日本同仁化学SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号：SB17 生物素标记蛋白质巯基标记试剂（水溶性）- DOJINDO

发表于2024年6月19日由whatman中国官网

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SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号：SB17

生物素标记蛋白质巯基标记试剂（水溶性）

SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution

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日本同仁化学Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂- DOJINDO

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Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01

生物素标记抗体试剂

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)

商品信息

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蛋白质抗体标记检测方案

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

产品概述

水溶性活性酯型生物素化试剂：使用生物素（AC₅）₂Sulfo-OSu用于生物素标记蛋白质游离氨基的试剂盒。它带有用于标记的LVDS3缓冲粉，用于凝胶过滤的柱和用于柱洗脱的PBS片剂，可以纯化标记的蛋白。由于是单次注射型（10毫克x4瓶），因此可以标记4种不同类型的蛋白质。可以通过改变添加的生物素-（AC₅）₂Sulfo-OSu的量来控制标记率。

*标记蛋白的量为1-5 mg。

原理

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

操作步骤

使用注意事项:

1. 本试剂盒请在0-5 ℃储存。

2. Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液需要现配现用 (由于Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu易水解，尽量避免在水溶液的状态保存)。

3. 标记好的蛋白质请在0-5 ℃保存 (加入0.1%的叠氮钠等防腐剂)。

使用步骤:

1. 配制溶液

1) NaHCO₃缓冲液

在含有NaHCO₃粉末的容器中加入10ml超纯水溶解。

2) PBS缓冲液

在100ml容量瓶中加入1片PBS，先用少量超纯水溶解后，再用超纯水补充至100ml，制成10mmol/l的PBS缓冲液。

3) 蛋白质溶液

在样品管中精确称量1.0-5.0mg蛋白质并记录称量值后，用移液器加入500μl操作步骤1)中的NaHCO₃缓冲液。盖上盖子后，用漩涡振荡器等搅拌溶解蛋白质。

4) Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液

在1支含有Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu的管子中加入适量纯水溶解。为了控制标记率，根据不同的标记对象，请参考表1调整Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液的浓度及加入量。

＊由于Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu易水解，溶解后请尽快标记。

2. 生物素标记操作方法

1) 请参考表1在配制好的蛋白质溶液中加入合适浓度和用量的Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu溶液。

2) 盖紧盖子充分混合后，在25 ℃水浴恒温摇床中培养2h。

表1 Biotin-(AC₅)₂Sulfo-OSu标记各种蛋白质的标记率

Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂

以上数据为本公司实际检测的结果，如实验条件变动，

结果有可能改变。标记率是根据HABA法测得。

a) 1mol蛋白质：生物素的摩尔数

b) 1mol蛋白质上所结合的生物素的摩尔数

3. 蛋白质标记后的凝胶过滤纯化

1) 打开层析柱上的盖子，弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的蛋白质溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一个2ml的样品管，在层析柱中加入1ml PBS，收集流出的生物素标记蛋白质。

＊经过层析，生物素标记蛋白质的最终浓度为标记时的1/2。

按照下列公式计算生物素标记蛋白质的最终浓度：

A (mol/l) = (X/MW_protein) × (1,000/Y) × 0.5

X：蛋白质的重量

MW_protein：蛋白质的分子量

Y：溶解蛋白质的NaHCO₃缓冲液体积

常见问题Q&A

Q1:如何存储标记的蛋白质？

A:将标记的蛋白质存放在冰箱中。另外，添加0.1％叠氮化钠作为防腐剂。

Q2:生物素标记试剂在水溶液中稳定吗？

A:试剂盒中使用的生物素-（AC5）2 Slufo-OSu处于水溶液中时，由于它会水解，因此无法存储在水溶液中。使用前请做好准备。另外，即使在粉末状态下，也要注意由于吸湿引起的劣化。

参考文献

1) J. Wormmeester, F. Stiekema and C. Groot, “Immunoselective Cell Separation”, Methods Enzymol., 1990, 184, 314.

2) J. J. Leary and D. J. Ward, “Rapid and Sensitive Colorimetric Method for Visualizing Biotin-labeled DNA Probes Hybridized to DNA or RNA Immoilized on Nitrocelulose: Bio-blots”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, 80, 4045.

3) W. T. Lee and D. H. Conrad, “The Murine Lymphocyte Receptor for IgE II. Characterization of the Multvalent Nature of the B Lymphocyte Receptor for IgE”, J. Exp. Med., 1984, 159, 1790.

4) D. R. Gretch, M. Suter and M. F. Stinski, “The Use of Biotinylated Monoclonal Antibodies and Streptavidin Affinity Chromatography to Isolate Herpesvirus Hydorophobic Proteins or Glycoproteins”, Anal. Biochem., 1987, 163, 270.

5) M. Shimkus, J. Levy and T. Herman, “A Chemically Cleavable Biotinylated Nucleotide: Usefulness in the Recovery of Protein-DNA Complexes from Avidin Affinity Columns”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82, 2593.

6) W. J. LaRochelle and S. C. Froehner, “Immunodhemical Detection of Proteins Biotinylated on Nitrocellulose Replicas”, J. Immunol. Methods, 1986, 92, 65.

7) P. S. Anjaneyulu and J. V. Staros,”Reactions of N-hydroxysulfosuccinimide Active Esters”, Int. J. Pept. Protein Res., 1987, 30, 117.

8) H. M. Ingalls, C. M. Goodloe-Holland and E. J. Luna,”Junctional Plasma Membrane Domains Isolated from Aggregating Dictyostelium Discoideum Amebae”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1986, 83, 4779.

9) J. Guesdon, T. Ternyck and S. Avrameas,”The Use of Avidin-Biotin Interaction in Immunoenzymatic Techniques”, J. Histochem. Cytochem., 1979, 27, 1131.

日本同仁化学Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37 生物素快速标记试剂盒（微量）- DOJINDO

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Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37

生物素快速标记试剂盒（微量）

Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit

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日本同仁化学Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基- DOJINDO

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Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10

生物素标记试剂盒-巯基

Biotin Labeling Kit – SH

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 整个标记过程仅需3个小时

● 整个标记过程在1支过滤管中进行

● 荧光标记抗体回收率高

● 适用于50-200 μg的IgG

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Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

试剂盒内含

产品概述

原理

操作步骤

产品优势

常见问题Q&A

参考文献

试剂盒内含

Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

产品概述

生物素标记试剂盒-SH是用于在具有SH基团的蛋白质（尤其是抗体）上标记生物素的试剂盒。由于试剂盒中包含的SH反应性生物素分子中具有马来酰亚胺基团，因此仅通过与具有SH基团的分子混合即可形成稳定的共价键。如果蛋白质具有S-S键，则可以使用连接的还原剂制备游离的SH基团。（但是，由于SS键的断裂，蛋白质的活性可能会丢失。）当用生物素标记高分子量蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））时，可以使用所附的过滤管轻松进行预采样。如果可以进行处理并且将铰链区中的SH基团用于标记，则可以制备生物素标记的还原IgG，而不会损害抗体活性。另外，未反应的SH-反应性生物素可以在反应后通过使用滤管的纯化操作除去。

原理

Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

3. 如果蛋白质溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果蛋白质溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管SH-Reactive Biotin可以标记50-200ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent管中，并用移液器吹打使其溶解。

（4）将100μl Reducing agent溶液转移到过滤管的滤膜上，吹打使IgG在膜上溶解。

（5）37℃培养30分钟。加入100μl Reaction buffer，8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（6）将10μl DMSO加入到SH-reactive biotin中，吹打使其溶解。^c）

（7）将100μl Reaction buffer与8μl SH-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。^d）

（8）37℃培养30分钟。将100μl WS buffer加入到过滤管中8,000-10,000g离心10分钟。 ^b）

（9）加入200μl WS buffer，8,000-10,000g离心10分钟。^b）再重复该步骤一次。

（10）加入200μl WS buffer，吹打10-15次来回收标记产物。^e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度<0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400 ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH₂-Reactive Biotin/SH-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果IgG的量为200ug，在步骤4时加入所有的NH₂-ReactiveBiotin溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1、整个标记过程仅需3个小时

2、整个标记过程在1支过滤管中进行

3、荧光标记抗体回收率高

4、适用于50-200 μg的IgG

常见问题Q&A

Q1:样品溶液中的共存会影响反应吗？

A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。
*不仅对于生物素标记试剂盒-SH，而且对于其他标记试剂盒，都需要采取相同的预防措施。

Q2:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q3:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？

A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。（2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。

根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。（回收的抗体/蛋白质的量将减少。）如果上述方法没有帮助，请与公司技术支持联系。

*如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。

替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33）

Q4:该试剂盒可以标记什么？

A:可以标记分子量为“50,000或更高”并且具有[S-S]或[SH]的任何化合物（抗体，蛋白质等）。量为“50-200μg”。
*由于试剂盒中包含的过滤管尺寸为30K，因此无法纯化低分子量化合物。

参考文献

1) E. Terasaka, K. Yamada, P.H. Wang, K. Hosokawa, R. Yamagiwa, K. Matsumoto, S. Ishii, T. Mori, K. Yagi, H. Sawai, H. Arai, H. Sugimoto, Y. Sugita, Y. Shiro and T. Tosha, “Dynamics of nitric oxide controlled by protein complex in bacterial system”, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.., 2017, 114, (37), 9888.

2) J. Hiruma, K. Harada, A. Motoyama, Y. Okubo, T. Maeda, M. Yamamoto, M. Miyai, T. Hibino and R. Tsuboi, “Key component of inflammasome, NLRC4, was identified in the lesional epidermis of psoriatic patients”, J. Dermatol.., 2018, 45, (8), 971.

3) K. Gonda, M. Watanabe, H. Tada, M. Miyashita, Y. Takahashi-Aoyama, T. Kamei, T. Ishida, S. Usami, H. Hirakawa, Y. Kakugawa, Y. Hamanaka, R. Yoshida, A. Furuta, H. Okada, H. Goda, H. Negishi, K. Takanashi, M. Takahashi, Y. Ozaki, Y. Yoshihara, Y. Nakano and N. Ohuchi, “Quantitative diagnostic imaging of cancer tissues by using phosphor-integrated dots with ultra-high brightness”, Sci. Rep.., 2017, 7, (1), 7509.

4) K. Saito, M. Sakaguchi, H. Iioka, M. Matsui, H. Nakanishi, N.H. Huh and E. Kondo, “Coxsackie and adenovirus receptor is a critical regulator for the survival and growth of oral squamous carcinoma cells”, Oncogene., 2014, 33, (10), 127401286.

5) K. Yamamoto, H. Murata, E.W. Putranto, K. Kataoka, A. Motoyama, T. Hibino, Y. Inoue, M. Sakaguchi and N.H. Huh, “DOCK7 is a critical regulator of the RAGE-Cdc42 signaling axis that induces formation of dendritic pseudopodia in human cancer cells”, Oncol. Rep.., 2013, 29, (3), 1073.

6) M. Sakaguchi, H. Murata, K. Yamamoto, T. Ono, Y. Sakaguchi, A. Motoyama, T. Hibino, K. Kataoka and N.H. Huh, “TIRAP, an Adaptor Protein for TLR2/4, Transduces a Signal from RAGE Phosphorylated upon Ligand Binding”, PLoS ONE., 2011, 6, (8), e23132.

7) M. Sakaguchi, H. Murata, Y. Aoyama, T. Hibino, E.W. Putranto, I.M. Ruma, Y. Inoue, Y. Sakaguchi, K. Yamamoto, R. Kinoshita, J. Futami, K. Kataoka, K. Iwatsuki and N.H. Huh, “DNAX-activating Protein 10 (DAP10) Membrane Adaptor Associates with Receptor for Advanced Glycation End Products (RAGE) and Modulates the RAGE-triggered Signaling Pathway in Human Keratinocytes”, J. Biol. Chem.., 2014, 289, (34), 23389.

8) N. Kobayashi, K. Odaka, T. Uehara, K. Imanaka-Yoshida, Y. Kato, H. Oyama, H. Tadokoro, H. Akizawa, S. Tanada, M. Hiroe, T. Fukumura, I. Komuro, Y. Arano, T. Yoshida and T. Irie, “Toward in Vivo Imaging of Heart Disease Using a Radiolabeled Single-Chain Fv Fragment Targeting Tenascin-C”, Anal. Chem.., 2011, 83, (23), 9123.

9) T. Ikeda, R. Shinohata, M. Murakami, K. Hina, S. Kamikawa, S. Hirohata, S. Kusachi, A. Tamura and S. Usui, “A rapid and precise method for measuring plasma apoE-rich HDL using polyethylene glycol and cation-exchange chromatography: a pilot study on the clinical significance of apoE-rich HDL measurements”, Clin. Chim. Acta.,2017, 465, 112.

10) T. Into, M. Inomata, M. Nakashima, K. Shibata, H. Hacker and K. Matsushita, “Regulation of MyD88-Dependent Signaling Events by S Nitrosylation Retards Toll-Like Receptor Signal Transduction and Initiation of Acute-Phase Immune Responses”, Mol. Cell. Biol.., 2008, 28, (4), 1338.

11) W. Nakai, T. Yoshida, D. Diez, Y. Miyatake, T. Nishibu, N. Imawaka, K. Naruse, Y. Sadamura and R. Hanayama, “A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles”, Sci. Rep.., 2016, 6, 33935.

12) Y. Terasaki, T. Akuta, M. Terasaki, T. Sawa, T. Mori, T. Okamoto, M. Ozaki, M. Takeya and T. Akaike, “Guanine Nitration in Idiopathic Pulmonary Fibrosis and Its Implication for Carcinogenesis”, Am. J. Respir. Crit. Care Med.., 2006, 174, (6), 665.

13) I. W. Sumardika, C. Youyi, E. Kondo, Y. Inoue, I. M. W. Ruma, H. Murata, R. Kinoshita, K. Yamamoto, S. Tomida, K. Shien, H. Sato, A. Yamauchi, J. Futami, E. W. Putranto, T. Hibino, S. Toyooka , M. Nishibori and M. Sakaguchi, “β-1,3-Galactosyl-O-Glycosyl-Glycoprotein β-1,6-N-Acetylglucosaminyltransferase 3 Increases MCAM Stability, Which Enhances S100A8/A9-Mediated Cancer Motility.”, Oncol. Res., 2018, 26, (3), 431.

14) J. Iwano, D. Shinmi, K. Masuda, T. Murakami and J. Enokizono, “Impact of Different Selectivity between Soluble and Membrane-bound Forms of Carcinoembryonic Antigen (CEA) on the Target-mediated Disposition of Anti-CEA Monoclonal Antibodies.”, Drug Metab. Dispos., 2019, 47, (1), 1240.

15) D. S. On, P. Chertchinnapa, Y. Shinkai, T. Kojima and H. Nakano, “Development of a dual monoclonal antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of swine influenza virus using rabbit monoclonal antibody by Ecobody technology.”, J. Biosci. Bioeng., 2020, DOI:10.1016/j.jbiosc.2020.03.003.

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55 生物素标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55

生物素标记试剂盒-氨基

Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)

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Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55 生物素标记试剂盒-氨基

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NO.1. Biotin Labeling Kit – NH2 生物素标记-氨基

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日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基- DOJINDO

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Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03

生物素抗体标记试剂盒-氨基

Biotin Labeling Kit – NH2

商品信息

储存条件：0-5度保存

运输条件：室温

特点：

● 生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 只需将NH2反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50-200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。

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Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基

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原理

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产品概述

生物素标记试剂盒-NH₂是用于用生物素标记带有氨基基团的蛋白质的试剂盒，尤其是抗体，由于该试剂盒中包含的NH₂-反应性生物素分子中具有活性酯基，因此仅通过与生物素混合即可形成稳定的共价键。当生物素标记在蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH₂-反应性生物素的低分子量化合物（例如Tris）。因此，没有必要进行诸如透析和凝胶过滤的处理，并且可以以高回收率获得高纯度的标记化合物。

原理

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基

操作步骤

使用注意事项：

1. 用本试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管NH₂-Reactive Biotin可以标记50-200 ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。^a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。^b）

（3）将10μl DMSO加入到NH₂-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。^c）

（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH₂-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。^d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，^b）除去滤液。

（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，^b）重复该步骤一次。

（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。^e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度低于0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的蛋白质聚积量达到50-200ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH₂-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果蛋白质的量为200ug，在操作步骤4时加入所有的NH₂-Reactive Biotin-DMSO溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1）生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）只需将NH₂反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

3）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

4）可以标记50-200μg的蛋白质。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:这个试剂盒可以用于标记其他蛋白质吗？

A:可以。但是如果含有像血清白蛋白或者明胶的蛋白，标记反应可能会受到干扰。用这个试剂盒标记之前，有必要先纯化抗体溶液。如果您想进一步了解纯化过程可以联系我们。

Q2:我只有少量的IgG，可以标记吗？

A:在该试剂盒中，标记所需的IgG量为50至200μg。

在此范围内，性能没有太大差异。

可以用10μg IgG进行标记，但是可能会出现诸如背景升高的问题。

Q3:样品溶液中的共存会影响反应吗？

A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。

<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。

*生物素标记试剂盒-不仅需要对NH2采取相同的预防措施，还需要对其他标记试剂盒采取相同的预防措施。

Q4:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。

A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。

Q5:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？

A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。

（2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。（回收的抗体/蛋白质的量将减少。）

*如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。

替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33）

Q6:该试剂盒可以标记什么？

A:可以标记分子量为“ 50,000或更高”和反应性氨基（NH2）的化合物（抗体，蛋白质等）。标记样品量为“50-200μg”。

*当考虑标记“ mg”的量时，也可以使用“生物素化试剂盒（Sulfo-OSu）；同仁产品货号：BK01”。

*由于试剂盒附带的过滤管为30K，因此无法纯化低分子量化合物。

Q7:一个IgG分子能标记多少生物素？

A:每个IgG分子平均能标记7至10个生物素。

Q8:标记产物能保存多久？

A:在0-5℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下 (只要该蛋白可以冷冻) 存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。

Q9:能不能用这个试剂盒标记寡核苷酸和寡肽？

A:不能，寡核苷酸和寡肽的分子量太小不能使其保留在过滤膜上。请参照Q4。

Q10:含有生物素标记蛋白质的活细胞怎么处理？

A:我们推荐使用PBS (含2-10% FBS) 制备细胞悬液，保持最佳细胞状态。

Q11:回收缓冲液 (WS Buffer)对活细胞有危害吗？

A:没有。WS Buffer含有表面活性剂，它的浓度控制在对细胞没有毒性的范围内。如果您担心WS Buffer中的添加剂，请您使用常用的缓冲液代替。

参考文献

1) Y. Kubota, Y. Oike, S. Satoh, Y. Tabata, Y. Niikura, T. Morisada, M. Akao, T. Urano, Y. Ito, T. Miyamoto, N. Nagai, G. Y. Koh, S. Watanabe and T. Suda, “Cooperative Interaction of Angiopoietin-like Proteins 1 and 2 in Zebrafish Vascular Development “, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2005, 102(38), 13502.

2) T. Yamabuki, A. Takano, S. Hayama, N. Ishikawa, T. Kato, M. Miyamoto, T. Ito, H. Ito, Y. Miyagi, H. Nakayama, M. Fujita, M. Hosokawa, E. Tsuchiya, N. Kohno, S. Kondo, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Dikkopf-1 as a Novel Serologic and Prognostic Biomarker for Lung and Esophageal Carcinomas”, Cancer Res., 2007, 67, 2517.

3) H. Kohara, Y. Omatsu, T. Suhiyama, M. Noda, N. Fujii and T. Nagasawa, “Development of Plasmacytoid Dendritic Cells in Bone Marrow Stromal Cell niches Requires CXCL12-CXCR4 Chemokine Signaling”, Blood, 2007, 110(13), 4153.

4) N. Ishikawa, A. Takano, W. Yasui, K. Inai, H. Nishimura, H. Ito, Y. Miyagi, H. Nakayama, M. Fujita, M. Hosokawa, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Cancer-testis Antigen Lymphocyte Antigen 6 Complex Locus K is a Serologic Biomarker and a Therapeutic Target for Lung and Esophageal Carcinomas”, Cancer Res., 2007, 67(24), 11601.

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7) D. Men, T.T. Zhang, L.W. Hou, J. Zhou, Z.P. Zhang, Y.Y. Shi, J.L. Zhang, Z.Q. Cui, J.Y. Deng, D.B. Wang and X.E. Zhang, “Self-Assembly of Ferritin Nanoparticles into an Enzyme Nanocomposite with Tunable Size for Ultrasensitive Immunoassay”, ACS Nano., 2015, 9, (11), 10852.

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9) H. Sasaki-Iwaoka, M. Ohori, A. Imasato, K. Taguchi, K. Minoura, T. Saito, K. Kushima, E. Imamura, S. Kubo, S. Furukawa and T. Morokata, “Generation and characterization of a potent fully human monoclonal antibody against the interleukin-23 receptor”, Eur. J. Pharmacol.., 2018, 828, 89.

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11) K.S. Tan, K. Kulkeaw, Y. Nakanishi, D. Sugiyama, “Expression of cytokine and extracellular matrix mRNAs in fetal hepatic stellate cells”, Genes Cells., 2017, 22, (9), 836.

12) M. Tahara, S. Ohno, K. Sakai, Y. Ito, H. Fukuhara, K. Komase, M.A. Brindley, P.A. Rota, R.K. Plemper, K. Maenaka and M. Takeda, “The receptor-binding site of the measles virus hemagglutinin protein itself constitutes a conserved neutralizing epitope”, J. Virol.., 2013, 87, (6), 3583.

13) M. Takahashi, Y. Ishida, D. Iwaki, K. Kanno, T. Suzuki, Y. Endo, Y. Homma and T. Fujita, “Essential role of Mannose-binding lectin-associated serine protease-1 in activation of the complement factor D”, J. Exp. Med.., 2010, 207, (1), 29.

14) N. Hosen, Y. Matsunaga, K. Hasegawa, H. Matsuno, Y. Nakamura, M. Makita, K. Watanabe, M. Yoshida, K. Satoh, S. Morimoto, F. Fujiki, H. Nakajima, J. Nakata, S. Nishida, A. Tsuboi, Y. Oka, M. Manabe, H. Ichihara, Y. Aoyama, A. Mugitani , T. Nakao, M. Hino, R. Uchibori, K. Ozawa, Y. Baba, S. Terakura, N. Wada, E. Morii, J. Nishimura, K. Takeda, Y. Oji, H. Sugiyama, J. Takagi and A. Kumanogoh, “The activated conformation of integrin β7 is a novel multiple myeloma-specific target for CAR T cell therapy”, Nat. Med.., 2017, 23, (12), 1436.

15) R. Nishino, A. Takano, H. Oshita, N. Ishikawa, H. Akiyama, H. Ito, H. Nakayama, Y. Miyagi, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Identification of Epstein-Barr virus–induced gene 3 as a novel serum and tissue biomarker and a therapeutic target for lung cancer”, Clin. Cancer Res.., 2011, 17, (19), 6272.

16) T. Hiono, A. Matsuda, T. Wagatsuma, M. Okamatsu, Y. Sakoda and A. Kuno, “Lectin microarray analyses reveal host cell-specific glycan profiles of the hemagglutinins of influenza A viruses”, Virology., 2019, 527, 132.

17) T. Oshima, S. Sato, J. Kato, Y. Ito, T. Watanabe, I. Tsuji, A. Hori, T. Kurokawa and T. Kokubo, “Nectin-2 is a potential target for antibody therapy of breast and ovarian cancers”, Mol. Cancer., 2013, 12, (60), .

18) T. Yoshida, N. Shiraki, H. Baba, M. Goto, S. Fujiwara, K. Kume and S. Kume, “Expression patterns of epiplakin1 in pancreas, pancreatic cancer and regenerating pancreas”, Genes Cells., 2008, 13, (7), 667.

19) X. Piao, T. Ozawa, H. Hamana, K. Shitaoka, A. Jin, H. Kishi and A. Muraguchi, “TRAIL-receptor 1 IgM antibodies strongly induce apoptosis in human cancer cells in vitro and in vivo”, Oncoimmunology., 2016, 5, (5), e1131380.

20) Y. Shimazaki, Y. Kohno, “Successive analysis of antigen trapping and enzymatic digestion on membrane-immobilized avidin”, Anal. Biochem.., 2012, 422, (1), 55.

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藻红蛋白标记试剂盒-氨基

在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒 LK03 生物素标记-氨基（50-200ug/sample）- DOJINDO

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生物素

荧光标记

酶标记物

螯合标记

藻胆蛋白

ICG标记

IgG纯化分离

交联剂

品名货号用途

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒	LK03	生物素标记-氨基（50-200ug/sample）
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒	LK55	生物素标记-氨基（1 mg/sample）
Biotin Labeling Kit – SH试剂盒	LK10	生物素标记-巯基（50-200ug/sample）
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒	LK37	生物素标记-氨基（10 ug/sample）
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂	BK01	生物素标记-氨基（1-5 mg/sample）
Biotin-PE-maleimide试剂	B592	生物素
Biotin-SS-Sulfo-Osu试剂	B572	生物素
Biotin-AC5-Osu试剂	B305	生物素
Biotin-(AC5)2-Osu试剂	B306	生物素
Biotin-Osu试剂	B304	生物素
Biotin-PEAC5-maleimide试剂	B299	生物素
ARP(Aldehyde Reactive Probe)试剂	A305	生物素

日本同仁化学蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂- DOJINDO

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蛋白抗体标记

简单、迅速的标记试剂盒 Dojindo Labeling Kits是一系列包含了活性试剂以及特制的过滤管，可以简便标记抗体等蛋白质的试剂盒。样品预处理-反应-纯化的整个过程都在一支过滤管中完成，3个小时内就能获得标记产物。1次可以标记50-200 μg的样品。使用本试剂盒的过滤管来纯化样品，与凝胶过滤和透析法相比，回收率要高很多，适合用于标记一些比较贵重的抗体。试剂盒中包含了标记产物的保存溶液，标记产物在保存溶液中能够稳定保存。Dojindo Labeling Kits能够标记分子量在50,000以上的大分子。其中辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶标记试剂盒还可以标记分子量在5,000以下的小分子。标记方法有两种：一种是氨基标记法，另一种是巯基标记法。氨基标记法采用带有N-hydroxysuccinimide (NHS) 基的活化试剂，能够标记抗体等样品上的氨基。巯基标记法采用带有Maleimide基的活化试剂，能够标记还原抗体等样品上带有巯基的化合物。根据样品的特性可以选择不同的标记方法。

生物素

荧光标记

酶标记物

螯合标记

藻胆蛋白

ICG标记

IgG纯化分离

交联剂

品名货号用途

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒	LK03	生物素标记-氨基（50-200ug/sample）
Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒	LK55	生物素标记-氨基（1 mg/sample）
Biotin Labeling Kit – SH试剂盒	LK10	生物素标记-巯基（50-200ug/sample）
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒	LK37	生物素标记-氨基（10 ug/sample）
Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂	BK01	生物素标记-氨基（1-5 mg/sample）
Biotin-PE-maleimide试剂	B592	生物素
Biotin-SS-Sulfo-Osu试剂	B572	生物素
Biotin-AC5-Osu试剂	B305	生物素
Biotin-(AC5)2-Osu试剂	B306	生物素
Biotin-Osu试剂	B304	生物素
Biotin-PEAC5-maleimide试剂	B299	生物素
ARP(Aldehyde Reactive Probe)试剂	A305	生物素

CLAMP F405-Signal Boosting	C554	检测细胞表面抗原(免疫荧光法)
Fluorescein Labeling Kit – NH2试剂盒	LK01	FITC（488激发）标记-氨基（50-200ug/sample）
HiLyte Fluor 555 Labeling Kit – NH2试剂盒	LK14	荧光素（555激发）标记-氨基（50-200ug/sample）
HiLyte Fluor 647 Labeling Kit – NH2试剂盒	LK15	荧光素（647激发）标记-氨基（50-200ug/sample）
Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit试剂盒	LK32	FITC（488激发）标记-氨基（10 ug/sample）
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 555 Labeling Kit试剂盒	LK35	荧光素（555激发）标记-氨基（10 ug/sample）
Ab-10 Rapid HiLyte Fluor 647 Labeling Kit试剂盒	LK36	荧光素（647激发）标记-氨基（10 ug/sample）
FITC-I试剂	F007	荧光素FITC

Peroxidase Labeling Kit – NH2试剂盒	LK11	辣根过氧化物酶（HRP）标记-氨基（50-200ug/sample）
Peroxidase Labeling Kit – SH试剂盒	LK09	辣根过氧化物酶（HRP）标记-巯基（50-200ug/sample）
Peroxidase Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒	LK51	辣根过氧化物酶（HRP）标记-氨基（1 mg/sample）
Ab-10 Rapid Peroxidase Labeling Kit试剂盒	LK33	辣根过氧化物酶（HRP）标记-氨基（10 ug/sample）
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – NH2试剂盒	LK12	碱性磷酸酶标记（ALP）-氨基（50-200ug/sample）
Alkaline Phosphatase Labeling Kit – SH试剂盒	LK13	碱性磷酸酶标记（ALP）-巯基（50-200ug/sample）

Isothiocyanobenzyl-EDTA试剂	M030	螯合标记
Isothiocyanobenzyl-NTA试剂	I279	蛋白抗体标记
FeBABE试剂	F279	蛋白抗体标记
AB-NTA free acid试剂	A459	螯合标记
Maleimido-C3-NTA试剂	M035	N-[5-(3′-马来酰亚胺丙烷基氨基)-1-戊基羧基]亚氨基二乙酸, 二钠盐, 一水合物
DTPA anhydride试剂	D033	螯合标记

Allophycocyanin Labeling Kit – NH2试剂盒	LK21	藻蓝蛋白（APC）标记-氨基（50-200ug/sample）
Allophycocyanin Labeling Kit – SH试剂盒	LK24	藻蓝蛋白（APC）标记-巯基（50-200ug/sample）
R-Phycoerythrin Labeling Kit – NH2试剂盒	LK23	藻红蛋白(PE)标记-氨基（50-200ug/sample）
R-Phycoerythrin Labeling Kit – SH试剂盒	LK26	藻红蛋白（PE）标记-巯基（50-200ug/sample）
Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit试剂盒	LK34	R-藻红蛋白(PE)抗体标记-氨基（10 ug/sample）

ICG Labeling Kit – NH2试剂盒	LK31	ICG 标记氨基（50-200ug/sample）

Sulfo-AC5-SPDP试剂	S359	IgG纯化分离

DTSSP试剂	D630	交联剂
BS3试剂	B574	交联剂
DSP试剂	D629	交联剂
EMCS试剂	E018	交联剂
GMBS试剂	G005	交联剂
SPDP试剂	S291	交联剂
Sulfo-SMCC试剂	S330	交联剂

抗体标记试剂盒可满足各种实验需求

1、我想对蛋白质进行定量

ELISA法

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

FCM

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

蛋白质印迹

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

2、我想看看蛋白质在哪里表达

影像学观察蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

3、该试剂盒可以很容易地进行蛋白质标记

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

4、客户对抗体标记试剂盒的反馈

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

5、操作方法非常简单

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

6、可与-NH₂和-SH标记方法兼容

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

生物素标记试剂盒

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

生物素标记试剂盒原理

适用人群

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

影像实验例

使用的试剂盒：Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

FCM实验示例

使用的试剂盒：Biotin Labeling Kit – NH₂试剂盒

竞争抑制

用生物素标记试剂盒-NH₂对抗X抗体进行生物素标记，然后使用链霉亲和素-APC通过流式细胞术进行分析。

抗原未标记的抗×抗体被抗体（A）封闭时，未观察到由于抗体的竞争性抑制而引起的生物素化抗x抗体的反应，仅反应了生物素化抗x抗体（B）的阳性部分。即使使用自制的标记抗体，也可以以很少的非特异性反应进行充分的检测反应。

（数据由北海道大学遗传医学研究所大仓黑木章博士，今茂茂重博士提供）

ELISA实验实例

使用的试剂盒：Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒	使用的试剂盒：Biotin Labeling Kit – SH试剂盒

产品列表

生物素	样品数量/类型	标记对象	产品名称	分析方法
生物素	10μg抗体	-NH₂	Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit
	50-200μg抗体/蛋白质	-NH₂	Biotin Labeling Kit -NH₂
	50-200μg抗体/蛋白质	-SH	Biotin Labeling Kit -SH
	1mg抗体	-NH₂	Biotin Labeling Kit – NH₂ (for 1mg)
	1-5 mg抗体/蛋白质	-NH₂	Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)

荧光染料/荧光蛋白标记试剂盒

生物素标记试剂盒原理

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

适用人群

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

影像实验例

使用的试剂盒：Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit, Ab-10 Rapid HiLyte Fluor™ 555 Labeling Kit

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

使用ICG标记抗体的小鼠皮下肿瘤的荧光观察

使用的试剂盒：ICG Labeling Kit – NH2试剂盒

竞争抑制

用生物素标记试剂盒-NH2对抗X抗体进行生物素标记，然后使用链霉亲和素-APC通过流式细胞仪进行分析。

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

FCM实验示例

使用的试剂盒：Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit

使用Ab-10快速荧光素标记试剂盒用抗CD44抗体（10μg）标记后，对HL60细胞进行免疫染色。

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

产品列表

荧光染料	样品数量/类型	标记对象	产品名称	分析方法
荧光素	10μg抗体	-NH₂	Ab-10 Rapid Fluorescein Labeling Kit
荧光素	50-200μg抗体/蛋白质	-NH₂	Fluorescein Labeling Kit -NH₂
HiLyte Fluor™	10μg抗体	-NH₂	Ab-10 Rapid HiLyte Fluor™ 555 / 647 Labeling Kit -NH2
HiLyte Fluor™	50-200μg抗体/蛋白质	-NH₂	HiLyte Fluor™ 555 / 647 Labeling Kit -NH2
ICG	50-200μg抗体/蛋白质	-NH₂	ICG Labeling Kit-NH₂

荧光蛋白	样品数量/类型	标记对象	产品名称	分析方法
R-藻红蛋白	10μg抗体	-NH₂	Ab-10 Rapid R-Phycoerythrin Labeling Kit
	50-200μg抗体/蛋白质	-NH₂	R-Phycoerythrin Labeling Kit-NH₂
	50-200μg抗体/蛋白质	-SH	R-Phycoerythrin Labeling Kit-SH
异花青素	50-200μg抗体/蛋白质	-NH₂	Allophycocyanin Labeling Kit-NH₂
异花青素	50-200μg抗体/蛋白质	-SH	Allophycocyanin Labeling Kit-SH

酶标试剂盒

酶标试剂盒原理

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

适用人群

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

ELISA实验实例

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

蛋白质印迹实验例

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

产品列表

蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂

VECTOR SBA生物素标记的大豆凝集素B-1015

发表于2024年3月18日由whatman中国官网

VECTOR SBA生物素标记的大豆凝集素

产品型号： B-1015
简单描述
VECTOR SBA生物素标记的大豆凝集素SBA Detection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR SBA生物素标记的大豆凝集素

isolated from Glycine max （soybean） seeds

Composed of four subunits of approximay equal size, soybean agglutinin is a family of closely related isolectins. This glycoprotein has a molecular weight of about 120,000 and an isoelectric point near pH 6.0. SBA preferentially binds to oligosaccharide structures with terminal a- or b-linked N-acetylgalactosamine, and to a lesser extent, galactose residues. Binding can be blocked by substitutions on penultimate sugars, such as fucose attached to the penultimate galactose in blood group B substance. SBA has been used in glycoprotein fractionation, histochemical applications and cell sorter analysis.

An important application for SBA is the separation of pluripotential stem cells from human bone marrow. Cells fractionated by SBA do not produce graft vs host disease and can be used in bone marrow transplantation across histocompatibility barriers （references available upon request）. It should be noted that some forms of SBA seem to be excellent in separating human cells while others are better for cells of other species.

VECTOR SBA生物素标记的大豆凝集素

This biotinylated lectin conjugate is prepared from affinity-purified lectin and is optimally labeled with biotin. Essentially free of inactive lectin conjugate and containing no free biotin, this biotinylated lectin provides an ideal intermediate for examining glycoconjugates using the Biotin-Avidin System. First the biotin-labeled lectin is added, followed by the VECTASTAIN^® ABC Reagent, Avidin D conjugate, or streptavidin derivative. Another possible application is in the isolation of lymphokines and other products of mitogenic stimulation.

Inhibiting/Eluting Sugar: 200 mM N-acetylgalactosamine

VECTOR生物素Jacalin Biotinylated JacalinB-1155

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

VECTOR生物素Jacalin Biotinylated Jacalin

产品型号： B-1155
简单描述
VECTOR生物素Jacalin Biotinylated JacalinDetection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR生物素Jacalin Biotinylated Jacalin

isolated from Artocarpus integrifolia （Jackfruit） seeds
Jacalin is a lectin composed of four subunits, two of approximay 10,000 daltons and two of 16,000 daltons each. This 50,000 dalton glycoprotein appears to bind only O-glycosidically linked oligosaccharides, preferring the structure galactosyl （b-1,3） N-acetylgalactosamine. This structure （the so-called “T-antigen”） is the oligosaccharide to which peanut agglutinin binds. However, unlike PNA, Jacalin will bind this structure even in a mono- or disialylated form. This lectin has been used to purify human IgA, since no other human immunoglobulin class binds Jacalin （references available upon request）. The specificity of this lectin also affords the opportunity to localize or isolate glycoproteins with O-glycosidically linked oligosaccharide side chains.

This biotinylated lectin conjugate is prepared from affinity-purified lectin and is optimally labeled with biotin. Essentially free of inactive lectin conjugate and containing no free biotin, this biotinylated lectin provides an ideal intermediate for examining glycoconjugates using the Biotin-Avidin System. First the biotin-labeled lectin is added, followed by the VECTASTAIN® ABC Reagent, Avidin D conjugate, or streptavidin derivative. Another possible application is in the isolation of lymphokines and other products of mitogenic stimulation.
Inhibiting/Eluting Sugar: 800 mM galactose or 100 mM melibiose

VECTOR生物素Jacalin Biotinylated Jacalin 详细产品信息可和选购

VECTOR GNL生物素雪花莲凝集素Biotinylated Galanthus Nivalis B-1245

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

VECTOR GNL生物素雪花莲凝集素Biotinylated Galanthus Nivalis

产品型号： B-1245
简单描述
VECTOR GNL生物素雪花莲凝集素Biotinylated Galanthus Nivalis LectinDetection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR GNL生物素雪花莲凝集素Biotinylated Galanthus Nivalis Lectin

The following protocols offer guidelines for assay development using lectin-based detection of glycoproteins
present in tissue sections, adsorbed onto microtiter plates, or transferred from electrophoretic
gels onto nitrocellulose or PVDF membranes.
Histochemistry:
1a. Staining procedure for paraffin sections: Deparaffinize and hydrate tissue sections through
xylenes or other clearing agents and graded alcohol series and rinse for 5 minutes in tap water.
If required, retrieve antigens using the Antigen Unmasking Solution （H-3300 or H-3301）.
1b. Staining procedure for frozen sections: Air dry sections. Immediay before staining, fix
sections with acetone. Transfer slices to buffer. If endogenous enzyme activities are present,
inactivate using appropriate methods.
2. Perform Streptavidin/Biotin blocking if required following kit instructions （SP-2002）. Do not
use SP-2001. Block non-specific binding by incubating section with Carbo-Free™ Blocking
Solution （Cat. No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Blot excess blocking solution
from the sections.
3. Apply biotinylated lectin at approximay 2-20 μg/ml in PBS （10 mM sodium phosphate, 150
mM NaCl, pH 7.4） to the sections and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash with
TPBS （PBS + 0.05% Tween™20）.
4. Prepare VECTASTAIN®
® ABC （peroxidase, Cat. No. PK-6100） or VECTASTAIN® ABC-AP
（alkaline phosphatase, Cat. No. AK-5000） reagents according to the kit instructions. Apply to the
sections and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash with TPBS.
5. Apply an appropriate precipitating substrate for the enzyme system used in step 4. For peroxidase,
ImmPACT™ DAB （Cat. No. SK-4105） is recommended; for alkaline phosphatase, Vector® Red
（Cat. No. SK-5100）. Rinse in tap water.
6. Counterstain （optional）, clear and mount. For galactose or GalNAc-specific lectins avoid mounting
in glycerol-based mounting media.
ELISA:
1. Adsorb target protein to microtiter plate by placing 50-200 μl of approximay 3 μg/ml glycoprotein
solution into the desired wells. Some wells may be left untreated as negative controls. Incubate at
37 ºC for 1 hour. Wash wells three times with TPBS （PBS + 0.05% Tween™20）.
2. Block non-specific binding by filling each well to the brim with Carbo-Free™ Blocking Solution
（Cat. No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.
3. Apply 50-200 μl of approximay 2-20 μg/ml biotinylated lectin in PBS to the wells and incubate
for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.

4. Prepare VECTASTAIN®
® ABC （peroxidase, Cat. No. PK-6100） or VECTASTAIN® ABC-AP
（alkaline phosphatase, Cat. No. AK-5000） reagents according to the kit instructions. Apply to the
wells and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.
5. Apply an appropriate non-precipitating substrate for the enzyme system used in step 4. For
peroxidase, ABTS （Cat. No. SK-4500） is recommended; for alkaline phophatase, pNPP （Cat. No.
SK-5900）.
6. Quantify the colored reaction product by spectrophotometry.
Western Blot:
1. Perform electrophoresis and transfer proteins to a membrane according to standard procedures.
2. Block non-specific binding by incubating the membrane in Carbo-Free™ Blocking Solution （Cat.
No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Use a sufficient volume to compley cover
the membrane.
3. Incubate membrane in PBS containing approximay 2-20 μg/ml biotinylated lectin for 30 minutes
at room temperature. Wash with TPBS （PBS +0.05% Tween™20）.
4. Prepare VECTASTAIN®
® ABC （peroxidase, Cat. No. PK-6100） or VECTASTAIN® ABC-AP
（alkaline phosphatase, Cat. No. AK-5000） reagents according to the kit instructions. Incubate the
membrane in the reagent for 30 minutes at room temperature. Wash with TPBS.
5. Apply an appropriate substrate for the enzyme system used in step 4. For peroxidase, DuoLuX™
Chemiluminescent/Fluorescent Substrate for Peroxidase （Cat. No. SK-6604） or ImmPACT™ DAB
（Cat. No. SK-4105） are recommended; for alkaline phosphatase, Chemiluminescent/Fluorescent
Substrate for Alkaline Phosphatase （Cat. No. SK-6605） or BCIP/NBT （Cat. No. SK-5400） are
recommended.
Negative Controls
Negative controls should be run in parallel in each of the above described methodologies to validate
binding results. When applying lectins, one of the most appropriate negative controls is to preabsorb
the lectin with a concentration of a defined sugar, with which, the lectin has a known high affinity.
Vector Labs offers a series of sugars that are intended for such a purpose.
The lectin is diluted to a suitable working concentration in a solution containing approximay
200 mM to 500 mM of the sugar. This mixture is left to bind at room temperature for 30 to 60 min.
Following this absorption incubation, the mixture is substituted into the procedure in place of the unabsorbed
lectin and incubated under the same conditions. The subsequent detection procedure is followed
as for the test method. In most cases the vast majority of lectin binding to the tissue section （membrane
blot, etc.） will be eliminated. Some trace binding to the section （blot etc） may still be present under
these conditions and probably indicates presence of secondary or tertiary sugar preferences. These negative
control results should be compared with the test results to determine specificity of binding

VECTOR EEL生物素大叶黄杨Europaeus凝集素B-11335

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

VECTOR EEL生物素大叶黄杨Europaeus凝集素

产品型号： B-11335
简单描述
VECTOR EEL生物素大叶黄杨Europaeus凝集素Detection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR EEL生物素大叶黄杨Europaeus凝集素

Negative Controls
Negative controls should be run in parallel in each of the above described methodologies to validate
binding results. When applying lectins, one of the most appropriate negative controls is to preabsorb
the lectin with a concentration of a defined sugar, with which, the lectin has a known high affinity.
Vector Labs offers a series of sugars that are intended for such a purpose.
The lectin is diluted to a suitable working concentration in a solution containing approximay
200 mM to 500 mM of the sugar. This mixture is left to bind at room temperature for 30 to 60 min.
Following this absorption incubation, the mixture is substituted into the procedure in place of the unabsorbed
lectin and incubated under the same conditions. The subsequent detection procedure is followed
as for the test method. In most cases the vast majority of lectin binding to the tissue section （membrane
blot, etc.） will be eliminated. Some trace binding to the section （blot etc） may still be present under
these conditions and probably indicates presence of secondary or tertiary sugar preferences. These negative
control results should be compared with the test results to determine specificity of binding

详细产品信息可和选购

VECTOR 生物素曼陀罗凝集素Biotinylated Datura Stramonium LecB-1185

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

VECTOR 生物素曼陀罗凝集素Biotinylated Datura Stramonium Lec

产品型号： B-1185
简单描述
VECTOR 生物素曼陀罗凝集素Biotinylated Datura Stramonium LectinDetection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR 生物素曼陀罗凝集素Biotinylated Datura Stramonium Lectin

The following protocols offer guidelines for assay development using lectin-based detection of glycoproteins
present in tissue sections, adsorbed onto microtiter plates, or transferred from electrophoretic
gels onto nitrocellulose or PVDF membranes.
Histochemistry:
1a. Staining procedure for paraffin sections: Deparaffinize and hydrate tissue sections through
xylenes or other clearing agents and graded alcohol series and rinse for 5 minutes in tap water.
If required, retrieve antigens using the Antigen Unmasking Solution （H-3300 or H-3301）.
1b. Staining procedure for frozen sections: Air dry sections. Immediay before staining, fix
sections with acetone. Transfer slices to buffer. If endogenous enzyme activities are present,
inactivate using appropriate methods.
2. Perform Streptavidin/Biotin blocking if required following kit instructions （SP-2002）. Do not
use SP-2001. Block non-specific binding by incubating section with Carbo-Free™ Blocking
Solution （Cat. No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Blot excess blocking solution
from the sections.
3. Apply biotinylated lectin at approximay 2-20 μg/ml in PBS （10 mM sodium phosphate, 150
mM NaCl, pH 7.4） to the sections and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash with
TPBS （PBS + 0.05% Tween™20）.
4. Prepare VECTASTAIN®
® ABC （peroxidase, Cat. No. PK-6100） or VECTASTAIN® ABC-AP
（alkaline phosphatase, Cat. No. AK-5000） reagents according to the kit instructions. Apply to the
sections and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash with TPBS.
5. Apply an appropriate precipitating substrate for the enzyme system used in step 4. For peroxidase,
ImmPACT™ DAB （Cat. No. SK-4105） is recommended; for alkaline phosphatase, Vector® Red
（Cat. No. SK-5100）. Rinse in tap water.
6. Counterstain （optional）, clear and mount. For galactose or GalNAc-specific lectins avoid mounting
VECTOR 生物素曼陀罗凝集素Biotinylated Datura Stramonium Lectin

in glycerol-based mounting media.
ELISA:
1. Adsorb target protein to microtiter plate by placing 50-200 μl of approximay 3 μg/ml glycoprotein
solution into the desired wells. Some wells may be left untreated as negative controls. Incubate at
37 ºC for 1 hour. Wash wells three times with TPBS （PBS + 0.05% Tween™20）.
2. Block non-specific binding by filling each well to the brim with Carbo-Free™ Blocking Solution
（Cat. No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.
3. Apply 50-200 μl of approximay 2-20 μg/ml biotinylated lectin in PBS to the wells and incubate
for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.

VECTOR BPL生物素菊紫荆凝集素Biotinylated Bauhinia Purpurea B-1285

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

VECTOR BPL生物素菊紫荆凝集素Biotinylated Bauhinia Purpurea

产品型号： B-1285
简单描述
VECTOR BPL生物素菊紫荆凝集素Biotinylated Bauhinia Purpurea LectinDetection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR BPL生物素菊紫荆凝集素Biotinylated Bauhinia Purpurea Lectin

VECTOR 生物素苋尾状凝集素（ACL，ACA） BIOTIN-ACLB-1255

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

VECTOR 生物素苋尾状凝集素（ACL，ACA） BIOTIN-ACL

产品型号： B-1255
简单描述
VECTOR 生物素苋尾状凝集素（ACL，ACA） BIOTIN-ACLBiotinylated Amaranthus Caudatus Lectin （ACL, ACA）Detection of Glycoproteins using Lectins in Histochemistry,ELISA, and Western Blot Applications

详细介绍

VECTOR 生物素苋尾状凝集素（ACL，ACA） BIOTIN-ACL

The following protocols offer guidelines for assay development using lectin-based detection of glycoproteins
present in tissue sections, adsorbed onto microtiter plates, or transferred from electrophoretic
gels onto nitrocellulose or PVDF membranes.
Histochemistry:
1a. Staining procedure for paraffin sections: Deparaffinize and hydrate tissue sections through
xylenes or other clearing agents and graded alcohol series and rinse for 5 minutes in tap water.
If required, retrieve antigens using the Antigen Unmasking Solution （H-3300 or H-3301）.
1b. Staining procedure for frozen sections: Air dry sections. Immediay before staining, fix
sections with acetone. Transfer slices to buffer. If endogenous enzyme activities are present,
inactivate using appropriate methods.
2. Perform Streptavidin/Biotin blocking if required following kit instructions （SP-2002）. Do not
use SP-2001. Block non-specific binding by incubating section with Carbo-Free™ Blocking
Solution （Cat. No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Blot excess blocking solution
from the sections.
3. Apply biotinylated lectin at approximay 2-20 μg/ml in PBS （10 mM sodium phosphate, 150
mM NaCl, pH 7.4） to the sections and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash with
TPBS （PBS + 0.05% Tween™20）.
4. Prepare VECTASTAIN®
® ABC （peroxidase, Cat. No. PK-6100） or VECTASTAIN® ABC-AP
（alkaline phosphatase, Cat. No. AK-5000） reagents according to the kit instructions. Apply to the
sections and incubate for 30 minutes at room temperature. Wash with TPBS.
5. Apply an appropriate precipitating substrate for the enzyme system used in step 4. For peroxidase,
ImmPACT™ DAB （Cat. No. SK-4105） is recommended; for alkaline phosphatase, Vector® Red
（Cat. No. SK-5100）. Rinse in tap water.
6. Counterstain （optional）, clear and mount. For galactose or GalNAc-specific lectins avoid mounting
in glycerol-based mounting media.
VECTOR 生物素苋尾状凝集素（ACL，ACA） BIOTIN-ACL

ELISA:
1. Adsorb target protein to microtiter plate by placing 50-200 μl of approximay 3 μg/ml glycoprotein
solution into the desired wells. Some wells may be left untreated as negative controls. Incubate at
37 ºC for 1 hour. Wash wells three times with TPBS （PBS + 0.05% Tween™20）.
2. Block non-specific binding by filling each well to the brim with Carbo-Free™ Blocking Solution
（Cat. No. SP-5040） for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.
3. Apply 50-200 μl of approximay 2-20 μg/ml biotinylated lectin in PBS to the wells and incubate
for 30 minutes at room temperature. Wash wells three times with TPBS.

3´-脱硫生物素标记 GTP 货号 #N0761SNEB酶试剂 New England Biolabs

发表于2024年1月27日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶试剂全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息和订购。

产品资料 – RNA 试剂 – RNA 合成

3´-脱硫生物素标记 GTP 收藏

货号

规格

价格(元)

北京库存

上海库存

广州库存

成都库存

苏州库存

#N0761S

0.5 µmol

3,929.00

有

无

Download:

isoschizomers |
compatible ends |
single letter code

概述

Cappable-seq 是一个由 NEB 开发的、用于直接富集初级转录本的 5´ 末端的方法。该方法可在单碱基水平上确定转录起始位点。使用牛痘病毒加帽系统（NEB #M2080）和 3´ –脱硫生物素标记 GTP 对磷酸化的 RNA 5´ 末端进行加帽。随后初级转录本吸附到亲水性链霉亲和素磁珠（NEB #S1421）上，再用游离生物素进行洗涤和洗脱。

质保声明

3´ –脱硫生物素标记 GTP 中无 RNase 和切刻酶污染。

参考文献

有关该产品特性和应用的相关文献请登陆 www.neb-china.com 或 www.neb.com。

whatman (沃特曼)

英国沃特曼品牌中国官网代理

标签归档：生物素

日本同仁化学SulfoBiotics- Biotin-HPDP(WS) solution试剂货号：SB17 生物素标记蛋白质巯基标记试剂（水溶性）- DOJINDO

日本同仁化学Biotinylation Kit (Sulfo-OSu)试剂货号：BK01 生物素标记抗体试剂- DOJINDO

日本同仁化学Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37 生物素快速标记试剂盒（微量）- DOJINDO

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基- DOJINDO

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55 生物素标记试剂盒-氨基- DOJINDO

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基- DOJINDO

日本同仁化学Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒 LK03 生物素标记-氨基（50-200ug/sample）- DOJINDO

日本同仁化学蛋白抗体标记生物素荧光标记酶标记物螯合标记藻胆蛋白 ICG标记 IgG纯化分离交联剂- DOJINDO

影像实验例

使用ICG标记抗体的小鼠皮下肿瘤的荧光观察

酶标试剂盒原理

VECTOR SBA生物素标记的大豆凝集素B-1015

VECTOR生物素Jacalin Biotinylated JacalinB-1155

VECTOR GNL生物素雪花莲凝集素Biotinylated Galanthus Nivalis B-1245

VECTOR EEL生物素大叶黄杨Europaeus凝集素B-11335

VECTOR 生物素曼陀罗凝集素Biotinylated Datura Stramonium LecB-1185

VECTOR BPL生物素菊紫荆凝集素Biotinylated Bauhinia Purpurea B-1285

VECTOR 生物素苋尾状凝集素（ACL，ACA） BIOTIN-ACLB-1255

3´-脱硫生物素标记 GTP 货号 #N0761SNEB酶试剂 New England Biolabs

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参考文献

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