液）。

*为了获得更准确的检测结果，建议每个实验组至少设置三个复孔（n=3）。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl Working solution）。

*气泡会对实验结果产生影响，如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时，建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后，建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果，如果必须在 有光源的地方震荡，建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能，请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下，避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性，建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值（RLU）。

CCK-L，仪器检测实验例，详见如下：（实验例仅供参考）

细胞内ATP活性检测（CCK-L）的仪器设置

参考文献

编号 文献 年 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094		 2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity，Cellular & Molecular Biology Letters， 2023，doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

日本同仁化学Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18- DOJINDO

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Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18
细胞活性（ATP检测）
ATP Assay Kit-Luminescence
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

 

● 操作简便，检测仅需10分钟

● 灵敏度高，微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格：
200 tests
600 tests
1000 tests
2000 tests

现货

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18

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实验操作步骤
参考文献

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NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源，在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用，甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸（ATP）的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板，10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外，本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18

图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法：多功能酶标仪

检测结果：化学发光值

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号：CK18

注意：该试剂盒只能比较实验组对照组结果，但是不能完全定量检测

（试剂盒内不含标准品）

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中，每孔加入 100 μl 细胞悬液（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl 细胞悬液）。

*为了获得更准确的检测结果，建议每个实验组至少设置三个复孔（n=3）。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution（白色 384 孔板，每孔加入 25 μl Working solution）。

*气泡会对实验结果产生影响，如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时，建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后，建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果，如果必须在 有光源的地方震荡，建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能，请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下，避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性，建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值（RLU）。

CCK-L，仪器检测实验例，详见如下：（实验例仅供参考）

细胞内ATP活性检测（CCK-L）的仪器设置

参考文献

编号 文献 年 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094		 2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity，Cellular & Molecular Biology Letters， 2023，doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

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BIO-RAD伯乐TC10 Counting slides细胞计数板1450015 1450016

发表于由

BIO-RAD伯乐TC10 Counting slides细胞计数板

  • 产品型号：  1450015 1450016
  • 简单描述
  • BIO-RAD伯乐TC10 Counting slides细胞计数板现货供应：厂家：美国伯乐货号：1450015 1450016
详细介绍

BIO-RAD伯乐TC10 Counting slides细胞计数板

Use the dual-chamber slides for fast, highly reproducible cell counts using the TC10 or TC20 automated cell counters.

  • Counting parameters – range 5 × 104 – 1 × 107 cells/ml and 6 – 50 μm cell diameter
  • Each chamber only requires 10 μl of suspended cells
  • Volume counted in each chamber is 0.4 μl (equivalent to four 1 x 1 mm squares of a manual hemocytometer)
  • Both chambers can be loaded prior to insertion
  • Chambers labeled A and B, with arrow next to chamber indicating direction of slide insertion
  • Can be used with or without trypan blue

The counting slides are disposable polygon plastic with a dual chamber composed of polymethyl methacrylate (PMMA). Each slide is 75 × 25 × 1.8 mm (W x D x H) with a chamber depth of 100 μm.

Packaging Options

Number of dual chamber slides

Counts

 Catalog #
30 60 1450003*
30 60 1450011
5 x 30 300 1450015
10 x 30 600 1450016
20 x 30 1,200 1450017
30 x 30 1,800 1450018
40 x 30 2,400 1450019
80 x 30 4,800 1450020

Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖和细胞毒性快速高灵敏度检测试剂盒C0038

发表于由

Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖和细胞毒性快速高灵敏度检测试剂盒

  • 产品型号：  C0038
  • 简单描述
  • Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
详细介绍

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan（参考图1）。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖和细胞毒性快速高灵敏度检测试剂盒C0038
图1. WST-8检测原理图 （EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂）
WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。
酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
WST-8对细胞无明显毒性。加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到*测定时间。
本试剂盒可以测定500个样品。
包装清单：

产品编号

产品名称

包装

C0038

CCK-8溶液

5ml

—

说明书

1份

保存条件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。
注意事项：
由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈zui容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞（具体每
孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定）。按照实验需要，进行培养
并给予0-10微升特定的药物刺激。
2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升CCK-8溶液，其它情况以
此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用
的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对
照。
3. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类
型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取
吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
4. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例
如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

 

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所Cell Counting Kit-8

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Counting Kit-8

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
  • 細胞機能解析
  • 細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

  • 製品コード
    CK04　 Cell Counting Kit-8
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
100 回用 ￥6,200 341-07761
500 回用 ￥15,400 347-07621
2500 回用 ￥42,600 343-07623
5000 回用 ￥79,200 341-07624
10000 回用 ￥113,000 341-08001
キット内容
100 回用 1 ml×1
500 回用 5 ml×1
2500 回用 5 ml×5
5000 回用 5 ml×10
10000 回用 100 ml×1

  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
  • 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
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    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所 English
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
  • プロトコル 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所 生細胞数を測りたい(吸光測定)
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所
  • パンフレット 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所

技術情報

  • 細胞別の参考文献 一覧 Cell Counting Kit-8を使用した、細胞別の論文を掲載しています。
    細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所

参考文献

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1) M. Ishiyama, Y. Miyazono, K. Sasamoto, Y. Ohkura and K. Ueno, "A Highly Water-Soluble Disulfonated Tetrazolium Salt as a Chromogenic Indicator for NADH as Well as Cell Viability", Talanta., 1997, 44, 1299.
2) H. Tominaga, M. Ishiyama, F. Ohseto, K. Sasamoto, T. Hamamoto, K. Suzuki and M. Watanabe, "A water-soluble tetrazolium salt useful for colorimetric cell viability assay", Anal. Commun., 1999, 36, 47.
3) T. Miyamoto, W. Min and H. S. Lillehoj, "Lymphocyte Proliferation Response During Eimeria tenella Infection Assessed by a New, Reliable, Nonradioactive Colorimetric Assay", Avian Dis., 2002, 46, 10.
4) K. Yoshimura, A. Tanimoto, T. Abe, M. Ogawa, T. Yutsudo, M. Kashimura and S. Yoshida, "Shiga toxin 1 and 2 Induce Apoptosis in the Amniotic cell line WISH", J. Soc. Gynecol. Investig., 2002, 9, 22.
5) Y. Hayakawa, Y. Hirata, H. Nakagawa, K. Sakamoto, Y. Hikiba, H. Kinoshita, W. Nakata, R. Takahashi, K. Tateishi, M. Tada, M. Akanuma, H. Yoshida, K. Takeda, H. Ichijo, M. Omata, S. Maeda and K. Koike, "Apoptosis signal-regulating kinase 1 and cyclin D1 compose a positive feedback loop contributing to tumor growth in gastric cancer", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2011, 108, (2), 780.
6) R. Chugh, V. Sangwan, S. P. Patil, V. Dudeja, R. K. Dawra, S. Banerjee, R. J. Schumacher, B. R. Blazar, G. I. Georg, S. M. Vickers and A. K. Saluja, "A Preclinical Evaluation of Minnelide as a Therapeutic Agent Against Pancreatic Cancer", Sci. Transl. Med., 2012, 4, (156), 156ra139.
7) R. Kang, T. Loux, D. Tang, N. E. Schapiro, P. Vernon, K. M. Livesey, A. Krasinskas, M. T. Lotze and H. J. Zeh III, "The expression of the receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) is permissive for early pancreatic neoplasia", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2012, 109, (18), 7031.
8) Y. Matsuo, J H Park, T. Miyamoto, S. Yamamoto, S. Hisada, H. Alachkar and Y. Nakamura, "TOPK inhibitor induces complete tumor regression in xenograft models of human cancer through inhibition of cytokinesis", Sci. Transl. Med., 2014, 6, (259), 259ra145.
9) K. Takayam, Y. Morisaki, S. Kuno, Y. Nagamoto, K. Harada, N. Furukawa, M. Ohtaka, K. Nishimura, K. Imagawa, F. Sakurai, M. Tachibana, R. Sumazaki, E. Noguchi, M. Nakanishi, K. Hirata, K. Kawabata and H. Mizuguchi, "Prediction of interindividual differences in hepatic functions and drug sensitivity by using human iPS-derived hepatocytes", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (47), 16772.
10) T. Ida, T. Sawa, H. Ihara, Y. Tsuchiya, Y. Watanabe, Y. Kumagai, M. Suematsu, H. Motohashi, S. Fujii, T. Matsunaga, M. Yamamoto, K. Ono, N. O. Devarie-Baez, M. Xian, J. M. Fukuto and Takaaki Akaike, "Reactive cysteine persulfides and S-polythiolation regulate oxidative stress and redox signaling", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2014, 111, (21), 7606.
11) K. Palumbo-Zerr, P. Zerr, A. Distler, J. Fliehr, R. Mancuso, J. Huang, D. Mielenz, M. Tomcik, B. G Furnrohr, C. Scholtysek, C. Dees, C. Beyer, G. Kronke, D. Metzger, O. Distler, G. Schett and J. H W Distler, Orphan nuclear receptor NR4A1 regulates transforming growth factor-β signaling and fibrosis", Nat. Med., 2015, 21, (2), 150.
12) T. Tu, C. Zhang, H. Yan, Y. Luo, R. Kong, P. Wen, Z. Ye, J. Chen, J. Feng, F. Liu, J. Y Wu and X. Yan, "CD146 acts as a novel receptor for netrin-1 in promoting angiogenesis and vascular development", Cell Res., 2015, 25, (3), 275.
13) S. Ji, Y. Qin, S. Shi, X. Liu, H. Hu, H. Zhou, J. Gao, B. Zhang, W. Xu, J. Liu, D. Liang, L. Liu, C. Liu, J. Long, H. Zhou, P J Chiao, J. Xu, Q. Ni, D. Gao and X. Yu, "ERK kinase phosphorylates and destabilizes the tumor suppressor FBW7 in pancreatic cancer", Cell Res., 2015, 25, (5), 561.
14) N. Li, W. Zhang, M. Khan, L. Lin, JM. Lin, "MoS2-LA-PEI nanocomposite carrier for real-time imaging of ATP metabolism in glioma stem cells co-cultured with endothelial cells on a microfluidic system", Biosens Bioelectron., 2017, 99, (2018), 142.
15) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.
16) Y. Xu, C. Huang, M. Liu, N. Chen, W. Chen, C. Yang, Y. Zhao, X. Li, J. Duan, S. Liu and S. Yang, "Survivin regulated by autophagy mediates hyperglycemia-induced vascular endothelial cell dysfunction", Exp. Cell Res.., 2018,doi: 10.1016/j.yexcr.2018.01.037 .
17) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci.,2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.

よくある質問

Q

カタログや説明書には96 wellプレートでの測定例が示してありますが、 24 wellや12 wellのプレートで測定を行うことができますか？ その場合には試薬(Cell Counting Kit)の添加量はどのようにすれば良いでしょうか？

A

96wellプレート以外でも測定できます。

試薬の添加量は使用培地の10分の1を目安にして下さい。
(1 mLであれば試薬を100 μL など）

細胞数などにより、試薬の添加量を少なくして測定できる可能性もありますが、最初は10分の１量を目安として検討されることをお勧めします。

Q

Cell Counting Kit-8とCell Counting Kit-Fの違いは何ですか？

A

Cell Counting Kit-8は細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。

【Cell Counting Kit-8】
色素：WST-8
形態：1ボトル

Cell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。
細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。（50 cells/well 以上）

【Cell Counting Kit-F】
色素：Calcein-AM
形態：1ボトル
 

  • 製品別に細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較しています 細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド
Q

Cell Counting Kit-8とMTTの違いは何でしょうか？

A

細胞の酵素により、テトラゾリウムがホルマザンになるというのは共通したところです。
それぞれの違いとしては

【Cell Counting Kit-8】
生成するホルマザンが水溶性である。（溶解操作が不要）
測定波長：400～450 nm
細胞全体の酵素活性を反映している。
生成するホルマザンは細胞毒性がない。
細胞が生きたまま測定できる。

【MTT】
生成するホルマザンが非水溶性である。（有機溶媒等による溶解が必要）
測定波長：550～600 nm
主にミトコンドリアの酵素活性を反映している。
生成するホルマザンが細胞毒性を示す。
細胞を溶かさないと測定できない。

有機溶媒によるホルマザン溶解が必要な分、MTTの方が操作が煩雑になります。
 

  • 製品別に細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較しています 細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド
Q

ブランク試験を行うとしたらどのような条件で吸光度を測定すればよいでしょうか？ （細胞単独、細胞＋培地、培地のみ、いずれも無し　etc.)

A

ブランクとして確認するのは3種類の考え方があります。

①細胞＋培地にて600 nm以上で測定する。
→細胞を含む培地の測定試料に濁りがある場合に測定します。
濁りによる散乱が測定誤差となるためで、全波長領域で高くなります。試薬の吸収がない600 nm以上で測定します。しかし、濁りがない、殆ど無視できる程度の濁りであれば、測定する必要はありません。

②細胞＋培地にて450 nm(測定波長)を測定する。
→細胞を含む培地の測定試料に試薬の発色と同じ吸収がある場合に測定します。
450 nmの吸収ですので、試料の着色で判断できます。着色がなければ必要はありません。

③培地＋試薬(CCK)にて450 nm(測定波長)を測定する。
→細胞を含まない培地に試薬を添加した場合の吸収を測定するもので、一般的な試薬ブランクです。
培地に還元性物質が含まれると、試薬が発色します。そのような発色がないことを確認します。
発色が僅かであれば、ブランクとして差し引いてもよいです。しかし、発色が強いようであれば培地中の還元物質を除くか、別の培地をご検討下さい。
また、薬物添加試験を行われるのであれば、添加する薬物で発色しないかを確認してください。

＊ブランクとして大きく出てくるのは②の培地に着色がある場合と③の試薬の誤発色です。
　これらをご確認ください。

Q

前培養をするように取扱説明書に指示されていますが、これは必要なものですか？

A

付着細胞では前培養を推奨しております。
トリプシン処理等により培養用フラスコから回収する際に、細胞はダメージを受けます。
そのため、対数増殖期の状態にために細胞の前培養が必要になります。

浮遊細胞の場合は省略しても構いません。

Q

Cell Counting Kit-8の発色に阻害を与えるような物質はなんですか？

A

一般的に還元物質（アスコルビン酸など）が共存していると正誤差が生じます。

フェノールレッドや血清は問題ありません。
フェノールレッドの場合、若干（5％程度）のブランク上昇がみられますが、使用上は問題ありません。

しかし、発色に阻害を与える培地成分が含まれているかもしれませんので、ご使用の培地が誤発色を与えないかご確認の上、ご使用ください。（薬剤も同様です）

また薬剤によっては細胞の機能に影響を与えるものがあるようで、細胞の増殖能は止まっていても酵素活性を働かせたりしていると（タンパク合成を行なったり）発色を起こしたりします。

負誤差の要因としては、特にこの物質が影響があるといわれているものはないのですが、上記と逆で、薬剤により影響を受け、実際には増殖しているのに発色が低く出る
という現象が起ることはあるようです。また、酸化剤も発色を阻害し負誤差を与える要因となることがあります。

Q

細胞数は変わらないのに吸光度が上昇します。どのような要因が考えられますか。

A

以下の要因が考えられます。

(1)還元物質の影響　　　　　　　　　　　　
(2)細胞当たりの代謝活性の変化　　　

詳細は下記をご確認下さい。

—————————————————————————————————————————————-
(1)還元物質の影響について

  　 試料や被験物質に還元性を持つ物質が存在する場合、Cell Counting Kit-8に含まれるWST-8を直接還元し誤発色することがあります。

　　細胞が無い系で、Cell Counting Kit-8を添加し、発色の有無を予めご確認ください。
　　発色する場合は、Cell Counting Kit-8を添加する前に培地交換を行ってください。

　　その他発色に影響を与える因子については、
　　よくある質問「Cell Counting Kit-8の発色に阻害を与えるような物質はなんですか？」をご確認ください。
—————————————————————————————————————————————-
(2)細胞当たりの代謝活性の変化について

　細胞当たりの代謝活性が上昇した場合、細胞数が変わらなくても、吸光度が上昇することがあります。

　Cell Counting Kit-8は生細胞の脱水素酵素の活性を指標としています。
　そのため、細胞数の変化がなくても、細胞の代謝活性が変化した場合に吸光度が変化する可能性があります。

　細胞の代謝活性の変化の有無は、別の指標で生細胞を測定*1したり、細胞の代謝産物＊2を確認することで
　複合的に評価される場合があります。下記リンク先の資料もご参考ください。

　*1:細胞増殖／細胞毒性測定用試薬の選択ガイド

　*2:細胞内代謝測定
—————————————————————————————————————————————-
 ご不明点がありましたら、小社カスタマーサポートまでお問合せください。
 (free dial:0120-489548 / E-mail:info@dojindo.co.jp)

Q

呈色反応を途中で止めたい(測定までに時間が空く)のですが、どうすれば反応を止められますか？

A

Cell Counting Kitの発色機構は細胞内に存在する脱水素酵素に依存しているので、
呈色反応を止めるには、この酵素反応を止める為に細胞を死滅させます。

下記のいずれかの方法で反応停止を行ってください(添加量は96wellの場合)
反応停止後は24時間以内に測定して下さい。

(1)1 w/v% SDSを10 μL添加する。
　　*SDSを添加する場合には、泡立たないように注意して下さい。
　　 表面に泡があると光散乱して吸光度が高くなります。
　　
(2)0.1 mol/ HClを10 μL添加する。
　　*もし、緩衝能の高い培地をご使用の場合には、もっと濃い酸を添加してください。
　　 アルカリ溶液による反応停止では定量が出来ません。
　　 反応液をアルカリ性にすると、生成したホルマザン色素が青変し、定量性が失われます。

Q

450 nm 以外のフィルターは使用できますか？

A

430-490 nm のフィルターが使用できますが、450 nm のフィルターをご使用いただきますと最も高感度に測定できます。

　　　参考)WST-8ホルマザンの吸収スペクトル

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8 同仁化学研究所

Q

Cell Counting Kit-8の保存期間を教えてください。

A

キット溶液は4℃で12ヶ月安定です。遮光して冷蔵にて保管してください。

長期保存の際は、遮光し-20℃で保存してください。

凍結-融解操作はなるべく行わないで下さい。

＊容器をプラスチック容器に変更いたしました。（以前はガラス容器）それに伴い、安定性試験を再度行い冷蔵での長期安定性が確認出来ましたので保管条件を変更しております。

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所Cell Counting Kit-F

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Counting Kit-F

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所

  • 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
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  • 細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

  • 製品コード
    CK06　 Cell Counting Kit-F
容　量 メーカー希望
小売価格		 富士フイルム
和光純薬
500 回用 ￥16,500 343-07743
キット内容
500 回用 Calcein-AM DMSO solution 110 μl x1

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マニュアル

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  • プロトコル 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所 生細胞数を測りたい（蛍光測定）
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  • パンフレット 細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所 細胞増殖測定細胞染色プロトコル
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技術情報

  • 細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド 細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較
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参考文献

参考文献を表示する

1) S. Sakamoto, M. Yokoyama, X. Zhang, K. Prakash, K. Nagao, T. Hatanaka, R. H. Getzenberg and Y. Kakehi, "Increased Expression of CYR61, an Extracellular Matrix Signaling Protein, in Human Benign Prostatic Hyperplasia and Its Regulation by Lysophosphatidic Acid", Endocrinology, 2004, 145, 2929.

よくある質問

Q

51Cr-release法とCell Couting Kit-Fとの相関はありますか？

A

Cell Couting Kit-Fとしての相関は確認していませんが、
蛍光試薬として用いているCalcein-AMと51Cr-release法との相関の報告はございます。

N.G.Papadopoulos, et.al., J.Immunol.Methods, 177,101-111(1994)

Q

Cell Counting KitとCell Counting Kit-8、Cell Counting Kit-Fの違いは何ですか？

A

Cell Counting KitとCell Counting Kit-8は、発色色素が違いますが基本的な原理は同じです。
細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。
また、Cell Counting Kit-8は、Cell Counting Kitと比較して、「感度が高い」、「試薬安定性が高い」と利点があります。

Cell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。

各製品で使用される色素と形態は以下の通りです。
　【Cell Counting Kit】
　　色素：　WST-1
　　形態：　2ボトル

　【Cell Counting Kit-8】
　　色素：WST-8
　　形態：1ボトル

　【Cell Counting Kit-F】
　　色素：Calcein-AM
　　形態：1ボトル

Q

通常の透明な培養プレートでも測定出来ますか？

A

白か黒のプレートを使用してください。

透明な培養プレートでは測定時の照射した光が散乱してしまい、正確な測定が行えません。
正確な測定を行うためにも、白色及び黒色の蛍光用プレートの御使用をお薦めします。

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    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

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    グルタチオン定量キット

    GSSG/GSH Quantification Kit

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

发表于由

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒

  • 产品型号：  CCK8
  • 简单描述
  • Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒是由（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8，在日本，美国，欧洲等国家地区均持有，Dojindo于2006年在中国获得了WST-8的注册商标。
详细介绍

 

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒

CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：

★灵敏度高，数据可靠，重现性好

★操作简便，省时省力

★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞

★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低

★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用

★适合于高通量药物筛选

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

CCK-8试剂盒在国内科研院所、重点大学、*医院被广泛应用，认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，zui高IF26.5分

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics 33, 172 – 176 （01 Feb 2003）]

CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

CCK-8试剂毒性：CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用

用

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

Cell Counting Kit-8

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

I公司产品

（操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询）

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