通用 miRNA 克隆接头

T4 RNA 连接酶 2，截短型 KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特异性将 5´ 末端预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到RNA 的 3´ OH 末端。反应无需 ATP，但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB#M0242）的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性， K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。

因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

200,000 units/ml。 

T4 Rnl2tr KQ 是 T4 RNA 连接酶 2，截短型（NEB#M0242）的双点突变体。 K227 的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了 T4 Rnl2tr 从接头将腺苷基团转移到 RNA 5´ 磷酸基的活性， K227Q 可以减少 T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在 T4 Rnl2tr K227Q 中进一步突变 R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型 T4 Rnl2tr 连接活性水平一致。
因为不再使用 ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

重组 E. coli 菌株，携带有 MBP 融合表达的质粒，该质粒克隆有含编码 T4 RNA 连接酶 2 的前249 个氨基酸序列。 T4 Rnl2tr K227Q 是将 227 位的赖氨酸突变为谷氨酸。 T4 Rnl2tr KQ 分别在 55 和 位置进行了突变，精氨酸突变为赖氨酸、赖氨酸突变为谷氨酰胺。

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000  

无单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。

200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [miRNA 通用克隆接头（NEB #S1315）] 所需的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。  

200,000 units/ml。  

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。  

催化 3´ →5´ 磷酸二酯键的形成，使核苷酸的 5´ -磷酸末端和 3´ -羟基末端连接，伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸。  

携带 T4 RNA 连接酶 1 基因的 E. coli 菌株。  

pCp 的连接需要加入终浓度为10%（v/v）的 DMSO。  

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
10 mM ATP（NEB #M0204中包含）或 100 mM ATP（NEB #M0437中包含）50% PEG 8000  

无单链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 和磷酸酶污染。  

1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内将 1 nmol 的 5´ -[³²P] rA16 转化成磷酸盐不溶物所需要的酶量。单位活性检测条件请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。  

10,000 或 30,000 units/ml。  

有关该产品特性和应用的参考文献请登陆 www.neb-china.com，www.neb.com。