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Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

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Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒

  • 产品型号：  CCK8
  • 简单描述
  • Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒是由（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8，在日本，美国，欧洲等国家地区均持有，Dojindo于2006年在中国获得了WST-8的注册商标。
详细介绍

 

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒

CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：

★灵敏度高，数据可靠，重现性好

★操作简便，省时省力

★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞

★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低

★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用

★适合于高通量药物筛选

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

CCK-8试剂盒在国内科研院所、重点大学、*医院被广泛应用，认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，zui高IF26.5分

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics 33, 172 – 176 （01 Feb 2003）]

CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

CCK-8试剂毒性：CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用

用

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

Cell Counting Kit-8

Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）细胞增殖、毒性检测试剂盒CCK8

I公司产品

（操作说明请参考中英文说明书或来电/在线咨询）

统计

 

 

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒Cell Cycle and Apoptosis Analysis KiC1052

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细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒Cell Cycle and Apoptosis Analysis Ki

  • 产品型号：  C1052
  • 简单描述
  • 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒Cell Cycle and Apoptosis Analysis KiT是一种采用经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。50次
详细介绍

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒Cell Cycle and Apoptosis Analysis KiT

碘化丙啶（Propidium，简称PI）是一种双链DNA的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化（DNA fragmentation）导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。
本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。
本试剂盒足够检测50个样品，每个样品的细胞数量可以为10-100万。
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒Cell Cycle and Apoptosis Analysis KiT

包装清单：

产品编号

产品名称

包装

C1052-1

染色缓冲液

25ml

C1052-2

碘化丙啶染色液（20X）

1.25ml

C1052-3

RNase A（50X）

0.5ml

—

说明书

1份

保存条件：
-20℃保存，一年有效。C1052-2碘化丙啶染色液（20X）需避光保存。本试剂盒可4℃保存，一个月内有效。
注意事项：
本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
需自备PBS和70%乙醇，PBS（C0221A）可以向碧云天订购。
荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
碘化丙啶对人体有刺激性，请注意适当防护。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

T 详细产品信息可和选购

sigma红细胞裂解液Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™R7757

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sigma红细胞裂解液Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™

  • 产品型号：  R7757
  • 简单描述
  • sigma红细胞裂解液Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™liquid, sterile-filtered, suitable for hybridoma规格：100ml
详细介绍

sigma红细胞裂解液Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™ 

Product Name Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™,
liquid, sterile-filtered, suitable for hybridoma
Product Number R7757
Product Brand SIGMA

 

sigma红细胞裂解液Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™
TEST SPECIFICATION
Appearance （Turbidity） Clear
Appearance （Form） Liquid
pH 7.3 – 7.7
Osmolality 281 – 311 mOs/kg
Sterility Pass
Endotoxin Level <= 1 EU/ml
Splenocyte Separation Pass

sigma红细胞裂解液Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max™详细产品信息可和选购

上海金畔代理SIGMA产品，欢迎

Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System酶试剂盒Takara

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Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara MK400 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 2,500 次 ￥3,405 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
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■ 制品内容
Premix WST-1 25 ml
 
■ 制品说明
本制品是通过吸光度比色分析法对细胞增殖和细胞活力进行检测的试剂。其检测原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸四唑盐还原酶 (succinate-tetrazolium reductase) 将四唑盐WST-1还原为水溶性formazan dye，进而通过吸光度比色分析法进行检测。此方法取代了[3H]-thymide掺入法，实现了非放射性检测。琥珀酸四唑盐还原酶存在于线粒体中，只有在活细胞中才具有活性，培养基中添加的四唑盐在琥珀酸四唑盐还原酶的作用下，还原生成formazan dye，活细胞数越多，样品中的琥珀酸四唑盐还原酶活性就越强，生成的formazan dye就越多，生成的formazan dye数量与活细胞数成线性正比关系。使用本制品检测时，无需洗涤细胞和使用放射性同位素，从微量培养开始，即可使用酶标仪在同一个微孔板上测定其光吸收值。本制品通过检测细胞活力，可以用于药物敏感性分析和药物筛选。
 
■ 保存
-20℃避光保存。
 
■ 特点
◇ 无需使用放射性同位素。
◇ 无需使用有机溶剂来溶解反应生成的formazan dye。
◇ 吸光度值与活细胞数成线性正比关系。
◇ 与MTT法相比，灵敏度更高。
◇ 可在同一个微孔板上进行不同反应时间的结果测定。
 
■ 用途
◇ 检测生长因子、cytokines、mitogens、nutrients等细胞增殖能力的影响。
◇ 分析抗癌药等具有细胞毒性和抑制细胞生长的化合物。
◇ 评估具有抑制细胞生长作用的抗体与生理介质。
 
 

页面更新：2020-12-09 15:03:16

Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System酶试剂盒Takara

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Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara MK400 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System 2500 Tests ￥3,405 Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System Premix WST-1 Cell Proliferation Assay System
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■ 制品内容
Premix WST-1 25 ml
 
■ 制品说明
本制品是通过吸光度比色分析法对细胞增殖和细胞活力进行检测的试剂。其检测原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸四唑盐还原酶 (succinate-tetrazolium reductase) 将四唑盐WST-1还原为水溶性formazan dye，进而通过吸光度比色分析法进行检测。此方法取代了[3H]-thymide掺入法，实现了非放射性检测。琥珀酸四唑盐还原酶存在于线粒体中，只有在活细胞中才具有活性，培养基中添加的四唑盐在琥珀酸四唑盐还原酶的作用下，还原生成formazan dye，活细胞数越多，样品中的琥珀酸四唑盐还原酶活性就越强，生成的formazan dye就越多，生成的formazan dye数量与活细胞数成线性正比关系。使用本制品检测时，无需洗涤细胞和使用放射性同位素，从微量培养开始，即可使用酶标仪在同一个微孔板上测定其光吸收值。本制品通过检测细胞活力，可以用于药物敏感性分析和药物筛选。
 
■ 保存
-20℃避光保存。
 
■ 特点
◇ 无需使用放射性同位素。
◇ 无需使用有机溶剂来溶解反应生成的formazan dye。
◇ 吸光度值与活细胞数成线性正比关系。
◇ 与MTT法相比，灵敏度更高。
◇ 可在同一个微孔板上进行不同反应时间的结果测定。
 
■ 用途
◇ 检测生长因子、cytokines、mitogens、nutrients等细胞增殖能力的影响。
◇ 分析抗癌药等具有细胞毒性和抑制细胞生长的化合物。
◇ 评估具有抑制细胞生长作用的抗体与生理介质。
 
 

页面更新：2019-08-16 13:32:01

Luna® Cell Ready 裂解模块 货 号 E3032SNEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – qPCR & RT-qPCR

Luna® Cell Ready 裂解模块                              收藏

货 号
规 格
价 格(元)
北京库存
上海库存
广州库存
成都库存
苏州库存

#E3032S
100 rxns
5,959.00
无
无
无
无
无

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特性

 ·仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除
 ·一次反应高效可裂解 10 至 10 万个细胞，适用于众多细胞系
 ·与其它 RNA 提取方法相比减少了样品损失，尤其对于低细胞起始量。
 ·兼容高通量应用，可在室温下进行细胞裂解
 ·与 Luna 通用一步法 RT-qPCR 试剂盒搭配使用时性能最佳：NEB＃E3005（染料法）或 NEB＃E3006（探针法） 
 ·提供完整的细胞裂解和一步法 RT-qPCR 试剂盒方案：NEB #E3030（染料法）或 NEB #E3031（探针法）

概述

   细胞培养常用于替代活体生物来分析基因表达或对治疗的反应。传统上使用柱提法或化学试剂法从处理过的细胞中提取和纯化 RNA.Luna Cell Ready 裂解模块无需进行传统的 RNA 提取步骤即可评估RNA表达水平，是一种快速、方便且灵敏的替代方案。该模块可同时进行细胞裂解、RNA 释放、基因组 DNA 去除，获得的细胞裂解物可直接使用Luna通用一步法 RT-qPCR 试剂盒进行 RT-qPCR 分析。与其它 Luna 产品一样，裂解缓冲液包含惰性蓝色示踪染料，使整个加样流程可视化。

下表列出的细胞系可使用 Luna Cell Ready 裂解模块裂解。这些细胞进行 5 log 梯度稀释（100000-10 细胞/50 µl 裂解反应），并取 1 ul 裂解产物进行 20 µl 体系的一步法 RT-qPCR 反应。每个细胞系的线性结果区域显示在最后一列。此外，经测试一些昆虫细胞系也能用上述裂解液裂解。

 

表一：经验证过的细胞系

细胞系

特性

菌种

50 ml 裂解体系中的细胞数量

A549

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

HEK293

Adherent

H. sapiens, Kidney

10 – 100,000

HeLa

Adherent

H. sapiens, Cervix, adenocarcinoma

10 – 100,000

HepG2

Adherent

H. sapiens, Liver, carcinoma

10 – 100,000

NCI-H460

Adherent

H. sapiens, Lung, carcinoma

10 – 100,000

SK-N-SH

Adherent

H. sapiens, Brain, Neuroblastoma

10 – 100,000

U2Os

Adherent

H. sapiens, Bone, osteosarcoma

10 – 10,000

Jurkat

Suspension

H. sapiens, T lymphocyte, leukemia

10 – 100,000

K-562

Suspension

H. sapiens, Lymphoblast, leukemia

10 – 1,000

 

图一：Luna Cell Ready 一步法 RT-qPCR 实验流程

 

Luna® Cell Ready 裂解模块 货 号 E3032S

 

Luna Cell Ready 裂解模块整合了 DNase I 和 Luna Cell Ready 蛋白酶的功能，可简单高效的进行细胞裂解，仅需 15 分钟即可完成细胞裂解、RNA 释放和基因组 DNA 去除。2 µl 裂解产物（相当于 0.2–4000 个细胞中的 RNA）即可实现 20 µl 体系的 RT-qPCR 反应。

 

试剂盒组分

 

随该产品提供的试剂

 

储存（°C）

浓度

Luna Cell Ready Lysis Buffer

-20

2 X

Luna Cell Ready RNA Protection Reagent

-20

25 X

Luna Cell Ready Protease

-20

25 X

Luna Cell Ready Stop Solution

-20

10 X

DNase I （RNase-free）

-20

10 X

 实验需要但不提供的试剂耗材

  •    磷酸盐缓冲液（PBS）
  •    目标特异性引物
  •    细胞
  •    Eppendorf 管
  •    PCR 联管
  •    PCR 板
  •    移液器和枪头（为减少交叉污染，应使用带滤芯的枪头）

    储存温度

 -20℃

Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector酶试剂盒Takara

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Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 3671 Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector 10 μg ￥10,014 Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector
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□ 浓度 0.5 μg/μl
     
□ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
Limited Use Label License: [L44], [M71]
 
■ 制品说明
本制品是制备Human iPS细胞诱导用逆转录病毒所使用的载体。在高效、高表达逆转录病毒载体pDON-5 DNA(Code No.: 3658)上，插入了iPS细胞诱导用基因OCT3/4和SOX2、KLF4、LIN28和NANOG，各基因以Thosea asigna virus 的2A*1序列连接在一个载体上。本载体与Retrovirus Packaging Kit Ampho(Code No.: 6161)中的pGP Vector以及pE-ampho Vector共转染至逆转录病毒制备用细胞G3T-hi(Code No.: 6163)后，可以制备iPS诱导用逆转录病毒。如此制备的重组逆转录病毒由于和RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)(Code No.: T100A/B)有高亲和性，所以在向目的细胞中导入基因时，使用经RetroNectin®处理后的培养皿或平板，可以得到较高的基因导入率，有效提高iPS细胞的诱导效率。
*1 5种基因转录在同一个mRNA上，翻译时在2A序列的特定位点被分割，使5种蛋白质可以等量表达。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 各载体的遗传信息
  基因名   GenBank Accession No.
  OCT4   NM_002701.4
  SOX2   NM_003106.2
  KLF4   NM_004235.3＊2
  LIN28   NM_024674.4
  NANOG   NM_024865.2
*2 更新的NM_004235.4中，CDS的5’端追加了对应9个氨基酸的碱基。本制品的KLF4基因中不含N端的这9个氨基酸的序列，已经确认可以有效诱导iPS细胞。
 
■ 载体图谱
Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector
 
 
 
 

页面更新：2019-07-18 15:02:30

Mouse Feeder Cell Quantification Kit酶试剂盒Takara

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Mouse Feeder Cell Quantification Kit
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR290 Mouse Feeder Cell Quantification Kit 100 Rxns Inquire Mouse Feeder Cell Quantification Kit Mouse Feeder Cell Quantification Kit Mouse Feeder Cell Quantification Kit
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■ 制品内容（25 μl × 100次量）
1. TB Green Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（2×Conc.） 625 μl × 4
2. Mouse_Mt_primer（10 μM each） 100 μl
3. Mouse_genome_primer(10 μM each) 100 μl
4. Human_primer_Type I（CHR3）（10 μM each） 100 μl
5. Human_primer_Type II（CHR7）（10 μM each） 100 μl
6. Human_primer_Type III（CHR15）（10 μM each） 100 μl
7. dH2O 1 ml×2
8. EASY Dilution（for Real Time PCR） 1 ml×2
9. ROX Reference Dye（50×Conc.）＊ 50 μl
10. ROX Reference Dye II（50×Conc.）＊ 50 μl
11. Human Genomic DNA（100 ng/μl） 20 μl
 
*：用于Applied Biosystems的Real Time PCR仪，用以校正孔与孔之间的荧光信号误差。
◆ 使用ROX Reference Dye 的PCR仪
·StepOnePlus Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific）
◆ 使用ROX Reference Dye II的PCR仪
·Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System（Thermo Fisher Scientific）
◆ 不使用ROX Reference Dye或ROX Reference Dye II的PCR仪
·Thermal Cycler Dice Real Time System II/Lite (Code No. TP900/TP960/TP700/TP760: 终卖)
 
Limited Use Label License：[M82]
 
■ 制品说明
小鼠饲养细胞可用于维持包括hESC（人胚胎干细胞）及 hiPSC（人诱导多能干细胞）等干细胞的增殖及分化。但对于干细胞的某一种应用如再生医学，去除异种饲养细胞是非常关键的。为了保证干细胞质量，有必要建立残留小鼠细胞的检测体系。
本制品以从hESC及hiPSC等培养干细胞提取的基因组DNA为模板，应用Real Time PCR方法对残留的小鼠饲养细胞来源的基因组DNA进行高灵敏度检测和定量的试剂盒。
本制品使用的引物是在小鼠线粒体（mt）DNA区域设计的Real Time PCR扩增用引物，可高灵敏度地检测小鼠饲养细胞来源的基因组DNA。现已知mtDNA拷贝数依据细胞种类、细胞株及分化状态不同而不同，使用的小鼠饲养细胞批次间也可能有差异，因此在试剂盒中附带了可检测小鼠mtDNA拷贝数的引物，用于小鼠饲养细胞批次间的校正。＊
*：使用同一个标准曲线对多批次小鼠饲养细胞来源的基因组DNA定量时，需确认各批次间的mtDNA拷贝数无差异。当小鼠饲养细胞每个批次都制作标准曲线时，则不需要校正。
 
■ 保 存
TB Green Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）
4℃可保存6个月。
避光保存。避免污染。
※长期保存时，请于-20℃保存。产品融解后请于4℃保存，并在6个月内用完。
其他组分
-20℃保存
 
 

页面更新：2022-06-24 13:03:04

Human iPS Cell Editing Systems酶试剂盒Takara

发表于由

Human iPS Cell Editing Systems
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Cellartis Y30021 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit 1 kit ￥7,860 Human iPS Cell Editing Systems Human iPS Cell Editing Systems Human iPS Cell Editing Systems
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从开始到结束：人iPS细胞基因编辑和单细胞克隆系统
Start-To-Finish hiPSC Editing and Single-Cell-Cloning Systems
人诱导多能干细胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一个功能强大的研究工具和疾病模型，因为其具备增殖、自我更新、分化为多种细胞类型的能力。此外，人iPS细胞还可以再现细胞来源个体的疾病表型和基因型。将人iPS细胞结合基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术，可以在同基因的细胞系中研究特定基因改变引起的功能影响，因为基因编辑过的人iPS细胞能提供可再生的、无遗传变异的患病细胞和健康细胞资源。
CRISPR/Cas9系统已经成为一个强大的基因编辑工具，因为其高的靶向特异性，编辑效率和易用性。该技术的强大主要源于它的简单，因为全部只需要一个Cas9核酸酶结合一个单链向导RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可以决定靶向特异性（Jinek et al. 2012)。这种RNA编程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端连接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修复途径的易错特性，进而产生基因敲除(通过插入/删除)。这种方法也可以通过同源重组（homology-directed repair，HDR)途径被用于基因敲入。
 
CRISPR/Cas9系统的组件可以通过多种方法成功导入至靶细胞，包括基于载体的表达系统，RNA转染, 导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)复合物(Sander and Joung 2014)等。与基于载体的方法相比，直接导入Cas9/sgRNA RNPs提供了一种快速转入基因编辑实验的方法，同时脱靶效应的可能性更小（Kim et al. 2014)。
 
一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入，为了分离和筛选感兴趣的基因型，单细胞必须被分离并扩增为克隆细胞系。传统上,从基因编辑的hiPS细胞建立一个克隆群是低效的、具有挑战性的和耗时的，因为hiPS 细胞是以集落生长和传代的。通常，这会导致细胞死亡和提前分化。然而，Cellartis单细胞克隆系统包含一个成分确定的培养系统(由基础培养基，包被剂，和添加剂组成)，用于有效形成单细胞克隆和扩增基因编辑后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一个基于单层培养的系统，规避了集落状培养带来的挑战，允许单细胞传代和促进接种的单细胞存活和后续扩增。
 
Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一个完整的，在无饲养层和成分确定条件下，用于hiPSCs有效扩增和扩大生产的系统。试剂盒包含了从接种单细胞至96孔板到扩增至48孔板过程中所有必要的试剂。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
 
关联基因编辑系统：
一、电穿孔法基因编辑
通过电穿孔的方法对hiPSCs进行有效的基因编辑，Takara提供重组Cas9蛋白质和产生大量sgRNAs所有必要的试剂，用于电穿孔hiPSCs。后续与Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)一起使用，用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
二、Gesicle法基因编辑
Gesicles法是一种无毒的、高效的、替代电穿孔的方法，不依赖昂贵的设备或耗材。通过Gesicle法导入Cas9/sgRNA复合物进行有效的基因编辑，Takara提供所有的必要试剂用于产生细胞衍生的纳米囊泡（Gesicles），来转导Cas9和sgRNA至hiPSCs。后续可与Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021)一起使用，用于进行基因编辑后的单细胞克隆形成和扩增。单细胞克隆扩增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)继续培养。
 
■ 产品特点
· Highly efficient gene editing in hiPSCs—use either electroporation or gesicles to deliver Cas9 protein and sgRNA with no genomic integration and reduced off-target effects
· Superior single-cell survival—edited hiPSCs exhibit high (typically ~50%) survival when seeded as single cells in a 96-well plate
· Maintenance of pluripotency after editing and during single-cell cloning—hiPSCs maintain high levels (>90%) of pluripotency markers Oct-4, TRA-1-60, and SSEA-4
· Stable karyotype from start to finish—maintain a normal and stable karyotype throughout editing, single-cell cloning, and expansion
· Flexibility to perform gene editing experiments your way—choose from complete kits that provide editing and single-cell cloning solutions using either electroporation-based or utilize the culture media kit (Code No. Y30021) to perform efficient single-cell cloning following your own editing experiments
· Continuous use of DEF-CS technology throughout gene editing/single-cell cloning experiments—use the Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010) before and during gene editing experiments, then during scale-up after single-cell cloning experiments
 
■ 产品组成
Cellartis® iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit
（Code No. Y30021，1 kit）
· Cellartis DEF-CS 500 Basal Medium (Code No. Y30011; 500 ml)
· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS COAT-1 (Code No. Y30018; 2 × 800 μl)
· Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Additives
   (Code No. Y30019; 2 × 750 μl, 1 × 500 μl, 1 × 500 μl)
 
关联基因编辑产品
电穿孔法基因编辑
Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (632635; 1 kit)
Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (632641; 100 μg)
Gesicle法基因编辑
Guide-it™ CRISPR/Cas9 Gesicle Production System (632613；1 kit)
 
■ 产品应用
· CRISPR/Cas9-mediated gene editing of hiPSCs
· Single-cell cloning of hiPSCs
· Disease modeling
 
■ 参考文献
Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90-104 (2016).
Jinek, M. et al. A Programmable Dual-RNA-Guided DNA Endonuclease in Adaptive Bacterial Immunity. Science 337, (2012).
Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012-9 (2014).
Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347-55 (2014).
 
■ 产品详情请点击：Human iPS Cell Editing Systems
 
 
 
Human iPS Cell Editing Systems
Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) growing in DEF-CS medium were edited with Cas9 and sgRNA specific to CD81. Pluripotency is maintained in edited human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) that have been seeded as single cells. 12 clonal lines created from single-seeded hiPSCs exhibit high levels of Oct-4 (97-99%), TRA-1-60 (98-99%), and SSEA-4 (98-99%).
  （图片来源于Takara Bio USA, Inc.）
 
 
 

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Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector酶试剂盒Takara

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Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector
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Takara 3671 Human iPS Cell Generation™ All-in-One Vector 10 μg ￥10,014 Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector
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□ 浓度 0.5 μg/μl
     
□ 贮存溶液  
     Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM
     EDTA 1 mM
Limited Use Label License: [L44]
 
■ 制品说明
本制品是制备Human iPS细胞诱导用逆转录病毒所使用的载体。在高效、高表达逆转录病毒载体pDON-5 DNA(Code No.: 3658)上，插入了iPS细胞诱导用基因OCT3/4和SOX2、KLF4、LIN28和NANOG，各基因以Thosea asigna virus 的2A*1序列连接在一个载体上。本载体与Retrovirus Packaging Kit Ampho(Code No.: 6161)中的pGP Vector以及pE-ampho Vector共转染至逆转录病毒制备用细胞G3T-hi(Code No.: 6163)后，可以制备iPS诱导用逆转录病毒。如此制备的重组逆转录病毒由于和RetroNectin®(Recombinant Human Fibronectin Fragment)(Code No.: T100A/B)有高亲和性，所以在向目的细胞中导入基因时，使用经RetroNectin®处理后的培养皿或平板，可以得到较高的基因导入率，有效提高iPS细胞的诱导效率。
*1 5种基因转录在同一个mRNA上，翻译时在2A序列的特定位点被分割，使5种蛋白质可以等量表达。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 各载体的遗传信息
  基因名   GenBank Accession No.
  OCT4   NM_002701.4
  SOX2   NM_003106.2
  KLF4   NM_004235.3＊2
  LIN28   NM_024674.4
  NANOG   NM_024865.2
*2 更新的NM_004235.4中，CDS的5’端追加了对应9个氨基酸的碱基。本制品的KLF4基因中不含N端的这9个氨基酸的序列，已经确认可以有效诱导iPS细胞。
 
■ 载体图谱
Human iPS Cell Generation&trade; All-in-One Vector
 
 
 
 
 

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Human Cell-Free Protein Expression System酶试剂盒Takara

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Human Cell-Free Protein Expression System
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara 3281 Human Cell-Free Protein Expression System 10 Rxns ￥2,237 Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System
Takara 3290 pT7-IRES His-N DNA 20 μg ￥1,502 Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System
Takara 3291 pT7-IRES His-C DNA 20 μg ￥1,502 Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System
Takara 3292 pT7-IRES Myc-N DNA 20 μg ￥1,502 Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System Human Cell-Free Protein Expression System
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■ 制品内容(Code No. 3281)
Cell Lysate＊1 100 μl
Mixture-1  60 μl
Mixture-2＊2 10 μl
Mixture-3＊2 20 μl
T7 RNA Polymerase (200 U/μl)  10 μl
pT7-IRES Vector (0.5 μg/μl) 20 μl
Control Vector＊3 (0.3 μg/μl) 5 μl
 
*1 现用现融解，使用微量移液器轻轻混合均匀并迅速使用，使用完毕立即置于-80℃保存。
注：虽然5次反复冻融基本不会造成产品性能下降，但建议小量分装保存。
*2 Mixture-2和Mixture-3中均含有蛋白质，其中Mixture-2中含有HN标签蛋白质，因此应避免剧烈搅拌或振荡。
*3 该质粒在pT7-IRES中插入了β-半乳糖苷酶基因。
 
■ 制品说明
Human Cell-Free Protein Expression System是利用人源细胞提取物的无细胞蛋白质合成系统。本系统中的Cell Lysate包含了所有体外蛋白质合成的必需因子(核糖体、翻译起始/延伸因子和tRNA等)。只需将携带靶基因的pT7-IRES Vector、T7 RNA Polymerase、Mixture-3(氨基酸和ATP等)和Mixture-2(翻译增强因子)加入到Cell Lysate中，就可以在一个反应管中完成从RNA转录到蛋白质合成的反应，操作十分简单。本制品具有反应体系小、反应速度快、可合成无细胞蛋白质的优点。 pT7-IRES Vector转录得到的目的RNA含有IRES序列，这段序列能够增强蛋白质翻译的起始。反应液中添加了翻译增强因子，在蛋白质合成过程中，它能够活化Cell Lysate中无活性的翻译起始因子，从而维持了稳定的翻译水平。本系统不仅提高了蛋白质合成的效率，弥补了哺乳类无细胞蛋白质合成系统翻译水平低的缺陷，而且能够合成超过150 kDa的高分子量蛋白质。 本系统适用于高通量的蛋白质合成反应，只需一步即可完成。由于毒性蛋白会抑制宿主细胞生长和功能，导致很难利用活细胞表达系统来合成毒性蛋白质，所以本系统尤其适用于合成毒性蛋白质。
 
* 3290/3291/3292与3281搭配使用，可表达带有His标签或Myc标签的蛋白质。
 
■ 保存
3281：-80℃；3290、3291、3292：-20℃。
 
■ pT7-IRES Vector 的结构
Human Cell-Free Protein Expression System
 
 

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NEBExpress™ Cell-free E. coli Protein Synthesis System 货 号 #E5360LNEB酶试剂 New England Biolabs

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 NEBExpress™ Cell-free E. coli Protein Synthesis System 货 号 #E5360L

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 NEBExpress™ Cell-free E. coli Protein Synthesis System 货 号 #E5360L

Advantages and Features

 NEBExpress™ Cell-free E. coli Protein Synthesis System 货 号 #E5360L

Properties & usage

 Storage Temperature

-80°C

SNAP-Cell 647-SiR 货 号 #S9102SNEB酶试剂 New England Biolabs

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特性

 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
SNAP-Cell 647-SiR 货 号 #S9102S

概述

NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。

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SNAP-Surface 594

SNAP-Surface Alexa Fluor 647

SNAP-Surface 649

CLIP-Cell 505

CLIP-Cell TMR-Star

CLIP-Surface 488

CLIP-Surface 547

CLIP-Surface 647

SNAP-Cell 505-Star 货 号 #S9103SNEB酶试剂 New England Biolabs

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特性

  荧光标记 SNAP-tag 或 CLIP-tag 融合蛋白，用于

细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（430 nm）
至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物

概述

  NEB 提供大量的用于标记 SNAP-tag 和 CLIP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由荧光染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由荧光染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP-Cell 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP-Surface 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。

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SNAP-Cell Oregon Green® 货 号 #S9104SNEB酶试剂 New England Biolabs

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特性

 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
SNAP-Cell Oregon Green® 货 号 #S9104S

概述

NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。

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SNAP-Cell TMR-Star 货 号 #S9105SNEB酶试剂 New England Biolabs

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 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
SNAP-Cell TMR-Star 货 号 #S9105S

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NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。

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 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
SNAP-Cell Fluorescein 货 号 #S9107S

概述

NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。

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SNAP-Cell 430 货 号 #S9109SNEB酶试剂 New England Biolabs

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 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
SNAP-Cell 430 货 号 #S9109S

概述

NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。
 

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CLIP-Cell 505 货 号 #S9217SNEB酶试剂 New England Biolabs

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 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
CLIP-Cell 505 货 号 #S9217S

概述

NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。

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 荧光标记 SNAP-、CLIP- 或 ACP-tag 融合蛋白，用于细胞成像
 标记物的荧光光谱波长范围从紫外（360 nm）至远红外（647+ nm）
 有细胞通透性和非通透性两种标记物
 
CLIP-Cell TMR-Star 货 号 #S9219S

概述

NEB 提供大量的用于标记 SNAP-、CLIP- 和 ACP-tag 融合蛋白的荧光底物供研究者选择。SNAP-tag 底物是由染料及通过苄基键耦联到染料上的鸟嘌呤或氯嘧啶构成；CLIP-tag 底物是由染料及通过苄基耦联至染料上的胞嘧啶构成。这些底物无需酶促反应，即可自我标记相应的 tag 标签。细胞通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Cell）不仅能标记细胞内部也能标记细胞表面，而细胞非通透性底物（SNAP- 和 CLIP-Surface）仅能特异性的标记在细胞表面表达的融合蛋白。
 
ACP-tag 的标记基团与辅酶 A（CoA）的磷酸泛酰巯基乙胺耦联，在 ACP 或 SFP 合成酶作用下，完成标记反应。标记反应仅特异地发生在细胞表面表达的融合蛋白上。使用同种底物标记 ACP-tags；用于标记的合成酶标记决定反应特异性（见 292 页）。

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