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试剂盒内含
产品概述
水溶性活性酯型生物素化试剂：使用生物素（AC5）2Sulfo-OSu用于生物素标记蛋白质游离氨基的试剂盒。它带有用于标记的LVDS3缓冲粉，用于凝胶过滤的柱和用于柱洗脱的PBS片剂，可以纯化标记的蛋白。由于是单次注射型（10毫克x4瓶），因此可以标记4种不同类型的蛋白质。可以通过改变添加的生物素-（AC5）2 Sulfo-OSu的量来控制标记率。
*标记蛋白的量为1-5 mg。
原理
操作步骤
使用注意事项:
1. 本试剂盒请在0-5 ℃储存。
2. Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液需要现配现用 (由于Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu易水解，尽量避免在水溶液的状态保存)。
3. 标记好的蛋白质请在0-5 ℃保存 (加入0.1%的叠氮钠等防腐剂)。
使用步骤:
1. 配制溶液
1) NaHCO3缓冲液
在含有NaHCO3粉末的容器中加入10ml超纯水溶解。
2) PBS缓冲液
在100ml容量瓶中加入1片PBS，先用少量超纯水溶解后，再用超纯水补充至100ml，制成10mmol/l的PBS缓冲液。
3) 蛋白质溶液
在样品管中精确称量1.0-5.0mg蛋白质并记录称量值后，用移液器加入500μl操作步骤1)中的NaHCO3缓冲液。盖上盖子后，用漩涡振荡器等搅拌溶解蛋白质。
4) Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液
在1支含有Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu的管子中加入适量纯水溶解。为了控制标记率，根据不同的标记对象，请参考表1调整Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液的浓度及加入量。
＊由于Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu易水解，溶解后请尽快标记。
2. 生物素标记操作方法
1) 请参考表1在配制好的蛋白质溶液中加入合适浓度和用量的Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu溶液。
2) 盖紧盖子充分混合后，在25 ℃水浴恒温摇床中培养2h。
表1 Biotin-(AC5)2Sulfo-OSu标记各种蛋白质的标记率
以上数据为本公司实际检测的结果，如实验条件变动，
结果有可能改变。标记率是根据HABA法测得。
a) 1mol蛋白质：生物素的摩尔数
b) 1mol蛋白质上所结合的生物素的摩尔数
3. 蛋白质标记后的凝胶过滤纯化
1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。
2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。
3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。
4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。
＊经过层析，生物素标记蛋白质的最终浓度为标记时的1/2。
按照下列公式计算生物素标记蛋白质的最终浓度：
A (mol/l) = (X/MWprotein) × (1,000/Y) × 0.5
X：蛋白质的重量
MWprotein：蛋白质的分子量
Y：溶解蛋白质的NaHCO3缓冲液体积
常见问题Q&A
| Q1:如何存储标记的蛋白质？ |
| A:将标记的蛋白质存放在冰箱中。另外，添加0.1％叠氮化钠作为防腐剂。 |
| Q2:生物素标记试剂在水溶液中稳定吗？ |
| A:试剂盒中使用的生物素-（AC5）2 Slufo-OSu处于水溶液中时，由于它会水解，因此无法存储在水溶液中。使用前请做好准备。另外，即使在粉末状态下，也要注意由于吸湿引起的劣化。 |
参考文献
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Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)
