生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- HSip-1 | CAS 1346220-52-7(free base) 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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–SulfoBiotics– HSip-1

02 酸化ストレス関連試薬

–SulfoBiotics– HSip-1

酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

製品コード

SB21　 –SulfoBiotics– HSip-1
CAS番号

1346220-52-7(free base)
化学名

N-[3′,6′-Dihydroxy-3-oxo-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-5-yl]-(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1-acetamide-κN¹, κN⁴, κN⁷, κN¹⁰) copper(2+) sulfate
分子式・分子量

C₃₀H₃₃CuN₅O₁₀S=719.22

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥23,500	345-92031

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

測定原理

-SulfoBiotics- HSip-1 は優れた硫化水素選択性を持つ銅(II)イオンキレート型の蛍光試薬です。
硫化水素にのみ反応し強い蛍光（λex 491 nm, λem 516 nm）を発します。

硫化水素の細胞内イメージングは、-SulfoBiotics- HSip-1 DA [コード：:SB22 ]　を参照ください。

参考文献

参考文献を表示する

1) K.Sasakura, K.Hanaoka, N.Shibuya, Y.Mikami, Y. Kimura, T.Komatsu, T.Ueno, T.Terai, H.Kimura, and Tetsuo Nagano, "Development of a Highly Selective Fluorescence Probe for Hydrogen Sulfide", J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, (45), 18003–18005.
2) H.Kimura, N.Shibuya, and Y.Kimura, "Hydrogen Sulfide Is a Signaling Molecule and a Cytoprotectant", Antioxid Redox Signal., 2012, 17, (1), 45-47.
3) H.Jurkowska, Heather B. Roman, Lawrence L. Hirschberger, K.Sasakura, T.Nagano, K.Hanaoka, J.Krijt, and Martha H. Stipanuk, "Primary hepatocytes from mice lacking cysteine dioxygenase show increased cysteine concentrations and higher rates of metabolism of cysteine to hydrogen sulfide and thiosulfate", Amino Acids., 2014, 48, (5), 1353-1365.
4) E.Marutani, M. Sakaguchi, W.Chen, K.Sasakura,c J. Liu, M.Xian, K. Hanaoka, T.Nagano, and F.Ichinose, "Cytoprotective effects of hydrogen sulfide-releasing N-methyl-D-aspartate receptor antagonists are mediated by intracellular sulfane sulfur", Medchemcomm., 2014, 5, (10), 1577-1583.
5) N.Fukushima, N.Ieda, M.Kawaguchi, K. Sasakura, T.Nagano, K.Hanaoka, N.Miyata, H.Nakagawa, "Development of photo-controllable hydrogen sulfide donor applicable in live cells", Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters., 2015, 25, (2), 175-178.
6) E.Marutani, M.Yamada, T.Ida, K.Tokuda, K.Ikeda, S.Kai, K.Shirozu, K.Hayashida, S.Kosugi, K.Hanaoka, M.Kaneki, T.Akaike, and F.Ichinose, 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- HSip-1 | CAS 1346220-52-7(free base) 同仁化学研究所 "Thiosulfate Mediates Cytoprotective Effects of Hydrogen Sulfide Against Neuronal Ischemia", J Am Heart Assoc., 2015, 4, (11), e002125.
7) K.Hanaoka, K.Sasakura, Y.Suwanai, S.Toma-Fukai, K.Shimamoto, Y..akano, N.Shibuya, T.Terai, T.Komatsu, T. Ueno, Y.Ogasawara, Y.Tsuchiya Y.Watanabe, H.Kimura, C.Wang, M.Uchiyama, H.Kojima, T.Okabe, Y.Urano, T.Shimizu & Tetsuo Nagano, "Discovery and Mechanistic Characterization of Selective Inhibitors of H2S-producing Enzyme: 3-Mercaptopyruvate Sulfurtransferase (3MST) Targeting Active-site Cysteine Persulfide", Scientific Reports 7., 2017, 40227, (10), 1038.
8)Y.Kawahara, Y.Hirashita, C.Tamura, Y.Kudo, K.Sakai, K.Togo, K.Fukuda, O.Matsunari, K.Okamoto, R.Ogawa, K.Mizukami, T.Okimoto, M.Kodama, K.Murakami, "Helicobacter pylori infection modulates endogenous hydrogen sulfide production in gastric cancer AGS cells", Helicobacter, 2020, https://doi.org/10.1111/hel.12732.

よくある質問

Q HSip-1 stock solutionは保存できますか？: A

HSip-1 stock solutionを調製後、-20℃で保存した場合、１ヶ月間安定です。
凍結融解の繰り返しを避けるため、使用量に応じて小分け保存されることをお勧めします。

Q HSip-1 working solutionは保存できますか？: A

HSip-1 working solutionは保存できません。ご使用前に調製してください。

Q メチレンブルー法との違いを教えてください。: A

メチレンブルー法とHSip-1を用いた硫化水素検出では、下記の点が異なります。

・選択性
　メチレンブルー法：
　酸性条件下で反応を行います。サンプル中に結合型硫黄が含まれる場合、酸性条件で結合型硫黄が硫化水素となりますので、結合型硫黄に由来する硫化水素も含んだ分として検出・定量されます。
　HSip-1：中性条件下で反応を行います。中性条件では、結合型硫黄は硫化水素とはならないため、硫化水素を選択的に検出・定量します。

・検出方法
　メチレンブルー法：吸光度法
　HSip-1：蛍光法

・検出に必要な試薬
　メチレンブルー法：p-アミノジメチルアニリン、塩化鉄(Ⅲ)、硫酸等
　HSip-1：他の試薬は必要ありません。

Q 推奨フィルターを教えてください。: A

検出時の推奨フィルターは下記の通りです。

励起フィルター: 450～500 nm
蛍光フィルター: 515～550 nm

取扱条件

規格
性状：	本品は、褐色～緑褐色固体である。
純度(HPLC)：	90.0％以上
性能試験：	試験適合

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- HSip-1 DA | CAS 1346170-03-3(free base) 同仁化学研究所

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–SulfoBiotics– HSip-1 DA

02 酸化ストレス関連試薬

–SulfoBiotics– HSip-1 DA

酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

製品コード

SB22　 –SulfoBiotics– HSip-1 DA
CAS番号

1346170-03-3(free base)
化学名

N-[3′,6′-Bis(acetyloxy)-3-oxo-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-5-yl]-(1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1-acetamide-κN¹,κN⁴,κN⁷,κN¹⁰copper(2+)sulfate
分子式・分子量

C₃₄H₃₇CuN₅O₁₂S=803.29

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 μg	￥21,100	342-92041

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

測定原理

–SulfoBiotics– HSip-1 DAは、細胞膜透過後の硫化水素への高い選択性と蛍光反応性から、細胞内硫化水素の蛍光検出を実現できる。

参考文献

参考文献を表示する

よくある質問

Q HSip-1 DA stock solutionは保存できますか？: A

HSip-1 DA stock solution調製後、-20℃で保存した場合、１ヶ月間安定です。
凍結融解の繰り返しを避けるため、使用量に応じて小分け保存されることをお勧めします。

Q HSip-1 DA working solutionは保存できますか？: A

HSip-1 DA working solutionは保存できません。ご使用前に調製してください。

Q 推奨フィルターを教えてください。: A

検出時の推奨フィルターは下記の通りです。
励起フィルター: 450～500 nm
蛍光フィルター: 515～550 nm

共焦点顕微鏡（488 nm励起）による蛍光観察例を小社HPにて紹介していますのでご参照ください。

取扱条件

規格
性状：	本品は、青色固体である
純度(HPLC)：	90.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 窒素置換

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 | CAS 106740-09-4 同仁化学研究所

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–SulfoBiotics– GYY4137

02 酸化ストレス関連試薬

–SulfoBiotics– GYY4137

酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

製品コード

SB06　 –SulfoBiotics– GYY4137
CAS番号

106740-09-4
化学名

(4-Methoxyphenyl)morpholinylphosphinodithioic acid, morpholine salt
分子式・分子量

C₁₅H₂₅N₂O₃PS₂=376.47

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 mg	￥8,400	345-91811

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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコル

技術情報

注意事項

・本製品を粉末の状態で取り出し使用する場合、性状の性質上、静電気等の要因で容器内に付着し、取り出しにくい場合があります。
・容器内に付着し、取り出せなかった粉末に関しては、使用する溶媒を容器に入れ、溶かし出して使用してください。

参考文献

参考文献を表示する

1) L. Li, M. Whiteman, Y. Y. Guan, K. L. Neo, Y. Cheng, S. W. Lee, Y. Zhao, R. Baskar, C-H. Tan, and P. K. Moore, “Characterization of a Novel, Water-Soluble Hydrogen Sulfide-Releasing Molecule (GYY4137): New Insights Into the Biology of Hydrogen Sulfide”, Circulation, 2008, 117, 2351.
2) M. Whiteman, L. Li, P. Rose, C-H. Tan, D. B. Parkinson, and P. K. Moore, “The Effect of Hydrogen Sulfide Donors of Lipopolysaccharide-Induced Formation of Inflammatory Mediators in Macrophages”, Antioxid. Redox Signal., 2013, 19, 1749.
3) Z. W. Lee, J. Zhou, C-S. Chen, Y. Zhao, C-H. Tan, L. Li, P. K. Moore, and L-W. Deng, “The Slow-Releasing Hydrogen Sulfide Donor, GYY4137, Exhibits Novel Anti-Cancer Effects In Vitro and In Vivo”, PLos One, 2011, 6, e21077.
4) L. Li, B. Fox, J. Keeble, M. Salto-Tellez, P. G. Winyard, M. E. Wood, P. K. Moore, and M. Whiteman, “The complex effects of the slow-releasing hydrogen sulfide donor GYY4137 in a model of acute joint inflammation and in human cartilage cells”, J. Cell. Mol. Med., 2013, 17, 365.
5) Z. Liu, Y. Han, L. Li, G. Meng, X. Li, M. Shirhan, M. T. Peh, L. Xie, S. Zhou, X. Wang, Q. Chen, W. Dai, C-H. Tan, S. Pan, P. K. Moore and Y. Ji, “The hydrogen sulfide donor, GYY4137, exhibits anti-atherosclerotic activity in high fat fed apolipoprotein E-/- mice”, Br. J. Pharmacology, 2013, 169, 1795.
6) Satoru Sakuma, Saaya Minamino, MayaTakase, Yoshitaka Ishiyama, Hiroyuki Hosokura, Tetsuya Kohda, Yukino Ikeda, Yohko Fujimoto, "Hydrogen sulfide donor GYY4137 suppresses proliferation of human colorectal cancer Caco-2 cells by inducing both cell cycle arrest and cell death", Heliyon., 2019,doi.org/10.1016/j.heliyon.2019.e02244 .

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～微黄色粉末である。
純度(HPLC)：	95.0％以上
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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核染色用色素 | CAS 23491-52-3(Hoechst 33342:free base) 同仁化学研究所

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–Cellstain^®– Hoechst 33342 solution

03 分子生物学関連試薬

05 細胞染色用色素

–Cellstain^®– Hoechst 33342 solution

分子生物学関連試薬
細胞染色用色素

核染色用色素

製品コード

H342　 –Cellstain^®– Hoechst 33342 solution
CAS番号

23491-52-3(Hoechst 33342:free base)
化学名

2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride, solution
分子式・分子量

C₂₇H₃₁Cl₃N₆O=561.93

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 ml	￥5,700	346-07951

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マニュアル

プロトコル細胞を染色したい
パンフレット細胞増殖測定細胞染色プロトコル

参考文献

参考文献を表示する

1) M. J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, "Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry", J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.
2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H. L. Roelen, van J. H. Boo and A. H. Wang, "Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex", Biochemistry, 1992, 31(47), 11823.
3) Y. Tadokoro, K. Yomogida, Y. Yagura, S. Yamada, M. Okabe and Y. Nishimune, "Characterization of Histone H2A.X Expression in Testis and Specific Labeling of Germ Cells at the Commitment Stage of Meiosis with Histone H2A.X Promoter-Enhanced Green Fluorescent Protein Transgene", Biol. Reprod., 2003, 69, 1325.
4) F. Wada, A. Ogawa, Y. Hanai, A. Nakamura, M. Maki and K. Hitomi, "Analyses of Expression and Localization of Two Mammalian-Type Transglutaminases in Physarum polycephalum, an Acellular Slime Mold", J. Biochem.(Tokyo), 2004, 136, 665.
5) M. Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, "Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes", Cells., 2019, 8, (4), 373
6) T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

よくある質問

Q Hoechst 33258 ,Hoechst 33342 solutionの波長とこの２つの違いについて教えて下さい。: A

波長は以下の通りです。
Hoechst33342 Ex:350 nm Em:461 nm
Hoechst33258 Ex:352 nm Em:461 nm

基本的な使用方法は両方とも同じです。
弊社の製品は水溶液になっておりますので、
ご希望の濃度の希釈し、添加して下さい。

この二つの違いですが、基本的にはAdenine-Thymidine部に特異的に結合する薬品です。
生細胞の膜も通過し、生細胞のDNAとも結合します。
膜の透過率はHoechst 33342の方が若干上です。
Hoechst33258はdsDNA selectiveのようです。

Q 核染色剤に使用される色素の特徴、違いは何でしょうか？: A

ここで紹介している色素は核酸との相互作用により蛍光を発するか、蛍光強度が強くなる特徴があります。
蛍光波長以外の違いとしては下記の点がございます。

【EB】
塩基特異性は無く、全DNA,RNAに結合します。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【PI】
EBと同様に塩基特異性はありません。インターカレーションした時の蛍光強度がEBより高いため、より広く使用される色素です。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【DAPI】
２重鎖の副溝(minor groove)と結合します。アデニン-チミジンクラスターに高い結合性を持っています。
生細胞の膜透過性がなく、死細胞を染色します。

【AO】
２重鎖にインターカレーションしたときと、単鎖のリン酸に結合した時では蛍光波長が異なることを利用して、２重鎖と単鎖を区別して検出できます。
生細胞の細胞膜を透過します。

【Hoechst33342､33258】
DNAのアデニン-チミジン部に特異的に結合します。
生細胞の細胞膜を透過し、生細胞のDNAを染色できる色素です。

Q 細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。: A

＊AOはフローサイトメトリーなどでは488nm励起で観察されることもあります

Q Hoechst33342の使用方法を教えてください。: A

一例として下記に示します。
・フローサイトメトリーによる培養株化細胞あるいは固形腫瘍の例

【試薬】

Hoechst33324 solution (1 mg/mL, 1.78 mmol/L)

【操作】

1)培養株化細胞あるいは固形腫瘍を0.25％トリプシンにて分離、浮遊細胞を用意する。

2)培養液で10 μmol/L Hoechst33342溶液とする。

3)細胞浮遊液10⁵個あたり、10 μmol/L Hoechst33342溶液を1 mL加える。

4)37℃,60分インキュベートする。

5)この染色液をフローサイトメトリーで測定する。

励起波長：352 nm、蛍光波長：461 nm

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色液体である。
含量：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光

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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose-I | CAS 9012-36-6 同仁化学研究所

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Agarose-I

03 分子生物学関連試薬

05 細胞染色用色素

14 キレート試薬

Agarose-I

分子生物学関連試薬
細胞染色用色素
細胞染色用色素
キレート試薬
キレート試薬

分子生物学関連試薬-Agarose

製品コード

A003　 Agarose-I
CAS番号

9012-36-6
化学名

Agarose

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 g	￥9,500	346-00072
100 g	￥26,600	344-00073

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マニュアル

プロトコル核酸を検出したい

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～灰黄白色粉末である。
水溶状：	試験適合
強熱残分(硫酸塩)：	1.0％以下
硫黄含量：	0.30％以下
ゲル強度：	800 g/cm² 以上

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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose-I | CAS 9012-36-6 同仁化学研究所

分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 900 | CAS 9012-36-6 同仁化学研究所

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Agarose 900

03 分子生物学関連試薬

Agarose 900

分子生物学関連試薬

分子生物学関連試薬-Agarose

製品コード

A426　 Agarose 900
CAS番号

9012-36-6
化学名

Agarose

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 g	￥9,500	341-07842

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マニュアル

プロトコル電気泳動で核酸を分離したい

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～灰黄白色粉末である。
水溶状：	試験適合
強熱残分(硫酸塩)：	1.0％以下
乾燥減量(80℃)：	22.0％以下
硫黄含量：	0.30％以下
ゲル強度：	800 g/cm² 以上
凝固温度：	35～40℃
融解温度：	87～91℃
DNase活性：	不検出
RNase活性：	不検出
バックグラウンド試験：	試験適合

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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 900 | CAS 9012-36-6 同仁化学研究所

分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 1500 | CAS 9012-36-6 同仁化学研究所

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Agarose 1500

03 分子生物学関連試薬

Agarose 1500

分子生物学関連試薬

分子生物学関連試薬-Agarose

製品コード

A427　 Agarose 1500
CAS番号

9012-36-6
化学名

Agarose

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 g	￥26,600	346-07831

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マニュアル

プロトコル電気泳動で核酸を分離したい

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～灰黄白色粉末である。
水溶状：	試験適合
強熱残分(硫酸塩)：	1.0％以下
乾燥減量(80℃)：	20.0％以下
硫黄含量：	0.30％以下
ゲル強度：	1400 g/cm² 以上
凝固温度：	35～40℃
融解温度：	91～95℃
DNase活性：	不検出
RNase活性：	不検出
バックグラウンド試験：	試験適合

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分子生物学関連試薬-Agarose Agarose 1500 | CAS 9012-36-6 同仁化学研究所

生体高分子機能解析用試薬 FeBABE | CAS 186136-50-5 同仁化学研究所

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FeBABE

03 分子生物学関連試薬

09 二価性試薬

FeBABE

分子生物学関連試薬
二価性試薬

生体高分子機能解析用試薬

製品コード

F279　 FeBABE
CAS番号

186136-50-5
化学名

1-(p-Bromoacetamidobenzyl)ethylenediamine-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, iron(III)
分子式・分子量

C₁₉H₂₁BrFeN₃O₉=571.13

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥18,300	345-08641

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技術情報

溶解例

緩衝溶液、DMSOに可溶

参考文献

参考文献を表示する

1) L. H. DeRiemer, C. F. Meares, D. A. Goodwin and C. I. Diamanti, "BLEDTA II: Synthesis of a New Tumer-Visualizing Derivative of Co(III)-bleomycin", J. Labelled Compd. Radiopharm., 1981, 18, 1517.
2) T. M. Rana and C. F. Meares, "Specific Cleavage of a Protein by an Attached Iron Chelate", J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 2457.
3) T. M. Rana and C. F. Meares, "Transfer of Oxigen from an artificial protease to peptide carbon during proteolysis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 10578.
4) D. P. Greiner, R. Miyake, J. K. Moran, A. D. Jones, T. Negishi, A. Ishihama and C. F. Meares, "Synthesis of the Protein Cutting Reagent Iron (S)-1-(p-Bromoacetamidobenzyl)ethylebediaminetetraacetate and Conjuation to cysteine Sie Cahins", Bioconjugate Chem., 1997, 8, 44.
5) E. Platis, M. R. Ermacora and R. O. Fox, "Oxidative Polypeptide Cleavage Mediated by EDTA-Fe Covalently Linked to Cysteine Residue", Biochemistry, 1993, 32, 12761.
6) S. L. Traviglia, S. A. Datwyler, D. Yan, A. Ishihama and C. F. Meares, "Targeted Protein Footprinting: Where Different Transcription Factors bind to RNA Polymerase", Biochemistry, 1999, 38, 4259.
7) J. B. Ghaim, D. P. Greiner, C. F. Meares and R. B. Gennis, "Proximity Mapping the suface of Membrane Protein Using an Artificial Protease: Demonstration That the Quinone-Binding Domain of Subunit I Is near the N-Terminal Region of Subunit II of Cytochrome bd", Biochemistry, 1995, 34, 11311.
8) R. Miyake, K. Murakami, J. T. Owens, D. P. Greiner, O. N. Ozoline, A. Ishihama and C. F. Meares, "Dimeric Association of Escherichia coli RNA Polymerase alfa subunits, studied by Cleavage of Single-Cysteine alfa Sununits Conjugated to Iron-(S)-1-(p-(Bromoacetamido)benzyl)ethylenediaminetetraacetate", Biochemistry, 1998, 37, 1344.
9) J. T. Owens, R. Miyake, K. Murakami, A. J. Chmura, N. Fujita, A. Ishihama and C. F. Meares, "Mapping the sigma70 subunits contact sites on Escherichia coli RNA polymerase with a sigma70-conjugated chemical protease", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, 95, 6021.
10) J. A. Bown, J. T. Owens, C. F. Meares, N. Fujita, A. Ishihama, S. J. Busby and S. D. Minchin, "Organization of open complexes at Escherichia coli promoters. Location of promoter DNA sites close to region 2.5 of the sigma70 subunit of RNA polymerase", J. Biol. Chem., 1999, 274, 2263.
11) F. Colland, N. Fujita, D. Kotlarz, J. A. Bown, C. F. Meares, A. Ishihama and A. Kolb, "Positioning of sigma(S), the stationary phase sigma factor, in Escherichia coli RNA polymerase-promoter open complexes", EMBO J., 1999, 18, 4049.
12) G. M. Heilek, R. Marusak, C. F. Meares and H. F. Noller, "Directed hydroxyl radical probing of 16S rRNA using Fe(II) tethered to ribosomal protein S4", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, 92, 1113.
13) G. M. Heilek and H. F. Noller, "Site-directed hydroxyl radical probing of the rRNA neighborhood of ribosomal protein S5", Science, 1996, 272, 1659.
14) K. R. Lieberman and H. F. Noller, "Ribosomal protein L15 as a probe of 50 S ribosomal subunit structure.", J. Mol. Biol., 1998, 284, 1367.

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄褐色粉末である。
純度(HPLC)：	95.0％以上
水溶状：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 吸湿注意

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β-galactosidaseの検出試薬 SPiDER-βGal | CAS 1824699-57-1 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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SPiDER-βGal

03 分子生物学関連試薬

SPiDER-βGal

分子生物学関連試薬
細胞機能解析
細胞老化

β-galactosidaseの検出試薬

製品コード

SG02　 SPiDER-βGal
CAS番号

1824699-57-1
化学名

(2S,3R,4S,5R,6R)-2-{[3′-(Diethylamino)-5′-(fluoromethyl)-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-6′-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
分子式・分子量

C₃₁H₃₄FNO₈=567.60

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 μg x 3	￥49,100	343-09161

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
アプリケーション β-ガラクトシダーゼ検出試薬（基質）の選択ガイド – 発生学 –
試薬選択ガイド β-ガラクトシダーゼ検出試薬（基質）の選択ガイド
試薬選択ガイド β-ガラクトシダーゼ検出試薬の比較データ

技術情報

原理

図1 SPiDER-βGalの細胞染色原理
SPiDER-βGal は生細胞膜を透過した後、細胞中のβ-galactosidaseによる酵素反応を受け、その中間体はタンパク質中の求核性基と共有結合を形成することで細胞内に滞留する。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用(リンク)
1	細胞・組織 (腸管幹細胞・幼虫の翼盤)	蛍光顕微鏡	T. Doura, M. Kamiya, F. Obata, Y. Yamaguchi, T. Y. Hiyama, T. Matsuda, A. Fukamizu, M. Noda, M. Miura, Y. Urano, "Detection of LacZ-Positive Cells in Living Tissue with Single-Cell Resolution.", Angew Chem Int Ed Engl., 2016, doi: 10.1002/anie.201603328.
2	細胞 (内分泌細胞)	蛍光顕微鏡	H. Omori, S. Ogaki, D. Sakano, M. Sato, K. Umeda, N. Takeda, N. Nakagata, S. Kume, "Changes in expression of C2cd4c in pancreatic endocrine cells during pancreatic development.", FEBS Lett., 2016, doi: 10.1002/1873-3468.12271.
3	細胞 (SHIN3; SKOV3; OVCAR3)	蛍光顕微鏡/フローサイトメーター	Y. Nakamura, A. Mochida, T. Nagaya, S. Okuyama, F. Ogata, P. L. Choyke, H. Kobayashi, "A topically-sprayable, activatable fluorescent and retaining probe, SPiDER-βGal for detecting cancer; Advantages of anchoring to cellular proteins after activation", Oncotarget., 2017, doi: 10.18632/oncotarget.17080.
4	組織 (マウス腎臓)	蛍光顕微鏡	S. Lu, S. Liu, A. Wietelmann, B. Kojonazarov, A. Atzberger, C. Tang, R. T. Schermuly, H. J. Gröne, S. Offermanns, "Developmental vascular remodeling defects and postnatal kidney failure in mice lacking Gpr116 (Adgrf5) and Eltd1 (Adgrl4)", PLoS ONE., 2017, 10.1371/journal.pone.0183166.
5	組織 (マウス脂肪組織)	蛍光顕微鏡	T. Sugizaki, S. Zhu, G. Guo, A. Matsumoto, J. Zhao, M. Endo, H. Horiguchi, J. Morinaga, Z. Tian, T. Kadomatsu, K. Miyata, H. Itoh & Y. Oike, "Treatment of diabetic mice with the SGLT2 inhibitor TA-1887 antagonizes diabetic cachexia and decreases mortality", NPJ Aging Mech Dis., 2017, DOI:10.1038/s41514-017-0012-0.
6	細胞 (VZ/SVZ)	フローサイトメーター	Y. Nakatani, H. Kiyonari and T. Kondo, "Ecrg4 deficiency results in extended replicative capacity of neural stem cells in a Foxg1-dependent manner", Development., 2019, doi: 10.1242/dev.168120.
7	細胞 (アフリカツメガエル; 卵母細胞)	蛍光顕微鏡	A. A.Tokmakov AA　and K. I. Sato, "Activity and intracellular localization of senescence-associated β-galactosidase in aging Xenopus oocytes and eggs.", Exp. Gerontol.., 2019, 119, 157.
8	細胞 (マウス初代平滑筋細胞)	蛍光顕微鏡/フローサイトメーター	Y. Han, T. Bedarida, Ye Ding, Q. Wang, P. Song, and M. H. Zou, "β-Hydroxybutyrate Prevents Vascular Senescence through hnRNP A1-Mediated Upregulation of Oct4", Molecular Cell., 2019, 71, 1064–1078.
9	細胞 (内皮細胞)	蛍光顕微鏡	A. J. Barinda, K. Ikeda, D. B. Nugroho, D. A. Wardhana, N. Sasaki, S. Honda, R. Urata, S. Matoba, K. Hirata and N. Emoto, "Endothelial progeria induces adipose tissue senescence and impairs insulin sensitivity through senescence associated secretory phenotype", Nat. Commun., 2020, 11, 481.
10	組織 (マウス筋組織)	蛍光顕微鏡	Y. Saito, T. Chikenji, T. Matsumura, M. Nakano, and M. Fujimiya, "Exercise enhances skeletal muscle regeneration by promoting senescence in fibro-adipogenic progenitors", Nat. Commun., 2020, doi:10.1038/s41467-020-14734-x.
11	細胞 (ヒト臍帯静脈内皮細胞)	フローサイトメーター	M. Suda, I. Shimizu, G. Katsuumi, Y. Yoshida, Y. Hayashi, R. Ikegami, N. Matsumoto, Y. Yoshida, R. Mikawa, A. Katayama, J. Wada, M. Seki, Y. Suzuki, A. Iwama, H. Nakagami, A. Nagasawa, R. Morishita, M. Sugimoto, S. Okuda, M. Tsuchida, K. Ozaki, M. Nakanishi-Matsui and T. Minamino, "Senolytic vaccination improves normal and pathological age-related phenotypes and increases lifespan in progeroid mice", Nature Aging, 2021, doi:10.1038/s43587-021-00151-2.
12	細胞 (MG63 cells)	蛍光顕微鏡	H. Nakashima, M. Yasunaga, M. Yoshida, M. Yamaguchi, S. Takahashi, H. Kajiya, S. Tamaoki, and J. Ohno, "Low Concentration of Etoposide Induces Enhanced Osteogenesis in MG63 Cells via Pin1 Activation", J. Hard Tissue Biol., 2021, doi:10.2485/jhtb.30.175.
13	細胞 (マウス筋肉細胞)	蛍光顕微鏡	V. Moiseeva, A. Cisneros, V. Sica, O. Deryagin, Y. Lai, S. Jung, E. Andres, J. An, J. Segales, L. Ortet, V. Lukesova, G. Volple, A. Benguria, A. Dopazo, S. Aznar-Benitah, Y. Urano, A. d. Sol, M. A. Esteban, Y. Ohkawa, A. L. Serrano, E. Perdiguer & P. Munoz-Canoves, "Senescence atlas reveals an aged-like inflamed niche that blunts muscle regeneration", Nature, 2022, doi:10.1038/s41586-022-05535-x.

よくある質問

Q 既存法に対する利点を教えてください。また、既存法との相関性はありますか？: A

①生細胞に適用できます。同様に生細胞に適用できるGFP融合タンパク質発現細胞を用いて相関性があることを確認しました。
②GFP法と比べて固定化後も蛍光観察ができます。
③既存の低分子β-ガラクトシダーゼ蛍光検出試薬と比較して、「細胞膜透過性」及び「細胞内滞留性」が優れるため、β-ガラクトシダーゼ発現細胞のみを一細胞レベルで染色できます。

Q Working solutionは、Hanks’ HEPES以外でも調製できますか？: A

PBS, HBSSなどが使用できます。

Q Working solutionは、どのくらい安定ですか？: A

保存できません。調整した日のうちに使用してください。

Q フローサイトメーターで使用可能ですか？: A

使用できます。β-ガラクトシダーゼ発現および未発現のHEK細胞の混合試料をフローサイトメーターで測定して、測り分けすることができました。取扱説明書に手順と条件を記載しています。

Q 固定後、試料の染色はできますか？: A

可能です。 4%パラホルムアルデヒドやメタノールで固定化しても蛍光観察ができます。固定化によりβ-ガラクトシダーゼ活性は低下しますので、固定化条件の検討を行ってください。

Q 推奨フィルターを教えてください。: A

以下のフィルターを推奨します。
・蛍光顕微鏡：　励起（500-540 nm）, 蛍光（500-540 nm）
・フローサイトメーター：　励起（488 nm）, 蛍光（500-540 nm）

取扱説明書の「励起/蛍光スペクトル」及び「上記フィルターを用いた蛍光顕微鏡測定例」もご参考ください。

Q 染色後、試料の固定はできますか？: A

可能です。 4%パラホルムアルデヒドやメタノールで固定化しても蛍光観察ができます。

Q 組織染色は可能ですか？: A

可能です。細胞染色と比べてWorking solution濃度を高くして染色条件をご検討ください（10-20 μmol/Lを目安）。

取扱条件

規格
性状：	本品は赤色～赤紫色固体でアセトニトリル及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0％以上
NMRスペクトル：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fura 2 | CAS 96314-98-6 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Fura 2

04 細胞内蛍光プローブ

Fura 2

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F014　 Fura 2
CAS番号

96314-98-6
化学名

1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentapotassium salt
分子式・分子量

C₂₉H₂₂K₅N₃O₁₄=831.99

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥32,100	347-05421

【注意】
本品は、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。
内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。（Free Dial：0120-489-548）

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マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/0.25 mL（水）

参考文献

参考文献を表示する

1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca²⁺ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca²⁺ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca²⁺ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.
10) P. L. Becker, F. S. Fay,"Photobleaching of fura-2 and its effect on determination of calcium concentrations", American Journal of Physiology, 1987, 253, 613.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。

製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色～橙黄色粉末又は固体で水に溶ける。
純度(HPLC)：	98.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fura 2-AM | CAS 108964-32-5 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Fura 2-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Fura 2-AM

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F015　 Fura 2-AM
CAS番号

108964-32-5
化学名

1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
分子式・分子量

C₄₄H₄₇N₃O₂₄=1001.85

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥37,200	341-08621

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プロトコル

参考文献

参考文献を表示する

1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca²⁺ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca²⁺ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca²⁺ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色～橙黄色結晶性粉末または固体でジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)：	98.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 3 | CAS 123632-39-3 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fluo 3

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 3

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F019　 Fluo 3
CAS番号

123632-39-3
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid
分子式・分子量

C₃₆H₃₀Cl₂N₂O₁₃=769.53

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥32,600	345-05721

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マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/50 μL(0.1 mol/L – KOH)

参考文献

参考文献を表示する

1) A. Minta, J. P. Y. Kao and R. Y. Tsien, "Fluorescent Indicators for Cytosolic Calcium Based on Rhodamine and Fluorescein Chromophores", J. Biol. Chem., 1989, 264(14), 8171.
2) J. P. Kao, A. T. Harootunian and R. Y. Tsien, "Photochemically Generated Cytosolic Calcium Pulses and Their Detection by Fluo-3", J. Biol. Chem., 1989, 264, 8179.
3) M. Eberhard and P. Erne, "Kinetics of Calcium Binding to Fluo-3 by Stopped-Flow Fluorescence", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, 163, 309.
4) A. Hernandez-Cruz, F. Sala and P. R. Adams, "Subcellular Calcium Transients Visualized by Confocal Microscopy in a Voltage-clamped Vertebrate Neuron", Science, 1990, 247, 858.
5) A. H. Cornell-Bell, S. M. Finkbeiner, M. S. Cooper and S. J. Smith, "Glutamate Induces Calcium Waves in Cultured Astrocytes: Long-Range Glial Signaling", Science, 1990, 247, 470.
6) D. A. Williams, "Quantitative Intracellular Calcium Imaging with Laser-scanning Confocal Microscopy", Cell Calcium, 1990, 11, 589.
7) D. A. Williams, S. H. Cody, C. A. Gehring, R. W. Parish and P. J. Harris, "Confocal Imaging of Ionised Calcium in Living Plant Cells", Cell Calcium, 1990, 11, 291.
8) P. A. Vandenberghe and J. L. Ceuppens, "Flow Cytometric Measurement of Cytoplasmic Free Calcium in Human Peripheral Blood T Lymphocytes with Fluo-3, A New Fluorescent Calcium Indicator", J. Immunol. Methods, 1990, 127, 197.
9) 河内秀幸, 南川哲寛, 高松哲郎, "高速走査共焦点レーザ顕微鏡による心室筋対細胞間のカルシウム波伝播の解析", 心筋の構造と代謝, 1991, 13, 63.
10) M. Iino, H. Kasai and T. Yamazawa, "Visualization of Neural Control of Intracellular Ca²⁺ Concentration in Single Vascular Smooth Muscle Cells in situ", EMBO J., 1994, 13 (21), 5026.
11) M. E. Dailey and S. J. Smith, "Spontaneous Ca²⁺ Transients in Developing Hippocampal Pyramidal Cells", J. Neurobiol., 1994, 25(3), 243.
12) M. Burnier, G. Centeno, E. Burki and H. R. Brunner, "Confocal Microscopy to Analyze Cytosolic and Nuclear Calcium in Cultured Vascular Cells", Am. J. Physiol., 1994, 266, C1118.
13) E. Donnadieu and L. Y. W. Bourguignon, "Ca²⁺ Signaling in Endothelial Cells Stimulated by Bradykinin: Ca²⁺ Measurement in the Mitochondria and the Cytosol by Confocal Microscopy", Cell Calcium, 1996, 20 (1), 53.
14) M. Ikeda, H. Ariyoshi, J. Kambayashi, K. Fujitani, N. Shinoki, M. Sakon, T. Kawasaki and M. Monden, "Separate Analysis of Nuclear and Cytosolic Ca²⁺ Concentrations in Human Umbilical Vein Endothelial Cells", J. Cell. Biochem., 1996, 63 (1), 23.
15) J. E. Merritt, S. A. McCarthy, M. P. A. Davies and K. E. Moores, "Use of fluo-3 to Measure Cytosolic Ca²⁺ in Platelets and Neutrophils Loading Cells with the Dye, Calibration of Traces, Measurements in the Presence of Plasma, and Buffering of Cytosolic Ca²⁺", Biochem. J., 1990, 269, 513.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤褐色～暗赤褐色粉末又は固体でアルカリに溶ける。
純度(HPLC)：	70.0％以上
アルカリ溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 3-AM | CAS 121714-22-5 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fluo 3-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 3-AM

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F023　 Fluo 3-AM
CAS番号

121714-22-5
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,tetra(acetoxymethyl)ester
分子式・分子量

C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃=1129.85

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥43,300	343-08061

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/0.5 mL（アセトニトリル）、1 mg/mL（ジメチルスルホキシド）

参考文献

参考文献を表示する

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

Q Caの変化をフローサイトメトリーで測定したいと思っています。どの試薬を使えばよいでしょうか？: A

フローサイトメトリーでは、励起波長が固定されておりますので、1波長励起タイプのものが望ましいと思われます。

まず、Indo 1(UV laser, 365 nm)やFluo 3(Ar-laser, 488 nm)をお試しください。
・Indo 1はカルシウムの結合によって蛍光波長が変化するメリットがあります。
・Fluo 3は励起光源としてArレーザーを利用できます。

実際の使用例としては、
[Indo 1]
　P. S. Rabinovitch, et al., Journal of Immunology, 137, 952 (1986).
[Fluo 3]
　S. W. Sherwood and Robert T. Schimke, Methods Cell Biol., 46, 77 (1995).
がございます。ご参照ください。

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤色粉末又は固体で、ジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0% 以上
アセトニトリル溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 4-AM | CAS 273221-67-3 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Fluo 4-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 4-AM

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F311　 Fluo 4-AM
CAS番号

273221-67-3
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl) ester
分子式・分子量

C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃=1096.94

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥50,800	345-90951

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/0.5 mL（アセトニトリル）、1 mg/mL(ジメチルスルホキシド）

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。

製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340nm, Ca free:380nm)、蛍光：λem=500nm
・解離定数：224nmol/l
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508nm、蛍光：λem=527nm
・解離定数：400nmol/l
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495nm、蛍光：λem=518nm
・解離定数：345nmol/l
・Fluo 3と比較して、励起極大波長が約10 nm短波長側にシフトしており、アルゴンレーザー励起による蛍光強度が約2倍と高感度である。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330nm、蛍光(λem= Ca:410nm, Ca free:485nm)
・解離定数：250nmol/l
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553nm、蛍光：λem=576nm
・解離定数：1.0μmol/l
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339nm、蛍光：λem=492nm
・解離定数：110nmol/l
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤橙色粉末又は固体である。
純度(HPLC)：	98.0％以上
アセトニトリル溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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カルシウムイオン測定試薬 Quin 2 | CAS 73630-23-6 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Quin 2

04 細胞内蛍光プローブ

Quin 2

細胞内蛍光プローブ

カルシウムイオン測定試薬

製品コード

Q001　 Quin 2
CAS番号

73630-23-6
化学名

8-Amino-2-[(2-amino-5-methylphenoxy)methyl]-6-methoxyquinoline-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetrapotassium salt
分子式・分子量

C₂₆H₂₃K₄N₃O₁₀=693.87

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 mg	￥34,100	340-04713

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

84 mg/100 mL（水）

参考文献

参考文献を表示する

1) R. Y. Tsien, "New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons:　Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures", Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, T. Pozzan and T. J. Rink, "Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored with a New, Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator", J. Cell Biol., 1982, 94, 325.
3) 和田弘子, 渥美博充, 中川元吉, 高濃度食塩溶液中の微量カルシウムの蛍光検出フローインジェクション定量, Chem. Express., 1989, 4, 381.
4) M. B. Feinstein, J. J. Egan, R. I. Sha'afi and J. White, "The Cytoplasmic Concentration of Free Calcium Inplatelets Is Controlled by Stimulators of Cyclic AMP Production (PGD2, PGE1, FORSKOLIN)", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, 113, 598.
5) N. Miyoshi, K. Hara, S. Kimura, K. Nakanishi and M. Fukuda, "A New Method of Determining Intracellular Free Ca²⁺ Concentration Using Quin　2-fluorescence", Photochem. Photobiol., 1991, 53 (3), 415.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、淡黄色粉末で水に溶ける。
純度(HPLC)：	95.0% 以上
水溶状：	試験適合
モル吸光係数：	34,000 以上(240 nm付近)

取扱条件
保存条件: 遮光

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カルシウムイオン測定試薬 Rhod 2-AM | CAS 145037-81-6 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Rhod 2-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Rhod 2-AM

細胞内蛍光プローブ

カルシウムイオン測定試薬

製品コード

R002　 Rhod 2-AM
CAS番号

145037-81-6
化学名

1-[2-Amino-5-(3-dimethylamino-6-dimethylammonio-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl ester, bromide
分子式・分子量

C₅₂H₅₉BrN₄O₁₉=1123.94

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥62,300	341-05821

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/mL(DMSO), 50 mg/mL(クロロホルム)

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) M. Burnier, G. Centeno, E. Burki and H. R. Brunner, "Confocal Microscopy to Analyze Cytosolic and Nuclear Calcium in Cultured Vascular Cells", Am. J. Physiol., 1994, 266, C1118.
2) J. Vergara, M. Difranco, D. Compagnon and B. A. Suarez-Isla, "Imaging of Calcium Transients in Skeletal Muscle Fibers", Biophys. J., 1991, 59, 12.
3) T. Meyer, T. Wensel and L. Stryer, "Kinetics of Calcium Channel Opening by Inositol 1,4,5-Trisphosphate", Biochemistry, 1990, 29, 32.
4) A. Minta, J. P. Y. Kao and R. Y. Tsien, "Fluorescent Indicators for Cytosolic Calcium Based on Rhodamine and Fluorescein Chromophores", J. Biol. Chem., 1989, 264(14), 8171.
5) D. R. Trollinger, W. E. Cascio and J. J. Lemasters, "Selective Loading of Rhod 2 into Mitochondria Shows Mitochondrial Ca²⁺ Transients during the Contractile Cycle in Adult Rabbit Cardiac Myocytes", Biochem. Biophys. Res. Commun.,> 1997, 236, 738.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo 3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo 3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しています。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、暗紫色固体でクロロホルムに溶ける。
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内pH測定試薬 BCECF | CAS 85138-49-4 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

BCECF

04 細胞内蛍光プローブ

BCECF

細胞内蛍光プローブ
細胞内蛍光プローブ

細胞内pH測定試薬

製品コード

B031　 BCECF
CAS番号

85138-49-4
化学名

2′,7′-Bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein
分子式・分子量

C₂₇H₂₀O₁₁=520.44

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 mg	￥16,100	345-05184

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参考文献

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1) R. A. Steinhardt and D. Mazia, "Development of K⁺-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH₄OH", Nature, 1973, 241, 400.
2) T. J. Rink, R. Y. Tsien and T. Pozzan, "Cytoplasmic pH and Free Mg²⁺ in Lymphocytes", J. Cell Biol., 1982, 95, 189.
3) A. M. Paradiso, R. Y. Tsien and T. E. Machen, "Na⁺ -H⁺ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81, 7436.
4) S. Grinstein, B. Elder and W. Furuya, "Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils: Role of Exocytosis in Na⁺ – H⁺ Exchange", Am. J. Physiol., 1985, 248, C379.
5) G. B. Zavoico, E. J. Cragoe and M. B. Feinstein, "Regulation of Intracellular pH in Human Platelets", J. Biol. Chem., 1986, 261(28), 13160.
6) G. R. Bright, W. Fisher, J. Rogowska and L. Taylor, "Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH", J. Cell Biol., 1987, 104, 1019.
7) C. Aalkjaer and E. J. Gragoe Jr, "Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels", J. Physiol., 1988, 402, 391.
8) K. Tsujimoto, M. Semadeni, M. Huflejt and L. Packer, "Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2',7'-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1988, 155, 123.
9) M. A. Kolber, R. R. Quinones, R. E. Gress and P. A. Henkart, "Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein(BCECF)", J. Immunol. Methods, 1988, 108, 255.
10) H. Harada, Y. Kanai, M. Anzai and Y. Suketa, "cAMP Activates Cl^–/HCO₃^– Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells", Biochim. Biophys. Acta, 1991, 1092, 404.
11) C. C. Freudenrich, E. Murphy, L. A. Levy, R. E. London and M. Lieberman, "Intracellular pH Modulates Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells", Am. J. Physiol., 1992, 262(4), C1024.
12) K. Khodakhah and D. Ogden, "Functional Heterogeneity of Calcium Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 4976.
13) G. Boyarsky, C. Hanssen and L. A. Clyne, "Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells", FASEB J., 1996, 10, 1205.
14) S. A. Weston and C. R. Parish, "New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy", J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
15) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

取扱条件

規格
性状：	本品は、橙色～赤茶褐色粉末でメチルアルコールに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0％以上
メチルアルコール溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 遮光

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細胞内鉄イオン測定試薬 FerroOrange | CAS – 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

FerroOrange

04 細胞内蛍光プローブ

FerroOrange

細胞内蛍光プローブ

細胞内鉄イオン測定試薬

製品コード

F374　 FerroOrange
CAS番号

–

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 tube	￥16,100	342-09533
3 tubes	￥36,300	346-09531

※ 1 tube当たり24 μgのFerroOrangeが含まれます。

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技術情報

鉄検出試薬の選択

鉄検出時の実験方法および測定機器に応じて試薬を選択頂けます。

	FerroOrange	Mito-FerroGreen
細胞内の局在	細胞内	ミトコンドリア
蛍光特性	λex : 543 nm、λem : 580 nm	λex : 505 nm、λem : 535 nm
対応装置（フィルター）	蛍光顕微鏡、プレートリーダー（Cy3）	蛍光顕微鏡（FITC、GFP）
測定対象	生細胞	生細胞
染色回数	24 μgで35 mm dish 17枚分染色可能（終濃度 1 μmol/l使用時）	50 μgで35 mm dish 5枚分染色可能（終濃度 5 μmol/l使用時）

技術や使用製品に関する補足

【注目の研究・トピック】

Dojin News No.162

地球上の生命体の活動や疾患における鉄の重要性の再認識　(名古屋大学　豊國伸哉先生)

Dojin News No.172

二重機能性蛍光色素（H-V）を用いたフェロトーシスの解明

▶Dojin News(4回/年）バックナンバー、

配信のご登録はこちら

高感度だから内在性の鉄も検出できる

HeLa細胞を用いて、細胞内に内在するFe²⁺および鉄キレート試薬Bpy（2,2‘-bipyridine、終濃度：100 μmol/l）と鉄（硫酸アンモニウム鉄（II）、終濃度：100 μmol/l）の添加有無により、細胞内のFe²⁺の変化をFerroOrangeにより確認しました。

蛍光顕微鏡によるイメージング
鉄キレート試薬を添加することで無刺激の細胞に比べ蛍光強度が低下したことから、細胞内には内在性のFe²⁺が存在することが確認できました。

細胞内鉄イオン測定試薬 FerroOrange | CAS - 同仁化学研究所

＜検出条件＞　Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm　　　　　　スケールバー：20 μm

プレートアッセイにより簡便に数値化
鉄キレート試薬および鉄の添加による細胞内のFe²⁺量の変化を数値データとして確認できました。

細胞内鉄イオン測定試薬 FerroOrange | CAS - 同仁化学研究所

＜検出条件＞　Ex: 543 nm、Em: 580 nm

*操作の詳細は　よくある質問「プレートリーダーでの測定方法を教えてください。」をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

ーフェロトーシス研究ー

実験例 : アミノ酸トランスポーター（xCT）阻害　

【関連試薬】

・過酸化脂質検出試薬

(Liperfluo)

・グルタミン酸測定キット

(Glutamate Assay Kit-WST)

・グルタチオン測定キット

(GSSG/GSH Quantification Kit)

参考文献

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文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（HeLa）	蛍光顕微鏡	K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, "MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.", Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
2)	細胞（ヒト内皮細胞株）	蛍光顕微鏡	Y. Wang and M. Tang, "PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance", Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
3)	細胞（MCF7-ADR）	蛍光顕微鏡	S Guo, X Yao, Q Jiang, K Wang, Y Zhang, H. Peng, J. Tang and W. Yang , "Dihydroartemisinin-Loaded Magnetic Nanoparticles for Enhanced Chemodynamic Therapy", Front Pharmacol , 2020, 11, 226.
4)	細胞（293T)	蛍光顕微鏡	R. A. Weber, F. S. Yen, S.P.V. Nicholson, H. Alwaaseem, E.C. Bayraktar,M. Alam, R. C. Timson, K. La, M. Abu-Remaileh, H. Molina and K. Birsoy, "Maintaining Iron Homeostasis Is the Key Role of Lysosomal Acidity for Cell Proliferation", Mol. Cell, 2020, 77, 1-11.
5)	細胞（SK-HEP-1)	蛍光顕微鏡（解析ソフトを使用し数値化)	X. Li, T. Wang, X. Huang, Y. Li, T. Sun, S. Zang, K. Guan, Y. Xiong, J. Liu and H. Yuan , "Targeting ferroptosis alleviates methionine‐choline deficient (MCD)‐diet induced NASH by suppressing liver lipotoxicity", Liver Int., 2020, doi:10.1111/liv.14428.
6)	細胞（HepG2）	蛍光顕微鏡マイクロプレートリーダーイメージングサイトメーター	T. Hirayama, M. Niwa, S. Hirosawa and H. Nagasawa, "High-Throughput Screening for the Discovery of Iron Homeostasis Modulators Using an Extremely Sensitive Fluorescent Probe", ACS Sens., 2020,doi: 10.1021/acssensors.0c01445. ※論文で「RhoNox-4」と記載されている化合物が「FerroOrange」となります。
7)	細胞、組織（BV-2細胞、海馬(脳)）	蛍光顕微鏡	T. Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, "Nitrogen‑doped graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium homeostasis in microglia", Part. Fibre Toxicol., 2022, doi:10.1186/s12989-022-00464-z.
8)	細胞、組織（HeLa細胞、子宮頸冷凍スライス）	蛍光顕微鏡	T. Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and R. Ju, "Persistent ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV infection", Cell Death Discovery, 2022, doi:10.1038/s41420-022-01013-5.

よくある質問

Q FerroOrangeで染色する時の注意点を教えて下さい。: A

染色時は下記の点に注意の上、使用してください。

①FerroOrange染色後の培地交換
培地交換によりFerroOrangeが細胞外へ漏れ出てしまうため、染色後はそのまま観察してください。

②コントロール実験
鉄検出の実験条件を確認するため、鉄キレート試薬Bpy(2,2‘-bipyridine)または鉄（硫酸アンモニウム鉄(II) ）を添加したサンプルを準備し、FerroOrangeの蛍光強度の変化をみられることをお勧めします。

③細胞が染色されにくい（感度が低い）時の対応
細胞種によって染色度合いに差がみられる場合があります。
FerroOrange working solution濃度を推奨の1 μmol/lより高くして染色を行ってください。1-5 μmol/lの範囲での染色をお勧めします。

Q プレートリーダーでの測定方法を教えてください。: A

下記の実験例を参考に測定ください。

＜測定サンプル＞
サンプルA：添加剤なし（HeLa細胞のみ）
サンプルB：鉄キレート試薬 2,2'-bipyridyl (Bpy) を添加したHeLa細胞
サンプルC：鉄（硫酸アンモニウム鉄）を添加したHeLa細胞

＜測定操作＞
1. 96ウェルマイクロブラックプレート（透明底）にHeLa細胞懸濁液100 μlを 10,000 cells/wellになるよう播種し、37℃インキュベータ（5% CO₂）で一晩培養した。
2. サンプルCの細胞をMEM（FBS不含） 100 μlで3回洗浄した。
3. サンプルCのウェルに硫酸アンモニウム鉄(II)/MEM（FBS不含）溶液 100 μL(終濃度：100 μmol/l)を添加し、37℃インキュベーター（5% CO₂）中で30分間静置した。
4. 全てのウェルの細胞をHBSS 100 μlで3回洗浄した。
5. サンプルAおよびCのウェルに1 μmol/l FerroOrange working solution 100 μlを添加し、サンプルBのウェルにFerroOrange (終濃度：1 μmol/l)及び Bpy (終濃度：100 μmol/l)を含むHBSS溶液 100 μlを添加し、37℃インキュベータ（5% CO₂）で30分間インキュベートした。
6. プレートリーダーにて各サンプルの蛍光強度（Ex: 543 nm、Em: 580 nm）を検出した。

＜測定データ＞

Q 推奨のフィルターを教えてください。: A

検出時の推奨フィルターは下記の通りです。
励起フィルター: 530-565 nm
蛍光フィルター: 570-620 nm

Q フローサイトメーターによる解析は可能ですか？: A

可能です。但し、以下の理由より実験条件の最適化を行う必要があります。

　・細胞密度や細胞の種類によっては、FerroOrangeの染色強度に影響を与える場合があります。
　・培地交換や洗浄により、色素が細胞外に漏れる場合があります。

(参考)
HeLa細胞を用いた実験例をご紹介致します。

＜操作＞
1. MEM（10％ FBS、1％ penicillin-streptomyci）培地に懸濁したHeLa細胞を6ウェルプレートに播種し（1 x10⁵cells／well）、37℃、5％CO₂インキュベーター中で一晩培養した。
2. 細胞を無血清培地（2 ml）で3回洗浄し、無血清培地（1 ml）を細胞に添加した。
3. 10 mmol/l 硫酸鉄（II）アンモニウム（10 μl）をウェルに添加した（終濃度：100 μmol/l）。
4. 硫酸鉄アンモニウムと無血清培地を混合するため、ウェル内の溶液全量を一度マイクロピペットで吸い上げ、再び同じウェルにゆっくり戻した。
5. 37℃、5％ CO₂インキュベーター中で20分間インキュベートし、HBSS(1 ml)で3回細胞を洗浄した。
6. トリプシン処理（250 µl）後、血清培地（1 ml）で反応を停止し、細胞懸濁液 1.25 mlを遠心管に移した。
7. 細胞懸濁液を1,500 rpm、3分間遠心分離した。
8. 上清を除去し、HBSS（1 ml）を遠心管に加え、ピペッティングにより懸濁した。
9. 細胞懸濁液を1,500 rpmで3分間遠心し、上清を除去した。
10. 無血清培地で希釈した1 μmol/l FerroOrangeを300 μl細胞に添加した。
11. 37℃、5％ CO₂インキュベーター中で15-30分間インキュベートした。
12. 細胞をセルストレーナーに通し、フローサイトメーターを用いて解析した。

＜注意点＞

1. 染色後の洗浄によりFerroOrangeが細胞外に漏出するため、染色後洗浄をせずに測定してください。

（染色後の洗浄有無による蛍光強度の差）

2. 色素溶液の量に依存して蛍光強度が変化することがあるので、等量の色素溶液を添加してください。

　(色素溶液量による蛍光強度の差)

3. 鉄(II)を検出する実験条件を確認するために、硫酸鉄(II)アンモニウムを含む試料を調製し、
　　FerroOrangeの蛍光強度の変化を確認することを推奨します。

取扱条件

規格
性状：	本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
純度(HPLC)：	92.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光

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塩化物イオン測定試薬 MQAE | CAS 124505-60-8 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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MQAE

04 細胞内蛍光プローブ

MQAE

細胞内蛍光プローブ

塩化物イオン測定試薬

製品コード

M024　 MQAE
CAS番号

124505-60-8
化学名

N-Ethoxycarbonylmethyl-6-methoxyquinolinium bromide
分子式・分子量

C₁₄H₁₆BrNO₃=326.19

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 mg	￥19,400	348-06051

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マニュアル

プロトコル細胞内塩化物イオンを測定したい

技術情報

溶解例

3 mg/mL（水：アセトニトリル＝1：1）

参考文献

参考文献を表示する

1) A. S. Verkman, M. C. Sellers, A. C. Chao, T. Leung and R. Ketcham, "Synthesis and Characterization of Improved Chloride-sensitive Fluorescent Indicators for Biological Applications", Anal. Biochem., 1989, 178, 355.
2) M. Inoue, M. Hara, X.-T. Zeng, T. Hirose, S. Ohnishi, T. Yasukura, T. Uriu, K. Omori, A. Minato and C. Inagaki, "An ATP-driven Cl^– Pump Regulates Cl^– Concentrations in Rathippocampal Neurons", Neurosci. Lett., 1991, 134, 75.
3) T. Nakamura, H. Kaneko and N. Nishida, "Direct Measurement of Chloride Concentration in Newt Olfactory Receptors with the Fluorescent Probe", Neurosci. Lett., 1997, 237, 5.

取扱条件

規格
性状：	本品は、微黄色～黄色粉末である。
純度(HPLC)：	95.0％以上
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬 Mito-FerroGreen | CAS – 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Mito-FerroGreen

04 細胞内蛍光プローブ

Mito-FerroGreen

細胞内蛍光プローブ
細胞機能解析
ミトコンドリア関連

ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬

製品コード

M489　 Mito-FerroGreen
CAS番号

–

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 μg x 2	￥28,400	344-09211

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取扱説明書日本語
Manual English
プロトコルミトコンドリアの鉄イオンを検出したい

技術情報

測定原理

参考文献

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参考文献

1) T. Hirayama, S. Kadota, M. Niwa and H. Nagasawa, "A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)", Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B, ※論文中では「Mito-FerroGreen」を「Ac-MtFluNox」で表記。.
2) T. Issitt, E. Bosseboeuf, N. Winter, N. Dufton, G. Gestri, V. Senatore, A. Chikh, A. Randi, C. Raimondi, "Neuropilin-1 controls endothelial homeostasis by regulating mitochondrial function and iron-dependent oxidative stress via ABCB8", iScience., 2018,DOI: 10.1016/j.isci.2018.12.005 .
3) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci., 2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
4) M. Fujimaki, N. Furuya, S. Saiki, T. Amo, Y. Imamichi and N. Hattori, "Iron supply via NCOA4-mediated ferritin degradation maintains mitochondrial functions", Mol. Cell. Biol.., 2019,doi: 10.1128/MCB.00010-19.
5) K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, "MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.", Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
6) Y. Wang and M. Tang, "PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance", Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
7) KF. Yambire, C. Rostosky, T. Watanabe, D. Pacheu-Grau, S. Torres-Odio,A. Sanchez-Guerrero,O. Senderovich, EG. Meyron-Holtz,I.Milosevic, J. Frahm, AP. West and N. Raimundo, "Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency and inflammation in vivo.", Elife, 2019, 3, (8), doi:10.7554/eLife.51031.
8) H. Nishizawa, M. Matsumoto, T. Shindo, D. Saigusa, H. Kato, K. Suzuki, M. Sato, Y. Ishii, H. Shimokawa and K. Igarashi, "Ferroptosis is controlled by the coordinated transcriptional regulation of glutathione and labile iron metabolism by the transcription factor BACH1", J. Biol. Chem., 2019,doi: 10.1074/jbc.RA119.009548.
9)Y. akashima, A. Hayano and B. Yamanaka, Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells.", Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.

よくある質問

Q 推奨フィルターを教えてください。: A

検出時の推奨フィルターは下記の通りです。

励起フィルター: 450～500 nm
蛍光フィルター: 515～550 nm

取扱条件

規格
性状：	本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
純度(HPLC)：	90.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 窒素置換,吸湿注意

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–SulfoBiotics– HSip-1

–SulfoBiotics– HSip-1

生体硫黄解析用試薬

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原理

参考文献

–Cellstain^®– Hoechst 33342 solution

–Cellstain^®– Hoechst 33342 solution

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ－カスタマーサポート担当者の視点から－」