日本同仁化学Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒- DOJINDO

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Glutamate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光，防潮

运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

产品文献

选择规格：

1set

现货

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

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试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glutamine Assay Kit-WST 谷氨酰胺的定量检测

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NO.4. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.5. Mito-FerroGreen 铁离子荧光探针

试剂盒内含

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

操作步骤

　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。 Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 10⁶ cells) 　药物处理时间：48 h

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？

A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Q2：配制后的Working solution可以保存多久？

A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。

Q3：是否可以定量D-Glutamate？

A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。

Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。

Q5：待测样品可以保存吗？

A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6：为什么我的样品孔没有显色？

A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

日本同仁化学Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒- DOJINDO

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Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291

Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 适合组织检测

● 配有标准品，可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

下载说明书

产品文献

选择规格：

50tests

现货

组织/细胞检测

试剂盒配套计算器（点击查看下载）

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

活动进行中

试剂盒内含

产品概述

原理

金属离子选择性

加标回收实验

实验例

参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.5. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

试剂盒内含

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一，生物体内铁元素的含量虽少，但有着重要的生理作用。近年来，随着铁死亡概念的提出，细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒相比，可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度，即可确定组织样品中的二价铁含量。同时，还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁，以确定总铁含量，进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

金属离子选择性

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

加标回收实验

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

实验例

组织样品中的Fe²⁺和 Fe³⁺的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织。

2. 加入 1 ml冷 PBS，移液器吹打 20次， Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min，去除上清。

3. 将样品转移至研钵，加入液氮充分研磨成粉末后，加入 1.3 ml Assay Buffer，回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。（为防止样品温度上升，每 1 min间隔置于冰浴上 20 s）。

5. 16,000 g离心 10 min，除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液，每管分别加入 400 μl上清液，制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管中加入 Reducer solution。（参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl）。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2，加入至 96孔板中 37 培养 60 min，检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”，自动计算出二价铁和三价铁浓度。

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

参考文献

No.	检测对象	引用 (含链接)	影响因子
1	组织 (小鼠肿瘤组织)	H. Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Self-assembled FeS-based cascade bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger robust cancer immunotherapy”, Acta Pharm. Sin. B, 2021, doi:10.1016/j.apsb.2021.05.005.	7.097
2	细胞 Kasumi-1 (人急性白血病细胞)	L. Zhang, Y. Song, K. Cao, Y. Du, M. Han, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Hepcidin-Based Nanocomposites for Enhanced Cancer Immunotherapy by Modulating Iron Export-Mediated N6-Methyladenosine RNA Transcript”, Adv. Funct. Mater., 2021, doi: 10.1002/adfm.202107195.	18.808
3	细胞 (II型肺泡细胞)	H. Cheng, D. Feng, X. Li, L. Gao, S. Tang, W. Liu, X. Wu, S. Yue, C. Li, Z. Luo, “Iron deposition-induced ferroptosis in alveolar type II cells promotes the development of pulmonary fibrosis”, Biochim. Biophys. Acta, Mol. Basis Dis., 2021, doi: 10.1016/j.bbadis.2021.166204.	5.187
4	细胞 MV4-11; Kasumi-1; NB4 (白血病细胞)	Y. Du, M. Han, K. Cao, Q. Li, J. Pang, L. Dou, S. Liu, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Gold Nanorods Exhibit Intrinsic Therapeutic Activity via Controlling N6‑Methyladenosine Based Epitranscriptomics in Acute Myeloid Leukemia”, ACS Nano, 2021, doi: 10.1021/acsnano.1c05547.	15.881
5	组织 (人软骨组织)	H. Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Contribution of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression”, EBioMedicine, 2022, doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103847.	8.143
6	组织 (小鼠肺、肝脏、肾脏)	T. Wu, X. Wang, M. Chen, X. Zhang, J. Zhang, J. Cheng, L. Kong, M. Tang,”Respiratory exposure to graphene quantum dots causes fibrotic effects on lung, liver and kidney of mice”, Food Chem. Toxicol., 2022, doi: 10.1016/j.fct.2022.112971.	6.023
7	组织 (小鼠海马组织)	T. Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, “Nitrogen‑doped graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium homeostasis in microglia”, Part. Fibre Toxicol., 2022, doi: 10.1186/s12989-022-00464-z.	9.4
8	组织 (宫颈管粘膜)	T. Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and R. Ju, “Persistent ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV infection”, 2022, Cell Death Discovery, doi: 10.1038/s41420-022-01013-5.	5.241
9	组织 (小鼠肺组织)	M. Li, L. Fu, B. Lv, Y. Xiang, H. Xiang, D. Xu, H. Zhao, “Arsenic induces ferroptosis and acute lung injury through mtROS-mediated mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane dysfunction”, Ecotoxicol. Environ. Saf., 2022, doi: 10.1016/j.ecoenv.2022.113595.	6.291
10	细胞 BEL-7402, SMMC-7721 (人肝癌细胞系)	L. Guan, F. Wang, M. Wang, S. Han, Z. Cui, S. Xi, H. Xu and S. Li, “Downregulation of HULC Induces Ferroptosis in Hepatocellular Carcinoma via Targeting of the miR-3200-5p/ATF4 Axis”, 2022, Oxid. Med. Cell. Longevity, doi: 10.1155/2022/9613095.	6.543
11	组织 (小鼠肺部组织)	Z. Zeng, H. Huang, J. Zhang, Y. Liu, W. Zhong, W. Chen, Y. Lu, Y. Qiao, H. Zhao, X. Meng, F. Zou, S. Cai, H. Dong, “HDM induce airway epithelial cell ferroptosis and promote inflammation by activating ferritinophagy in asthma”, FASEB J., 2022, doi: 10.1096/fj.202101977RR.	5.191
12	组织 (大豆叶片)	Y. Cheng, H. Zhang, W. Zhu, Q. Li, R. Meng, K. Yang, Z. Guo, Y. Zhai, R. Ji, H. Peng, D. Dou, M. Jing, “Ferroptosis induced by the biocontrol agent Pythium oligandrum enhances soybean resistance to Phytophthora sojae”, Environ. Microbiol., doi: 10.1111/1462-2920.16248.	5.476
13	组织 (小鼠睾丸组织)	Y. Zhao, H. Zhang, J. Cui, J. Wang, M. Chen, H. Wang, X. Li, J. Li, “Ferroptosis is critical for phthalates driving the blood-testis barrier dysfunction via targeting transferrin receptor”, Redox Biol., 2022, doi: 10.1016/j.redox.2022.102584.	10.787
14	组织 (小鼠结肠组织)	F. Yang, Y. Chen, Y. Xiao, H. Jiang, Z. Jiang, M. Yang, M. Li, Y. Su, Z. Yan, Y. Lin, D. Li, “pH-sensitive Molybdenum (Mo)-based polyoxometalate nanoclusters have therapeutic efficacy in Inflammatory Bowel disease by counteracting ferroptosis”, Pharmacol. Res., 2023, doi: 10.1016/j.phrs.2023.106645.	10.334
15	组织 (小鼠肺部组织)	W. Tang, J. Qin, Y. Zhou, W. Wang, F. Teng, J. Liu, L. Yi, J. Cui, X. Zhu, S. Wang, J. Dong, Y. Wei, “Regulation of ferroptosis and ACSL4-15LO1 pathway contributed to the anti-asthma effect of acupuncture”, Int. Immunopharmacol., 2023, doi: 10.1016/j.intimp.2022.109670.	5.714
16	组织 (小鼠心脏组织)	H. Hu, L. Li, H. Zhang, Y. Zhang, Q. Liu, M. Chen, J. Ning, Y. Pang, W. Hu, Y. Niu, R. Zhang, “Mechanism of YY1 mediating autophagy dependent ferroptosis in PM2.5 induced cardiac fibrosis”, Chemosphere, 2023, doi: 10.1016/j.chemosphere.2023.137749.	8.943
17	细胞 (HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)	L. Kang, D. Wang, T. Shen, X. Liu, B. Dai, D. Zhou, H. Shen, J. Gong, G. Li, Y. Hu, P. Wang, X. Mi, Y. Zhang, X. Tan, “PDIA4 confers resistance to ferroptosis via induction of ATF4/SLC7A11 in renal cell carcinoma”, Cell Death Dis., 2023, doi: 10.1038/s41419-023-05719-x.	9.685
18	细胞 (HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)	C. Dong, C. Song, Z. He, Q. Song, T. Song, J. Liu, Y. Xiong, X. Su, J. Zhou, X. Yang, W. Liao, “Protective efficacy of Schizandrin B on ameliorating nephrolithiasis via regulating GSK3β/Nrf2 signaling-mediated ferroptosis in vivo and in vitro”, 2023, Int. Immunopharmacol., doi:10.1016/j.intimp.2023.110042.	5.714
19	组织 (小鼠肺部组织)	B. Guo, Z. Zuo, X. Di, Y. Huang, G. Gong, B. Xu, L. Wang, X. Zhang, Z. Liang, Y. Hou, X. Liu, Z. Hu, “Salidroside attenuates HALI via IL-17A-mediated ferroptosis of alveolar epithelial cells by regulating Act1-TRAF6-p38 MAPK pathway”, 2022, Cell Commun. Signaling, doi: 10.1186/s12964-022-00994-1.	7.525
20	组织 (小鼠睾丸组织)	J. Ding, B. Lu, L. Liu, Z. Zhong, N. Wang, B. Li, W. Sheng, Q. He, “Guilu-Erxian-Glue alleviates Tripterygium wilfordii polyglycoside-induced oligoasthenospermia in rats by resisting ferroptosis via the Keap1/Nrf2/GPX4 signaling pathway”, Pharm. Biol., 2023, doi:10.1080/13880209.2023.2165114.	3.889
21	细胞 (人髓核细胞)	X. Yang, Y. Chen, J. Guo, J. Li, P. Zhang, H. Yang, K. Rong, T. Zhou, J. Fu, J. Zhao, “Polydopamine Nanoparticles Targeting Ferroptosis Mitigate Intervertebral Disc Degeneration Via Reactive Oxygen Species Depletion, Iron Ions Chelation, and GPX4 Ubiquitination Suppression”, Adv. Sci., 2023, doi:10.1002/advs.202207216.	17.521
22	组织 (小鼠心脏组织)	J. Pan, W Xiong, A. Zhang, H. Zhang, H. Lin, L. Gao, J. Ke, S. Huang, J. ZHang, J. Gu, A. Chang, C. Wang, “The Imbalance of p53–Park7 Signaling Axis Induces Iron Homeostasis Dysfunction in Doxorubicin-Challenged Cardiomyocytes”, Adv. Sci, 2023, doi:10.1002/advs.202206007.	17.521
23	细胞 (H9c2, 4T1)	T. Chen, Y. Qin, Y. Li, Y. Li, J. Luo, L. Fan, M. Feng, Z. Wang and Y. Zhao, “Chiral Polymer Micelles Alleviate Adriamycin Cardiotoxicity via Iron Chelation and Ferroptosis Inhibition”, Adv. Funct. Mater., 2023, doi:10.1002/adfm.202300689.	19.923
24	细胞 (乳腺癌细胞)	Z. ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J. Tang., “GATA3 mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction in breast cancer cells”, Drug Resistance Updates, 2023, doi:10.1016/j.drup.2023.100974.	22.841
25	组织（the brains of 3 × Tg-AD mice）	Xinlu Li, Jianfeng Chen, Wennuo Feng ,Chao Wang, Minyu Chen, Yifan Li, Jinghong Chen, Xinwei Liu, Qiong Liu, Jing Tian,“Berberine ameliorates iron levels and ferroptosis in the brain of 3 × Tg-AD mice”2023, PHYTOMEDICINE, doi:10.1016/j.phymed.2023.154962	7.9
26	组织（Testicular tissues）	Lipeng Li , Zijie Pei , Ruiting Wu , Yaling Zhang , Yaxian Pang , Huaifang Hu , Wentao Hu , Zihan Geng , Tengfei Feng , Yujie Niu , Guimin Hao , Rong Zhang“FDX1 regulates leydig cell ferroptosis mediates PM2.5-induced testicular dysfunction of mice”，Ecotoxicology and Environmental Safety，2023，doi.org/10.1016/j.ecoenv.2023.115309	6.8
27	细胞（macrophage）	Wenlin Yuan , Yuting Yang , Yingming Wei , Xufei Yu , Jiaqi Bao , Jiahui Zhong , Zhongxiu Wang , Lili Chen“Macrophage ferroptosis promotes MMP2/9 overexpression induced by hemin in hemorrhagic plaque”，Thromb Haemost，2023，doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110916	6.7
28	细胞（HT-22）	Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097	7.0

日本同仁化学超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311- DOJINDO

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超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST

SOD Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 可以检测细胞、组织等多种样品

● 准确性和灵敏度高

● 可以测定100%SOD抑制率

下载说明书

产品文献

SDS下载

选择规格：

100tests

现货

氧化应激与自由基检测方案

试剂盒配套计算器（点击查看下载）

活动进行中

产品概述

检测原理

所需设备和材料

操作步骤

抑制曲线

实验例

食品抗氧化能力的检测

常见问题Q&A

参考文献

活动进行中

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.2. ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA- ROS检测

NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.4. Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric 细胞凋亡检测

NO.5. DMPO 超氧阴离子和羟自由基检测

产品概述

超氧化物歧化酶 (SOD) 是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子 (O₂^–) 的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑 (氮蓝四唑NitroblueTetrazolium ，简称NBT) 的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是NBT法存在一些缺点，例如生成的甲臜 (Formazan dye) 的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST^®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST^®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O₂^–) 反应生成一种水溶性的染料。WST^®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制 (见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST^®-1反应才能发生)。因此SOD或者SOD类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定。

特点
1)可以测定100%SOD抑制率。
2)不需要甲醛溶解操作，操作简单。
3)一次可以进行多样本的测定。
4)由于灵敏度高，可以提高样品的稀释倍率，所以可以抑制干扰物质带来的影响。

检测原理

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

所需设备和材料

2-20 µl和20-200 µl的可调式移液器、多通道移液器，酶标仪（450 nm）、96孔板、37℃培养箱

操作步骤

用96孔板，制作样品到检测可在1小时内完成

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

抑制曲线

Cu,Zn-SOD的抑制曲线

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

实验例

高知大学的岛村等人对石茶制作的每一步都测定了其SOD活性。据报道，在制造过程中和微生物相关的需氧发酵和厌氧发酵极大地增加了SOD样活性，并且在发酵过程中抗氧化能力随着茶提取物成分的变化而改变。

“ 石茶生产过程中儿茶素含量和超氧阴离子清除活性的变化”，日本食品科学技术学会学报，55（12），640

超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

L：新鲜树叶

SL：蒸煮的树叶

PFL：预发酵（有氧条件下发酵几天）树叶

FL：发酵（在厌氧条件下发酵数天）树叶

DL：晒干（数天）树叶

食品抗氧化能力的检测

我们知道，许多由呼吸和各种外在因素产生的活性氧，会降低机体功能，促进各种疾病的发病和老化。
有越来越多对这此类现象的防御机制(抗氧化能力)的文章出现，关于利用食品所具有的抗氧化能力维持健康、预防疾病的研究也备受关注。

常见问题Q&A

Q1：“1 Unit”的定义是什么？

A1：1 Unit是指样品中的还原性染料（如细胞色素C，WST-1，NBT或XTT）与超氧阴离子之间的比色反应，50%被抑制时的点。例如如果不含任何SOD的样品溶液的O.D.值为1.0的话，那么另一个O.D.值为0.5的样品则被定义为具有1个单位的酶活性。可以使用这个单位来确定样品中的

SOD活性。使用不同染料或方法检测SOD活性，它们之间不具有可比性。

Q2：我能使用SOD标准品来确定样品溶液的SOD活性吗？

A2：可以。制备标准曲线，确定样品溶液的SOD活性。SOD Bovine Erythrocytes

（CAS# 9054-89-1，EC 1.15.1.1）能够从Sigma（Catalog# S2525）购得。

Q3：是否可以用动力学法来测定SOD活性？

A3：可以。因为在20分钟内的生色比率是保持一致的，可以测量直线上升阶段5分钟内的斜率来测定SOD活性。

Q4：如果样品自身带有较深的颜色，这样的样品可以使用吗？

A4：可以。稀释样品可以减小干扰，将样品孔的O.D.值减去Blank 2的O.D.值就可以扣除本底的颜色。但是如果样品溶液的SOD活性过低是不能检测出的。

Q5：如何能够制备更多的Dilution Buffer？

A5：Dilution Buffer为PBS。请按以下浓度配制：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，

1.47 mM KH₂PO₄， 8.1 mM Na₂HPO₄，pH 7.4。

Q6：使用该试剂盒能否分别检测Mn-SOD和Cu/Zn-SOD？

A6：可以。要单独检测Mn-SOD活性，可以添加KCN阻断Cu/Zn-SOD活性。向样品中加入

1 mM的KCN可以完全阻断Cu/Zn-SOD活性。要测定Cu/Zn-SOD的活，可以用总的SOD活性减去Mn-SOD活性，就可以得到。

Q7：怎样保存样品？

A7：在-80℃可以保存1年。

Q8：能否使用该试剂盒检测超氧化物阴离子的水平？

A8：不必用这个试剂盒，可以使用WST-1来检测超氧化物。但是必须有一个检测样品溶液中超氧化物量的标准。因为超氧化物不稳定，而且会和其它物质反应，要确定系统中生成的超氧化物的总量是比较困难的。试剂盒中的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以被用作检测每个样品中超氧化物相对生成量的标准。

参考文献

1. Manganese superoxide dismutase polymorphism affects the oxidized low-density lipoproteininduced apoptosis of

macrophages and coronary artery disease, European Heart Journal, 2008, 29, 1267-1274

2. Extracellular Superoxide Dismutase Accelerates Endothelial Recovery and Inhibits In-Stent Restenosis in Stented

Atherosclerotic Watanabe Heritable Hyperlipidemic Rabbit Aorta,

Journal of the American College of Cardiology, 2007, 50, 2249-2253

3. An Abnormal Mitochondrial–Hypoxia Inducible Factor-1-Kv Channel Pathway Disrupts Oxygen Sensing and Triggers

Pulmonary Arterial Hypertension in Fawn Hooded Rats: Similarities to Human Pulmonary Arterial Hypertension,

Circulation, 2006, 113, 2630-2641

4. Deficient plastidic fatty acid synthesis triggers cell death by modulating mitochondrial reactive oxygen species,

Cell Research, 2015, 25, 621-633

5. A Tau-Targeted Multifunctional Nanocomposite for Combinational Therapy of Alzheimer’s Disease,

ACS Nano, 2018, 12(2), 1321-1338

6. Endothelial Cell Palmitoylproteomic Identifies Novel Lipid-Modified Targets and Potential Substrates for Protein Acyl

Transferases, Circulation Research, 2012, 110(10), 1336-44

7. Lung EC-SOD overexpression attenuates hypoxic induction of Egr-1 and chronic hypoxic pulmonary vascular remodeling,

American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2008, 295, L422-L430

8. Inhaled Ethyl Nitrite Prevents Hyperoxia-impaired Postnatal Alveolar Development in Newborn Rats,

American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2007, 176, 291-299

9. In vivo guiding nitrogen-doped carbon nanozyme for tumor catalytic therapy,

Nature Communications, 2018, 9(1), 1440

10. A lytic polysaccharide monooxygenase-like protein functions in fungal copper import and meningitis,

Nature Chemical Biology, 2020, doi.org/10.1038/s41589-019-0437-9

11. Nestin regulates cellular redox homeostasis in lung cancer through the Keap1-Nrf2 feedback loop,

Nature Communications, 2019, 10, 5043

12. Allelopathic interactions of linoleic acid and nitric oxide increase the competitive ability of Microcystis aeruginosa,

The ISME Journal, 2017, 11, 1865-1876

13. Phase I Study of Copper-Binding Agent ATN-224 in Patients with Advanced Solid Tumors,

Clinical Cancer Research, 2008, 14, 7526-7534

14. Chemoprevention of Carcinogenic Progression to Esophageal Adenocarcinoma by the Manganese Superoxide Dismutase

Supplementation, Clinical Cancer Research, 2007, 13, 5176-5182

15. Development of insulin resistance and obesity in mice overexpressing cellular glutathione peroxidase,

日本同仁化学Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测

氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶，被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素，但在氧化应激中，诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。

抗氧化能力

活性氧

谷胱甘肽

DNA损伤

脂质过氧化物

铁离子

谷氨酰胺、谷氨酸

自由基

NO研究

品名货号用途

Glutamine Assay Kit-WST试剂盒	G268	谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒	G269	谷氨酸的定量检测

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。 Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 G268 谷氨酰胺的定量检测

日本同仁化学Cell Cycle Assay Solution Blue试剂货号：C549 细胞周期检测试剂盒-蓝色- DOJINDO

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Cell Cycle Assay Solution Blue试剂货号：C549 细胞周期检测试剂盒-蓝色

Cell Cycle Assay Solution Blue

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·检测时间短

·固定和不固定都可以用

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日本同仁化学Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号：C548 细胞周期检测试剂盒-深红色- DOJINDO

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Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号：C548 细胞周期检测试剂盒-深红色

Cell Cycle Assay Solution Deep Red

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日本同仁化学ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552- DOJINDO

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ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

ADP/ATP比率检测试剂盒

ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

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特点：

●可获得稳定的ADP/ATP比值

●溶液配制后可以保存

●冷藏保存(无需解冻操作)

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ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

产品解说

产品概述

参考文献

规格性状

检测原理

与其他公司产品比较

实验例

常见问题Q&A

产品解说

产品概述

通常情况下，当细胞内ATP浓度降低时，会由二磷酸腺苷(ADP)重新合成为ATP，以维持细胞内一定的ATP浓度。当产生ATP的相关代谢发生紊乱时，ADP无法再合成为ATP，ATP却不断地分解成为ADP，导致ADP/ATP的比例上升。而ADP/ATP比率的变化与细胞凋亡、细胞自噬、能量代谢等诸多途径息息相关，因此经常被作为细胞活性的指标之一检测。

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

参考文献

1、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”，2023, Advanced Science, doi：10.1002/advs.202302136

2、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, and Xinquan Jiang，“Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration”，2023，Advanced Science ，DOI: 10.1002/advs.202302136

3、Takeshi Ikizawa , Kazutaka Ikeda, Makoto Arita, Shojiro Kitajima , Tomoyoshi Soga , Hidenori Ichijo, and Isao Naguro，“Mitochondria directly sense osmotic stress to trigger rapid metabolic remodeling via regulation of pyruvate dehydrogenase phosphorylation”，2022，Research Article，doi.org/10.1016/j.jbc.2022.102837

规格性状

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

检测原理

本试剂盒可以检测细胞中ADP与ATP的比率。首先用萤火虫荧光素酶法检测细胞内的ATP。

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

之后用酶将细胞内的ADP全部转化为ATP，再用相同的发光原理检测ATP，即可算出细胞内ADP/ATP的比率。

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

与其他公司产品比较

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

本试剂盒的检测结果，不受ATP和ADP的总量影响，比值的结果稳定。

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

实验例

使用Staurosporine诱导细胞凋亡后，用本试剂盒检测细胞中ADP/ATP的比值。另外，用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI染料标记的Staurosporine诱导凋亡的细胞。

结果显示，Staurosporine诱导后的细胞中ADP/ATP的比例明显上升。相同条件的细胞中也观察到磷脂酰丝氨酸(PS)的外翻以及细胞膜破损。说明凋亡细胞中的ADP/ATP的比率上升。

＜ADP/ATP比的检测结果＞

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

常见问题Q&A

Q：一个试剂盒可以检测多少个样品？

A：按照每个样品3个复孔计算，可以检测32个样品，96孔板的孔板设置请参考说明书。

Q：检测时是否可以用白色96孔板以外的孔板？

A：黑色和透明孔板都会造成发光强度的降低，透明孔板还会导致背景升高。因此建议使用白色96孔板。

Q：配制好的working solution是否可以保存？

A：本试剂盒共包含4种working solution，ADP working solution无法保存，请现配现用。其他3种的保存条件及保存时间如下：

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

Q：确定最佳细胞数的方法是什么？

A：配制梯度浓度的细胞悬液播种至孔板中，按照最终实验相同的条件进行培养。使用本试剂盒制作标准曲线(参照图1)，选择呈直线性的范围，并且ADP/ATP比率(参考图2)在相对稳定的范围内进行最终实验的检测。下图的情况，最细胞数的范围是2,000~4,000个。

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence货号：A552

Q：发光法检测波长为多少？

A：由于是通过萤光素检测，所以检测波长为556 nm。

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线粒体呼吸

ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence	A552	检测细胞中ADP与ATP的比率
Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒	E297	氧消耗量检测
Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒	CK18	ATP活性检测
Glutamine Assay Kit-WST试剂盒	G268	谷氨酰胺的定量检测
Glutamate Assay Kit-WST试剂盒	G269	谷氨酸的定量检测
NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒	N509	NAD/NADH检测试剂盒
NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒	N510	NADP/NADPH检测

日本同仁化学Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）- DOJINDO

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Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06

脂滴荧光检测（深红色）

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red

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特点：

● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

● 多种颜色可供选择

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Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

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试剂盒内含

概述

原理

特点

实验例

脂肪滴产品选择指南

参考文献

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NO.5. Mitophagy Detection Kit 线粒体自噬检测

试剂盒内含

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

概述

同仁化学研究所研发的Lipid Droplet Assays Kit-Blue＆Deep Red试剂盒，与油红O和尼罗红不同，只需简单操作即可选择性的检测LDs。与尼罗红相比试剂盒中的染色剂，具有更好的选择性，从而将荧光背景降低到最小值。此外，试剂盒中的Loading Buffer可维持检测过程中细胞的状态完好。本试剂盒可使用流式细胞仪检测活细胞或固定细胞，也可用于荧光酶标仪进行高通量检测。

原理

脂滴(脂肪滴，Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成，主要包括甘油三酯和胆固醇酯，其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在，在真核生物中也普遍存在。最新的研究表明，以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器，但最近的研究表明其在调节脂质代谢¹⁾，自噬²⁾和细胞衰老³⁾等方面都起着重要作用，因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针，可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后，无须洗涤即可观察到脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

Lipid Droplet Assay Kit中使用的荧光染料可用于活细胞和固定细胞。因此，与使用比色法试剂相比可以大大缩短检测所需的时间。此外，由于染料不会沉积在孔板上，所以可以提高实验的重现性。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

实验例

实验例1：孔板检测实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到A549细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂）分别加入到HeLa细胞中，并使用Lipid Droplet Assay Kit对脂滴的变化进行定量。结果表明，与对照和加入Triacsin C的细胞相比，加入油酸的细胞中脂滴量有所增加。

Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂货号：LD06 脂滴荧光检测（深红色）

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

参考文献

1. Fujimoto,T.et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits”Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2. Singh,R.et al., “Autophagy regulates lipid metabolism”Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3. Yokoyama, M.et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity”Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

4. Oka, M.et al., “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

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ADP/ATP比率检测试剂盒

日本同仁化学Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）- DOJINDO

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Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05

脂滴荧光检测（蓝色）

Lipid Droplet Assay Kit-Blue

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● 高特异性脂滴定位

● 可流式定量检测

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实验例

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凑单关联产品TOP5

NO.1. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit 细胞凋亡检测

NO.2. Lipid Droplet Assay Kit-Blue 脂滴荧光检测（蓝色）

NO.3. Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red 脂滴荧光检测（深红色）

NO.4. Glucose 葡萄糖摄取检测

NO.5. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

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Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

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原理

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

特点

特点1：定量专用试剂盒

试剂盒包含所需的工作液和缓冲液、可以简便实现定量脂滴。

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

特点2：大幅度缩短操作，活细胞也可以使用

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实验例

实验例1：孔板检测实验例

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

<检测条件>

Blue：Ex: 376 – 386 nm、 Em: 435 – 455 nm

Deep Red ：Ex: 623 – 633 nm、 Em: 649 – 669 nm

实验例2：流式细胞术的实验例

Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂货号：LD05 脂滴荧光检测（蓝色）

< 检测条件>

Blue：Ex: 405 nm、 Em: 425 – 475 nm

Deep Red ：Ex: 640 nm、 Em: 650 – 670 nm

脂肪滴产品选择指南

	产品名称	规格	货号
成像(成像) 脂滴荧光探针	Lipi-Blue	10 nmol	LD01
	Lipi-Green	10 nmol	LD02
	Lipi-Red	100 nmol	LD03
	Lipi-Deep Red	10 nmol	LD04
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Blue	1 set	LD05
定量（荧光酶标仪，FCM）脂滴荧光检测试剂盒	Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red	1 set	LD06

参考文献

1. Fujimoto,T.et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits”Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.

2. Singh,R.et al., “Autophagy regulates lipid metabolism”Nature, 2009, 458(7242), 1131.

3. Yokoyama, M.et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity”Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

4. Oka, M.et al., “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Classical Brown Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373.

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日本同仁化学脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

脂肪酸摄取测定试剂盒

Fatty Acid Uptake Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：常温

特点：

● 灵敏度高，操作简便

● 操作简单三步即可完成实验

● 无需清洗细胞

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期货

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

产品解说

试剂盒内含

产品概述

检测产品优势

选择指南

产品Q&A

产品解说

试剂盒内含

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

产品概述

该试剂盒使用Fatty Acid Uptake Probe作为脂肪酸类似物，通过位于细胞膜表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞，可以通过荧光显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪等荧光测量方法检测细胞的摄取能力。此外，该试剂盒配备了Quenching Buffer，可消除未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe的荧光，因此无需清洗细胞也可以检测。

检测产品优势

为什么脂肪酸摄取能力越来越受到关注？

脂肪酸是为生物体供应能量的重要物质。脂肪酸摄取能力不仅与肥胖和糖尿病等疾病有关，也是癌细胞的代谢指标之一（左下图）。细胞增殖活跃的癌细胞往往需要很多脂质，所以细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取很活跃（右下图）。因此，以癌细胞的脂肪酸代谢途径为目标，开发了很多药物。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

用单个试剂盒即可解决整个脂肪酸摄取实验！

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

本试剂盒所内含的脂肪酸类似物通过脂肪酸转运体被转运至细胞内，再通过荧光探针（荧光法）检测该类似物的摄入量【检测原理】。Quenching buffer可以省去清洗操作的麻烦和时间成本，进行检测【操作步骤】。

检测原理

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

操作步骤

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

检测仪器

HepG2细胞通过添加脂肪酸转运蛋白抑制剂CB-2，在不同仪器中检测其脂肪酸摄取能力的变化。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

选择指南

Washing Buffer或Quenching Buffer的选择指南

请参考下表，根据细胞种类和实验系统（操作和测量装置）选择Washing Buffer或Quenching Buffer。

〇：可测量、×：不可测量、△：参考注释

		Washing Buffer (10×)		Quenching Buffer
		贴壁细胞	悬浮细胞	贴壁细胞	悬浮细胞
清洗操作		必要		不需要
荧光酶标仪	底部读数（透明底）	〇		〇	△※1
	顶部读数	〇		×
荧光显微镜		〇		〇
激光共聚焦显微镜		〇		△※2
流式细胞仪		〇		×

※1接种的细胞需要覆盖板底（大约：3x105cells/well），使之静置一段时间，从而可检测在板底的贴壁细胞。

※2使用激光共聚焦显微镜时，请将Quenching Buffer用Washing Buffer稀释10倍后使用,如果不能使用ex:488nm,请使用ex:640nm进行检测。

实验例

确认细胞中脂肪酸代谢状态

在A549细胞中添加不含葡萄糖或含有25mmol/l葡萄糖的DMEM培养基，制备了正常状态（control）和饥饿状态（Starved）的两组细胞。使用本试剂盒对两组细胞进行染色，并使用荧光显微镜观察。

结果显示，在对照组细胞中，荧光素大多聚集在脂肪滴中，而在饥饿状态的细胞中荧光素主要集中在线粒体和内质网上。由此可看出在饥饿状态下的细胞脂肪酸代谢的变化。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

对照组细胞和饥饿组细胞的荧光图

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

*供参考的可检测数：35 mm dish 10块、 96孔板 1 块

产品Q&A

Q: 可用于哪些种类的细胞

A：在下述细胞中有使用实例。

细胞	由来
A549	人肺泡基底上皮腺癌细胞
HepG2	人肝癌细胞
HeLa	人宫颈癌细胞
Jurkat	人白血病T细胞
MOLT-4	人急性淋巴白血病细胞
3T3-L1 (preadipocyte)	前脂肪細胞
3T3-L1 (adipocyte)	脂肪細胞

Q: 将Fatty Acid Uptake Probe孵育进活细胞后，可以固定细胞吗？

A：<实验例>使用4%PFA固定染色后的细胞实验案例

Protocol:贴壁细胞

1. 将制备好的细胞接种在培养皿或96孔板上；

2. 用无血清培养基洗涤两次；

3. 加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO₂存在下）中静置孵育15 min;

4. 去除上清液，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃、5%CO₂存在下）中静置15 min；

5. 去除上清液，用Washing Buffer solution清洗1次；

6. 向细胞中加入4%PFA/PBS并在室温下孵育5 min；

7. 用PBS洗涤细胞3次，用荧光显微镜检测，荧光酶标仪检测。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

※固定会降低荧光强度

悬浮细胞

1. 取细胞样品至微管中；

2. 300×g离心5min，去除上清液;

3. 加入无血清培养基，300×g离心5min，去除上清液,重复两次;

4. 加入无血清培养基，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置15 min；

5. 300×g离心5 min，去除上清液;

6. 加入Fatty Acid Uptake Probe working solution，混匀细胞，在培养箱（37℃，5%CO2）中静置15 min ；

7. 300×g离心5min，去除上清液;

8. 用Washing Buffer solution清洗一次；

9. 加入4%PFA/PBS，混匀细胞，在室温下孵育5 min;

10. 300×g离心5 min，去除上清液;

11. 加入PBS，混匀细胞,300×g离心5 min，去除上清液；重复两次。

12. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

Q: 用荧光酶标仪检测时，应该用哪种板子？

A: 检测荧光，请使用细胞培养用的黑色孔板。

〇：可使用、×：不可使用、△：参考注释

		贴壁细胞		悬浮细胞
		不透明底	透明底	不透明底	透明底
Washing Buffer (10×)	Top Reading	〇		〇
	Bottom Reading	×	〇	×	〇
Quenching Buffer	Top Reading	×		×
	Bottom Reading	×	〇	×	△※

※接种的细胞需要覆盖板底，使之静置一段时间，从而可检测在板底的贴壁细胞。

〈使用Quenching Buffer时，悬浮细胞的数据〉

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

实验案例使用孔板：

厂家	产品名	Cat No.
ibidi	µPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

Q: Fatty Acid Uptake Probe working solution可以保存吗？

A：无法保存。

Q：背景较高怎么办？

A：样品中可能存在未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe。可重复使用Washing Buffer solution清洗，或者考虑使用Quenching Buffer。

Q：试剂盒可检测的样品数量是多少？

A：请参照下表。

贴壁细胞

悬浮细胞

培养皿

（添加量）

6 well

(1.5 ml/well)

24-well

(0.3 ml/well)

96-well

(0.1 ml/well)

35-mm dish

(1.5 ml/well)

1.5-ml microtube

(0.5 ml/tube)

样本数

7 sample

34 sample

100 sample

7 sample

20 sample

Q：使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测，应该怎么做？

A：使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测时，请将Quenching Buffer用Washing Buffer solution稀释10倍后使用，或者使用640nm激发光检测。

<用用激光共焦显微镜进行透射光观察时所看到的现象>

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

Q：可以进行脂肪酸定量吗？

A：不能使用本产品定量脂肪酸。

Q：可以量化细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe吗？

A：无法定量细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe。该试剂是为了确认脂肪酸摄取能力的增减的配合用试剂。

Q：可以和其他荧光染料共染吗？

A：Fatty Acid Uptake Probe是使用红色荧光观察。因此，请使用绿色或者红色荧光检测以外的试剂进行共染色。

与本公司线粒体染色试剂MitoBright LT Deep Red（MT12）共染色的实绩。

〈进入红色荧光〉

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

〈与MitoBright LT Deep Red共染色〉

1. 制备细胞样品接种到培养皿或者孔板中；

2.去除培养基，用无血清培养基洗涤两次；

3.加入无血清培养基，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置15 min；

4.去除上清液后，添加Fatty Acid Uptake Probe working solution，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置15 min；

5. 去除上清液后，添加0.1µmol/l MitoBright LT working solution，在培养箱（37℃，5%CO₂）中静置30 min；

6. 去除上清液后，用HBSS洗涤两次；

7.加入HBSS并用荧光显微镜观察。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

Q: 荧光显微镜观察时有什么注意事项吗？

A：荧光显微镜观察时，如果持续照射激发光，Fatty Acid Uptake Probe的荧光可能会淬灭。请控制连续的激发光的照射次数。

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号：UP07

日本同仁化学α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：常温

特点：

● 检测结果的重现性好

● 可作为线粒体活性的指标

● 多角度了解细胞代谢变化

下载说明书

选择规格：

100tests

现货

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

产品解说

规格性状

产品概述

检测原理

检测操作

标准曲线的作成例

实验例

常见问题Q&A

产品解说

规格性状

100 tests

・Fluorescent Dye
・α-KG Standard
・Enzyme Mix
・Coenzyme
・Assay Buffer
・lysis Solution
・Control Buffer
・ALT Solution
・Reaction Buffer

×1
300 μl×1
×1
×1
6.5 ml×1
2 ml×1
25 ml×1
35 μl×1
5 ml×1

产品概述

α-酮戊二酸(α-KG)是TCA循环中重要的中间体。它被作为进入TCA循环的葡萄糖代谢物增加的指标以及谷氨酰胺代谢(Glutaminolysis,一种谷氨酰胺底物与α-KG反应的通路)增加的指标。α-KG在神经递质谷氨酸和γ-氨基丁酸（GABA）的产生中起着重要作用，不仅如此它还担负着一定的清除细胞内的活性氧的功能，是非常重要的细胞代谢指标之一。

检测原理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric可以定量检测α-酮戊二酸(α-KG)。通过检测反应生成的试卤灵(Resorufin)的荧光(Ex：530 – 560 nm、Em：580 – 600 nm)对细胞内的α-KG进行定量。另外，本试剂盒还可以通过使用96孔板进行多样品检测。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

检测操作

整个操作过程，从细胞的前处理到荧光酶标仪检测，只需要按照操作说明书的步骤添加试剂即可检测细胞内α-酮戊二酸(α-KG)的浓度。而且，本试剂盒专门针对同类型检测方法中普遍存在的结果重现性差的问题进行了优化，即使是第一次做α-KG检测实验的科研人员也可以放心使用。

► 结果重现性高的两个秘诀

1) 样品的前处理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

同类型的检测试剂盒在样品前处理时需要微量的pH调节、过滤膜过滤等操作，这是导致结果重现性差的原因之一。而同仁化学研究所的α-KG检测试剂盒，只需要按照说明书添加试剂，可以大幅减少前处理过程中产生的操作误差。

2) α-Ketoglutarate的检测

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

其他检测试剂盒使用与上图相同的原理，但是由于①和②的两步反应同时在96孔板里进行，这是造成误差的另一个重要原因。而同仁化学研究所的试剂盒将这两步反应分开进行，进一步降低了误差。

标准曲线的作成例

本试剂盒附带α-KG的标准品，可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20 μmol/l，请预先稀释样品再检测。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

实验例

Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化

阿霉素(Doxorubicin, DOX)可以作用于细胞周期的G2/M期，停止细胞的增殖并且细胞衰老，利用DOX作用于A549细胞，会导致胞内α-KG浓度增加。另外通过SG 03 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal检测细胞衰老、C548 Cell Cycle Assay Solution Deep Red / C549 Cell Cycle Assay Solution Blue检测细胞周期、MT09 JC-1 MitoMP Detection Kit检测线粒体膜电位的结果如下：

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化

Sulfasalazine(SSZ)可以抑制细胞的胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)。用SSZ刺激A549细胞后，细胞内的α-KG、ATP、GSH、细胞放出的谷氨酸等变化用下列方法进行了检测。结果发现，SSZ刺激后细胞内的ATP、谷胱甘肽(GSH)、谷氨酸的放出量均减少，而细胞内的α-KG和ROS水平增加。 α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

<使用产品>

・细胞内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・细胞内GSH：G263 GSSG/GSH Quantification Kit II

・细胞内ROS：R252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

・胞外谷氨酸：G269 Glutamate Assay Kit-WST

<实验条件>

细胞：A549细胞(1 x 106 cells) 暴露时间： 48 h

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

参考文献) Shogo Okazaki et al., “Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”. Cancer Sci., 2019, doi:10.1111/cas.14182.

NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化

NASH(非酒精性脂肪肝)的病变组织中有ATP、α-KG、NAD的量减少的特点。使用4周龄的高脂肪食物投喂(引发NASH)的1型糖尿病模型小鼠(STAM模型)的肝脏组织，检测其中的ATP、α-KG、NAD水平的变化。结果显示，NASH诱导后10周龄的小鼠组中ATP、α-KG、NAD的浓度降低。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例

<使用产品>

・组织内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・组织内NAD：N509 NAD/NADH Assay Kit-WST

<实验参考文献>

ATP	Francesco Bellanti, et al., “Synergistic interaction of fatty acids and oxysterols impairs mitochondrial function and limits liver adaptation during nafld progression”, Redox Biology, 2018, 15, 86-96.
α-KG	Jianjian Zhao, et al., “The mechanism and role of intracellular α-ketoglutarate reduction in hepatic stellate cell activation”, Bioscience Reports, 2020, 40, (3).
α-KG	Ali Canbay, et al., “L‑Ornithine L‑Aspartate (LOLA) as a Novel Approach for Therapy of Non‑alcoholic Fatty Liver Disease”, Drugs, 2019, 79, 39-44.
NAD	Jinhan He, et al., “Activation of the Aryl Hydrocarbon Receptor Sensitizes Mice to Nonalcoholic Steatohepatitis by Deactivating Mitochondrial Sirtuin Deacetylase Sirt3”, Mol. and Cell. Biol., 2013, 33, (10), 2047-55.

常见问题Q&A

Q1：每个试剂盒可以检测所少个样品？

A1：如果标准曲线和样品都采用3个复孔来计算，可以检测12个样品。具体的96孔板的样品孔排列实例请见说明书。

Q2：是否可以用黑色孔板以外的孔板（透明板或白色板）？

A2：用透明板或白色板无法准确的绘制标准曲线，请使用黑色96孔板进行实验

Q3：检测时样品没有显色，可能的原因有哪些？

A3：本试剂盒对α-KG的检测范围是0.2 μmol/l以上，样品中的α-KG浓度如果低于0.2 μmol/l无法检测出来。可以尝试降低样品前处理时的稀释倍率。

Q：配置好的Working Solution能否保存？

A：配置好的Working solution无法保存，请现配现用。另外，Working solution遇光不稳定，配制好后请用铝箔纸包裹避光。※避光、室温的条件下可保存2小时左右。

Q：检测样品是否可以保存？

A：操作说明书上的“—定量细胞内α-KG的样品制备—”的步骤5中得到的前处理样品在-20℃可以保存10天。冷冻保存后的样品会发生沉淀，请离心后取上清作为检测样品。※加入20 μl Lysis solution, 吹打混匀后8,000xg离心10 min，取上清。

Q：是否有组织样品的检测实例？

A：有小鼠肝脏组织的检测实例。

具体的实验步骤如下：

碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测

1.取大约100 mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液中。

※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品，否则残留的血液会影响检测结果。

2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。

3.将研磨后的样品回收至微管中，用500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液清洗研磨器，并将清洗后的液体也

一起转移到回收样品的微管中(共约1 ml)。

4.向回收样品的微管中加入1 ml预冷的超纯水，充分混合后在冰浴上静置5 min(共约2 ml)。

※由于溶液的粘性较高，有时会出现离心后难以分离的情况。此时，用25 g左右的细针头注射器不断

吸取/推出(大约20-30次)，直到可以顺畅的吹打溶液为止。

5.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min。

α-KG检测用样品的制备

6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液，加入200μl 1mol/l KH2PO4水溶液进行中和，混匀后在冰浴上

静置5 min。

7.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min，取1 ml上清液至新的微管中作为检测样品。

<检测时的注意事项>

※组织提取的样品无法保存，请在当天内完成检测。

※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一，吸取样品溶液时尽量缓慢，减少枪头中残留的样品溶液。

※在稀释标准品和样品的时候，使用0.5 mol/l KOH水溶液和1mol/l KH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。

<检测实例>

诱导非酒精性脂肪肝的小鼠肝脏组中α-KG量的变化

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261 α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

日本同仁化学Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256

乳酸检测试剂盒

Lactate Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

特点：

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 操作简便

● 灵敏度高最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸

● 试剂稳定性高

● 享有显色底物WST专利

下载说明书

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代谢宣传资料

葡萄糖乳酸检测

选择规格：

50 tests

200 tests

现货

代谢检测方案

产品解说

活动进行中

试剂盒内含

概述

原理

特点

乳酸标准曲线

实验例

常见问题Q&A

参考文献

产品解说

活动进行中

订购满5000元，200元礼品等你拿

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NO.5. MitoPeDPP 线粒体内脂质过氧化物检测

试剂盒内含

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

概述

乳酸是细胞的一种主要代谢途径-糖酵解的代谢产物，也是肌肉疲劳和高乳酸血症的重要生物标志物。它还可以作为监测细胞内代谢途径变化的标志物。此外最近的代谢研究表明，乳酸是组织和癌细胞的三羧酸循环中碳的主要来源。

Lactate Assay Kit-WST^®可用于定量检测糖酵解代谢产生的乳酸，并优化了定量过程。本试剂盒通过测定WST^®的显色反应来定量细胞上清液中的乳酸含量，可用96孔板检测，灵敏度高，最低可检测到0.02 mmol/l的乳酸。

WST^®：WST是日本同仁化学研究所的注册商标

原理

本试剂盒通过测定WST的显色反应来定量细胞上清或细胞内的乳酸含量。

另外，试剂盒中含有乳酸标准液，可以通过制备标准曲线来定量样品中的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

特点

特点1：操作简单，只需要加入试剂

只需在加入细胞裂解液的细胞上清液中加入试剂，培养即可。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

特点2：试剂稳定性高

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

乳酸标准曲线

可以从使用试剂盒中的乳酸标准液制作出乳酸标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的乳酸浓度。

当乳酸浓度在1 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

实验例

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用

1、在96孔板中接种1×10⁴个/孔的HeLa细胞(MEM培养基中含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素)，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

2、去除上清液后，在培养基中加入100 µl配制好的系列浓度的2-脱氧-D-葡萄糖溶液。

3、在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

4、培养后，吸取20 µl细胞上清液至1.5 ml微量管中，并用超纯水稀释8倍制备样品溶液，然后按照说明书的图3在每孔中加入20 µl样品溶液。

5、按照“配制乳酸标准液”的方法配制乳酸标准液。

6、在96孔板中按照说明书的图3在每孔中加入20 µl各种浓度的乳酸标准液。

7、在每孔中加入80 µl工作液。

8、在37℃培养箱中培养30 min。

9、用酶标仪测定450 nm的吸光度，并用标准曲线计算样品的乳酸浓度。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

2-脱氧-D-葡萄糖对糖酵解的抑制作用，随着2-脱氧-D-葡萄糖 (一种糖酵解抑制剂)浓度的增加，乳酸浓度逐渐减少

葡萄糖和乳酸的测定例

用葡萄糖测定试剂盒（货号：G264）和乳酸测定试剂盒检测（货号：L256）:检测将葡萄糖转运蛋白抑制剂Phloretin添加到Jurkat细胞时的代谢活性变化。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

■实验条件

细胞：Jurkat细胞（5×10⁵细胞）

药物：Phloretin（终浓度：100 µmol/l）

培养时间：过夜培养

■结果

Phloretin的添加抑制了葡萄糖的摄取，减少了葡萄糖的消耗，增加了培养基中葡萄糖的量，并减少了乳酸的量。

常见问题Q&A

Q：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸吗？

A：使用含有血清的培养基，可以测定培养上清液中的乳酸。
但是在含有血清的情况下，由于背景上升，需要测定培养基OD值并将其作为背景对照减去。
【参考数据】
含和不含10％FBS的吸光度比较

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

<结果>
在培养基中加入10％FBS的组吸光度大大升高，因此需要测定培养基作为背景对照。

Q：如何检测细胞内乳酸含量？

（1）用微量管收集1×10⁵的细胞^*1。

（2）以300×g离心2 min后去除上清液。

（3）加入300 μl的PBS，用移液器吹打使其重悬，再以300×g离心2 min后去除上清液。
（4）加入300 μl细胞裂解液^*2（0.1％Triton-X）并涡旋1 min，制成细胞裂解液。

（5）以8000×g离心5 min，收集上清液。
（6）将步骤（5）所得溶液用超滤离心管（PALL，No.OD010C3，滤膜分子量：10K）以12,000×g 离心10 min^*3去除蛋白质，得到待测样品。

*1、样品为HeLa细胞时，为了检测出0.02 mmol/l以上的乳酸含量，需要1×10⁵的细胞甚至更多。
*2、如果细胞裂解液中含有SDS会抑制显色，因此不要使用含有SDS的缓冲液。

*3、内源性乳酸脱氢酶（LDH）会导致背景增高，因此通过脱蛋白处理去除内源性乳酸脱氢酶

（LDH）。
※测定样品设定为3个复孔时（n=3），合计至少需要60 μl以上（每孔20 μl×3）。
※如果过滤后滤液不足60 μl，可适当延长过滤时间。
※稀释细胞裂解液至合适的浓度，使结果在标准曲线范围内（0-1 mmol/l）。

Q：配制后的Working Solution稳定性如何，可以保存多久？

A：Working Solution需要现配现用。
光会影响Working Solution的稳定性，所以配制后请用铝箔纸包裹。
配制后的Working Solution在室温避光条件下可以保存4 h。
（Working Solution遇到光，溶液的颜色会由红色变为橙色，背景会升高。）

Q：为什么我的样品孔没有显色？

A：样品中的乳酸浓度可能低于检测限（0.02 mmol/l）。
乳酸浓度低于0.02 mmol/l的样品无法用该试剂盒检测，因此请考虑其他方法，如LC-MS。
如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的乳酸浓度可能低于0.02 mmol/l。
请降低稀释比例，从而将检测样品的乳酸浓度调整到最低检测限以上。

Q：是否可以检测含有还原性物质的样品？

A：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量乳酸浓度。
实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂），
并将标准品孔和样品孔的吸光度分别减去药物对照的吸光度。

Q：该试剂盒可以定量D-Lactate吗？

A：该试剂盒是用于L-Lactate的定量，不能定量D-Lactate。

Q：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？

A：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。

Q：一个试剂盒可以检测样品的数量。

A：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Lactate Assay Kit-WST试剂盒货号：L256 乳酸检测试剂盒

96孔板排列示意图（n=3）

参考文献

编号	文献名	年分	IF
1	Hypoxia-induced exosomal circPDK1 promotes pancreatic cancer glycolysis via c-myc activation by modulating miR-628-3p/BPTF axis and degrading BIN1	2022	23.2
2	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine	2020	19.9
3	YAP mediates compensatory cardiac hypertrophy through aerobic glycolysis in response to pressure overload	2022	19.5
4	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nature Metabolism,2020, 2,81–96	2020	13.5
5	Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis, Biomaterials,2021, 269:120631	2020	12.8
6	Metabolome Analysis Reveals Excessive Glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK Signaling in Methotrexate-Resistant Primary CNS Lymphoma-Derived Cells, Clinical Cancer Research,2020, 26(11):2754-2766	2020	11.2
7	Inhibition of glycolytic activator PFKFB3 suppresses tumor growth and induces tumor vessel normalization in hepatocellular carcinoma	2021	9.8
8	Epigenetic silencing of LncRNA LINC00261 promotes c-myc-mediated aerobic glycolysis by regulating miR-222-3p/HIPK2/ERK axis and sequestering IGF2BP1	2021	8.8
9	PLEKHA5 regulates the survival and peritoneal dissemination of diffuse-type gastric carcinoma cells with Met gene amplification, Oncogenesis,2021, 10(3):25	2021	7.5
10	An iPSC-based neural model of sialidosis uncovers glycolytic impairment-causing presynaptic dysfunction and deregulation of Ca2+ dynamics	2021	7.1
11	Tumor cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic metabolism in lung cancer cells,Cancer Science,2020, 111(4):1241-1253	2020	6.7
12	Tumor cell-derived angiopoietin-like protein 2 establishes a preference for glycolytic metabolism in lung cancer cells	2020	6.5
13	Sodium-Glucose Co-Transporter 2 Inhibitors Correct Metabolic Maladaptation of Proximal Tubular Epithelial Cells in High-Glucose Conditions	2020	6.2
14	Metabolites Produced by a New Lactiplantibacillus plantarum Strain BF1-13 Isolated from Deep Seawater of Izu-Akazawa Protect the Intestinal Epithelial Barrier from the Dysfunction Induced by Hydrogen Peroxide	2022	6.1
15	MicroRNA-505, Suppressed by Oncogenic Long Non-coding RNA LINC01448, Acts as a Novel Suppressor of Glycolysis and Tumor Progression Through Inhibiting HK2 Expression in Pancreatic Cancer	2021	6.1
16	Matrine Promotes Human Myeloid Leukemia Cells Apoptosis Through Warburg Effect Mediated by Hexokinase 2, Frontiers in Pharmacology,2019, 10:1069	2019	5.8
17	Mutant KRAS drives metabolic reprogramming and autophagic flux in premalignant pancreatic cells	2021	5.8
18	Long Non-Coding RNA TMPO-AS1 Promotes GLUT1-Mediated Glycolysis and Paclitaxel Resistance in Endometrial Cancer Cells by Interacting With miR-140 and miR-143	2022	5.7
19	Circ_0002111/miR-134-5p/FSTL1 signal axis regulates tumor progression and glycolytic metabolism in papillary thyroid carcinoma cells	2022	5.5
20	SIRT3-Mediated SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells, Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732	2021	5.3
21	Metabolic changes in synovial cells in early inflammation: Involvement of CREB phosphorylation in the anti-inflammatory effect of 2-deoxyglucose	2021	4.1
22	Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway, Biochemical and Biophysical Research Communications,2019, 510(4):501-507	2019	3.6
23	Neopetrosidines A–D, pyridine alkaloids isolated from the marine sponge Neopetrosia chaliniformis and their cell cycle elongation activity	2021	3.5
24	Novel pharmacological effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib on the lactate dehydrogenase pathway	2019	3.3
25	Circ_0000442 functions as a tumor repressor in breast cancer by impacting miR-1229-3p and upregulating ZBTB1	2020	2.5
26	Suppressive Effects of Anisomycin on the Proliferation of B16 Mouse Melanoma Cells In Vitro	2021	2.1
27	Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration	2023	15.1
28	Arresting calcium-regulated sperm metabolic dynamics enables prolonged fertility in poultry liquid semen storage	2023	4.6
29	Exosomes secreted by ST3GAL5high cancer cells promote peritoneal dissemination by establishing a premetastatic microenvironment	2023	6.6

日本同仁化学Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

葡萄糖检测试剂盒

Glucose Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光防潮

运输条件：室温

特点：

● 细胞上清液和细胞样品均适用

● 稳定性好

●可使用酶标仪高通量筛选

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葡萄糖乳酸检测

选择规格：

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代谢

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒

产品解说

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试剂盒内含

概述

原理

操作步骤

制作葡萄糖标准曲线

实验例

常见问题Q&A

参考文献

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NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测

NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测

NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

试剂盒内含

	50 tests	200 tests
Dye Mixture	×1	×1
葡萄糖标准品（10 mmol/l）(红盖)	150 μl×1	600 μl×1
酶(绿盖)	×1	×1
Assay Buffer	3.5 ml×1	14 ml×1
Reconstitution Buffer(蓝盖)	350 μl×1	1.4 ml×1

概述

葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质，也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标，在癌症研究中，也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明，抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性，可以抑制癌细胞的生长。

葡萄糖检测试剂盒（Glucose Assay Kit-WST）可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖，通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖，适合用96孔板检测，可以同时检测多个样品。

原理

*本试剂盒可以检测细胞上清液^＊的葡萄糖的含量，通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外，试剂盒里有葡萄糖标准液，可以制作标准曲线，测定样品中的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

*要测定细胞上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。

操作步骤

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

制作葡萄糖标准曲线

可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线，然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时，可以通过稀释样品进行检测。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

实验例

用Phloretin抑制葡萄糖的摄取

1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×10⁵ cells/ml，在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。

2. 在6孔板中接种1×10⁶ cells/孔的细胞悬液，在37℃，5% CO₂培养箱中过夜培养。

3. 将细胞悬液转移到锥形管中，在1,500 rpm离心5 min。

4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中，用超纯水稀释30倍。

5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。

6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。

7. 在每孔中加入50 µl工作液。

8. 在37℃培养箱中培养30 min。

9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度，根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

Phloretin抑制葡萄糖的摄取

实验证实，细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。

常见问题Q&A

Q1：是否可以检测2-Deoxy-D-glucose？

A1：可以检测2-Deoxy-D-glucose。

Q2：Working Solution的稳定性如何？

A2：Working Solution无法保存，请现配现用。由于对光不稳定，因此配制后请避光，在室温和避光条件下可保存4小时（当Working Solution在曝光下，溶液颜色会由红色变为橙色，背景升高）。

Q3：当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测？

A3：如果样品中含有还原性的物质，则也会和WST染料发生显色，此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况，可以设定药物对照（不含细胞含药物的培养基+试剂）作为背景对照，并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。

Q4：是否有检测细胞上清液以外的实验例?

A4：有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情，请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。

Q5：是否可以检测细胞内葡萄糖？

A5：细胞内葡萄糖也可以检测，请参考下面的样品制备步骤。

请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜（分子量：10KD ）」

（1）将细胞^*1悬液收于1.5 ml微量管中。

※测定所需的细胞数，需要根据细胞种类进行调整。
HepG2细胞和Jurkat细胞的测量结果如下图所示
（2）在300×g下离心5分钟，去除上清液。
(3)加入300 µl PBS，重悬细胞，在300×g下离心5分钟，除去上清液。
(4)加入250 µl细胞溶解液^*2(0.1%Triton-X)，裂解细胞后，在12,000×g离心5分钟。
(5)将操作(4)的上清液200 µl转移到超滤膜过滤管(分子量：10K)中，以12,000×g离心10分钟。
※当测定样品为n=3时，总共需要150 µl以上(50 µl×3)。
※离心后的滤液不超过150 µl时，请延长离心时间。
(6)将通过操作(5)得到的滤液作为测定样品。
然后按照使用说明书，测定葡萄糖浓度。
※测定试样在标准曲线范围内(0-0.5 mmol/l)内，请适当用细胞溶解液稀释，用于测定。
*1 为了检测0.02 mmol/l以上的葡萄糖，HepG2细胞数量为1×10⁵cells以上，Jurket细胞需要2×10⁶ cells以上的细胞数量。
*2 细胞溶解液中含有SDS会抑制显色，因此不能使用含有SDS的缓冲液。

Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。

A6：制备标准曲线和样品（n=3）时，可以检测的样品数量如下所示。

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

标准曲线：8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3)

Glucose Assay Kit-WST试剂盒货号：G264

96孔板排列示意图（n=3）

Q7:可以测量L-Glucose吗？

A7：本产品用于β-D-Glucose测量，不能测量L-Glucose。

参考文献

No	检测对象	文献
1	小鼠血清	Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR
2	链霉菌	Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002
3	HCT116细胞	Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81
4	P388白血病细胞	2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966
5	小鼠精子细胞	Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9

*要测定细胞培养上清液以外的样品，请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。

日本同仁化学糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒

Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：常温

特点：

●酶标仪即可检测，无需昂贵的检测仪器

●试剂盒包含所有所需试剂 All in One Kit

●详尽的操作手册

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选择规格：

50tests

期货

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

产品解说

规格性状

产品概述

三种评价方式

实验例

常见问题Q&A

产品文献

产品解说

规格性状

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

产品概述

很多癌细胞都是主要依靠糖酵解途径产生ATP，而近年来的研究发现，如果抑制癌细胞的糖酵解途径，细胞中的主要能量代谢会从糖酵解途径向线粒体的氧化磷酸化途径转移。对于这一现象的研究，有望成为新的抗癌药物研发的靶点，并且在细胞衰老、神经退行性疾病等其他疾病的治疗和药物研发的工作中也具有潜力，因此而备受瞩目。

本试剂盒通过酶标仪就可以方便快捷的检测糖酵解能、细胞代谢途径转移、细胞对糖酵解途径和氧化磷酸化途径的依赖程度。试剂盒中包含所有所需的试剂，可大幅减少实验前的准备工作和时间。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

三种评价方式

用Oligomycin抑制氧化磷酸化(OXPHOS)的ATP合成，或者用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)抑制糖酵解(Glycolysis)的ATP合成，然后通过检测ATP的量(发光法)和Lactate的量(吸光度法)对下图中的①~③进行评价。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

实验例

对糖酵解抑制剂(2-DG)处理后的HeLa细胞进行糖酵解能评价和代谢途径转移评价。糖酵解能评价(左图)的结果可以看出，HeLa细胞经过糖酵解抑制剂作用后，糖酵解能明显降低。而代谢途径转移评价的结果(右图)可以看出，糖酵解抑制剂作用后，HeLa细胞内的代谢途径开始向氧化磷酸化转移，由线粒体产生的ATP明显增加。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

常见问题Q&A

Q：一个试剂盒可以检测多少个样品？

A：按照每个样品3个复孔计算，可检测的样品数请见下表：

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

※以上是按照不做预实验，最多可能检测的样品数量。

※Lactate Assay时，如果培养基内含有血清，建议单独检测含有血清的培养基，作为背景空白扣除。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

※以上是先做预实验，再做正式实验时，最多可能检测的样品数量。

※Lactate Assay时，如果培养基内含有血清，建议单独检测含有血清的培养基，作为背景空白扣除。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

糖酵解能评价(Lactate Assay)的孔板设置例(n=3时)

(左：不做预实验；右：做预实验)

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

代谢途径转移评价(ATP Assay)的孔板设置例(n=3时)

(左：不做预实验；右：做预实验)

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

代谢途径依赖程度评价的孔板设置例(n=3时)

(左：ATP Assay；右：Lactate Assay)(不做预实验)

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

代谢途径依赖程度评价的孔板设置例(n=3时)

(左：ATP Assay；右：Lactate Assay)(做预实验)

Q：在做糖酵解能评价时，实验孔与空白孔(只含培养基)的吸光度没有变化，是什么原因？有哪些改善方法？

A：可能的原因是细胞释放的乳酸量过少，建议提高细胞数，增加培养时间(3小时⇒5小时)。

Q：是否需要通过使用蛋白质定量分析使乳酸和ATP浓度正常化？

A：Oligomycin和2-DG处理5小时的检测结果，用蛋白定量校正和不校正的结果几乎没有变化。但是，如果检测中使用其他药物时，请预先确认该药物是否会对细胞数和蛋白质的量有影响，然后再用本试剂盒检测。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

需要用蛋白质定量进行校正的时候，请参考下图中的步骤。

※在进行蛋白质定量校正的时候，由于ATP Assay的试剂的原因，不能使用ATP Assay或Lactate Assay检测时使用的细胞，请额外专门准备蛋白质定量用的细胞悬液。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

Q：Lactate Assay时，是否可以用450 nm以外的滤光片检测？

A：如果没有450 nm的滤光片，可以用490 nm滤光片检测，不过检测得到的吸光度的值要比450 nm检测时低。

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit货号：G270

Q：发光信号是否稳定？

A：发光信号在3小时以内都稳定。不过，发光信号会受温度和光照影响，如果不能立即检测的话，请在避光和25℃环境下静置。

Q：检测时是否可以用白色96孔板以外的孔板？

A：黑色和透明孔板都会造成发光强度的降低，透明孔板还会导致背景升高。因此建议使用白色96孔板。

Q: ATP检测时用的发光法，检测波长为多少？

A：由于P是通过萤光素检测，所以检测波长为556 nm。

产品文献

No.	Sample	Reference
1	Cell (RAW264.7)	H. Gu, Y. Zhu, J. Yang, R. Jiang, Y. Deng, A. Li, Y. Fang, Q. Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, and X. Jiang, “Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds SimulateRegenerative Signals and Mobilize Anti-InflammatoryReserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration”, Adv. Sci., 2023, doi.org/10.1002/advs.202302136.
2	Cell (A549)	L. Liu, B. Wang, R. Zhang, Z. Wu, Y. Huang, X. Zhang, J. Zhou, J. Yi, J. Shen, M. Li, and M. Dong, “The activated CD36-Src axis promotes lung adenocarcinoma cell proliferation and actin remodeling-involved metastasis in high-fat environment”, Cell Deat & Disease, 2023, doi.org/10.1038/s41419-023-06078-3.
3	Canine GL cell lines	H. Yamazaki, S. Onoyama, S. Gotani, T. Deguchi, M. Tamura, H. Ohta, H. Iwano, H. Nishida, P.J. Dickinson and H. Akiyoshi, ‘Influence of the Hypoxia-Activated Prodrug Evofosfamide (TH-302) on Glycolytic Metabolism of Canine Glioma: A Potential Improvement in Cancer Metabolism’, Cancers, 2023, doi:10.3390/cancers15235537.
4	Cell (Primary Hepatocyte)	S. Tsuno, K. Harada, M. Horikoshi, M. Mita, T. Kitaguchi, M. Y. Hirai, M. Matsumoto and T. Tsubo , ‘Mitochondrial ATP concentration decreases immediately after glucose administration to glucose-deprived hepatocytes’, FEBS Open Bio, 2023, doi:10.1002/2211-5463.13744.

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日本同仁化学Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

糖酵解(乳酸生成量)和线粒体膜电位(JC-1)同时检测试剂盒

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：常温

特点：

● 一个样品同时检测两种指标

● 包含所有所需试剂

● 详细的操作步骤

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检测原理

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Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

产品概述

线粒体功能与细胞代谢之间的联系是众所周知的，对一系列疾病都有影响，包括癌症、衰老和神经退行性疾病。已经发现，衰老细胞通常依靠糖酵解系统生存，而不是利用线粒体能量来源。相反，即使糖酵解系统受到抑制，通常严重依赖糖酵解的癌细胞激活线粒体功能依然能确保其存活，。鉴于这些观察结果，越来越有必要研究线粒体功能和糖酵解途径，以增强我们对细胞内代谢改变的理解。我们的试剂盒允许测量乳酸产生（通过乳酸测定）以检测糖酵解系统的变化，以及线粒体膜电位（通过JC-1测定）以评估线粒体功能。该试剂盒的概念是提供来自同一样品的全面一站式检测，以跟踪细胞内代谢的变化并指导后续更详细的分析。该试剂盒包括检测所需的所有试剂，还提供组合方案。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

产品特点

任何刺激引起的细胞内代谢变化都可以通过测量乳酸产生和线粒体膜电位来检测。

在某些情况下，尽管细胞糖酵解系统或线粒体功能（能量产生的主要途径）受到损害，但细胞仍设法存活。据了解，这是因为细胞努力通过增强糖酵解来持续并防止细胞死亡，即使线粒体功能受损，或者在糖酵解受损时激活线粒体功能，同时监测糖酵解系统和线粒体功能。如下所述，可以深入了解细胞内发生的事情。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

同时测量同一样品

通过从单个样品中分离上清液和细胞，可以同时测量线粒体膜电位（JC-1测定）和乳酸产生。详细的测量方法在说明书中描述。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

检测原理

该试剂盒包括乳酸检测试剂盒，旨在通过测量WST甲臜吸光度来检测细胞培养基中的乳酸产生。此外，它还具有JC-1染料，用于使用荧光测量检测细胞内的线粒体膜电位。使用酶标仪在同一样品上轻松定量这两个靶标，便于评估代谢变化。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

实验例

用糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）处理的HeLa细胞的细胞内代谢变化

当我们使用CCK-8*测定法评估8-DG处理的HeLa细胞的细胞活力时，我们观察到活力的微小变化。然而，鉴于观察到乳酸产生的减少，它促使我们质疑尽管糖酵解系统受到抑制，如何维持细胞活力。为了回答这个问题，我们使用JC-1测定法检查了线粒体膜电位。这项研究的结果表明，当糖酵解系统被2-DG抑制时，HeLa细胞通过增强线粒体功能来维持其存活。

※ 细胞计数试剂盒-8（产品代码：CK04）不包含在本试剂盒中。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

常见问题Q&A

Q:每个试剂盒可以检测多少样品？

A:【乳酸测定】按每个样品3个复孔计算，您可以检测到如下样品数量

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

*如果样品的乳酸浓度未知，请进行预实验，以确定稀释比例，使其低于1 mmol/l乳酸标准溶液的吸光度。请参照说明书中“检测样品的制备”。

*进行预实验或不进行预实验时，可检测的最大样品数详见以上表格。

*进行乳酸测定时，如培养基含有血清，建议制备一个含血清的培养基的测量样品，作为背景对照。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

乳酸测定的孔板设置示例（n = 3）

（左：无预实验，右：预实验）

【JC-1 检测】

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

※ 本试剂盒，至少可使用96孔板检测48个孔。

Q: 使用此试剂盒进行乳酸检测和 JC-1 检测需要多长时间？

A: 实验流程和每次测定所需的时间（大约）如下图所示。

Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

Q: 【乳酸检测】是否可以先进行乳酸测定，然后在收集上清液后进行JC-1测定？

A: 如果首先进行乳酸测定，测量时间的差异可能会由于刺激条件的不同而影响结果。收集上清液后，请务必先进行JC-1测定。细胞培养上清液可冷冻（-20°C）保存1个月。

Q: 【乳酸检测】乳酸测定可以使用450 nm以外的波长进行测量吗？

A: 除了 450 nm 外，它还可与 490 nm 滤光片一起使用。但是，吸光度值会低于在450nm处测量时的值。 Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit货号：G272

Q: 【乳酸检测】乳酸测定可以测量含有还原性物质的样品吗？

A：如果样品中含有还原性物质，染料WST会变色，您可能无法准确测量乳酸的变化。如果您的检测物质中含有还原性物质，请准备一些只有待测物+培养基的孔【不含细胞】，作为背景对照。最后计算时，从标准曲线/样品吸光度结果中扣除以上背景对照。

Q：【乳酸检测】工作液稳定性如何？

A：工作液无法保存。请现配现用。另外，由于它对光不稳定，因此避光，工作液在室温避光条件下，可稳定保存4个小时。

一旦工作液未避光，则颜色会从红色变为橙色，从而导致背景的增加。

Q：【乳酸检测】细胞培养上清液样品可以保存吗？

A：可以冷冻（-20°C）储存1个月。

Q：【JC-1 检测】我可以使用含血清的培养基吗？

A：含血清的培养基可以在清洗细胞或制备JC-1工作液时使用，在荧光观察时，我们建议使用Imaging Buffer溶液，但如果一定要使用含血清的培养基，也建议使用无酚红的培养基。

Q：【JC-1检测】是否可以固定细胞？

A：不建议，由于线粒体固定后会发生去极化，因此染色后固定和固定后染色都是不可能的。

Q：【乳酸检测】检测到的样品的吸光度与空白孔的吸光度相同，原因和解决方案是什么？

A：原因可能是细胞释放的乳酸量低。首先，请增加要接种的细胞数量或进一步延长孵育时间。

Q：【JC-1检测】如何解释增加（或减少）红色和绿色的荧光值的结果？

A：计算每个药物处理后的样品和对照组的红色与绿色荧光值的比率。将两者进行比较，荧光比越低，线粒体膜电位越低。

【按红/绿比评估的原因】

由于JC-1以膜电位依赖性方式在细胞中积累，因此每个细胞的JC-1浓度可能因细胞的状态而变化^1），2）（由于细胞条件的不同，实验组和对照组的JC-1累积浓度不同）。

此外，当线粒体膜电位高时，JC-1聚集，其荧光从绿色变为红色。

JC-1累积的量则取决于膜电位^3）因此样品的线粒体膜电位变化可以通过红/绿比进行分析比较。

〈参考资料〉

1） A. Cossarizza， et al.， Biochem Biophys Res Commun.， 1993， 197（1）， 40.

2） A. Perelman， et al.， Cell Death and Disease， 2012， 3， e430.

3） S. T. Smiley， et al.， Proc. Nail. Acad. Sci.， 1991， 88， 3671.

日本同仁化学氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

氨基酸摄取能力检测试剂盒

Amino Acid Uptake Assay Kit

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测

● 简便操作即可检测氨基酸摄取能力

※注意：您选择的孔板类型会对实验结果产生重大影响。并非所有孔板都与本检测方法兼容。

您可以下拉参考网站“常见问题Q&A”，查看推荐的孔板及其对检测结果的影响。

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氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

产品解说

规格性状

产品概述

运用领域

操作步骤

实验例

与传统方法比较

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常见问题Q&A

产品文献

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规格性状

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

产品概述

氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。

在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。

氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。

运用领域

抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

操作步骤

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

实验例

使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

＜检测条件＞

细胞：HeLa cells

培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）

培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min

检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)

检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

<检测条件>

检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)

与传统方法比较

与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

关联产品

产品名	包装	价格	货号
Glucose Uptake Assay Kit-Blue	1 set	3,980	UP01
Glucose Uptake Assay Kit-Green	1 set	3,980	UP02
Glucose Uptake Assay Kit-Red	1 set	3,980	UP03

常见问题Q&A

Q：推荐什么类型的微孔板？

A：我们推荐以下几种微孔板

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

微孔板的类型对检测结果有何影响，请参考【Q&A:微孔板的类型会影响结果吗？】获取更多信息。

Q：微孔板的类型会影响结果吗？

A：是的。并非所有微孔板都与该测定兼容，有些微孔板可能无法进行某些测量（参见参考数据）。

建议使用以下板检测

氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit货号：UP04

<参考：微孔板之间的比较>

使用Ibidi板和其他制造商的微孔板，我们研究了HeLa细胞在氨基酸转运蛋白抑制剂BCH（2-氨基双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸）存在下摄取氨基酸的能力。然而，我们无法确认BCH对吸收的抑制，因为与推荐的Ibidi板相比，在其他制造商的微孔板中观察到更高的背景。

荧光显微镜观察

荧光酶标仪检测结果

Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？

A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。

Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？

A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。

Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？

A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。

Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？

A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。

Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？

A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。

Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？

A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。

Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？

A：主要可能的原因有以下两点： ①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution

的浓度。(5~50倍稀释)

②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。

Q：如果荧光背景较高，我该怎么办？

A：检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。

Q：BPA是否可以定量检测？

A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。

产品文献

1、T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, “Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy”, 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.

2、Wencan Zhang，Xu Cao，Xiancai Zhong，Hongmin Wu，Yun Shi，Mingye Feng，Yi-Chang Wang， David Ann，Yousang Gwack，Yate-Ching Yuan，Weirong Shang ，and Zuoming Sun，”SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated up-regulation of amino acid transporter Slc7a5″，2023，PNAS【11.1】，doi：10.1073/pnas.2221352120.

关联产品

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒

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Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒

氧消耗量检测试剂盒

Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green

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ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

ADP/ATP比率检测试剂盒

日本同仁化学α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

α-酮戊二酸(α-KG)检测试剂盒(荧光法)

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：常温

特点：

● 检测结果的重现性好

● 可作为线粒体活性的指标

● 多角度了解细胞代谢变化

下载说明书

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选择规格：

100tests

现货

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

规格性状

产品概述

检测原理

检测操作

标准曲线的作成例

实验例

常见问题Q&A

规格性状

100 tests

・Fluorescent Dye
・α-KG Standard
・Enzyme Mix
・Coenzyme
・Assay Buffer
・lysis Solution
・Control Buffer
・ALT Solution
・Reaction Buffer

×1
300 μl×1
×1
×1
6.5 ml×1
2 ml×1
25 ml×1
35 μl×1
5 ml×1

产品概述

检测原理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

检测操作

► 结果重现性高的两个秘诀

1) 样品的前处理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

2) α-Ketoglutarate的检测

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

标准曲线的作成例

本试剂盒附带α-KG的标准品，可以通过制作标准曲线来定量的检测样品中的α-KG浓度。如果样品中的α-KG浓度高于20 μmol/l，请预先稀释样品再检测。

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

实验例

Doxorubicin(DOX)刺激引起的细胞内代谢变化

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

Sulfasalazine(SSZ)引起的细胞内代谢变化

<使用产品>

・细胞内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・细胞内GSH：G263 GSSG/GSH Quantification Kit II

・细胞内ROS：R252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

・胞外谷氨酸：G269 Glutamate Assay Kit-WST

<实验条件>

细胞：A549细胞(1 x 106 cells) 暴露时间： 48 h

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

NASH诱导小鼠的肝脏组织的代谢变化

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

※详细的实验步骤请参考FAQ“是否有检测组织的实验例

<使用产品>

・组织内ATP：CK18 Cell Counting Kit-Luminescence

・组织内NAD：N509 NAD/NADH Assay Kit-WST

<实验参考文献>

ATP	Francesco Bellanti, et al., “Synergistic interaction of fatty acids and oxysterols impairs mitochondrial function and limits liver adaptation during nafld progression”, Redox Biology, 2018, 15, 86-96.
α-KG	Jianjian Zhao, et al., “The mechanism and role of intracellular α-ketoglutarate reduction in hepatic stellate cell activation”, Bioscience Reports, 2020, 40, (3).
α-KG	Ali Canbay, et al., “L‑Ornithine L‑Aspartate (LOLA) as a Novel Approach for Therapy of Non‑alcoholic Fatty Liver Disease”, Drugs, 2019, 79, 39-44.
NAD	Jinhan He, et al., “Activation of the Aryl Hydrocarbon Receptor Sensitizes Mice to Nonalcoholic Steatohepatitis by Deactivating Mitochondrial Sirtuin Deacetylase Sirt3”, Mol. and Cell. Biol., 2013, 33, (10), 2047-55.

常见问题Q&A

Q1：每个试剂盒可以检测所少个样品？

A1：如果标准曲线和样品都采用3个复孔来计算，可以检测12个样品。具体的96孔板的样品孔排列实例请见说明书。

Q2：是否可以用黑色孔板以外的孔板（透明板或白色板）？

A2：用透明板或白色板无法准确的绘制标准曲线，请使用黑色96孔板进行实验

Q3：检测时样品没有显色，可能的原因有哪些？

A3：本试剂盒对α-KG的检测范围是0.2 μmol/l以上，样品中的α-KG浓度如果低于0.2 μmol/l无法检测出来。可以尝试降低样品前处理时的稀释倍率。

Q：配置好的Working Solution能否保存？

Q：检测样品是否可以保存？

Q：是否有组织样品的检测实例？

A：有小鼠肝脏组织的检测实例。

具体的实验步骤如下：

碱性提取法提取的肝脏样品中的代谢指标检测

1.取大约100 mg小鼠肝脏组织样品加至500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液中。

※必须使用经过灌流操作完全脱血的组织样品，否则残留的血液会影响检测结果。

2.用Dounce型组织研磨器研磨肝脏组织。

3.将研磨后的样品回收至微管中，用500μl预冷的0.5 mol/ KOH水溶液清洗研磨器，并将清洗后的液体也

一起转移到回收样品的微管中(共约1 ml)。

4.向回收样品的微管中加入1 ml预冷的超纯水，充分混合后在冰浴上静置5 min(共约2 ml)。

※由于溶液的粘性较高，有时会出现离心后难以分离的情况。此时，用25 g左右的细针头注射器不断

吸取/推出(大约20-30次)，直到可以顺畅的吹打溶液为止。

5.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min。

α-KG检测用样品的制备

6.取900μl上一步操作(步骤5)得到的溶液，加入200μl 1mol/l KH2PO4水溶液进行中和，混匀后在冰浴上

静置5 min。

7.离心机12,000xg，4 ℃离心5 min，取1 ml上清液至新的微管中作为检测样品。

<检测时的注意事项>

※组织提取的样品无法保存，请在当天内完成检测。

※枪头中残留的样品溶液时造成误差的原因之一，吸取样品溶液时尽量缓慢，减少枪头中残留的样品溶液。

※在稀释标准品和样品的时候，使用0.5 mol/l KOH水溶液和1mol/l KH2PO4水溶液按照9:5比率混合的溶液。

<检测实例>

诱导非酒精性脂肪肝的小鼠肝脏组中α-KG量的变化

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric货号：K261

日本同仁化学NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

NADP/NADPH检测试剂盒

NADP/NADPH Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 数据可靠，不会与NAD⁺及NADH反应

● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

● 享有显色底物WST专利

选择规格：

100 tests

现货

产品解说

活动进行中

试剂盒内含

概述

原理

技术资料

操作步骤

实验例

常见问题Q&A

参考文献

产品解说

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凑单关联产品TOP5

NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测

NO.2. Glucose Assay Kit-WST 葡萄糖检测

NO.3. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测

NO.4. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测

NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色）

试剂盒内含

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP) 是磷酸戊糖途径（一种细胞代谢途径）反应中一种重要的辅因子。NADP以氧化态NADP⁺和还原态NADPH的形式存在于细胞中。NADPH不光对脂肪酸、胆固醇而且对还原型谷胱甘肽的生成至关重要。另外最近的研究表明，NADP⁺/NADPH通过限制碳水化合物的摄入来延长寿命与NADP⁺/NADPH有很大关联。

NADP/NADPH Assay Kit-WST能定量检测细胞中总NADP⁺/NADPH、NADPH和NADP⁺的量，并计算它们的比值。细胞内NADPH水平可以用试剂盒内的Extraction Buffer裂解细胞后加热进行定量检测。而细胞内的NADP⁺水平则可以通过总NADP⁺/NADPH减去NADPH的量计算得到。

原理

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

技术资料

分别检测NADP⁺和NADPH

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

分别测定NADP⁺和NADPH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内NADPH量，而细胞内的NADP⁺量则可以通过总NADP⁺/NADPH量减去NADPH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准样品。使用超过12个样品时，您需要准备单独的超滤管。

使用NADP⁺/NADPH作为标记的研究

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NADP/NADPH：“NADP/NADPH”

线粒体：”NADP/NADPH”Mitochondria

癌：”NADP/NADPH”Cancer

氧化应激：”NADP/NADPH”Oxidative Stress

孔板检测中数据的可靠性

通过同时检测试剂盒内的标准溶液，可以对浓度在0.01-1 μmol/l的总NADP⁺/NADPH和NADPH进行定量。如果样品中的总NADP⁺/NADPH的浓度>1 μmol/l，可以通过稀释样品来调节。实验证实本试剂盒(NADP/NADPH Assay Kit-WST)不会与NAD⁺及NADH反应。

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

操作步骤

（1）按下图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

（2）在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

（3）在37°C培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

（4）用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

（5）用标准曲线测定样品中总NADP⁺/NADPH和NADPH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NADP⁺的量可用下列计算公式计算：总NADP⁺/NADPH-NADPH的量计算得到。

NADP⁺=总NADP⁺/NADPH-NADPH

实验例

细胞样品检测实验例 (加入抗癌药物Doxorubicin)

向Jucket细胞中 (3×10⁶ cells)加入终浓度为500 nmol/l的Doxorubicin (Dox)，在培养24 h后检测NADP⁺/NADPH 比值和还原型/氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)。用本试剂盒检测PBS清洗后的细胞的NADP⁺/NADPH比值，用 GSSG/GSH Quantification Kit II (货号：G263) 检测谷胱甘肽的比值。

在细胞内加入DOX后，产生的ROS(H₂O₂) 破坏了DNA、DNA修复酶 (PARP*) 被激活，并且NADP⁺被其消耗。为了补充不足的NADP⁺，NADPH氧化酶被激活，结果在数据中则会表现为NADP⁺的增加。与此同时还原型谷胱甘肽 (GSH) 会被产生的ROS所消耗，因此GSH/GSSG的比值会下降。

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

常见问题Q&A

Q1：该试剂盒可以检测多少个样本？

A1：

NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒货号：N510

*所有样品均测定3次（n=3）

上表中显示了当标准样品从2 μmol/l连续稀释，作出一条共计8个点（n=3）的标准曲线时可以检测的样品数量。如果分为2次检测，由于需要重复做一条标准曲线，因此样品检测的数量会更少。

Q2：可以单独购买过滤管吗？

A2：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。

Q3：工作液稳定吗？

A3：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。

Q4：样品颜色没有变化，是什么原因？

A4：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

参考文献

编号	文献	年	IF
1	Order-of-magnitude enhancement in photocurrent generation of Synechocystis sp. PCC 6803 by outer membrane deprivation	2022	17.7
2	Targeted therapy for drug-tolerant persister cells after imatinib treatment for gastrointestinal stromal tumours	2021	9.1
3	Impact of anti-diabetic sodium-glucose cotransporter 2 inhibitors on tumor growth of intractable hematological malignancy in humans	2022	7.4
4	Chemical Triggering Cyanobacterial Glycogen Accumulation: Methyl Viologen Treatment Increases Synechocystis sp. PCC 6803 Glycogen Storage by Enhancing Levels of Gene Transcript and Substrates in Glycogen Synthesis	2022	4.9
5	Glucose Limitation Sensitizes Cancer Cells to Selenite-Induced Cytotoxicity via SLC7A11-Mediated Redox Collapse, Cancers (Basel),2022, 14(2):345	2022	4.4
6	Inhibition of NAMPT markedly enhances plasma-activated medium-induced cell death in human breast cancer MDA-MB-231 cells	2019	4.1
7	Metabolomic approach to characterize the metabolic phenotypes and varied response to ouabain of diffuse large B-cell lymphoma cells	2021	2.9
8	Effect of Phosphoribosyltransferase Down-regulation on Malignant Glioma Cell Characteristics	2020	2.5

日本同仁化学NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509- DOJINDO

发表于2024年6月18日由whatman中国官网

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NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

NAD/NADH检测试剂盒

NAD/NADH Assay Kit-WST

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 数据可靠，不会与NADP及NADPH反应

● 同一样品可以用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量

● 只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

● 享有显色底物WST专利

选择规格：

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原理

技术情报

操作步骤

常见问题Q&A

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NO.5. Lipi-Green 脂滴检测（绿色)

试剂盒内含

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

概述

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是参与糖酵解、电子转移系统和TCA循环等细胞主要代谢途径氧化还原反应的重要辅助因子。NAD以氧化型NAD⁺和还原型NADH的形式存在于细胞中。维持适当的NAD⁺和NADH水平对细胞功能至关重要。此外最近的研究表明NAD⁺水平的下降与衰老相关，NAD⁺的量被认为是衰老相关研究的一个标志。

NAD/NADH检测试剂盒可以定量细胞中NAD⁺/NADH、NADH和NAD⁺的量，并测量它们的比值。细胞内NADH水平可以通过试剂盒内含的Extraction Buffer裂解细胞并在加热后选择性地定量检测。而细胞内的NAD⁺水平则可以通过总的NAD⁺/NADH总量减去NADH量计算得到。

原理

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

技术情报

NAD⁺和NADH的分别检测

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

分别测定NAD⁺和NADH的操作步骤

*只有Dojindo的试剂盒中带有可以简单去除蛋白质的微量管

用试剂盒内的提取缓冲液及去除蛋白质用的微量管，能简便地制备细胞裂解液。通过加热细胞裂解液能单独检测细胞内的NADH量。而细胞内的NAD⁺量则可以通过总NAD⁺/NADH量减去NADH量的计算得到。

在本试剂盒中，当n=3时，可以测量12个样品和8个标准品。当使用超过12个样品时，您需要准备单独的微量管。

使用NAD⁺/NADH作为指标的研究

细胞中NAD⁺和NADH的量被评估为重要的代谢指标，用于了解受药物管理和基因重组影响的癌细胞和线粒体功能。最近已经明确了长寿相关的受体与NAD⁺的含量密切相关。越来越多的人将其评估为肥胖，糖尿病和细胞分化等生物学状况的标志物。

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

检索来源：Google Scholar

检索关键词：

NAD/NADH : “NAD/NADH”

线粒体：“NAD/NADH”Mitochondria

癌：“NAD/NADH”Cancer

肥胖：“NAD/NADH”Obesity

孔板检测中数据的可靠性

可以通过同时测量该试剂盒中包含的标准溶液来进行定量分析。如果样品中NAD⁺/NADH的总含量高于2 μmol/l，则可以通过稀释样品进行评估。在下面的实验中，使用细胞数相差2倍的HeLa细胞，来确定NAD⁺和NADH的数量和比率。

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

使用增殖培养的HeLa细胞（2.5×10⁵，5.0×10⁵个细胞），从标准曲线中得到细胞内NAD⁺和NADH的量。最终NAD⁺的量和NADH的量会随着细胞数而改变，但是即使细胞数改变，NAD⁺和NADH量的比率也不变。

经确认，将2-Deoxy-D-glucose加入到HeLa 细胞后，代谢活性发生了变化。

用乳酸检测试剂盒检测的实验例

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

向HeLa细胞（1×10⁶细胞）中加入2-Deoxy-D-glucose，终浓度为6 mmol/l，培养24小时后测定乳酸量和NAD⁺/NADH比。用Lactate Assay Kit-WST（货号：L256）测定上清液中乳酸含量，去除上清后用本试剂盒检测细胞中的NAD⁺/NADH比。

最终加入2-Deoxy-D-glucose抑制了细胞内糖酵解系统，并导致乳酸量的减少和NAD⁺/NADH比率的增加。

实验例：NASH诱导小鼠肝脏组织中代谢的变化

非酒精性脂肪肝炎（NASH）病变导致组织中ATP、α-酮戊二酸（α-KG），已知NAD量减少。使用从4周龄开始进行高脂肪饮食处理（NASH诱导）的1型糖尿病模型小鼠（STAM模型）的肝脏组织α-测量了KG、NAD量。其结果，在NASH诱导后10周龄小鼠组织

非酒精性脂肪肝炎（NASH）病变导致组织中ATP、α-酮戊二酸（α-KG），已知NAD量减少。使用从4周龄开始进行高脂肪饮食处理（NASH诱导）的1型糖尿病模型小鼠（STAM模型）的肝脏组织α-测量了KG、NAD量。其结果，在NASH诱导后10

中α-确认KG、NAD量减少。

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

<使用产品>

・组织内ATP:ATP Assay Kit-Luminescence（产品货号：A550）

・组织内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（产品货号：K261）

・组织内NAD:NAD/NADH Assay Kit-WST（产品货号：N509）

<実験参考文献>

ATP　 Francesco Bellanti, et al., “Synergistic interaction of fatty acids and oxysterols impairs mitochondrial function and limits liver adaptation during nafld progression”, Redox Biology, 2018, 15, 86-96..

α-KG Jianjian Zhao, et al., “The mechanism and role of intracellular α-ketoglutarate reduction in hepatic stellate cell activation”, Bioscience Reports, 2020, 40, (3).

Ali Canbay, et al., “L‑Ornithine L‑Aspartate (LOLA) as a Novel Approach for Therapy of Non‑alcoholic Fatty Liver Disease”, Drugs, 2019, 79, 39-44.

NAD Jinhan He, et al., “Activation of the Aryl Hydrocarbon Receptor Sensitizes Mice to Nonalcoholic Steatohepatitis by Deactivating Mitochondrial Sirtuin Deacetylase Sirt3”, Mol. and Cell. Biol., 2013, 33, (10), 2047-55.

实验例：脂肪酸转运抑制剂引起的HeLa细胞细胞内代谢的変化

脂肪酸对膜的合成等重要，细胞的增殖不可缺少。因此，用脂肪酸转运体抑制剂处理HeLa细胞，确认了阻碍脂肪酸摄取时的细胞增殖能力及细胞内代谢（葡萄糖消耗量、Lactate释放量、NAD/NADH比率）的变化。

结果显示，细胞增殖能力下降，但葡萄糖消耗量和Lactate释放量增加，细胞内NAD+/NDH比率下降，因此确认了代谢途径向解糖类转移。

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

＜使用产品＞

脂肪酸摄取：Fatty Acid Uptake Assay Kit (产品货号：UP07)

细胞增殖： Cell Counting Kit-8 (产品货号：CK04)

Glucose摄取：Glucose Assay Kit-WST (产品货号：G264)

Lactate检测：Lactate Assay Kit-WST (产品货号：L256)

实验例：诱导老化引起的A549细胞的代谢移位

当细胞老化被诱导时，SA-β-除了出现gal的表达亢进和不可逆的细胞增殖停止的现象以外，DNA损伤积蓄了的老化细胞，由于线粒体功能的降低能源产生转移到解糖系。

因此，用Doxorubicin处理A549细胞，诱导老化时的SA-β-确认了gal表达亢进及能量产生途径（NAD量、线粒体膜电位、ATP量、Lactate释放量）的偏移。

结果发现DNA损伤，SA-β-刚度测量-β- Galactosidase）生产量增加，细胞内NAD+量下降，线粒体膜电位下降，能量生产途径从氧化性磷酸化转移到解糖系

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

＜使用产品＞

DNA损伤：DNA Damage Detection Kit – γH2AX (产品货号：G265)

SA-β-gal检测：Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal (产品货号：SG03)

NAD+量：NAD/NADH Assay Kit-WST (产品货号：N509)

线粒体膜电位：JC-1 MitoMP Detection Kit (产品货号：MT09)

糖酵解/氧化磷酸化：Glycolysis/OXPHOS Assay Kit (产品货号：G270)

操作步骤

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

(1) 按照上图，在每孔中分别加入50 μl的标准液和样品溶液。

※为了获得准确的数据，建议每个样品做3个复孔。

(2) 在每孔中加入50 μl Working Solution。

※由于在加入Working Solution后酶会立刻反应，请用多通道移液器以减少由于加液时间延迟而导致的实验误差。

(3) 在37℃培养60 min。

※培养时请密封培养板，以防止液体蒸发。

(4) 用酶标仪在450 nm处检测吸光度。

(5) 用标准曲线测定样品中总NAD⁺/NADH和NADH的量。

※如果原样品在检测前已稀释，可用稀释倍率乘以检测的数值。

※NAD⁺的量可用总NAD⁺/NADH的量-NADH的量计算得到

NAD⁺= 总NAD⁺/NADH-NADH

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

常见问题Q&A

Q1：试剂盒可以测量多少个样本？

A1：

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

*所有样品均测定3次（n=3）

Q2：是否可以使用450 nm以外的滤光片进行测量？

A2：也可以使用490 nm的滤光片，但是吸光度会低于在450 nm处的吸光度。当用不同滤光片检测时，校准曲线如下：

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

Q3：可以单独购买过滤管吗？

A3：不可以，我们不单独出售过滤管。如果需要其他耗材，可以使用市场上售卖的过滤管。

Q4：工作液稳定吗？

A4：工作液无法长期保存。请在使用前配制工作液，由于工作液对光敏感请注意避光。该工作液在室温下可避光保存4小时。

Q5：样品颜色没有变化，是什么原因？

A5：样品中的NAD含量可能低于使用此试剂盒可测定的检测限度，在这种情况下，请增加细胞数，或者如果检测样品被稀释，则在检测前降低稀释比例。

Q6：有使用组织的实验例子吗？

A6：我们已经用小鼠肝组织测量了NAD/NADH和ATP,有关实验操作的更多信息，请参见下文。

碱性提取法提取肝脏代谢指标

1.每100毫克小鼠肝脏500毫升500摩尔/升KOH的冷水。

请务必将纸巾彻底沥干。残余血液会影响测量。

2.它被向下型均化器粉碎。

*请去冰浴。

3.用500ml冷的0.5mol/l KOH水溶液共同洗涤用于破碎的容器，以匹配管中的样品。（共1毫升）

4.向样品管中加入1毫升冷的超纯水。（共2毫升）如果溶液的粘度高，操作后可能难以分离离心机。

在这种情况下，将25g（针的针数）的细针应用于注射器，并混合（20-30次），直到样品溶液顺利放入注射器。

5.在5000 x g，4°C下离心5分钟，上清液回收到两个900 mm L的样品管中。1个NAD/NADH测量和另一个用于ATP测量。NAD/NA

NAD/NADH测量样品的制备

将0.5mol/L KOH水溶液和1mol/L KH₂PO₄混合制备稀释溶液。KH₂PO₄水溶液，比例为9:5。

6.将样品转移到MWCO 10K膜沉积管中，并在15000xg下离心20分钟。

*如果溶液超过200克或更多，请延长离心时间。

7.将所得滤液加入1.5 ml微管μ中，转移总NAD+/NADH含量和NADH量样品。

8.NADH量测量样品在60°C下孵育60分钟，将样品冷却至室温。

9.中和完成后，加入1mol/L的KH₂PO₄。22μL放入装有总NAD+/NADH量和制备后NADH量测量样品的管中，

中和溶液，加入78ml稀溶液（KOH和KH₂PO₄），混合混合物，将样品用作测量样品（总计200ul）。

＜测定例＞

NASH诱导小鼠肝脏组织中NAD量的变化

NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒货号：N509

Q7:测量样品可以保存吗？

A7.可以保存。使用说明书(1.测定用样品的调制的操作6）的溶液，在冷冻（-20℃）下可以保存3周。

参考文献

编号	文献	年	IF
1	Restoring NAD+ by NAMPT is essential for the SIRT1/p53-mediated survival of UVA- and UVB-irradiated epidermal keratinocytes	2021	6.8
2	Rewired Cellular Metabolic Profiles in Response to Metformin under Different Oxygen and Nutrient Conditions, International Journal of Molecular Sciences，2022, 23(2):989	2022	5.9
3	SIRT3-Mediated SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells, Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732	2021	5.3
4	Nicotinamide Attenuates the Progression of Renal Failure in a Mouse Model of Adenine-Induced Chronic Kidney Disease	2021	5.1
5	Impact of Nuclear De Novo NAD+ Synthesis via Histone Dynamics on DNA Repair during Cellular Senescence To Prevent Tumorigenesis	2022	5.1
6	Role of pyruvate in maintaining cell viability and energy production under high-glucose conditions	2021	4.9
7	Kynurenine, 3-OH-kynurenine, and anthranilate are nutrient metabolites that alter H3K4 trimethylation and H2AS40 O-GlcNAcylation at hypothalamus-related loci	2019	4.9
8	Porcine placental extract increase the cellular NAD levels in human epidermal keratinocytes	2022	4.9
9	Nicaraven induces programmed cell death by distinct mechanisms according to the expression levels of Bcl-2 and poly (ADP-ribose) glycohydrolase in cancer cells	2022	4.8
10	Effects of sirtuins on the riboflavin production in Ashbya gossypii	2021	4.8
11	SIRT7 regulates the nuclear export of NF-κB p65 by deacetylating Ran, Biochimica et Biophysica Acta – Molecular Cell Research,2019, 1866(9):1355-1367	2019	4.7
12	Epigenetic silencing of Lgr5 induces senescence of intestinal epithelial organoids during the process of aging,NPJ Aging and Mechanisms of Disease,2018, 5:1	2018	4.3
13	Effect of fumaric acid on the growth of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus during yogurt fermentation	2021	4.2
14	SIRT3-Mediated SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells, Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732	2021	4.1
15	High expression of NAMPT in adult T-cell leukemia/lymphoma and anti-tumor activity of a NAMPT inhibitor, The European Journal of Pharmacology，2019, 865:172738	2019	3.0
16	Lactic acid induces HSPA1A expression through ERK1/2 activation	2022	2.4
17	Contribution of GPD2/mGPDH to an alternative respiratory chain of the mitochondrial energy metabolism and the stemness in CD133-positive HuH-7 cells, Genes to Cells,2020, 25(2):139-148	2020	1.9

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