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AMV 反转录酶 货 号 M0277LNEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – DNA聚合酶与扩增技术 – cDNA 合成

AMV 反转录酶                              收藏

AMV 反转录酶 货 号 M0277L

货 号
规 格
价 格(元)
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#M0277L
1,000 units
2,589.00
有
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#M0277S
200 units
649.00
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概述

 禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 为模板从引物开始合成互补的 DNA 链。

来源

 禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）。

反应条件

 1X AMV 反转录酶反应缓冲液 [50 mM

Tris-acetate (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KOAc，8 mM
Mg(OAc)2，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提
供），37℃-42℃ 温育。

质保声明

 无核酸内切酶、外切酶和 RNase 污染。

单位定义

 1 单位指以 poly(rA)•oligo(dT)为模板/引

物，37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP
掺入酸不溶物中所需要的酶量。单位活性检测条
件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。

浓度

 10,000 units/ml

贮存注意

 解冻后，请贮存于 -20℃。反复冻融会导致酶失活。长时间贮存可分装后置于 -70℃。

AMV 反转录酶 货 号 #M0277LNEB酶试剂 New England Biolabs

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上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – RNA 试剂 – cDNA 合成

AMV 反转录酶                              收藏

AMV 反转录酶 货 号 #M0277L

货 号
规 格
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#M0277L
1,000 units
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特性

 合成 cDNA
 RNA 测序
 RT-PCR 

概述

禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）反转录酶是一种 RNA 介导的 DNA 聚合酶。该酶能以 RNA（合成 cDNA 时）或单链 DNA 为模板从引物开始合成互补的 DNA 链。 

来源

禽骨髓母细胞瘤病毒（AMV）。 

反应条件

1X AMV 反转录酶反应缓冲液
[50 mM Tris-acetate (pH 8.3 @ 25℃)，75 mM KOAc，8 mM Mg(OAc)2，10 mM DTT]，加入 dNTPs（不随酶提供），37-42℃ 温育。 

 

质保声明

无核酸内、外切酶和 RNase 污染。 

单位定义

1 单位指以 poly(rA) 为模板，oligo(dT) 为引物，37℃ 条件下，10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入酸不溶性沉淀物中所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。 

浓度

10,000 units/ml。 

贮存注意

解冻后，请立即贮存于-20℃。反复冻融会导致酶失活。长时间贮存可分装后置于 -70℃。 

参考文献

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。 

TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1酶试剂盒Takara

发表于由

TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR012A TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 100 Rxns ￥2,168 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
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TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1 TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
 
 
■ 制品内容 (100 次量*1)
AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (来源于Avian Myeloblastosis Virus) 50 μl
RNase Inhibitor*2 (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers*2 (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa LA Taq (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4*2 (20 pmol/μl) 50 μl
10X RNA PCR Buffer 120 μl
    100 mM Tris-HCl (pH8.3)  
    500 mM KCl  
10X LA PCR Buffer II (Mg2+ Free) 500 μl
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物) 25 μl
Control R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物) 25 μl
Positive Control RNA*2 (2 × 105 copies/μl)
(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)		 25 μl
 
*1：本试剂盒可用于100次反应 (总反应量：RT 反应10 μl, PCR反应 50 μl)
*2：【各种引物序列】
 
引物名称 各引物序列
Random 9 mers
        5′-NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer
        包含dT区域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer
        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4
        5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
 
*3：【Positive Control RNA】
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kbp的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。当把Control RNA经RT-PCR合成的双链cDNA插入质粒时，该质粒便可获得四环素抗性。Control RNA简图见图1。
 
TaKaRa RNA LA PCR™ Kit (AMV) Ver.1.1
图1. Positive Control RNA：使用各种引物所能扩增的DNA片段
 
 
■ 制品说明
TaKaRa RNA LA PCR Kit (AMV) Ver.1.1使用TaKaRa LA Taq酶，实现反转录后的更长更准确的PCR反应。TaKaRa LA Taq酶是Takara Bio公司研制的LA (long and accurate) PCR*反应的关键组成。
本试剂盒利用LA Technology的优势特点，用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 来源的反转录酶，由RNA反转录至cDNA，然后再在同一反应管中用TaKaRa LA Taq扩增此cDNA，操作简单，使用方便。本试剂盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特别设计，使从Poly (A)+ RNA 3’端合成cDNA的效率更高，从而可以利用3’-RACE法高效扩增RNA的3′端未知区域。
*：U.S.Patent 5,436,149 for LA Technology is owned by TAKARA BIO INC.
 
■ 保存
-20℃。
 
■ 特点
RNA模板
   适用于所有RNA
扩增片段大小
   ～12 kb
反转录酶
   AMV Reverse Transcriptase (反转录反应温度在42℃～60℃)
DNA Polymerase
   TaKaRa LA Taq
RNase Inhibitor
   试剂盒中含有
合成cDNA第一条链的引物
   Random 9 mers或Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游PCR Primer 可供选择
3′-RACE法
  RT反应时使用Oligo dT-Adaptor Primer
  PCR反应时下游引物使用M13 Primer M4
操 作
   在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)
 
■ 使用注意
1. 当同时需要进行多个反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等），然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用Reverse Transcriptase (AMV)、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 等试剂时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。
5. PCR反应条件
最适的PCR条件因PCR扩增仪的不同而不同，建议在进行样品实验前先试做一下Control实验。
6. 引物选择
用于反转录的引物可视实验具体情况选择Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游引物。对于不具有Hairpin构造的短链mRNA，3种引物中的任何一种都可以使用，但一般应按以下方法进行选择。
Random 9 mers
  适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。
  用Random 9 mers合成的cDNA进行PCR反应时，使用任何一对特异性引物都能获得良好的扩增。
Oligo dT-AdaptorPrimer
   适用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物Primer 的rRNA及tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA不具有Poly(A)+ Tail)。本Primer设计巧妙，反转录效率高。反转录反应后，可用M13 Primer M4进行3’-RACE实验。
特异性下游PCR Primer
(PCR时的下游引物)
  因其必须与模板序列互补，所以只适用于Target序列已知的情况。
 
 

页面更新：2022-07-13 11:51:01

TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0酶试剂盒Takara

发表于由

TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR019A TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 100 Rxns ￥1,683 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
Takara RR019B (A × 2) TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 100 Rxns × 2 ￥3,024 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
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■ 制品内容 (Code No.: RR019A : 100 次量*1)
AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (Avian Myeloblastosis Virus来源)
50 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 25 μl
Random 9 mers*2 (50 pmol/μl) 50 μl
Oligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl) 25 μl
M13 Primer M4*2 (20 pmol/μl) 50 μl
10 × RT Buffer [100 mM Tris-HCl (pH8.3)，500 mM KCl] 1 ml
5 × PCR Buffer 1 ml
dNTP Mixture (各10 mM) 150 μl
MgCl2 (25 mM) 1 ml
Control R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物) 25 μl
Control F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物) 25 μl
Positive Control RNA*3 (2 × 105 copies/μl)
(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)		 25 μl
 
*1：1次反应即10 μl RT及 50 μl PCR
*2：引物序列
引物名称 各引物序列
Random 9 mers
        5′-(P)NNNNNNNNN-3′
Oligo dT-Adaptor Primer
        包含dT区域及M13 Primer M4序列。
Control F-1 Primer
        5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer
        5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
M13 Primer M4
        5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′
*3：Positive Control RNA
本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。Control RNA (约1.4 kb) 是带有30个A碱基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。当把Control RNA经RT-PCR合成的双链cDNA插入质粒时，该质粒便可获得四环素抗性。Control RNA简图见图1。
TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
图1. Positive Control RNA：使用各种引物所能扩增的DNA片段
 
■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
TaKaRa RNA PCR Kit Ver.3.0是使用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由来的反转录酶将RNA合成cDNA，然后在同一反应管中使用Hot Start PCR用TaKaRa Ex Taq HS DNA聚合酶扩增此cDNA的RT-PCR试剂盒。本试剂盒含有从RNA到cDNA，然后使用PCR法扩增此cDNA所需的全部试剂，可实现简单高效的RNA分析。
本试剂盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特殊设计，大大地提高了Poly(A)+ RNA 3′端区域的cDNA合成效率。Hot Start PCR用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS的应用，避免扩增前由于错配或引物二聚体产生的非特异性扩增。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ RNA LA PCR的原理
本试剂盒使用AMV由来的反转录酶由RNA合成cDNA，并可在同一反应管中使用TaKaRa Ex Taq HS扩增此cDNA。Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特异性下游引物等均可作为反转录引物用于cDNA合成。Oligo dT-Adaptor Primer同时适用于3′-RACE实验。
TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
图2. RNA PCR的原理
 
■ 特点
RNA模板
   适用于所有RNA
扩增片段大小
   ≤5 kb
反转录酶
   AMV Reverse Transcriptase XL
DNA Polymerase
   TaKaRa Ex Taq HS
RNase Inhibitor
   必须使用 (Kit中含有)
合成第一条cDNA链的引物
   Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特异性下游PCR Primer 可供选择
3′-RACE法
  RT反应时使用Oligo dT-Adaptor Primer，PCR反应时下游引物使用M13 Primer M4
操 作
   在同一反应管中进行 (反转录酶在进行PCR反应前须进行高温失活)
 
■ 反转录反应时Primer的选择
Random 9 mers
  适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。 用Random 9 mers合成的cDNA进行PCR反应时，必须使用特异性引物。
Oligo dT-Adaptor Primer
   适用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物 Primer 的rRNA及tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA不具有Poly (A)+ Tail)。 本Primer设计巧妙，反转录效率高。反转录反应后，可用M13 Primer M4进行3′-RACE实验。
特异性下游PCR Primer
(PCR时的下游引物)
  因其必须与模板序列互补，所以只适用于Target序列已知的情况。
 
■ 注意事项
1. 当同时需要进行数次反转录反应或PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等)，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 酶等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
5. 最佳的PCR条件，因PCR扩增仪的不同而不同，所以在使用您的样品之前最好先试做一下Control反应，以确定最佳的PCR条件。
 
 

页面更新：2022-07-13 11:56:12

TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)酶试剂盒Takara

发表于由

TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格（元） 说明书 数量
Takara RR024A TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 50 Rxns ￥1,472 TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
Takara RR024B (A × 2) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 50 Rxns × 2 ￥2,653 TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
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※ 上表中产品货期不定，请您在下单前咨询当地代理商。
 
 
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
 
 
■ 制品内容 (Code No.: RR024A : 50 次量)
AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl) 50 μl
RNase Free dH2O 1 ml × 2 支
RNase Inhibitor (40 U/μl) 50 μl
AMV-Optimized Taq (5 U/μl) 50 μl
10X One Step RNA PCR Buffer 250 μl
dNTP Mixture (各10 mM) 250 μl
MgCl2 (25 mM) 500 μl
Control F-1 Primer (20 μM)*1
(Positive Control RNA用上游引物)		 25 μl
Control R-1 Primer (20 μM)*1
(Positive Control RNA用下游引物)		 25 μl
Positive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)
(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)		 25 μl
   
*1：各种引物序列
引物名称 各引物序列
Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′
Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
 
*2：本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。
 
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
图1. Positive Control RNA：进行Control实验时所能扩增的DNA片段
 
 
■ 制品说明
PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。
本试剂盒采用了一步反应法 (One Step法) 完成RT-PCR反应。RNA→cDNA→PCR反应操作在同一反应体系中进行，反应中途不需添加任何试剂，就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由来的反转录酶从RNA反转录为cDNA，再由AMV-Optimized Taq (根据LA PCR技术研制) 扩增cDNA的全部反应。
常规RT-PCR试剂盒采用2 step PCR进行连续反应，并分别配制反应液，这些操作增加了污染的可能性，而本试剂盒可降低污染，并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本试剂盒中含有进行One Step法RT-PCR反应用的全部试剂，可以简便而有效地对RNA进行扩增分析。
 
■ 保存
-20℃。
 
■ One Step RT- PCR的原理
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反应管中完成由AMV 反转录酶从RNA反转录为cDNA，再使用AMV-Optimized Taq扩增此cDNA的RT-PCR反应。
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
图2. One Step RT-PCR原理图
 
■ 特点
      RNA模板      适用于所有RNA
      扩增片段大小      ～5.6 kb
      反转录酶     AMV Reverse Transcriptase XL (反转录反应温度在42℃～60℃)
      反转录引物      特异性下游引物(PCR扩增反应用反义链引物)（不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer）
      DNA Polymerase      AMV-Optimized Taq
      RNase Inhibitor      Kit中含有
      操作      在同一反应管中连续进行 (PCR反应前加热使RTase失活)
 
■ 注意事项
1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液(Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等)，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。
3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放回-20℃中保存。
4. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。
5. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。
6. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物，Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。
 
 

页面更新：2022-07-13 13:15:41