日本同仁化学Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐水溶液 Cellstain- DAPI solution- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523

4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐水溶液

Cellstain- DAPI solution

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₁₆H₁₇Cl₂N₅

分子量：

350.25

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选择规格：

1ml

现货

细胞染色

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日本同仁化学FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate- DOJINDO

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FDA试剂货号：F209

Fluorescein diacetate

商品信息

储存条件：0-5度保存，避光

运输条件：室温

分子式：

C₂₄H₁₆O₇

分子量：

416.38

特点：

● 激发和发射波长分别为488 nm和530 nm

● 可用于流式细胞仪

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选择规格：

1mg

期货

细胞染色

规格性状

产品概述

荧光特性

参考文献

常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产物为白色结晶粉末或固体，可溶于二甲基亚砜。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

FDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488 nm和530 nm。

荧光特性

荧光特性：λex=488 nm, λem=530 nm

参考文献

1) B. Rotman and B. W. Papermaster, “Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 55, 134.

2) H. R. Hulett, W. A. Bonner, J. Barrett and L. A. Herzenberg, “Cell Sorting: Automated Separation of Mammalian Cells as a Function of Intercellular Fluorescence”, Science, 1969, 166, 747.

3) K. H. Jones and J. A. Senft, “An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide”,J.Histochem.Cytochem., 1985, 33, 77.

4) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, “A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1986, 86, 7.

5) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

6) E. Prosperi, “Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux”, Histochem.J., 1990, 22, 227.

常见问题Q&A

Q1:如何使用FDA。

A1:下面给出一个例子。请根据细胞的种类，观察条件讨论细胞的固定和试剂浓度。

【例1】HeLa细胞的形态观察

将1mg的FDA溶解在2ml的DMSO中(储存溶液)

用PBS(-)溶液稀释，设为2μmol/L。(用5ml PBS(-)稀释8μl贮存溶液)

1)用胰蛋白酶-EDTA等回收HaLa细胞，制备细胞悬浊液。

2)离心分离细胞悬浊液(1000rpm, 3min)

3)除去上清，添加PBS(-)(此时细胞数为105 ~ 106cells /mL)

4)通过粘贴等充分分散。

*因为培养液中的血清等有使背景上升的危险重复②~④的操作充分清洗。

5)在1.5 mL微管中添加用4)得到的30μL细胞悬浊液。

6)在此加入15μL的FDA溶液。

7)盖上微管，37℃下孵育15min。

8)在玻璃罩上放上7)的溶液10μL，从上面再盖上一层玻璃，夹入染色的细胞悬浊液。

9)将盖杯置于荧光显微镜下，用490nm滤光器激发，观察发出黄绿色荧光的活细胞。

例2:C57BL/6小鼠脾脏细胞的双重染色，使用FDA和PI。

k.h.j ones, j.a. senft, J.Histochem.Cytochem.， 33, 77 (1985).

将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液)

将上述0.04 mL溶液稀释为10ml PBS(-)。

PI将1mg溶解在50ml PBS(-)中。

在0.2 mL D-PBS溶液中混浊的细胞(2×106 cells/mL)溶液中添加0.1 mL的FDA溶液和0.03 mL的PI溶液。

孵化后观察。

【例3】使用HeLa细胞的细胞膜离子梯度对Fluorescein溶出的影响

·E.Prosperi, Histochem. J.， 22, 227 (1990).

将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液)

用PBS(-)，终浓度2.4μmol/L染色。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate

ACE阻害活性測定キット ACE Kit – WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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ACE Kit – WST

02 酸化ストレス関連試薬

ACE Kit – WST

酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

ACE阻害活性測定キット

初めての方も使いやすい
必要な試薬は1キットに
一度に多検体のスクリーニングができる

製品コード

A502　 ACE Kit – WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥43,100	345-08923
100 tests	￥79,400	349-08921

キット内容

50 tests	・Substrate Buffer　　　・Enzyme A　・Enzyme B　・Enzyme C ・Coenzyme　　　　　・Indicator Solution	1 ml x1 x1 x1 x1 x1 5 ml x1
100 tests	・Substrate Buffer ・Enzyme A　　　　　　・Enzyme B　　　　　　・Enzyme C　　　　　　・Coenzyme　　　　　　・Indicator Solution	1 ml x2 x2 x2 x2 x2 5 ml x2

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

ACE Kit-WST の使い方

技術情報

キット以外に必要なもの

・プレートリーダー(450 nmフィルター)　・2～20 μl, 20～200 μl, 100～1000 μlのマイクロピペット　・マルチチャンネルピペット
・96穴マイクロプレート　・インキュベーター(37℃)　・ディスポーザブルシリンジ(1 ml)

参考文献

参考文献を表示する

1) L. H. Lam, T. Shimamura, K. Sakaguchi, K. Noguchi, M. Ishiyama, Y. Fujimura and H. Ukeda, "Assay of angiotensin I-converting enzyme-inhibiting activity based on the detection of 3-Hydroxybutyric acid", Anal. Biochem., 2007, 364, 104.
2) L. H. Lam, T. Shimamura, S. Manabe, M. Ishiyama and H. Ukeda, "Assay of Angiotensin I-converting Enzyme-inhibiting Activity Based on the Detection of 3-Hydroxybutyrate with Water-soluble Tetrazolium Salt", Anal. Sci., 2008, 24, 1057.
3) 浅尾浩史他, "ヤマトトウキの調製過程におけるアンジオテンシンI変換酵素(ACE)阻害活性と品質特性の変化", 近畿中国四国農研究, 2010, 17, 9.
4) C. C. Lau, N. Abdullah and A. S. Shuoib, "Novel angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from an edible mushroom, Pleurotus cystidiosus O.K. Miller identified by LC-MS/MS", BMC Complement. Altern. Med., 2013,13, 313.
5) K. Yamaki, "Screening Research Methods for α-glucosidase Inhibitors and Angiotensin-converting Enzyme Inhibitors in Fermented Soybean Products and Fermented Milk Products", JARQ, 2014, 48, 41.
6) R. Nakabayashi, Z. Yang, T. Nishizawa, T. Mori and K. Saito, "Top-down Targeted Metabolomics Reveals a Sulfur-Containing Metabolite with Inhibitory Activity against Angiotensin-Converting Enzyme in Asparagus officinalis", J. Nat. Prod., 2015, 78(5), 1179.
7) M. Alauddin, H. Shirakawa, K. Hiwatashi, A. Shimakage, S. Takahashi, M. Shinbo and M. Komaia, "Processed soymilk effectively ameliorates blood pressure elevation in spontaneously hypertensive rats", J. Funct. Foods., 2015, 14, 126.
8) N. Ontiverosa, V. López-Terosb, M. Vergara-Jiménezc, A. R. Islas-Rubiod, F. I. Cárdenas-Torresc, E. Cuevas-Rodrígueze, C. Reyes-Morenoe, D. M. Granda-Restrepof, S. Lopera-Cardonaf, G. Isaí Ramírez-Torresb and F. Cabrera-Chávezc, Amaranth-hydrolyzate enriched cookies reduce the systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats', J. Funct. Foods., 2019,doi:10.1016/j.jff.2019.103613.
9) J. H. Lee, T. Kim, H. I. Yong, J. Y. CHa, K. Song, H. G. L, J. Je, M. Kang, Y. Choi, "Peptides inhibiting angiotensin-I-converting enzyme: Isolation from flavourzyme hydrolysate of Protaetia brevitarsis larva protein and identification", 2022, Food Chemistry, doi:10.1016/j.foodchem.2022.133897.

よくある質問

Q ACE活性は測定できますか？: A

ACE活性は測定できません。このキットは、ACEの阻害活性を測定できます。

Q キットの利点は何ですか？: A

従来法（酢酸エチル法）と比較して、下記の点で安全で迅速・簡便な手法となります。
　｢有機溶媒を使用しない｣
　｢一度に多検体を測定できる｣
　｢再現性の高いデータが得られる｣

Q サンプル数はどれくらい測定できますか？: A

IC50を得るためにサンプルを6段階希釈した場合（n=3）、96 wellマイクロプレート１枚で4サンプルを測定可能です。
*正確な測定値を得るため、n=3以上でお使いください。

<下図>プレートレイアウト例（n=3の場合）

Q 測定に影響を与える物質を教えてください？: A

1. アスコルビン酸などの還元物質は、Indicator soutionに含まれるWSTを還元し、正の誤差を生じます。
　アスコルビン酸の場合、濃度を0.01%以下で測定してください。

2. アミノアシラーゼや3HBDHを阻害する物質が含まれていると、酵素反応に影響を与えるために正確な測定ができません。

3. クエン酸や酢酸を含む強酸性のサンプルでは、Substrate bufferに含まれる成分が沈殿し、発色を阻害する場合があります。
　サンプルをpH5以上に調整して測定してください。
　（少量の炭酸水素ナトリウムの粉末を加えて中和して遠心分離し、上清をご使用ください）

4. サンプルに不溶性物質を含む場合、ろ過後の溶液または遠心後の上清をサンプルとしてください。

5. 着色の強いサンプルの場合、取扱説明書を参照してください。

Q 測定したいサンプルが水に溶けにくいのですが、測定は可能ですか？: A

水に溶けにくいサンプルはDMSOやエタノールに溶解後、水で希釈して下さい。
DMSOやエタノールであれば、測定試料中の有機溶媒濃度として、1%程度までは測定に影響を与えないことを確認しております。

Q 前処理の方法や注意点を教えて下さい。: A

【試料前処理例（野菜/果物の場合）】

・食品試料の場合、試料をホモジナイズ後、遠心分離し、その上清をご使用下さい。

・濁りがある場合、濾過するか、希釈して濁りが測定に影響しないよう澄明な溶液としてください。

・着色が強い場合、適宜希釈し、測定に影響のない範囲で測定下さい。取扱説明書を参照してください。

Q 反応対象となるアンジオテンシン変換酵素はACEのみですか？ACE2も反応対象になりますか？: A

ACEのみとなります。
このキットでは、ACE2の阻害活性を測定することはできません。

Q Enzyme BとEnzyme Aの溶解の順番を逆にすると何か問題はありますか？: A

感度が低くなります。
必ずEnzyme Bを先に純水で溶解し、その溶液を用いてEnzyme Aを溶解してください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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SARS-CoV-2假病毒宿主细胞酶试剂盒Takara

发表于2024年2月4日由whatman中国官网

SARS-CoV-2假病毒宿主细胞
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	631289	Human ACE2 293T Cell Line	1 ml	￥27,106

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SARS-CoV-2进入宿主细胞是由刺突蛋白与ACE2受体之间的相互作用所介导的。为了助力病毒与受体相互作用研究和COVID-19疗法开发，我们开发了在CMV启动子控制下稳定表达ACE2的HEK细胞。已证实，经过多次传代该细胞依然可持续高水平表达ACE2，并可被使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备的SARS-CoV-2假病毒高效转导。

ACE2是一种含锌金属酶，位于内皮细胞和其他类型细胞的表面。这种跨膜蛋白可将血管紧张素I转化为血管紧张素1-9(一种在心肌细胞中起抗肥厚作用的9-氨基酸肽)，并将血管紧张素II转化为血管紧张素1-7，这是一种有益的血管扩张剂和防扩散剂。

Human ACE2 293T Cell Line由编码ACE2的慢病毒转导HEK细胞构建而成。通过RT-qPCR方法证实，该细胞经亚克隆能高效表达ACE2。

■ 概述

· 由CMV启动子控制，组成型表达ACE2的HEK细胞
· 经多次传代证实，ACE2可持续高效表达
· 可被SARS-CoV-2假病毒
(e.g., 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备)高效转导

■ 应用

· SARS-CoV-2假病毒中和研究
· 病毒-受体相互作用和病毒侵入分析

■ 实验例

图1 通过流式细胞术分析ACE2表达情况。使用与Alexa Fluor 488共轭抗ACE2抗体(R&D Systems, Code No. FAB9332G)检测表达在人ACE2 293T细胞表面的ACE2，未被标记的细胞作为阴性对照。

图2 不同代次细胞中ACE2稳定表达的情况。使用One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A)通过RT-qPCR方法，测定人ACE2 293T连续细胞代次中ACE2 mRNA相对表达水平。以三个重复测定的管家基因ACTB Ct值为标准对ACE2表达的Ct值进行归一化处理。通过计算2^(-ΔΔCt)，确定相对于293T细胞，稳转细胞中ACE2的表达情况。

图3 使用表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（截短形式）并表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的慢病毒粒子。Panel A为感染72小时后被转导细胞的显微图像。Panel B为在转导6天后，通过流式细胞仪测定的每个样品的转导效率。

图4 使用表达荧光素酶的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（全长或者截短形式）并表达萤火虫荧光素酶的慢病毒粒子。取10 μl 浓缩病毒液（21倍）转导人ACE2 293T细胞。转导6天后测定荧光素酶活性，以不表达包膜蛋白的病毒作为对照，测定荧光素酶活性背景值。

图5 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以非人灵长类动物恢复期混合血清作为阻断剂。野生型（截短形式）SARS-CoV-2假病毒与梯度稀释的恢复期血清(BEI Resources，Code. NR-52401)孵育后转导人ACE2 293T细胞。感染3天后测定荧光素酶水平，作为病毒感染读数。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。阴性对照组添加健康猕猴血清作为阻断剂。

图6 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以可溶性ACE2蛋白作为阻断剂。Panels A和B梯度稀释与IgG (ACE2-Fc)Fc结构域相融合的可溶性ACE2蛋白，和SARS-CoV-2假病毒一起转导人ACE2 293T细胞。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。

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页面更新：2021-08-23 15:51:05

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标签归档：ace

日本同仁化学Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐水溶液 Cellstain- DAPI solution- DOJINDO

日本同仁化学FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate- DOJINDO

ACE阻害活性測定キット ACE Kit – WST 同仁化学研究所

ACE Kit – WST

ACE Kit – WST

ACE阻害活性測定キット

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参考文献

よくある質問

取扱条件

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