HR4-918- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Products > Cryocrystallography > CryoLoops > 18 mm Mounted CryoLoop™ – 20 micron

18 mm Mounted CryoLoop™ – 20 micron

CAT NO

HR4-932

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.025 – 0.05 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-945

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.05 – 0.1 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-947

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.1 – 0.2 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-970

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.2 – 0.3 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-971

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.3 – 0.4 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-972

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.4 – 0.5 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-973

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.5 – 0.7 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-974

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.7 – 1.0 mm – 25 pack

PRICE

$74.00

CAT NO

HR4-918

NAME

18 mm Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

Sampler – 30 pack (5 of each diameter size 0.1 – 1.0 mm)

PRICE

$86.00

应用

Cryocrystallography
低温晶体学

特征

Ready to use 18 mm length MicroTube with CryoLoop
Synthetic CryoLoop on stainless steel MicroTube
Complete range of loop diameters from 0.025 – 1.0 mm
Compatible with CrystalCap, CrystalCap ALS, CrystalCap ALS HT and CrystalCap Spine HT
即用型 18 mm 长 MicroTube 和 CryoLoop
不锈钢 MicroTube 上的合成 CryoLoop
从 0.025 – 1.0 mm 的完整范围的环直径
与 CrystalCap、CrystalCap ALS、CrystalCap ALS HT 和 CrystalCap Spine HT 兼容

描述

18 mm Mounted CryoLoops with 20 micron diameter nylon. Nylon loops are staked to hollow, stainless steel MicroTubes™ that are used to mount, freeze, and secure the crystal during cryocrystallographic procedures and X-ray data collection. The MicroTube on the 18 mm Mounted CryoLoops is 18 mm in length and ready to insert into CrystalCap Magnetic and CrystalCap HT. The 20 micron diameter nylon loops show minimal diffraction, are thin for fast cryo cooling of the crystal, strong, and aerodynamic.

For use with CrystalCap, CrystalCap ALS, CrystalCap ALS HT and CrystalCap SPINE HT systems. Not compatible with the CrystalCap Copper, CrystalCap Copper HT, or CrystalCap ALS HT.

18 毫米安装的 CryoLoops，带有 20 微米直径的尼龙。尼龙环固定在空心不锈钢 MicroTubes™ 上，用于在低温晶体学程序和 X 射线数据收集过程中安装、冷冻和固定晶体。安装在 18 mm CryoLoops 上的 MicroTube 长 18 mm，可插入 CrystalCap Magnetic 和 CrystalCap HT。直径为 20 微米的尼龙环显示出最小的衍射，很薄，可快速冷却晶体，坚固且符合空气动力学。

用于 CrystalCap、CrystalCap ALS、CrystalCap ALS HT 和 CrystalCap SPINE HT 系统。与 CrystalCap Copper、CrystalCap Copper HT 或 CrystalCap ALS HT 不兼容。

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒Mounted CryoLoop™ – 20 micron/HR4-963/HR4-959/HR4-957- DOJINDO

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Products > Cryocrystallography > CryoLoops > Mounted CryoLoop™ – 20 micron

Mounted CryoLoop™ – 20 micron

应用

Cryocrystallography
低温晶体学

特征

Synthetic CryoLoop on stainless steel MicroTube
MicroTube specially engineered with EasySnap notches
Complete range of loop diameters from 0.025 – 1.0 mm
Compatible with all CrystalCap Systems
不锈钢 MicroTube 上的合成 CryoLoop
MicroTube 特别设计，带有 EasySnap 凹槽
从 0.025 – 1.0 mm 的完整范围的环直径
与所有 CrystalCap 系统兼容

描述

Note: If you are using the CrystalCap, CrystalCap ALS, CrystalCap ALS HT, or CrystalCap SPINE HT, save time and money by using the ready to mount 18 mm Mounted CryoLoop.

Mounted CryoLoops with 20 micron diameter nylon. These nylon loops are bonded to hollow, stainless steel MicroTubes™ that are used to mount, freeze, and secure the crystal during cryocrystallographic procedures and X-ray data collection. The MicroTube is 24 mm in length and is specially engineered with EasySnap™ notches at the 10, 12, 14, 18, and 21 mm measures. To obtain the desired length of MicroTube, simply snap the MicroTube at the desired length and secure to the CrystalCap using epoxy or similar adhesive. These nylon loops show minimal diffraction, are thin for fast freezing, strong, and aerodynamic..

Most data collection geometries prefer or require a 22 mm length between the base of the cap and the beam. For a 22 mm overall length using the CrystalCap, CrystalCap ALS, CrystalCap ALS HT and CrystalCap SPINE HT, snap the MicroTube at the second notch from the bottom, creating an 18 mm MicroTube lenghth and secure to the CrystalCap using epoxy or similar adhesive. For a 22 mm over length using the CrystalCap Copper, CrystalCap Copper HT, CrystalCap ALS Copper HT snap the MicroTube at the fifth notch from the bottom (notch closest to the CryoLoop) and secure to the CrystalCap using epoxy or similar adhesive.

注意：如果您使用的是 CrystalCap、CrystalCap ALS、CrystalCap ALS HT 或 CrystalCap SPINE HT，请使用可安装的 18 毫米已安装 CryoLoop 来节省时间和金钱。

安装有 20 微米直径尼龙的 CryoLoops。这些尼龙环与中空不锈钢 MicroTubes™ 粘合，用于在低温晶体学程序和 X 射线数据收集过程中安装、冷冻和固定晶体。 MicroTube 的长度为 24 毫米，专门设计了 10、12、14、18 和 21 毫米尺寸的 EasySnap™ 凹槽。要获得所需长度的 MicroTube，只需将 MicroTube 卡入所需长度并使用环氧树脂或类似粘合剂固定到 CrystalCap。这些尼龙环显示出最小的衍射，很薄，可以快速冷冻，坚固且符合空气动力学。

大多数数据收集几何结构更喜欢或要求帽底和梁之间有 22 毫米的长度。对于使用 CrystalCap、CrystalCap ALS、CrystalCap ALS HT 和 CrystalCap SPINE HT 的 22 mm 总长度，将 MicroTube 从底部的第二个凹口处卡入，形成 18 mm 的 MicroTube 长度并使用环氧树脂或类似粘合剂固定到 CrystalCap。对于 22 mm 以上的长度，使用 CrystalCap Copper、CrystalCap Copper HT、CrystalCap ALS Copper HT 将 MicroTube 卡在从底部算起的第五个槽口（最靠近 CryoLoop 的槽口），并使用环氧树脂或类似粘合剂固定到 CrystalCap。

HR4-965 Mounted CryoLoop 0.7 – 1.0 mm

Hampton蛋白结晶试剂盒Mounted CryoLoop™ – 20 micron/HR4-963/HR4-959/HR4-957

CAT NO

HR4-313

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.025 – 0.05 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-625

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.05 – 0.1 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-955

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.1 – 0.2 mm – 25 pack

PRICE

$84.00CAT NO

HR4-957

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.2 – 0.3 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-959

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.3 – 0.4 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-961

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.4 – 0.5 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-963

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.5 – 0.7 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-965

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

0.7 – 1.0 mm – 25 pack

PRICE

$84.00

CAT NO

HR4-953

NAME

Mounted CryoLoop – 20 micron

DESCRIPTION

Sampler – 30 pack (5 of each diameter size 0.1 – 1.0 mm)

PRICE

$103.00

参考

1. FeeM, an N-acyl amino acid synthase from an uncultured soil microbe: Structure, mechanism, and acyl carrier protein binding. Ryan M. Van Wagoner and Jon Clardy. Structure, 2006, Volume 14, Number 9, 1425-1435.

1. FeeM，一种来自未培养土壤微生物的 N-酰基氨基酸合酶：结构、机制和酰基载体蛋白结合。瑞安 M. 范瓦格纳和乔恩克拉迪。结构，2006 年，第 14 卷，第 9 期，1425-1435。

日本同仁化学Hampton蛋白结晶试剂盒Mounted CryoLoop™ – 10 micron/HR4-994/HR4-995/HR4-999/HR4-997- DOJINDO

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Products > Cryocrystallography > CryoLoops > Mounted CryoLoop™ – 10 micron

Mounted CryoLoop™ – 10 micron

CAT NO

HR4-994

NAME

Mounted CryoLoop – 10 micron

DESCRIPTION

0.025-0.05 mm – 25 pack

PRICE

$91.00

CAT NO

HR4-995

NAME

Mounted CryoLoop – 10 micron

DESCRIPTION

0.05 – 0.1 mm – 25 pack

PRICE

$91.00

CAT NO

HR4-997

NAME

Mounted CryoLoop – 10 micron

DESCRIPTION

0.1 – 0.2 mm – 25 pack

PRICE

$91.00

CAT NO

HR4-999

NAME

Mounted CryoLoop – 10 micron

DESCRIPTION

0.2 – 0.3 mm – 25 pack

PRICE

$91.00

应用

Cryocrystallography
低温晶体学

特征

Synthetic CryoLoop on stainless steel MicroTube
MicroTube specially engineered with EasySnap notches
不锈钢 MicroTube 上的合成 CryoLoop
MicroTube 特别设计，带有 EasySnap 凹槽

描述

Mounted CryoLoops with 10 micron diameter nylon. The 10 micron Mounted CryoLoop shows less background diffraction than the 20 micron Mounted CryoLoop. Please note that the 10 micron Mounted CryoLoops are very flexible due to their small diameter. These nylon loops are bonded to hollow, stainless steel MicroTubes™ that are used to mount, freeze, and secure the crystal during cryocrystallographic procedures and X-ray data collection. The MicroTube is 24 mm in length and is specially engineered with EasySnap™ notches at the 10, 12, 14, 18, and 21 mm measures. To obtain the desired length of MicroTube, simply snap the MicroTube at the desired length and secure to the CrystalCap using epoxy or similar adhesive. These nylon loops show minimal diffraction, are thin for fast freezing, strong, and aerodynamic.

安装有 10 微米直径尼龙的 CryoLoops。 10 微米安装的 CryoLoop 显示的背景衍射比 20 微米安装的 CryoLoop 少。请注意，10 微米安装的 CryoLoop 因其小直径而非常灵活。这些尼龙环与中空不锈钢 MicroTubes™ 粘合，用于在低温晶体学程序和 X 射线数据收集过程中安装、冷冻和固定晶体。 MicroTube 的长度为 24 毫米，专门设计了 10、12、14、18 和 21 毫米尺寸的 EasySnap™ 凹槽。要获得所需长度的 MicroTube，只需将 MicroTube 卡入所需长度并使用环氧树脂或类似粘合剂固定到 CrystalCap。这些尼龙环显示出最小的衍射，很薄，可以快速冷冻，坚固且符合空气动力学。

参考HR4-994 Mounted CryoLoop 0.025 – 0.05 mm

1. A novel approach to micro-sample X-ray powder diffraction using nylon loops. Reibenspies and Bhuvanesh. J. Appl. Cryst. (2003). 36, 1480-1481.

1. 一种使用尼龙环进行微量样品 X 射线粉末衍射的新方法。 Reibenspies 和 Bhuvanesh。 J.应用。水晶。（2003 年）。 36, 1480-1481。

日本同仁化学DAB试剂货号：D006 3,3′-Diaminobenzidine, tetrahydrochloride CAS号：7411-49-6- DOJINDO

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DAB试剂货号：D006

3,3′-Diaminobenzidine, tetrahydrochloride

CAS号：7411-49-6

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₂H₁₈Cl₄N₄

分子量：

360.11

SDS下载

选择规格：

期货

细胞染色

DAB试剂货号：D006 3,3′-Diaminobenzidine, tetrahydrochloride CAS号：7411-49-6

产品简介

染色溶液的制备

参考文献

操作和储存条件

产品简介

DAB试剂货号：D006 3,3′-Diaminobenzidine, tetrahydrochloride CAS号：7411-49-6

DAB是在免疫组化中最常用的氧化型过氧化物酶显色底物之一。在过氧化氢和过氧化酶存在时，DAB被氧化成棕色的显色底物。这种棕色的显色底物是苯胺黑类化合物，可以牢固的沉积在细胞膜或组织上的过氧化物酶的周围。市面上销售的DAB往往由于生产和保存期间的氧化问题呈褐色。而同仁化学研究所的提供的高纯度DAB的性状呈白色或略带红色的灰色粉末，可以得到灵敏度更高的染色效果。

染色溶液的制备

1. 用1 ml PBS溶解9 mg DAB制备成100 x DAB solution。

2. 用1 ml PBS混合5 μl 的30%过氧化氢酶溶液制备成200 x H₂O₂ solution。

3. 向1 ml PBS中加入10 μl 的100 x DAB solution和5 μl的 200 x 的H₂O₂ solution制成Staining soluiton¹⁾。

4. 将Staining solution加入到染色容器中并将样品在室温下培养1 h²⁾。

5. 用PBS清洗样品数次使染色反应停止。

1) Staining solution不稳定，请现配现用。

2) 为了获得更好的染色效果，可以在加入Staining solution之前预先用0.09 mg DAB/PBS溶液培养样品10 min。

参考文献

1) A. B. Novikoff, et al., Studies on Microperoxisomes V. Are Microperoxisomes Ubiquitous in Mammalian Cells. J Histochem Cytochem. 1973;21:737.

2) V. Herzog, et al., A New Sensitive Colorimetric Assay for Peroxidaase Using 3, 3 EDiaminobenzidine as Hydrogen Donor. Anal Biochem. 1973;55:554.

3) H. Yamada, et al., Improvement of Technique of Immunohistochemical Demonstraction of Bioactive Substances in the Central Nervous System. Acta Histochem Cytochem. 1987;20:629.

4) K. L. Cheng, Determination of Traces of Selenium 3,3 EDiaminobenzidine as Selenium(IV) Organic Reagent. Anal Chem. 1956;28:1738.

操作和储存条件

规格：

性状：红色或略带红色的灰色粉末

纯度(滴定法)：≥97.0%(干燥固态)

水中溶解度：通过检测

Tris缓冲液中溶解度：通过检测

吸光度(硒化合物)：≧ 0.500 (420 nm附近)

干燥失重：≤5.0%

硫酸盐灰分：≤0.05%

IR谱图：一致

操作和储存条件：

0-5℃，避光

危险/有害性标志

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日本同仁化学Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Cellstain- DAPI试剂货号：D212

4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐

Cellstain- DAPI

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₆H₁₇Cl₂N₅

分子量：

350.25

特点：

● 可用于流式细胞仪

● 活细胞核染色试剂

SDS下载

选择规格：

1 mg

现货

细胞染色

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

规格性状

产品概述

荧光特性

操作说明

文献

常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产物为黄色至微黄色的绿棕色粉末或固体，可溶于水和稀盐酸。

水溶性：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料DAPI是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对细胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360 nm和460 nm。

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

荧光特性

λex=360 nm, λem=460 nm

操作说明

产品使用步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMDAPI溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的DAPI溶液。^b）

3.将细胞在37℃下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.使用带有360 nm激发光和460 nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a）由于DAPI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的DAPI缓冲溶液代替培养基。

注意事项

制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

考虑长期存储时，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（代码：D523），以提高解决方案的稳定性。

文献

1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.

2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.

3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains”, Stain Technol.,1985, 60, 7.

4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains”, Cytometry, 1994,16,227.

5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”, J.Appl. Microbiol.,1999, 86 (3),496.

常见问题Q&A

Q1 核染色中所用染料的特征和区别是什么？

A1:这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。

除荧光波长以外的差异如下。

[EB]

它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[PI]

像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[DAPI]

与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[AO]

通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。

它渗透到活细胞的细胞膜上。

[Hoechst33342，33258]

它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。

它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

Q3 如何使用DAPI进行核染色？

A3:有以下使用情况报告示例。制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

对于长期存储，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（货号：D523），具有更高的解决方案稳定性。使用时，用缓冲液或有机溶剂将储备溶液稀释至所需浓度。

[使用DAPI进行细胞染色的示例]

包含实体瘤或簇的样品的DAPI染色示例（参考文献3）

1）用0.02％胰蛋白酶-EDTA处理，在37°C下孵育30分钟，以1,500 rpm离心5分钟，然后冲洗上清液。

2）在-20°C下用50％甲醇（也可以使用乙醇）固定后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1,500rpm离心5分钟以除去上清液。

4）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

5）每106个细胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）（pH 7.2）（1 mg / mL），并在37°C下孵育30分钟。

6）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

7）加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液，并在黑暗中于4°C染色2小时。

[使用DAPI进行细胞染色的例子] Vollenweider等人在磷酸化因子激活的杀伤（LAK）细胞的细胞增殖试验中。

使用荧光打印机执行DAPI染色并进行测量（参考2）。

那时，请使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。

使用每孔100μL进行荧光染色。

日本同仁化学BCECF-AM试剂货号：B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号：117464-70-7- DOJINDO

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BCECF-AM试剂货号：B262

3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester

CAS号：117464-70-7

商品信息

储存条件：-20度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₃₅H₂₈O₁₅

分子量：

688.59

特点：

● 水溶性好，可进入细胞膜

● 荧光强度高

下载说明书

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选择规格：

1mg

现货

荧光探针检测方案

BCECF-AM试剂货号：B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号：117464-70-7

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产品特性

操作说明

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规格性状

规格

特性：该产物为浅橙色至浅橙色棕色粉末或固体，可溶于DMSO和乙腈。

纯度(HPLC)：90%以上

荧光光谱：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

BCECF被广泛地用于细胞内pH的测定。Tsien博士和其他人通过加入2个额外的羧化物基团改进了这种羧基荧光素。加入的两个羧基使得它能更好地被固定在细胞内。BCECF具有很好的水溶性，是因为它在中性pH时带有4-5个负电荷。但是BCECF却很难穿过细胞膜进入到细胞内。它的pKa值为6.97，高于其它的羧基荧光素。BCECF在激发光谱439nm处有等吸收点，因此它能和Fura 2一样可用比率法测定。505nm和439nm通常是非常有用的用于比率测量的波长，一般会将490nm和450nm的滤光片加在激发光源的前面。而530nm的滤光片则是用来查看它的荧光信号的。这里要注意的是激发光谱与吸收光谱有一些细微的区别。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF。它能够轻易地进入到细胞内。就和其他的乙酰甲酯类一样，BCECF-AM只需要通过孵育就能进入细胞。BCECF-AM对潮湿非常敏感，所以要小心保存。如果DMSO储存液的颜色从浅黄色变为深橙色就代表了AM的分解。所以通过对颜色变化的观测，能判断AM酯的水解情况。

BCECF-AM试剂货号：B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号：117464-70-7

产品特性

BCECF-AM是一种对细胞内pH敏感的新型荧光探针，分别用490nm和440nm波长激发BCECF所得到的发射荧光之比与pH有很好的线性关系。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF，BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，BCECF-AM没有荧光，进入细胞后被细胞内的酯酶水解成BCECF，从而被留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。BCECF-AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也有报道用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF AM被广泛应用。BCECF-AM(pH荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)配制。

BCECF-AM试剂货号：B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号：117464-70-7

操作说明

试剂 (溶解方法):

1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液(将1 mg 的BCECF-AM溶于1mlDMSO)HEPES缓冲液(20mM HEPES，153mM NaCl，5mM KCl，5mM glucose，pH7.4)

操作：

1.用HEPES制备细胞悬液，细胞浓度为4×10⁷个/ml。

2.将1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液加入细胞悬液中 (细胞悬液的1/300体积)，BCECF-AM终浓度为3mM。

3.37℃培养30min。

4.用HEPES缓冲液清洗细胞3次，制成3×10⁶个/ml的细胞悬液。

5.使用荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光强度。

*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

BCECF-AM试剂货号：B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号：117464-70-7

文献

1.R.A.Steinhardt, et al.,Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH. Nature.1973;241:400-401.

2.T.J.Rink, et al.,Cytoplasmic pH and Free Mg2+ in Lymphocytes.J Cell Biol.1982;95:189-196.

3.A.M.Paradiso,et al.,Na+ -H+ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator. PNAS.1984;81:7436-7440.

4.S.Grinstein,et al.,Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils:Role of Exocytosis in Na+ – H+ Exchange.Am J Physiol.1985;248:C379-C386.

5.G.B.Zavoico, et al.,Regulation of intracellular pH in human platelets.Effects of thrombin,A23187,and ionomycin and evidence for activation of Na+/H+ exchange and its inhibition by amiloride analogs.J Biol Chem.1986;261:13160-13167.

6.G.R.Bright,et al.,Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH.J Cell Biol.1987;104:1019-1033.

7.C.Aalkjaer,et al.,Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels. J Physiol.1988;402:391-410.

8.K.Tsujimoto,et al.,Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2 E 7 Ebis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein.Biochem Biophys Res Commun.1988;155:123-129.

9.M.A.Kolber,et al.,Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethylcarboxyfluorescein(BCECF).J Immunol Methods.1988;108:255-264.

10.H.Harada,et al.,cAMP Activates Cl-/HCO3 – Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells. Biochim Biophys Acta. 1991;1092:404-407.11.C.C. Freudenrich, et al.,Intracellular pH Modulates Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells.Am J Physiol.1992;262:C1024-C1030.

12.K.Khodakhah,et al.,Functional Heterogeneity of Calcium Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues. PNAS. 1993;90:4976-4980.

13.G.Boyarsky,et al.,Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells. FASEB J.1996;10:1205-1212.

14.S.A. Weston,et al., New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy.J Immunol Methods.1990;133:87-97.

15.L.S.De Clerck,et al.,Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function.J Immunol Methods.1994;172:115-124.

日本同仁化学CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE- DOJINDO

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CFSE试剂货号：C309

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate

CFSE

商品信息

储存条件：-20度保存

运输条件：室温

分子式：

C₂₉H₁₉NO₁₁

分子量：

557.46

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选择规格：

10mg

期货

细胞染色检测方案

关联产品

CFSE试剂货号：C309 5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate CFSE

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒

活死细胞双染试剂盒

活细胞质染色-绿色——Calcein-AM

3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂

2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂

细胞膜染色试剂—绿色

Cellstain- CFSE试剂

5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-d

日本同仁化学死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red- DOJINDO

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死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556

死细胞标记试剂– Deep Red

Dead Cell Makeup Deep Red – Higher Retention than PI

商品信息

储存条件：-20°C，避光

运输条件：常温运输

特点：

● 流式细胞仪检测

● 可固定细胞

● 荧光不会泄露

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选择规格：

100tests

现货

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

产品概述

技术信息

DMSO 储存溶液的保质期

与现有 PI 方法的比较

实验案例：诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

常见问题Q&A

产品概述

该试剂可与细胞表面和细胞内的蛋白质共价结合，对膜受损的死亡细胞进行强染色。此外，染色剂在固定和渗透细胞后不会渗漏。染色后，活细胞和死细胞的荧光强度差异显著，通过流式细胞仪分析，死细胞很容易区分和排除。

技术信息

区分和排除死细胞对使用流式细胞仪 (FCM) 获得准确数据至关重要，近年来，这一过程已成为发表论文时越来越常见的要求。碘化丙啶（PI）可用于区分死细胞，但细胞膜的固定或渗透会导致 PI 从细胞中渗出，从而难以获得准确的数据。这种试剂具有与细胞表面和细胞内部蛋白质共价结合的特性，因此即使细胞被固定或渗透后，染料也不会渗出。此外，染色后活细胞和死细胞的荧光强度差异很大，因此 FCM 可以轻松区分死细胞并将其排除在分析之外。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

DMSO 储存溶液的保质期

本产品的 DMSO 储备溶液可冷冻保存六个月。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

与现有 PI 方法的比较

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

实验案例：诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

MOLT-4 细胞在含有 Ionomycin（500 ng/ml）和 PMA（Phorbol 12-myristate 13-acetate，50 ng/ml）的 RPMI 培养基中刺激 48 小时。死细胞用本品染色，PD-1 表达用免疫染色法检测（一抗：抗 PD-1 小鼠抗体，二抗：抗小鼠抗体-Alexa488）。结果表明，死细胞和活细胞可以清楚地区分开来，而且在只选取活细胞的情况下，受刺激细胞组的 PD-1 表达升高。

实验步骤

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

试验结果

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

常见问题Q&A

Q1：能否测量贴壁细胞？

A1：可对贴壁细胞进行检测。用胰蛋白酶消化细胞或用刮板收集细胞，以制备细胞悬液。

Q2：胰蛋白酶会干扰测量吗？

A2：通过以下实验证实胰蛋白酶对 HeLa 细胞的影响。我们将胰蛋白酶处理与使用刮板进行了比较，确认两种情况下的分析结果没有区别。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

Q3：是否可以用显微镜进行观察？

A3：我们已经证实，可以对染色后的 HeLa 细胞进行成像。用这种染料染色的 HeLa 细胞在固定和膜渗透后的成像结果如下。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

Q4：染色是否会产生细胞毒性？

A4：使用CCK-8 来评估染色对 HeLa 细胞的细胞毒性，结果显示几乎没有细胞毒性。

Q5：染色后能否保存固定的细胞？

A5：不建议保存。由于荧光强度在固定后会随着时间的推移而降低，因此染色后的样本应在当天进行检测。

Q6：DMSO stock solution的稳定性如何？

A6：该产品在 -20°C 下冷冻保存 6 个月是稳定的。本品受潮后会降解；如果考虑长期储存超过 6 个月，请使用未开封且含水量低的DMSO。

此外，如有必要，可将产品分成小份储存

Q7：如何对细胞进行栅极化？

A7：以下是使用 Becton Dickinson (BD) 流式细胞仪的方法。

死细胞标记试剂– Deep Red货号：C556 死细胞标记试剂– Deep Red

日本同仁化学死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue- DOJINDO

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死细胞标记试剂–Blue货号：C555

死细胞标记试剂–Blue

Dead Cell Makeup Blue – Higher Retention than PI

商品信息

储存条件：0-5°C，避光

运输条件：常温运输

特点：

● 染料不会从死细胞中泄漏

● 储备溶液可以冷冻保存6个月

● 有两种不同的颜色可供选择

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C555/C556宣传资料

选择规格：

100tests

现货

产品概述

技术信息

DMSO 储存溶液的保质期

与现有 PI 方法的比较

实验案例：诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

常见问题Q&A

产品概述

技术信息

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

DMSO 储存溶液的保质期

本产品的 DMSO 储备溶液可冷冻保存六个月。

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

与现有 PI 方法的比较

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

实验案例：诱导 MOLT-4 细胞衰竭后的 PD-1 检测

实验步骤

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

试验结果

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

常见问题Q&A

Q1：能否测量贴壁细胞？

A1：可对贴壁细胞进行检测。用胰蛋白酶消化细胞或用刮板收集细胞，以制备细胞悬液。

Q2：胰蛋白酶会干扰测量吗？

A2：通过以下实验证实胰蛋白酶对 HeLa 细胞的影响。我们将胰蛋白酶处理与使用刮板进行了比较，确认两种情况下的分析结果没有区别。

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

Q3：是否可以用显微镜进行观察？

A3：我们已经证实，可以对染色后的 HeLa 细胞进行成像。用这种染料染色的 HeLa 细胞在固定和膜渗透后的成像结果如下。

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

Q4：染色是否会产生细胞毒性？

A4：使用CCK-8 来评估染色对 HeLa 细胞的细胞毒性，结果显示几乎没有细胞毒性。

Q5：染色后能否保存固定的细胞？

A5：不建议保存。由于荧光强度在固定后会随着时间的推移而降低，因此染色后的样本应在当天进行检测。

Q6：DMSO stock solution的稳定性如何？

A6：该产品在 -20°C 下冷冻保存 6 个月是稳定的。本品受潮后会降解；如果考虑长期储存超过 6 个月，请使用未开封且含水量低的DMSO。

此外，如有必要，可将产品分成小份储存

Q7：如何对细胞进行栅极化？

A7：以下是使用 Becton Dickinson (BD) 流式细胞仪的方法。

死细胞标记试剂–Blue货号：C555 死细胞标记试剂–Blue

日本同仁化学DSP试剂货号：D629 3,3′-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯) DSP- DOJINDO

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DSP试剂货号：D629

3,3′-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯)

DSP

商品信息

储存条件：0-5度保存，防潮

运输条件：室温

分子式：

C₁₄H₁₆N₂O₈S₂

分子量：

404.42

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选择规格：

交联剂

日本同仁化学DTSSP试剂货号：D630 3,3′-二硫代双(磺酸琥珀酰亚氨基丙酸酯)，二钠盐 DTSSP- DOJINDO

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DTSSP试剂货号：D630

3,3′-二硫代双(磺酸琥珀酰亚氨基丙酸酯)，二钠盐

DTSSP

商品信息

储存条件：0-5度保存，防潮

运输条件：室温

分子式：

C₁₄H₁₄N₂Na₂O₁₄S₄

分子量：

608.51

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选择规格：

50mg

期货

交联剂

日本同仁化学ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31

ICG 标记试剂盒-氨基

ICG Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存,防潮

运输条件：室温

特点：

● 标记的物质可以在大约2个小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 标记的物质可以用所附的保存溶液保存。

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宣传资料

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选择规格：

3samples

现货

蛋白抗体标记检测方案

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

ICG标记实验例

荧光特性

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

产品概述

ICG（吲哚菁绿）是一种花青颜料，也用于肝功能和肝储备测试的色素负载测试中，并且在近红外区域具有荧光。激发波长在774nm附近，荧光波长在805nm附近，并且具有即使在体内使用也不容易被血红蛋白干扰的荧光特性。因此，期望将其应用于使用近红外荧光的体内荧光成像。 ICG标记试剂盒-NH₂是用于标记具有氨基基团的蛋白质（尤其是抗体）的试剂盒。套件随附的NH₂-Reactive以及已发布的荧光素标记套件–NH₂（代码：LK01），HiLyte Fluor^TM555标记套件–NH₂（代码：LK14），HiLite Fluor^TM 647标记套件–NH₂（代码：LK15）由于ICG在分子中具有活性酯，因此仅通过与具有氨基的分子混合即可形成稳定的共价键。当将ICG标记在蛋白质上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH₂反应性ICG的低分子量化合物（例如Tris）。对于ICG标记的IgG，荧光波长为774/805nm。

该试剂盒包含标记所需的试剂和用于储存准备好的ICG标记产品的溶液。

原理

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

如果样品中含有分子量>10,000的物质 (多肽、其它蛋白等)，有阻碍标记反应的可能性。在标记前需要先纯化，如果样品是抗体，可用 IgG Purification Kit (AP01，AP02)纯化，如果样品中有小的不溶物质，离心后取上清液来标记。

操作步骤：

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

a) 蛋白溶液量要≤100ul，如果抗体浓度<0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总蛋白量达到50-200ug。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，继续离心5min或提高转速。

c) NH₂-Reactive ICG在管子的底部，加10ul DMSO到管子的底部，用移液器反复吹打溶解。由于NH₂-Reactive ICG会被DMSO中的水分水解，在制备好NH₂-Reactive ICG溶液后马上进行第4步操作。

d) 如果蛋白总量达到200ug，请加入全部NH₂-Reactive ICG溶液。

e) 我们推荐用WS Buffer保存标记产物，但也可以根据下一步实验要求选择合适的缓冲液。

产品优势

1）标记的物质可以在大约2个小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）标记的物质可以用所附的保存溶液保存。

ICG标记实验例

图. 小鼠尾静脉注射ICG抗体的荧光成像图小鼠皮下肿瘤模型在注射了ICG抗体 (50ug) 48h后，有明显的迹象表明抗体在肿瘤中有选择性地聚集。

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

仪器：活体成像仪 (Clairvivo OPT，岛津制作所)

小鼠：BALB/c(nu/nu) 纯合子裸小鼠 (母，11周)

肿瘤细胞：HeLa细胞 (在右腋皮下移植后4周)

检测条件：Ex=785nm，Em=845/55nm

抗体：整合素α2抗体曝光时间：10s

荧光特性

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK31 ICG 标记试剂盒-氨基

常见问题Q&A

Q1: 标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

参考文献

1) M. Ogawa, C. A. S. Regino, J. Seidel, M. V. Green, W. Xi, M. Williams, N. Kosaka, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “Dual-Modality Molecular Imaging Using Antibodies Labeled with Activatable Fluorescence and a Radionuclide for Specific and Quantitative Targeted Cancer Detection”, Bioconjugate Chem., 2009, 20(11), 2177.

2) M. Ogawa, N. Kosaka, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “In vivo Molecular Imaging of Cancer with a Quenching Near-Infrared Fluorescent Probe Using Conjuates of Monoclonal Antibodies and Indocyanine Green”, Cancer Res., 2009, 69(4), 1268.

3) N. Kosaka, M. Ogawa, P. L. Choyke and H. Kobayashi, “Clinical implications of near-infrared fluorescence imaging in cancer”, Future Oncology, 2009, 5(9), 1501.

4) 伊藤進, 六車直樹, 林重仁, 日下至弘, 多田津昌也, 多田津陽子, 岡本耕一, 井本佳孝, 稲山久美, 坂東輝美, 田岡聡子, 高川真由子, 矢野充保, 伊井邦雄, 長尾善光, 佐野茂樹, 芝村誠一, 島田典昭, 石田和彦, 中村一成, “赤外線蛍光内視鏡の原理と臨床応用”, Biomedical THERMOLOGY, 2003, 23(2), 77.

5) S. Ito, N.Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, T. Bando, K. Inayama, M. Sogabe, T. Okahisa, S. Okamura, H. Shibata, T. Irimura, K. Takesako and S. Shibamura, “Development of Agents for Reinforcement of Fluorescence on Near-infrared Ray Excitation for Immunohistological Staining”, Bioorg. Med. Chem., 1998, 6, 613.

6) S. Ito, N. Muguruma, Y. Kakehashi, S. Hayashi, S. Okamura, H. Shibata, T. Okahisa, M. Kanamori, S. Shibamura, K. Takesako, M. Nozawa, K. Ishida and M. Shiga, “Development of Fluorescence-Emitting Antibody Labeling Substance by Near-Infrared Ray Excitation”, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1995, 5, 2689.

7) K. Inayama, S. Ito, N. Muguruma, Y. Kusaka, T. Bando, Y. Tadatsu, M. Tadatsu, K. Ii, S. Shibamura and K. Takesako, “Basic Study of an Agent for Reinforcement of Near-infrared Fluorescence on Tumor Tissue”, Digestive and Liver Disease, 2003, 35, 88.

8) S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, T. Bando, Y. Kusaka, M. Yano, S. Ichikawa, A. Hiasa, T. Omoya, H. Honda, I. Shimizu, K. Ii, K. Nakamura, K. Takesako, Y. Goto and S. Shibamura, “Visualization of Human Gastric Cancer with a Novel Infrared Fluorescent Labeling Marker of Anti-carcinoembryonic Antigen Antibody in vitro”, Dig. Endosc., 2000, 12, 33.

9) S. Taoka, S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, Y. Kusaka, K. Ii, K. Nakamura, K. Imaizumi, K. Takesako and S. Shibamura, “Reflected Illumination-type Imaging System for the Development of Infrared Fluorescence Endoscopy”, Dig. Endosc.,1999, 11(4), 321.

10) S. Ito, N. Muguruma, S. Hayashi, S. Taoka, A. Tsutsui, T. Fukuda, T. Okahisa, Y. Ohkita, H. Matsunaga, I. Shimizu, K. Nakamura, K. Imaizumi, K. Takesako and S. Shibamura,”Development of an Imaging System Using Fluorescent Labeling Substances Excited by Infrared Rays”, Dig. Endosc., 1997, 9, 278.

11) S. Ito, N. Muguruma, Y. Kusaka, M. Tadatsu, K. Inayama, Y. Musashi, M. Yano, T. Bando, H. Honda, I. Shimizu, K. Ii, K. Takesako, H. Takeuchi and S. Shibamura, “Detection of Human Ganstric Cancer of Resected Specimens Using a Novel Infrared Fluorescent Anti-Human Carcinoembryonic Antigen Antibody with an Infrared Fluorescence Endoscope in Vitro”, Endoscopy, 2001, 33(10), 849.

12) N. Muguruma, S. Ito, T. Bando, S. Taoka, Y. Kusaka, S. Hayashi, S. Ichikawa, Y. Matsunaga, Y. Tada, S. Okamura, K. Ii, K. Imaizumi, K. Nakamura, K. Takesako and S. Shibamura, “Labeled Carcinoembryonic Antigen Antibodies Excitable by Infrared Rays: a Novel Diagnostic Method for Micro Cancers in the Digestive Tract”, Internal Medicine, 1999, 38(7), 537.

13) T. Bando, N. Muguruma, S. Ito, Y. Musashi, K. Inayama, Y. Kusaka, M. Tadatsu, K. Ii, T. Irimura, S. Shibamura and K. Takesako, “Basic Study on a Labeled anti-mucin Antibody Detectable by Infrared-fluorescence Endoscopy”, J. Gastroenterol., 2002, 37, 260.

14) N. Muguruma, S. Ito, S. Hayashi, S. Taoka, H. Kakehashi, K. Ii, S. Shibamura and K. Takesako, “Antibodies Labeled with Fluorescence-agent Excitable by Infrared Rays”, J. Gastroenterol., 1998, 33, 467.

15) 伊藤進, 六車直樹,“不可視情報の画像化－新しい内視鏡診断学の展望 (5)赤外蛍光を用いた微小癌診断”,　臨牀消化器内科, 1999, 14(8), 1205.

16) W. Aung, A. Tsuji, H. Sudo, A. Sugyo, T. Furukawa, Y. Ukai, Y. Kurosawa and T. Saga, “Immunotargeting of Integrin α6β4 for Single-Photon Emission Computed Tomography and Near-Infrared Fluorescence Imaging in a Pancreatic Cancer Model”, Molecular Imaging, 2016, 15, 1.

日本同仁化学R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基- DOJINDO

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R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26

藻红蛋白标记试剂盒-巯基

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 也可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

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选择规格：

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现货

蛋白抗体标记检测方案

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

荧光特性

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

试剂盒内含

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有橙色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，SH-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。

*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)

原理

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

荧光特性

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。

（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。

（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive R-PE并吹打其溶解。

（8）将所得的SH-reactive R-PE溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。

（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。

（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。^d）

R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK26 藻红蛋白标记试剂盒-巯基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个R-PE分子。没有被结合的R-PE可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常R-PE标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）也可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

*还原剂经过优化，可减少IgG的制备。当使用具有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，标记分子的活性可能会丢失。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

日本同仁化学R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23

藻红蛋白标记试剂盒-氨基

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

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NO.2. Calcein-AM 活细胞荧光染色

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藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。R-藻红蛋白(R-PE)是一种藻胆蛋白，它在578nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH₂能够简便快速地制备被R-PE标记的IgG，NH₂-reactive R-PE（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了包括标记产物的储存液等用于R-PE标记的所需的全部试剂。

*R-PE: R-Phycoerythrin(R-藻红蛋白)

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荧光特性

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操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者R-Phycoerythrin-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作概述

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）完成离心后，将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive R-PE中并用移液枪吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive R-PE的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK23 藻红蛋白标记试剂盒-氨基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

产品优势

1）R-PE标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）带有R-PE标签的产品可以与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) K.R. McCarthy, A. Watanabe, M. Kuraoka, K.T. Do, C.E. McGee, G.D. Sempowski, T.B. Kepler, A.G. Schmidt, G. Kelsoe and S.C. Harrison, “Memory B Cells that Cross-React with Group 1 and Group 2 Influenza A Viruses Are Abundant in Adult Human Repertoires”, Immunity., 2018, 48, (1), 174.

2) K.Y Su, A. Watanabe, C.H. Yeh, G. Kelsoe, M. Kuraoka, “Efficient Culture of Human Naive and Memory B Cells for Use as APCs”, J. Immunol.., 2016, 197, (10), 4163.

3) T. Tsujikawa, T. Yaguchi, G. Ohmura, S. Ohta, A. Kobayashi, N. Kawamura, T. Fujita, H. Nakano, T. Shimada, T. Takahashi, R. Nakao, A. Yanagisawa, Y. Hisa, Y. Kawakami, “Autocrine and paracrine loops between cancer cells and macrophages promote lymph node metastasis via CCR4/CCL22 in head and neck squamous cell carcinoma”, Int. J. Cancer., 2013, 132, (12), 2755.

4) Y. Inaguma, Y. Akahori, Y. Murayama, K. Shiraishi, S. Tsuzuki-Iba, A. Endoh, J. Tsujikawa, A. Demachi-Okamura, K. Hiramatsu, H. Saji, Y. Yamamoto, N. Yamamoto, Y. Nishimura, T. Takahashi, K. Kuzushima, N. Emi, Y. Akatsuka, “Construction and molecular characterization of a T-cell receptor-like antibody and CAR-T cells specific for minor histocompatibility antigen HA-1H”, Gene Ther.., 2014, 21, (6), 575.

5) A. Watanabe, K. R. McCarthy, M. Kuraoka, A. G. Schmidt, Y. Adachi, T. Onodera, K. Tonouchi, T. M.Caradonna, G. Bajic, S. Song, C. E. McGee, G. D. Sempowski, F. Feng, P. Urick, T. B. Kepler, Y. Takahashi, S. C. Harrison, and G. Kelsoe, ‘Antibodies to a Conserved Influenza Head Interface Epitope Protect by an IgG Subtype-Dependent Mechanism.’, Cell.., 2019, 177, (5), 1124.

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日本同仁化学Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基- DOJINDO

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Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24

藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

Allophycocyanin Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50-200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 可以使用随附的保存溶液保存APC标签。

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宣传资料

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选择规格：

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期货

蛋白抗体标记检测方案

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

荧光特性

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

试剂盒内含

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

产品概述

藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白(APC)是一种藻胆蛋白，它在660nm附近有红色荧光，激发波长为488nm。Allophycocyanin Labeling Kit-SH能够简便快速地制备被APC标记的IgG，SH-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个马来酰亚胺基，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的巯基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube能够快速交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记所需的全部溶液，包括制备带有SH的还原型IgG所需的还原剂以及储存标记产物的Storage buffer。

*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)

原理

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

荧光特性

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，然后8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent中并用移液器吹打数次使其溶解。

（4）从步骤3所得的溶液中，取100μl转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次后，37℃培养30分钟。

（6）将100μl RA solution加入到管中，8,000-10,000g离心10分钟。弃滤液，加入200μl RA solution，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive APC并吹打其溶解。

（8）将所得的SH-reactive APC溶液转移到被还原的IgG所集中的过滤管的膜上。

（9）用移液器吹打数次后，37℃培养1小时。

（10）加入150μl WS buffer并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将该溶液转移至0.5ml试管中，在0-5℃下保存。^d）

Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK24 藻蓝蛋白标记试剂盒-巯基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后产物的浓度为1.4-1.8mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-2个APC分子。没有被结合的APC可能会干扰正常的免疫试验。如果需要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）APC标记的产品可以在大约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50-200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）还可以通过使用附着的还原剂*标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）可以使用随附的保存溶液保存APC标签。

*还原剂针对减少IgG的制备而优化。当使用带有除IgG以外的S-S键的样品时，由于S-S键的断裂，可能会失去待标记分子的活性。请在确认不会发生因还原引起的失活后使用。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

日本同仁化学Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2

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储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 可以使用附带的保存溶液保存APC标签。

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原理

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藻胆蛋白是一种从蓝藻和真核藻类中得到的荧光蛋白，它的荧光强度要比化学荧光探针，如荧光素和罗丹明高得多。因此，用藻胆蛋白标记的抗体和其他分子在做流式细胞术和免疫染色时具有很高的灵敏度。别藻蓝蛋白（APC）是一种藻胆蛋白，它在660 nm附近有红色荧光。Allophycocyanin Labeling Kit-NH₂能够简便快速地制备被APC标记的IgG，NH₂-reactive APC（该试剂盒的成分之一）具有一个活性的酯基团，不需任何活化就能够轻易地与靶分子中的氨基形成共价键。试剂盒中的Filtration tube用来交换缓冲液和浓缩样品IgG溶液。该试剂盒中包含了标记产物的Storage buffer等用于APC标记的所需的全部试剂。

*APC: Allophycocyanin (别藻蓝蛋白)

原理

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1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量应当>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Phycobiliprotein-IgG标记物始终在过滤管的滤膜上。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000 g离心10分钟后，加入100μl WS buffer再离心一次。^b）

（3）离心完成后，将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive APC中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive APC的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将190μl WS buffer加入到过滤管中并用枪吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK21 藻蓝蛋白标记试剂盒-氨基

a）样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

d）通常，APC标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

产品优势

1）APC标记的产品可以在约2.5小时内制备。

2）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

5）可以使用附带的保存溶液保存APC标签。

常见问题Q&A

Q1:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000且具有活性氨基结构。参照IgG的标记操作说明，可以标记0.5-1 nmol的蛋白样品。

Q2:在与IgG反应后，未标记的NH2-reactive APC是否仍含有活性酯基？

A:没有。反应过程中，活性酯基完全被水解了

Q3:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q4:荧光蛋白分为三种，每种的波长特征是什么？

A:别藻蓝蛋白（缩写：APC）激发波长：650nm发射波长：660nm

B-藻红蛋白（缩写：B-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

R-藻红蛋白（缩写：R-PE）激发波长：564nm发射波长：575nm

Q5:标记反应过程中，NH2-reactive APC是否会形成一些低聚物

A:不会。由于NH2-reactive APC中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q6:能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000且具有活性巯基结构或者可被还原且不会失活的二硫化物。参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品。

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:不行。寡核苷酸或者寡肽可能因为分子量太小而不能存在于滤膜上。

Q8:每个IgG能够标记多少个APC分子

A:每个IgG平均能标记上1-2个APC分子。

Q9:是否必须要使用试剂盒所包含的WS Buffer？

A:是的，要用WS Buffer来制备标记产物的储存液。但是，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来稀释储存液。

Q10:标记产物能保存多久？

A:在4℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

参考文献

1) H. Shinohara, T. Yasuda, Y. Aiba, H. Sanjo, M. Hamadate, H. Watarai, H. Sakurai and T. Kurosaki, “PKCβ Regulates BCR-mediated IKK Activatioin by Facilitating the Interaction between TAK1 and CARMA1”, J. Exp. Med., 2005, 202(10), 1423.

2) E. Grace Suto, Y. Mabuchi, N. Suzuki, K. Suzuki, Y. Ogata, M. Taguchi, T. Muneta, I. Sekiya and C. Akazawa, “Prospectively isolated mesenchymal stem/stromal cells are enriched in the CD73+ population and exhibit efficacy after transplantation”, Sci. Rep.., 2017,(7), 4838.

3) H. Fujii, Y. Ikeuchi, Y. Kurata, N. Ikeda, U. Bahrudin, P. Li, Y. Nakayama, R. Endo, A. Hasegawa, K. Morikawa, J. Miake, A. Yoshida, K. Hidaka, T. Morisaki, H. Ninomiya, Y. Shirayoshi, K. Yamamoto, I. Hisatome, “Electrophysiological properties of prion-positive cardiac progenitors derived from murine embryonic stem cells”, Circ. J.., 2012,76, (12), 2875.

日本同仁化学DTPA anhydride试剂货号：D033 Diethylenetriamine-N,N,N’,N”,N”-pentaacetic acid, dianhydride 23911-26-4- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

DTPA anhydride试剂货号：D033

Diethylenetriamine-N,N,N’,N”,N”-pentaacetic acid, dianhydride

23911-26-4

商品信息

储存条件：室温，防潮

运输条件：室温

分子式：

C₁₄H₁₉N₃O₈

分子量：

357.32

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螯合标记

日本同仁化学Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51

辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● POD标签可以用随附的保存溶液保存。

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蛋白抗体标记检测方案

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的NH₂-reactive peroxidase具有琥珀酰亚胺基 (NHS)，它能够与含有NH₂的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的所有试剂，包括储存用缓冲液。标记过程相当简单：只需将IgG和NH₂-reactive peroxidase混合并且在37℃下培养2小时。NH₂-reactive peroxidase不需任何活化就可以和靶分子形成共价键。NHS与辣根过氧化物酶之间的距离大约为1.2nm，为辣根过氧化物酶分子半径的一半。因此，当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，NH₂-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。由于NH₂-reactive peroxidase自身的氨基已经被阻断，因此自身不会发生反应。

原理

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

5.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH₂-reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。

（7）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积达到或超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常，辣根过氧化物酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，^a）并将该溶液加入到NH₂-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g 离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g 离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK51 辣根过氧化物酶标记试剂盒-氨基

a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

产品优势

1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。

常见问题Q&A

Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？

A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。

Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？

A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？

A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。

Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？

A:可以。只要标记分子的分子量>50,000或者<5,000且具有活性伯胺或仲胺结构。如果分子量>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用LK11-10来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。

Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。

Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。

参考文献

1) 広田次郎, 清水眞也, “キットを用いたモノクローナル抗体への迅速・簡便なペルオキシダーゼ標識法”, 動物衛生研究所研究報告, 2005, 111, 37.

2) A. Miyagawa-Yamaguchi, N. Kotani, and K. Honke, “Expressed Glycosylphosphatidylinositol-Anchored Horseradish Peroxidase Identifies Co-Clustering Molecules in Individual Lipid Raft Domains”, PLoS ONE., 2014, 9, (3), e93054.

3) J. Zhang, D. Klufas, K. Manalo, K. Adjepong, J.O. Davidson, G. Wassink, L. Bennet, A.J. Gunn, E.G. Stopa, K. Liu, M. Nishibori, and B.S. Stonestreet, “HMGB1 Translocation After Ischemia in the Ovine Fetal Brain”, J. Neuropathol. Exp. Neurol.., 2016, 75, (6), 527.

4) M. Okumura, T. Ozawa, H. Hamana, Y. Norimatsu, R. Tsuda, E. Kobayashi, K. Shinoda, H. Taki, K. Tobe, J. Imura, E. Sugiyama, H. Kishi, and A. Muraguchi, “Autoantibodies reactive to PEP08 are clinically related with morbidity and severity of interstitial lung disease in connective tissue diseases”, Eur. J. Immunol.., 2018, 48, (10), 1717.

5) R. Sugisawa, G. Komatsu, E. Hiramoto, N. Takeda, K. Yamamura, S. Arai, and T. Miyazaki, “Independent modes of disease repair by AIM protein distinguished in AIM-felinized mice”, Sci. Rep.., 2018, 8, 13157.

6) S. Takatsuka, T. Inukai, S. Kawakubo, T. Umeyama, M. Abe, K. Ueno, Y. Hoshino, Y. Kinjo, Y. Miyazaki, and S. Yamagoe, “Identification of a Novel Variant Form of Aspergillus fumigatus CalC and Generation of Anti-CalC Monoclonal Antibodies”, Med Mycol J., 2019, 60, (1), 11.

7) T. Sasaki, K. Liu,T. Agari, T. Yasuhara, J. Morimoto, M. Okazaki, H. Takeuchi, A. Toyoshima, S. Sasada, A. Shinko, A. Kondo, M. Kameda, I. Miyazaki, M. Asanuma, CV. Borlongan, M. Nishibori, and I. Date, “Anti-high mobility group box 1 antibody exerts neuroprotection in a rat model of Parkinson’s disease”, Exp. Neurol.., 2016, 275, 220.

8) T. Tsumuraya, I. Fujii, M. Inoue, A. Tatami, K. Miyazaki, and M. Hirama, “Production of monoclonal antibodies for sandwich immunoassay detection of ciguatoxin 51-hydroxyCTX3C”, Toxicon., 2006, 48, (3), 287.

9) W. Jin, K. Yamada, M. Ikami, N. Kaji, M. Tokeshi, Y. Atsumi, M. Mizutani, A. Murai, A. Okamoto, T. Namikaw, Y. Baba, and M. Ohta, “Application of IgY to sandwich enzyme-linked immunosorbent assays, lateral flow devices, and immunopillar chips for detecting staphylococcal enterotoxins in milk and dairy products”, J. Microbiol. Methods., 2013, 92, (3), 323.

10) W.W.P.N. Weerakoon, M. Sakase, N. Kawate, M.A. Hannan, N. Kohama, and H. Tamada, “Plasma IGF-I, INSL3, testosterone, inhibin concentrations and scrotal circumferences surrounding puberty in Japanese Black beef bulls with normal and abnormal semen”, Theriogenology., 2018, 114, (1), 54.

11) Y. Watanabe, Y. Kazuki, K. Kazuki, M. Ebiki, M. Nakanishi, K. Nakamura, M. Yoshida Yamakawa,H. Hosokawa, T. Ohbayashi, M. Oshimura, and K. Nakashima, “Use of a Human Artificial Chromosome for Delivering Trophic Factors in a Rodent Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis”, Mol Ther Nucleic Acids., 2015, 4, (10), e253.

12) Y.S. Kim, D.H. Jung, I.S. Lee, B.J. Pyun and J.S. Kim, “Osteomeles schwerinae extracts inhibits the binding to receptors of advanced glycation end products and TGF-β1 expression in mesangial cells under diabetic conditions”, Phytomedicine., 2016, 23, (4), 388.

13) S .Kon, M. Honda, K. Ishikawa, M. Maeda and T. Segawa, “Antibodies against nephronectin ameliorate anti-type II collagen-induced arthritis in mice.’, FEBS Open Bio., 2019,10.1002/2211-5463.12758.

日本同仁化学Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基- DOJINDO

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Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09

过氧化物酶标记试剂盒-巯基

Peroxidase Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。

● 还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● POD标签可与随附的存储溶液一起存储。

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现货

蛋白抗体标记检测方案

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

产品概述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析（EIA）所需的辣根过氧化物酶标IgG以及竞争性EIA所需的辣根过氧化物酶标抗原。该试剂盒中的SH-reactive peroxidase能够与含有巯基的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括还原剂和储存用缓冲液。SH-reactive peroxidase可以和靶分子形成共价键，还原剂能够在IgG分子上建立自由巯基。当辣根过氧化物酶标IgG用于EIA时，SH-reactive peroxidase的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。

原理

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的巯基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

4.如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化（不包含于此试剂盒中）。

5.如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

6.如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶SH -reactive peroxidase放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Solution A以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）用移液器使溶液混合，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl Solution A加入到Reducing agent中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将100μl步骤3所得溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养30分钟。

（6）将100μl Solution B加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟。除去滤液，加入200μl Solution B，再离心一次。^b）

（7）将50μl Reaction buffer加入到SH-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。

（8）将SH-reactive peroxidase溶液移到被还原的IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（9）用移液器吹打数次，然后在37℃下培养1小时。

（10）将100μl Solution A加入到试管中，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（11）加入200μl Storage buffer并吹打10-15次来回收标记产物。^c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管，并储存于0-5℃。

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

a）推荐的IgG的量为100μg，样品溶液的体积不应超过100μl。如果抗体浓度低于0.5mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200μg。如果在聚积过程中，滤液体积超过了400μl，则需在进行下一步离心前将滤液除去。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度为0.5-1.3mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个还原后的IgG分子上会被标记上1到2个辣根过氧化物酶分子。没有被结合的辣根过氧化物酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常辣根过氧化物酶标记后的还原型IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（终浓度：50%），并在-20℃下存放。另外，还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1 mM的巯基化合物溶液，^a）并将该溶液加入到SH-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Solution A加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Solution A。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10-15次来回收抗体。^c）将此溶液转移至一支0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK09 过氧化物酶标记试剂盒-巯基

a）如果巯基化合物无法在水溶液中溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl 与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml（10-12.5μM）。1到2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

产品优势

1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）POD标记的产品只需与SH反应过氧化物酶混合即可形成。

5）还可以通过使用附着的还原剂标记不具有游离SH基团的蛋白质。

6）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

7）POD标签可与随附的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1: 能够使用这个试剂盒标记F(ab’)2吗？

A:可以标记。请参照标记IgG的操作说明，回收率通常都超过80%。

Q2: 能够用这个试剂盒标记其他蛋白质或者多肽吗？

A:可以，只要标记分子的还原型分子量>50,000或者<5,000且具有活性巯基结构。如果分子量.>50,000，参照IgG的标记操作说明，使用0.5-1 nmol蛋白样品用 LK09-10来标记。如果分子量<5,000，参照标记小分子的操作说明。如果分子量>5,000且<50,000，请咨询我们的客户服务。Email：info@dojindo.cn 免费电话：800-988-0083

Q3: 能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以，只要它的分子量小于5,000且具有活性巯基。可以参照标记小分子的操作说明。

Q4:LK09所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。但是，在步骤8，使用SH-reactive peroxidase溶液时，用量缩小为原来的1/5，也能够标记10 μg的IgG。

Q5: 每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-2个辣根过氧化物酶分子。

Q6:标记蛋白质之前是否必须先使用过滤管？

A:如果蛋白溶液中不含有带有活性巯基的小分子并且蛋白浓度在10 mg/ml或者70 μM左右，则没有必要使用过滤管。只需要将样品溶液和Solution B混合，再把混合液加入到SH-reactive peroxidase管中即可。

Q7:是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该试验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q8:我的样品中含有小的不溶物，我该怎么办？

A:低速离心后用上清液来标记。

Q9:标记反应结束后，未标记的SH-reactive peroxidase是否仍然含有活性马来酰亚胺？

A:不含有。几乎100%的SH-reactive peroxidase都被用于了IgG或者小分子的标记。

Q10:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

参考文献

1) 広田次郎, 清水眞也, “キットを用いたモノクローナル抗体への迅速・簡便なペルオキシダーゼ標識法”, 動物衛生研究所研究報告, 2005, 111, 37.

2) K. Inoue, A. Sugiyama, P. C. Reid, Y. Ito, K. Miyauchi, S. Mukai, M. Sagara, K. Miyamoto, H. Satoh, I. Kohno, T. Kurata, H. Ota, A. Mantovani, T. Hamakubo, H. Daida and T. Kodama, “Establishment of a High Sensitivity Plasma Assay for Human Pentraxin3 as a Marker for Unstable Angina Pectoris”, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2007, 27, 161.

3) N. Esaki, Y. Ohkawa, N. Hashimoto, Y. Tsuda, Y. Ohmi, R. H. Bhuiyan, N. Kotani, K. Honke, A. Enomoto, M. Takahashi, K. Furukawa, and K. Furukawa, “ASC amino acid transporter 2, defined by enzyme-mediated activation of radical sources, enhances malignancy of GD2-positive small-cell lung cancer.”, Cancer Sci.., 2018, 109, (1), 141.

4) G.W.Zhanga, S.J.Lai, Y.Yoshimura, and N.Isobe, “Messenger RNA expression and immunolocalization of psoriasin in the goat mammary gland and its milk concentration after an intramammary infusion of lipopolysaccharide”, Vet. J.., 2014, 202, (1), 89.

5) G-W. Zhang, S-J. Lai, Y. Yoshimura, and N. Isobe, “Expression of cathelicidins mRNA in the goat mammary gland and effect of the intramammary infusion of lipopolysaccharide on milk cathelicidin-2 concentration”, Vet. Microbiol.., 2014, 170, (1-2), 125.

6) H. Tateno, S. Saito, K. Hiemori, K. Kiyoi, K. Hasehira, M. Toyoda, Y. Onuma, Y. Ito, H. Akutsu, and J. Hirabayashi, “α2–6 sialylation is a marker of the differentiation potential of human mesenchymal stem cells”, Glycobiology., 2016, 26, (12), 1328.

7) K. Iizumi, H. Kawasaki, A. Shigenaga, M. Tominaga, A. Otsu, A. Kamo, Y. Kamata, K. Takamori, and F. Yamakura, “Tryptophan nitration of immunoglobulin light chain as a new possible biomarker for atopic dermatitis”, J Clin Biochem Nutr., 2018, 63, (3), 197.

8) K. Morioka, K. Fukai, K. Yoshida, R. Yamazoe, H. Onozato, S. Ohashi, T. Tsuda, and K. Sakamoto, “Foot-and-Mouth Disease Virus Antigen Detection Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Using Multiserotype-Reactive Monoclonal Antibodies”, J. Clin. Microbiol.., 2009, 47, (11), 3663.

9) M. Watanabe, I. Takemasa, N. Kaneko, Y. Yokoyama, E. Matsuo, S. Iwasa, M. Mori, N. Matsuura, M. Monden, and O. Nishimura, “Clinical significance of circulating galectins as colorectal cancer markers”, Oncol. Rep.., 2011, 25, (5), 1217.

10) M. Yasunaga, S. Saijou, S. Hanaoka, T. Anzai, R. Tsumura, and Y. Matsumura, “Significant antitumor effect of an antibody against TMEM180, a new colorectal cancer‐specific molecule”, Cancer Sci.., 2019, 110, (2), 761.

11) N. Esaki, Y. Ohkawa, N. Hashimoto, Y. Tsuda, Y. Ohmi, R. H. Bhuiyan, N. Kotani, K. Honke, A. Enomoto, M. Takahashi, K. Furukawa, and K. Furukawa, “ASC amino acid transporter 2, defined by enzyme‐mediated activation of radical sources, enhances malignancy of GD2‐positive small‐cell lung cancer”, Cancer Sci.., 2018, 109, (1), 141.

12) N. Hashimoto, K. Hamamura, N. Kotani, K. Furukawa, K. Kaneko, K. Honke, and K. Furukawa, “Proteomic analysis of ganglioside‐associated membrane molecules: Substantial basis for molecular clustering”, Proteomics., 2012, 12, (21), 3154.

13) N. Kotani, Y. Ida, T. Nakano, I. Sato, R. Kuwahara, A. Yamaguchi, M. Tomita, K. Honke, and T. Murakoshi, “Tumor-dependent secretion of close homolog of L1 results in elevation of its circulating level in mouse model for human lung tumor”, Biochem. Biophys. Res. Commun.., 2018, 501, (4), 982.

14) R. Yamashita, N. Kotani, Y. Ishiura, S. Higashiyama, and K. Honke, “Spatiotemporally-regulated interaction between β1 integrin and ErbB4 that is involved in fibronectin-dependent cell migration”, J. Biol. Chem.., 2011, 149, (3), 347.

15) T. Noro, E. Oishi, T. Kaneshige, K. Yaguchi, K. Amimoto, and M. Shimizu, “Identification and characterization of haemagglutinin epitopes of Avibacterium paragallinarum serovar C”, Vet. Microbiol.., 2008, 131, (3-4), 406.

16) K. Okada, H. Itoh and M. Ikemotob, “Circulating S100A8/A9 is potentially a biomarker that could reflect the severity of experimental colitis in rats’, Heliyon, 2020, 6, (2), e03470.

日本同仁化学Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学 DOJINDO代理商全线产品，欢迎访问官网了解更多信息

Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11

过氧化物酶标记试剂盒-氨基

Peroxidase Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

● 可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

● 可以标记50至200μg的蛋白质。

● POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● POD标签可以用随附的保存溶液保存。

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蛋白抗体标记检测方案

Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

活动进行中

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

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Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

产品概述

原理

Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项:

1.所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

2.所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

3.标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

标记IgG操作步骤：

（1）将100μl Washing buffer以及含有50-200μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟后，加入100μl Washing buffer再离心一次。^b）

（3）将10μl Reaction buffer加入到NH₂-reactive peroxidase中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH₂-reactive peroxidase的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹吸净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）将100μl Washing buffer加入到过滤管中。如果滤液的体积超过300μl，在进行步骤7前需要先丢弃滤液。

（7）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（8）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）
Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50μl，1mM的氨基化合物，^a）并将该溶液加入到NH₂-reactive peroxidase管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（3）在8,000-10,000g离心10分钟，^b）弃滤液，向管中加入200μl Washing buffer。再重复该过程一次，然后再在8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（4）加入200μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收抗体。^c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储存于0-5℃下。^d）

Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK11 过氧化物酶标记试剂盒-氨基

a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10mM的溶液，取5μl与45μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500μg/ml (10-12.5μM)。1-2个靶分子能够和1个辣根过氧化物酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

产品优势

1）POD标记的产品可以在大约3个小时内制备。

2）可以标记高分子量化合物（MW> 50,000）和低分子量化合物（MW <5,000）。

3）可以标记50至200μg的蛋白质。

4）POD标记的产品只需与NH₂-反应性过氧化物酶混合即可形成。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）POD标签可以用随附的保存溶液保存。

常见问题Q&A

Q1: 标记反应结束后，未反应的NH2-reactive peroxdase是否还具有活性？

A:没有了。它在反应过程中会完全被水解。

Q2: 标记反应过程中，NH2-reactive peroxdase是否会形成一些低聚物？

A:不会。由于NH2-reactive peroxdase中的所有氨基都被阻断，因此不会有低聚物生成。

Q3: 是否必须要使用试剂盒所包含的Storage Buffer？

A:不一定要使用试剂盒所包含的Storage Buffer。可以选择任何适用于该实验的缓冲液。但是，Storage Buffer能够提高标记产物的稳定性。

Q4:Storage Buffer中是否含有动物产品或者高分子聚合物？

A:Storage Buffer中不含有任何动物产品，高分子聚合物或者重金属离子。

Q5: 能够使用这个试剂盒标记Fab或者Fab’吗？

A:可以标记。并且回收率通常都超过80%。

Q6:能够用这个试剂盒标记其它蛋白质吗？

Q7:能够使用这个试剂盒标记寡核苷酸或者寡肽吗？

A:可以。只要它的分子量小于5,000且具有活性伯胺或仲胺。可以参照标记小分子的操作说明。

Q8:LK11所能标记的最小的IgG的量是多少？

A:最小量为50 μg。标记50 μg与200 μg之间的IgG，在灵敏度和本底上没有太大的区别。尽管这个试剂盒也能标记10 μg的IgG，但是本底会较高。

Q9:每个IgG能够标记多少辣根过氧化物酶分子？

A:每个IgG平均能标记上1-3个辣根过氧化物酶分子。

参考文献

1) 広田次郎, 清水眞也, “キットを用いたモノクローナル抗体への迅速・簡便なペルオキシダーゼ標識法”, 動物衛生研究所研究報告, 2005, 111, 37.

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