細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fura 2-AM solution | CAS 108964-32-5(Fura 2-AM) 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Fura 2-AM solution

04 細胞内蛍光プローブ

Fura 2-AM solution

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F016　 Fura 2-AM solution
CAS番号

108964-32-5(Fura 2-AM)
化学名

1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester, DMSO solution
分子式・分子量

C₄₄H₄₇N₃O₂₄=1001.85

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 ml	￥51,000	343-05401

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

参考文献

参考文献を表示する

1) G. Grynkiewicz, M. Poenie and R. Y. Tsien, "A New Generation of Ca²⁺ Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties", J. Biol. Chem., 1985, 260, 3440.
2) D. A. Williams, K. E. Fogarty, R. Y. Tsien and F. S. Fay, "Calcium Gradients in Single Smooth Muscle Cells Revealed by the Digital Imaging Microscope Using Fura-2", Nature, 1985, 318, 558.
3) R. Y. Tsien, T. J. Rink and M. Poenie, "Measurement of Cytosolic Free Ca²⁺ in Individual Small Cells Using Fluorescence Microscopy with Dual Excitation Wavelengths", Cell Calcium, 1985, 6, 145.
4) D. A. Williams and F. S. Fay, "Intracellular Calibration of the Fluorescent Calcium Indicator Fura-2", Cell Calcium, 1990, 11, 75.
5) W. Almers and E. Neher, "The Ca Signal from Fura-2 Loaded Mast Cells Depends Strongly on the Method of Dye-loading", FEBS Lett., 1985, 192, 13.
6) G. H. R. Rao, J. D. Peller and J. G. White, "Measurement of Ionized Calcium in Blood Platelets with a New Generation Calcium Indicator", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1985, 132, 652.
7) H. Ozaki, K. Sato, T. Satoh and H. Karaki, "Simultaneous Recordings of Calcium Signals and Mechanical Activity Using Fluorescent Dye Fura 2 in Isolated Strips of Vascular Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1987, 45, 429.
8) M. Mitsui, A. Abe, M. Tajimi and H. Karaki, "Leakage of the Fluorescent Ca²⁺ Indicator Fura-2 in Smooth Muscle", Jpn. J. Pharmacol., 1993, 61, 165.
9) 宮川厚夫, 牧野徹, 玉川彰, 尾崎一穂, "ビデオ画像処理を用いた蛍光性カルシウム指示薬Fura-2による細胞内遊離カルシウムイオン濃度分布の測定", 分析化学, 1989, 38, 643.

よくある質問

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色液体である。
純度(HPLC)：	98.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 3 | CAS 123632-39-3 同仁化学研究所

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Fluo 3

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 3

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F019　 Fluo 3
CAS番号

123632-39-3
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid
分子式・分子量

C₃₆H₃₀Cl₂N₂O₁₃=769.53

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥32,600	345-05721

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/50 μL(0.1 mol/L – KOH)

参考文献

参考文献を表示する

1) A. Minta, J. P. Y. Kao and R. Y. Tsien, "Fluorescent Indicators for Cytosolic Calcium Based on Rhodamine and Fluorescein Chromophores", J. Biol. Chem., 1989, 264(14), 8171.
2) J. P. Kao, A. T. Harootunian and R. Y. Tsien, "Photochemically Generated Cytosolic Calcium Pulses and Their Detection by Fluo-3", J. Biol. Chem., 1989, 264, 8179.
3) M. Eberhard and P. Erne, "Kinetics of Calcium Binding to Fluo-3 by Stopped-Flow Fluorescence", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1989, 163, 309.
4) A. Hernandez-Cruz, F. Sala and P. R. Adams, "Subcellular Calcium Transients Visualized by Confocal Microscopy in a Voltage-clamped Vertebrate Neuron", Science, 1990, 247, 858.
5) A. H. Cornell-Bell, S. M. Finkbeiner, M. S. Cooper and S. J. Smith, "Glutamate Induces Calcium Waves in Cultured Astrocytes: Long-Range Glial Signaling", Science, 1990, 247, 470.
6) D. A. Williams, "Quantitative Intracellular Calcium Imaging with Laser-scanning Confocal Microscopy", Cell Calcium, 1990, 11, 589.
7) D. A. Williams, S. H. Cody, C. A. Gehring, R. W. Parish and P. J. Harris, "Confocal Imaging of Ionised Calcium in Living Plant Cells", Cell Calcium, 1990, 11, 291.
8) P. A. Vandenberghe and J. L. Ceuppens, "Flow Cytometric Measurement of Cytoplasmic Free Calcium in Human Peripheral Blood T Lymphocytes with Fluo-3, A New Fluorescent Calcium Indicator", J. Immunol. Methods, 1990, 127, 197.
9) 河内秀幸, 南川哲寛, 高松哲郎, "高速走査共焦点レーザ顕微鏡による心室筋対細胞間のカルシウム波伝播の解析", 心筋の構造と代謝, 1991, 13, 63.
10) M. Iino, H. Kasai and T. Yamazawa, "Visualization of Neural Control of Intracellular Ca²⁺ Concentration in Single Vascular Smooth Muscle Cells in situ", EMBO J., 1994, 13 (21), 5026.
11) M. E. Dailey and S. J. Smith, "Spontaneous Ca²⁺ Transients in Developing Hippocampal Pyramidal Cells", J. Neurobiol., 1994, 25(3), 243.
12) M. Burnier, G. Centeno, E. Burki and H. R. Brunner, "Confocal Microscopy to Analyze Cytosolic and Nuclear Calcium in Cultured Vascular Cells", Am. J. Physiol., 1994, 266, C1118.
13) E. Donnadieu and L. Y. W. Bourguignon, "Ca²⁺ Signaling in Endothelial Cells Stimulated by Bradykinin: Ca²⁺ Measurement in the Mitochondria and the Cytosol by Confocal Microscopy", Cell Calcium, 1996, 20 (1), 53.
14) M. Ikeda, H. Ariyoshi, J. Kambayashi, K. Fujitani, N. Shinoki, M. Sakon, T. Kawasaki and M. Monden, "Separate Analysis of Nuclear and Cytosolic Ca²⁺ Concentrations in Human Umbilical Vein Endothelial Cells", J. Cell. Biochem., 1996, 63 (1), 23.
15) J. E. Merritt, S. A. McCarthy, M. P. A. Davies and K. E. Moores, "Use of fluo-3 to Measure Cytosolic Ca²⁺ in Platelets and Neutrophils Loading Cells with the Dye, Calibration of Traces, Measurements in the Presence of Plasma, and Buffering of Cytosolic Ca²⁺", Biochem. J., 1990, 269, 513.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤褐色～暗赤褐色粉末又は固体でアルカリに溶ける。
純度(HPLC)：	70.0％以上
アルカリ溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 3-AM | CAS 121714-22-5 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Fluo 3-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 3-AM

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F023　 Fluo 3-AM
CAS番号

121714-22-5
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid,tetra(acetoxymethyl)ester
分子式・分子量

C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃=1129.85

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥43,300	343-08061

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/0.5 mL（アセトニトリル）、1 mg/mL（ジメチルスルホキシド）

参考文献

参考文献を表示する

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

Q Caの変化をフローサイトメトリーで測定したいと思っています。どの試薬を使えばよいでしょうか？: A

フローサイトメトリーでは、励起波長が固定されておりますので、1波長励起タイプのものが望ましいと思われます。

まず、Indo 1(UV laser, 365 nm)やFluo 3(Ar-laser, 488 nm)をお試しください。
・Indo 1はカルシウムの結合によって蛍光波長が変化するメリットがあります。
・Fluo 3は励起光源としてArレーザーを利用できます。

実際の使用例としては、
[Indo 1]
　P. S. Rabinovitch, et al., Journal of Immunology, 137, 952 (1986).
[Fluo 3]
　S. W. Sherwood and Robert T. Schimke, Methods Cell Biol., 46, 77 (1995).
がございます。ご参照ください。

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤色粉末又は固体で、ジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0% 以上
アセトニトリル溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fura 2-AM special packaging | CAS 108964-32-5 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fura 2-AM special packaging

04 細胞内蛍光プローブ

Fura 2-AM special packaging

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F025　 Fura 2-AM special packaging
CAS番号

108964-32-5
化学名

1-[6-Amino-2-(5-carboxy-2-oxazolyl)-5-benzofuranyloxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
分子式・分子量

C₄₄H₄₇N₃O₂₄=1001.85

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 μg x 8	￥24,200	348-05831

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶液調製法

Fura 2-AM 50 μgに適量のDMSOを加え均一に溶解することで、ご希望の濃度に調製いただけます。
下表に加えるDMSO量とFura 2-AM濃度の関係を示しましたので、ご参照ください。

DMSO (μL)	10	20	30	40	50
濃度 (mmol/L)	5.0	2.5	1.7	1.3	1.0

※DMSOに溶解後は保存できません。使用直前にFura 2-AM溶液を調製し、速やかにご使用ください。

参考文献

参考文献を表示する

よくある質問

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fura 2-AM special packaging | CAS 108964-32-5 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状：	本品は、黄色～橙黄色固体でジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)：	98.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 3-AM special packaging | CAS 121714-22-5 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fluo 3-AM special packaging

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 3-AM special packaging

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F026　 Fluo 3-AM special packaging
CAS番号

121714-22-5
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl) ester
分子式・分子量

C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃=1129.85

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 μg x 8	￥31,700	349-06961

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶液調製法

Fluo 3-AM 50 μgに適量のDMSOを加え均一に溶解することで、ご希望の濃度に調製いただけます。
下表に加えるDMSO量とFluo 3-AM濃度の関係を示しましたので、ご参照ください。

DMSO (μL)	10	20	30	40	44	50
濃度 (mmol/L)	4.4	2.2	1.5	1.1	1	0.9

※DMSOに溶解後は保存できません。使用直前にFluo 3-AM溶液を調製し、速やかにご使用ください。

参考文献

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よくある質問

Q はじめて測定します。Ca2+プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca2⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 3-AM special packaging | CAS 121714-22-5 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤色固体でジメチルスルホキシド、アセトニトリルに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0％以上
アセトニトリル溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 4-AM | CAS 273221-67-3 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fluo 4-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 4-AM

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F311　 Fluo 4-AM
CAS番号

273221-67-3
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl) ester
分子式・分子量

C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃=1096.94

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥50,800	345-90951

【注意】
本品は、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。
内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。（Free Dial：0120-489-548）

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/0.5 mL（アセトニトリル）、1 mg/mL(ジメチルスルホキシド）

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。

製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340nm, Ca free:380nm)、蛍光：λem=500nm
・解離定数：224nmol/l
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508nm、蛍光：λem=527nm
・解離定数：400nmol/l
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495nm、蛍光：λem=518nm
・解離定数：345nmol/l
・Fluo 3と比較して、励起極大波長が約10 nm短波長側にシフトしており、アルゴンレーザー励起による蛍光強度が約2倍と高感度である。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330nm、蛍光(λem= Ca:410nm, Ca free:485nm)
・解離定数：250nmol/l
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553nm、蛍光：λem=576nm
・解離定数：1.0μmol/l
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339nm、蛍光：λem=492nm
・解離定数：110nmol/l
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤橙色粉末又は固体である。
純度(HPLC)：	98.0％以上
アセトニトリル溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 4-AM special packaging | CAS 273221-67-3 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fluo 4-AM special packaging

04 細胞内蛍光プローブ

Fluo 4-AM special packaging

細胞内蛍光プローブ

細胞内カルシウムイオン測定試薬

製品コード

F312　 Fluo 4-AM special packaging
CAS番号

273221-67-3
化学名

1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-acetoxymethoxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetra(acetoxymethyl) ester
分子式・分子量

C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃=1096.94

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 μg x 8	￥37,000	342-90961

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
プロトコル蛍光で細胞内Caを測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/0.5 mL（アセトニトリル）、1 mg/mL（ジメチルスルホキシド）

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λ_ex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λ_em=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λ_ex=508 nm、蛍光：λ_em=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH, NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo 3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）
【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λ_ex=495 nm、蛍光：λ_em=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo 3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH, NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo 3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λ_ex= 330 nm、蛍光(λ_em= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λ_ex=553 nm、蛍光：λ_em=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH, NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λ_ex=339 nm、蛍光：λ_em=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ2009/05/15

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

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細胞内カルシウムイオン測定試薬 Fluo 4-AM special packaging | CAS 273221-67-3 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤橙色粉末又は固体である。
純度(HPLC)：	98.0％以上
NMRスペクトル：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
アセトニトリル溶状：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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カルシウムイオン測定試薬 Quin 2 | CAS 73630-23-6 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Quin 2

04 細胞内蛍光プローブ

Quin 2

細胞内蛍光プローブ

カルシウムイオン測定試薬

製品コード

Q001　 Quin 2
CAS番号

73630-23-6
化学名

8-Amino-2-[(2-amino-5-methylphenoxy)methyl]-6-methoxyquinoline-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetrapotassium salt
分子式・分子量

C₂₆H₂₃K₄N₃O₁₀=693.87

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 mg	￥34,100	340-04713

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

84 mg/100 mL（水）

参考文献

参考文献を表示する

1) R. Y. Tsien, "New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons:　Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures", Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, T. Pozzan and T. J. Rink, "Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored with a New, Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator", J. Cell Biol., 1982, 94, 325.
3) 和田弘子, 渥美博充, 中川元吉, 高濃度食塩溶液中の微量カルシウムの蛍光検出フローインジェクション定量, Chem. Express., 1989, 4, 381.
4) M. B. Feinstein, J. J. Egan, R. I. Sha'afi and J. White, "The Cytoplasmic Concentration of Free Calcium Inplatelets Is Controlled by Stimulators of Cyclic AMP Production (PGD2, PGE1, FORSKOLIN)", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, 113, 598.
5) N. Miyoshi, K. Hara, S. Kimura, K. Nakanishi and M. Fukuda, "A New Method of Determining Intracellular Free Ca²⁺ Concentration Using Quin　2-fluorescence", Photochem. Photobiol., 1991, 53 (3), 415.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しております。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、淡黄色粉末で水に溶ける。
純度(HPLC)：	95.0% 以上
水溶状：	試験適合
モル吸光係数：	34,000 以上(240 nm付近)

取扱条件
保存条件: 遮光

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カルシウムイオン測定試薬 Rhod 2-AM | CAS 145037-81-6 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Rhod 2-AM

04 細胞内蛍光プローブ

Rhod 2-AM

細胞内蛍光プローブ

カルシウムイオン測定試薬

製品コード

R002　 Rhod 2-AM
CAS番号

145037-81-6
化学名

1-[2-Amino-5-(3-dimethylamino-6-dimethylammonio-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl ester, bromide
分子式・分子量

C₅₂H₅₉BrN₄O₁₉=1123.94

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥62,300	341-05821

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル蛍光で細胞内 Ca を測定したい

技術情報

溶解例

1 mg/mL(DMSO), 50 mg/mL(クロロホルム)

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) M. Burnier, G. Centeno, E. Burki and H. R. Brunner, "Confocal Microscopy to Analyze Cytosolic and Nuclear Calcium in Cultured Vascular Cells", Am. J. Physiol., 1994, 266, C1118.
2) J. Vergara, M. Difranco, D. Compagnon and B. A. Suarez-Isla, "Imaging of Calcium Transients in Skeletal Muscle Fibers", Biophys. J., 1991, 59, 12.
3) T. Meyer, T. Wensel and L. Stryer, "Kinetics of Calcium Channel Opening by Inositol 1,4,5-Trisphosphate", Biochemistry, 1990, 29, 32.
4) A. Minta, J. P. Y. Kao and R. Y. Tsien, "Fluorescent Indicators for Cytosolic Calcium Based on Rhodamine and Fluorescein Chromophores", J. Biol. Chem., 1989, 264(14), 8171.
5) D. R. Trollinger, W. E. Cascio and J. J. Lemasters, "Selective Loading of Rhod 2 into Mitochondria Shows Mitochondrial Ca²⁺ Transients during the Contractile Cycle in Adult Rabbit Cardiac Myocytes", Biochem. Biophys. Res. Commun.,> 1997, 236, 738.

よくある質問

Q 細胞内カルシウム測定試薬は何種類かありますが、どのように選べばよいのでしょうか？: A

測定機器や測定波長などで選ばれることが多いようです。
製品名の後ろに[-AM]が付いているものは細胞膜透過型になります。
それぞれの試薬の特性は

【Fura 2】
・2励起1蛍光
　　励起(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、蛍光：λem=500 nm
・解離定数：224 nmol/L
・蛍光強度比での測定が出来るので、誤差要因の補正を行なうことが出来る。
=>細胞内Ca濃度の計算が行ない易い。
・最も多く使用されている。
・励起フィルターを切替えなくてはいけないので、切替え間のタイムロスがある。
　（機器の性能にもよる）

【Fluo 3】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=508 nm、蛍光：λem=527 nm
・解離定数：400 nmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・スライス標本には適さない
　（Fluo 3がスライス表面の死んだ細胞に結合するのか、細胞外のカルシウム濃度を測定する）

【Fluo 4】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=495 nm、蛍光：λem=518 nm
・解離定数：360 nmol/L
・Fluo3よりも蛍光強度が強い。
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。
・Fluo 3よりも細胞毒性がでやすい。

【Indo 1】
・1励起2蛍光
　　励起：λex= 330 nm、蛍光(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
・解離定数：250 nmol/L
・励起波長の切替えの必要がないので、非常に早い速度のCa濃度変化や心筋細胞の
　ような動きの試料も測定できる（但し、検出器は2台必要）

【Rhod 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=553 nm、蛍光：λem=576 nm
・解離定数：1.0 μmol/L
・励起波長が長波長側にあるので細胞に与える障害が少ない
　（NADH,NADPHの影響が出ない）
・Arレーザーによる励起装置が使用出来る。

【Quin 2】
・1励起1蛍光
　　励起：λex=339 nm、蛍光：λem=492 nm
・解離定数：110 nmol/L
・一番最初に開発されたプローブ

Q はじめて測定します。Ca²⁺プローブの原理や測定方法、トラブルシューティング法を分かり易く教えて下さい。: A

はじめて細胞内Ca²⁺測定をされる方を対象としたプロトコルを作成しています。
原理、Ca²⁺プローブの特徴、測定方法、トラブルシューティングの方法等を記載しておりますので、ご参照下さい。

下記リンクよりダウンロード可能です。

「はじめて細胞内Ca²⁺を測定する方へ　－カスタマーサポート担当者の視点から－」

取扱条件

規格
性状：	本品は、暗紫色固体でクロロホルムに溶ける。
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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細胞内pH測定試薬 BCECF | CAS 85138-49-4 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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BCECF

04 細胞内蛍光プローブ

BCECF

細胞内蛍光プローブ
細胞内蛍光プローブ

細胞内pH測定試薬

製品コード

B031　 BCECF
CAS番号

85138-49-4
化学名

2′,7′-Bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein
分子式・分子量

C₂₇H₂₀O₁₁=520.44

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
5 mg	￥16,100	345-05184

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

プロトコル細胞内 pH を測定したい

技術情報

注意事項

・本製品を粉末の状態で取り出し使用する場合、性状の性質上、静電気等の要因で容器内に付着し、取り出しにくい場合があります。
・容器内に付着し、取り出せなかった粉末に関しては、使用する溶媒を容器に入れ、溶かし出して使用してください。

参考文献

参考文献を表示する

1) R. A. Steinhardt and D. Mazia, "Development of K⁺-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH₄OH", Nature, 1973, 241, 400.
2) T. J. Rink, R. Y. Tsien and T. Pozzan, "Cytoplasmic pH and Free Mg²⁺ in Lymphocytes", J. Cell Biol., 1982, 95, 189.
3) A. M. Paradiso, R. Y. Tsien and T. E. Machen, "Na⁺ -H⁺ Exchange in Gastric Glands as Measured with a Cytoplasmic-trapped, Fluorescent pH Indicator", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81, 7436.
4) S. Grinstein, B. Elder and W. Furuya, "Phorbol Ester-induces Changes of Cytoplasmic pH in Neutrophils: Role of Exocytosis in Na⁺ – H⁺ Exchange", Am. J. Physiol., 1985, 248, C379.
5) G. B. Zavoico, E. J. Cragoe and M. B. Feinstein, "Regulation of Intracellular pH in Human Platelets", J. Biol. Chem., 1986, 261(28), 13160.
6) G. R. Bright, W. Fisher, J. Rogowska and L. Taylor, "Fluorescence Ratio Imaging Microscopy: Temporal and Spatial Measurements of Cytoplasmic pH", J. Cell Biol., 1987, 104, 1019.
7) C. Aalkjaer and E. J. Gragoe Jr, "Intracellular pH Regulation in Resting and Contracting Segments of Rat Mesenteric Resistance Vessels", J. Physiol., 1988, 402, 391.
8) K. Tsujimoto, M. Semadeni, M. Huflejt and L. Packer, "Intracellular pH of Halobacteria Can Be Determined by the Fluorescent Dye 2',7'-bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein", Biochem. Biophys. Res. Commun., 1988, 155, 123.
9) M. A. Kolber, R. R. Quinones, R. E. Gress and P. A. Henkart, "Measurament of Cytotoxicity by Target Cell Release and Retention of the Fluorescent Dye Bis-carboxyethyl-carboxyfluorescein(BCECF)", J. Immunol. Methods, 1988, 108, 255.
10) H. Harada, Y. Kanai, M. Anzai and Y. Suketa, "cAMP Activates Cl^–/HCO₃^– Exchange for Regulation of Intracellular pH in Renal Epithelial Cells", Biochim. Biophys. Acta, 1991, 1092, 404.
11) C. C. Freudenrich, E. Murphy, L. A. Levy, R. E. London and M. Lieberman, "Intracellular pH Modulates Cytosolic Free Magnesium in Cultured Chicken Heart Cells", Am. J. Physiol., 1992, 262(4), C1024.
12) K. Khodakhah and D. Ogden, "Functional Heterogeneity of Calcium Release by Inositol Triphosphate in Single Purkinje Neurones, Cultured Cerebellar Astorocytes, and Peripheral Tissues", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 4976.
13) G. Boyarsky, C. Hanssen and L. A. Clyne, "Superiority of in vitro Over in vivo Calibrations of BCECF in Vascular Smooth Muscle Cells", FASEB J., 1996, 10, 1205.
14) S. A. Weston and C. R. Parish, "New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy", J. Immunol. Methods, 1990, 133, 87.
15) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.

取扱条件

規格
性状：	本品は、橙色～赤茶褐色粉末でメチルアルコールに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0％以上
メチルアルコール溶状：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合
IRスペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 遮光

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細胞内pH測定試薬 BCECF-AM special packaging | CAS 117464-70-7 同仁化学研究所

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BCECF-AM special packaging

04 細胞内蛍光プローブ

BCECF-AM special packaging

細胞内蛍光プローブ

細胞内pH測定試薬

製品コード

B221　 BCECF-AM special packaging
CAS番号

117464-70-7
化学名

3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 μg x 8	￥19,600	349-08161

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
プロトコル細胞内 pH を測定したい

参考文献

参考文献を表示する

取扱条件

規格
性状：	本品は、白色～微黄色固体でジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。
純度(HPLC)：	90.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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細胞内pH測定試薬 BCECF-AM special packaging | CAS 117464-70-7 同仁化学研究所

細胞内pH測定試薬 BCECF-AM | CAS 117464-70-7 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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BCECF-AM

04 細胞内蛍光プローブ

BCECF-AM

細胞内蛍光プローブ

細胞内pH測定試薬

製品コード

B262　 BCECF-AM
CAS番号

117464-70-7
化学名

3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester
分子式・分子量

C₃₅H₂₈O₁₅=688.59

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 mg	￥38,300	342-08411

本品は、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。
内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。（Free Dial：0120-489-548）

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル細胞内 pH を測定したい

参考文献

参考文献を表示する

取扱条件

規格
性状：	本品は、淡橙色～淡橙褐色粉末または固体で、DMSOおよびアセトニトリルに溶ける。
純度(HPLC)：	90.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合
NMRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光 , 取扱条件: 吸湿注意

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細胞内鉄イオン測定試薬 FerroOrange | CAS – 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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FerroOrange

04 細胞内蛍光プローブ

FerroOrange

細胞内蛍光プローブ

細胞内鉄イオン測定試薬

製品コード

F374　 FerroOrange
CAS番号

–

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 tube	￥16,100	342-09533
3 tubes	￥36,300	346-09531

※ 1 tube当たり24 μgのFerroOrangeが含まれます。

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

鉄検出試薬の選択

鉄検出時の実験方法および測定機器に応じて試薬を選択頂けます。

	FerroOrange	Mito-FerroGreen
細胞内の局在	細胞内	ミトコンドリア
蛍光特性	λex : 543 nm、λem : 580 nm	λex : 505 nm、λem : 535 nm
対応装置（フィルター）	蛍光顕微鏡、プレートリーダー（Cy3）	蛍光顕微鏡（FITC、GFP）
測定対象	生細胞	生細胞
染色回数	24 μgで35 mm dish 17枚分染色可能（終濃度 1 μmol/l使用時）	50 μgで35 mm dish 5枚分染色可能（終濃度 5 μmol/l使用時）

技術や使用製品に関する補足

【注目の研究・トピック】

Dojin News No.162

地球上の生命体の活動や疾患における鉄の重要性の再認識　(名古屋大学　豊國伸哉先生)

Dojin News No.172

二重機能性蛍光色素（H-V）を用いたフェロトーシスの解明

▶Dojin News(4回/年）バックナンバー、

配信のご登録はこちら

高感度だから内在性の鉄も検出できる

HeLa細胞を用いて、細胞内に内在するFe²⁺および鉄キレート試薬Bpy（2,2‘-bipyridine、終濃度：100 μmol/l）と鉄（硫酸アンモニウム鉄（II）、終濃度：100 μmol/l）の添加有無により、細胞内のFe²⁺の変化をFerroOrangeにより確認しました。

蛍光顕微鏡によるイメージング
鉄キレート試薬を添加することで無刺激の細胞に比べ蛍光強度が低下したことから、細胞内には内在性のFe²⁺が存在することが確認できました。

細胞内鉄イオン測定試薬 FerroOrange | CAS - 同仁化学研究所

＜検出条件＞　Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm　　　　　　スケールバー：20 μm

プレートアッセイにより簡便に数値化
鉄キレート試薬および鉄の添加による細胞内のFe²⁺量の変化を数値データとして確認できました。

細胞内鉄イオン測定試薬 FerroOrange | CAS - 同仁化学研究所

＜検出条件＞　Ex: 543 nm、Em: 580 nm

*操作の詳細は　よくある質問「プレートリーダーでの測定方法を教えてください。」をご参照ください。

技術や使用製品に関する補足

ーフェロトーシス研究ー

実験例 : アミノ酸トランスポーター（xCT）阻害　

【関連試薬】

・過酸化脂質検出試薬

(Liperfluo)

・グルタミン酸測定キット

(Glutamate Assay Kit-WST)

・グルタチオン測定キット

(GSSG/GSH Quantification Kit)

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（HeLa）	蛍光顕微鏡	K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, "MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.", Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.
2)	細胞（ヒト内皮細胞株）	蛍光顕微鏡	Y. Wang and M. Tang, "PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance", Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.
3)	細胞（MCF7-ADR）	蛍光顕微鏡	S Guo, X Yao, Q Jiang, K Wang, Y Zhang, H. Peng, J. Tang and W. Yang , "Dihydroartemisinin-Loaded Magnetic Nanoparticles for Enhanced Chemodynamic Therapy", Front Pharmacol , 2020, 11, 226.
4)	細胞（293T)	蛍光顕微鏡	R. A. Weber, F. S. Yen, S.P.V. Nicholson, H. Alwaaseem, E.C. Bayraktar,M. Alam, R. C. Timson, K. La, M. Abu-Remaileh, H. Molina and K. Birsoy, "Maintaining Iron Homeostasis Is the Key Role of Lysosomal Acidity for Cell Proliferation", Mol. Cell, 2020, 77, 1-11.
5)	細胞（SK-HEP-1)	蛍光顕微鏡（解析ソフトを使用し数値化)	X. Li, T. Wang, X. Huang, Y. Li, T. Sun, S. Zang, K. Guan, Y. Xiong, J. Liu and H. Yuan , "Targeting ferroptosis alleviates methionine‐choline deficient (MCD)‐diet induced NASH by suppressing liver lipotoxicity", Liver Int., 2020, doi:10.1111/liv.14428.
6)	細胞（HepG2）	蛍光顕微鏡マイクロプレートリーダーイメージングサイトメーター	T. Hirayama, M. Niwa, S. Hirosawa and H. Nagasawa, "High-Throughput Screening for the Discovery of Iron Homeostasis Modulators Using an Extremely Sensitive Fluorescent Probe", ACS Sens., 2020,doi: 10.1021/acssensors.0c01445. ※論文で「RhoNox-4」と記載されている化合物が「FerroOrange」となります。
7)	細胞、組織（BV-2細胞、海馬(脳)）	蛍光顕微鏡	T. Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, "Nitrogen‑doped graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium homeostasis in microglia", Part. Fibre Toxicol., 2022, doi:10.1186/s12989-022-00464-z.
8)	細胞、組織（HeLa細胞、子宮頸冷凍スライス）	蛍光顕微鏡	T. Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and R. Ju, "Persistent ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV infection", Cell Death Discovery, 2022, doi:10.1038/s41420-022-01013-5.

よくある質問

Q FerroOrangeで染色する時の注意点を教えて下さい。: A

染色時は下記の点に注意の上、使用してください。

①FerroOrange染色後の培地交換
培地交換によりFerroOrangeが細胞外へ漏れ出てしまうため、染色後はそのまま観察してください。

②コントロール実験
鉄検出の実験条件を確認するため、鉄キレート試薬Bpy(2,2‘-bipyridine)または鉄（硫酸アンモニウム鉄(II) ）を添加したサンプルを準備し、FerroOrangeの蛍光強度の変化をみられることをお勧めします。

③細胞が染色されにくい（感度が低い）時の対応
細胞種によって染色度合いに差がみられる場合があります。
FerroOrange working solution濃度を推奨の1 μmol/lより高くして染色を行ってください。1-5 μmol/lの範囲での染色をお勧めします。

Q プレートリーダーでの測定方法を教えてください。: A

下記の実験例を参考に測定ください。

＜測定サンプル＞
サンプルA：添加剤なし（HeLa細胞のみ）
サンプルB：鉄キレート試薬 2,2'-bipyridyl (Bpy) を添加したHeLa細胞
サンプルC：鉄（硫酸アンモニウム鉄）を添加したHeLa細胞

＜測定操作＞
1. 96ウェルマイクロブラックプレート（透明底）にHeLa細胞懸濁液100 μlを 10,000 cells/wellになるよう播種し、37℃インキュベータ（5% CO₂）で一晩培養した。
2. サンプルCの細胞をMEM（FBS不含） 100 μlで3回洗浄した。
3. サンプルCのウェルに硫酸アンモニウム鉄(II)/MEM（FBS不含）溶液 100 μL(終濃度：100 μmol/l)を添加し、37℃インキュベーター（5% CO₂）中で30分間静置した。
4. 全てのウェルの細胞をHBSS 100 μlで3回洗浄した。
5. サンプルAおよびCのウェルに1 μmol/l FerroOrange working solution 100 μlを添加し、サンプルBのウェルにFerroOrange (終濃度：1 μmol/l)及び Bpy (終濃度：100 μmol/l)を含むHBSS溶液 100 μlを添加し、37℃インキュベータ（5% CO₂）で30分間インキュベートした。
6. プレートリーダーにて各サンプルの蛍光強度（Ex: 543 nm、Em: 580 nm）を検出した。

＜測定データ＞

Q 推奨のフィルターを教えてください。: A

検出時の推奨フィルターは下記の通りです。
励起フィルター: 530-565 nm
蛍光フィルター: 570-620 nm

Q フローサイトメーターによる解析は可能ですか？: A

可能です。但し、以下の理由より実験条件の最適化を行う必要があります。

　・細胞密度や細胞の種類によっては、FerroOrangeの染色強度に影響を与える場合があります。
　・培地交換や洗浄により、色素が細胞外に漏れる場合があります。

(参考)
HeLa細胞を用いた実験例をご紹介致します。

＜操作＞
1. MEM（10％ FBS、1％ penicillin-streptomyci）培地に懸濁したHeLa細胞を6ウェルプレートに播種し（1 x10⁵cells／well）、37℃、5％CO₂インキュベーター中で一晩培養した。
2. 細胞を無血清培地（2 ml）で3回洗浄し、無血清培地（1 ml）を細胞に添加した。
3. 10 mmol/l 硫酸鉄（II）アンモニウム（10 μl）をウェルに添加した（終濃度：100 μmol/l）。
4. 硫酸鉄アンモニウムと無血清培地を混合するため、ウェル内の溶液全量を一度マイクロピペットで吸い上げ、再び同じウェルにゆっくり戻した。
5. 37℃、5％ CO₂インキュベーター中で20分間インキュベートし、HBSS(1 ml)で3回細胞を洗浄した。
6. トリプシン処理（250 µl）後、血清培地（1 ml）で反応を停止し、細胞懸濁液 1.25 mlを遠心管に移した。
7. 細胞懸濁液を1,500 rpm、3分間遠心分離した。
8. 上清を除去し、HBSS（1 ml）を遠心管に加え、ピペッティングにより懸濁した。
9. 細胞懸濁液を1,500 rpmで3分間遠心し、上清を除去した。
10. 無血清培地で希釈した1 μmol/l FerroOrangeを300 μl細胞に添加した。
11. 37℃、5％ CO₂インキュベーター中で15-30分間インキュベートした。
12. 細胞をセルストレーナーに通し、フローサイトメーターを用いて解析した。

＜注意点＞

1. 染色後の洗浄によりFerroOrangeが細胞外に漏出するため、染色後洗浄をせずに測定してください。

（染色後の洗浄有無による蛍光強度の差）

2. 色素溶液の量に依存して蛍光強度が変化することがあるので、等量の色素溶液を添加してください。

　(色素溶液量による蛍光強度の差)

3. 鉄(II)を検出する実験条件を確認するために、硫酸鉄(II)アンモニウムを含む試料を調製し、
　　FerroOrangeの蛍光強度の変化を確認することを推奨します。

取扱条件

規格
性状：	本品はアセトニトリル、メタノール、ジメチルスルホキシドに溶解する。
純度(HPLC)：	92.0％以上
蛍光スペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光

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塩化物イオン測定試薬 MQAE | CAS 124505-60-8 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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MQAE

04 細胞内蛍光プローブ

MQAE

細胞内蛍光プローブ

塩化物イオン測定試薬

製品コード

M024　 MQAE
CAS番号

124505-60-8
化学名

N-Ethoxycarbonylmethyl-6-methoxyquinolinium bromide
分子式・分子量

C₁₄H₁₆BrNO₃=326.19

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 mg	￥19,400	348-06051

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

プロトコル細胞内塩化物イオンを測定したい

技術情報

溶解例

3 mg/mL（水：アセトニトリル＝1：1）

参考文献

参考文献を表示する

1) A. S. Verkman, M. C. Sellers, A. C. Chao, T. Leung and R. Ketcham, "Synthesis and Characterization of Improved Chloride-sensitive Fluorescent Indicators for Biological Applications", Anal. Biochem., 1989, 178, 355.
2) M. Inoue, M. Hara, X.-T. Zeng, T. Hirose, S. Ohnishi, T. Yasukura, T. Uriu, K. Omori, A. Minato and C. Inagaki, "An ATP-driven Cl^– Pump Regulates Cl^– Concentrations in Rathippocampal Neurons", Neurosci. Lett., 1991, 134, 75.
3) T. Nakamura, H. Kaneko and N. Nishida, "Direct Measurement of Chloride Concentration in Newt Olfactory Receptors with the Fluorescent Probe", Neurosci. Lett., 1997, 237, 5.

取扱条件

規格
性状：	本品は、微黄色～黄色粉末である。
純度(HPLC)：	95.0％以上
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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膜電位測定試薬 DiBAC4(3) | CAS 70363-83-6(free acid) 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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DiBAC₄(3)

04 細胞内蛍光プローブ

DiBAC₄(3)

細胞内蛍光プローブ

膜電位測定試薬

製品コード

D545　 DiBAC₄(3)
CAS番号

70363-83-6(free acid)
化学名

Bis(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol, sodium salt
分子式・分子量

C₂₇H₃₉N₄NaO₆=538.61

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
25 mg	￥38,500	349-90231

試験成績書

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マニュアル

プロトコル膜電位を測定したい

参考文献

参考文献を表示する

1) D. E. Epps, M. L. Wolfe and V. Groppi, "Characterization of the Steady-state and Dynamic Fluorescence Properties of the Potential-sensitive Dye Bis-(1,3-dibutylbarbituric acid)trimethine oxonol(Dibac4(3)) in Model Systems and Cells", Chem. Phys. Lipids, 1994, 69, 137.
2) T. Braner, D. F. Hulser and R. J. Strasser, "Comparative Measurements of Membrane Potentials with Microelectrodes and Voltage-sensitibe Dyes", Biochim. Biophys. Acta, 1984, 771, 208.
3) T. T. Rohn, A. Sauvadet, C. Pavoine and F. Pecker, "Xanthine Affects [Ca²⁺]_i and Contractile Responses of Ventricular Cardiocytes to Electrical Stimulation", Am. J. Physiol., 1997, 273, C909.
4) D. J. Mason, R. Allman, J. M. Stark and D. Lloyd, "Rapid Estimation of Bacterial Antibiotic Susceptibility with Flow Cytometry", J. Microsc., 1994, 176, 8.
5) U. Langheinrich and J. Daut, "Hyperpolarization of Isolated Capillaries from Guinea-pig Heart Induced by K⁺ Channel Openers and Glucose Deprivation", J. Physiol., 1997, 502, 397.
6) V. Dall'Asta, R. Getti, G. Orlandini, P. A. Rossi, B. M. Rotoli, R. Sala, O. Bussolati and G. C. Gazzola, "Membrane Potential Changes Visualized in Complete Growth Media through Confocal Laser Scanning Microscopy of bis-Oxonol-loaded Cells", Exp. Cell Res., 1997, 231, 260.
7) K. S. Schroeder and B. D. Neagle, "FLIPR: A New Instrument for Accurate, High Throughput Optical Screening", J. Biomol. Screening, 1996, 1, 75.

取扱条件

規格
性状：	本品は、赤橙色～赤色粉末である。
純度(HPLC)：	98.0％以上
ジメチルスルホキシド溶状：	試験適合
モル吸光係数：	140,000 以上(493 nm付近)
IRスペクトル：	試験適合

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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脂肪滴測定キット Lipid Droplet Assay Kit – Blue 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Lipid Droplet Assay Kit – Blue

05 細胞染色用色素

Lipid Droplet Assay Kit – Blue

細胞染色用色素
細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴測定キット

製品コード

LD05　 Lipid Droplet Assay Kit – Blue

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set ^※	￥26,800	349-09641

※ 96 well plate : 1 枚分、フローサイトメトリー: 40 アッセイ分

キット内容

1 set ^※	・Staining Dye – Blue ・loading Buffer (10x)	×1 6 ml ×1

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

脂肪滴は、トリアシルグリセロールやコレステロールエステルなどの中性脂肪が単分層のリン脂質一重膜によって取り囲まれた構造体です。脂肪滴は脂肪細胞のみに存在するわけではなく、すべての細胞に普遍的に存在しています。最近の研究から、脂肪滴はその表面に種々のタンパク質が結合し、体内の脂質代謝制御において重要な役割を担っていることが明らかになってきています¹⁾。近年、脂肪滴とオートファジー²⁾、細胞老化³⁾ といった細胞内現象との関連性も示唆されており、脂肪滴の形成・成長・融合・分解のメカニズムをより詳細に解明するツールが待ち望まれています。

1) T. Fujimoto et al., “Lipid droplets: a classic organelle with new outfits.” Histochem Cell Biol., 2008, 130(2), 263.
2) R. Singh et al., “Autophagy regulates lipid metabolism.” Nature, 2009, 458(7242), 1131.
3) M. Yokoyama et al., “Inhibition of endothelial p53 improves metabolic abnormalities related to dietary obesity.” Cell Reports, 2014, 7(5), 1691.

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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脂肪滴測定キット Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red

05 細胞染色用色素

Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red

細胞染色用色素
細胞染色用色素
細胞機能解析

脂肪滴測定キット

製品コード

LD06　 Lipid Droplet Assay Kit – Deep Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set ^※	￥26,800	346-09651

※ 96 well plate : 1 枚分、フローサイトメトリー: 40 アッセイ分

キット内容

1 set ^※	・Staining Dye – Deep Red ・loading Buffer (10x)	×1 6 ml ×1

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

脂肪滴とその機能

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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バイオフィルム形成量・形成阻害測定キット Biofilm Formation Assay Kit 同仁化学研究所

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Biofilm Formation Assay Kit

06 細菌研究用試薬

Biofilm Formation Assay Kit

細菌研究用試薬
食品機能評価
バイオフィルム

バイオフィルム形成量・形成阻害測定キット

バイオフィルム形成量および薬剤のバイオフィルム形成阻害を測定できる
測定の手間を大幅に低減
バラツキを抑えることが可能

製品コード

B601　 Biofilm Formation Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
96 tests	￥17,400	340-09573

「試験片用バイオフィルム形成能測定キット」をラインナップ！

・独自開発の蓋(TestPiece Holder)で、任意の素材をを簡便に測定できます

キット内容

96 tests	・Crystal Violet Solution ・96-peg lid ・96-well Plate	22 ml ×1 ×1 ×10

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

Biofilm Formation Assay Kitの特長と操作

技術情報

特徴① 測定の手間を大幅に低減

既存法はマイクロプレートの底にバイオフィルムを形成するため、菌の培養に伴う培地交換や、染色工程前後の洗浄作業に多くの手間を要していました。本キットは蓋に固定されたピン上にバイオフィルムを形成させるため、培地交換や染色工程が蓋を移すだけで完了し、操作が非常に簡便です。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	Streptococcus mutans （ATCC 35668）	I. Okamoto, H. Miyaji, S. Miyata, K. Shitomi, T. Sugaya, N. Ushijima, T. Akasaka, S. Enya, S. Saita and H. Kawasaki, "Antibacterial and Antibiofilm Photodynamic Activities of Lysozyme-Au Nanoclusters/Rose Bengal Conjugates", ACS Omega, 2021, doi:10.1021/acsomega.1c00838.
2)	A. baumannii （MDRAB）	Y. Sato, T. Ubagai, S. T.-Nagakawa, Y. Yoshino, Y. Ono, "Effects of colistin and on multidrug-resistant Acinetobacter baumannii biofilms: advantages and disadvantages of their combination", Sci. Rep., 2021, 11, 11700. doi:10.1038/s41598-021-90732-3.
3)	Staphylococcus aureus	S. Zhang, X. Qu, J. Jiao, H. Tang, M. Wang. Y. Wang, H. Yang, W. Yuan and B. Yue, " enhances aminoglycosides efficacy against implant infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus, persisters and biofilms", Bioact. Mater., 2021, doi: 10.1016/j.bioactmat.2021.11.019.
4)	Vibrio parahaemolyticus （腸炎ビブリオ）	M. Billaud, F. Seneca, E. Tambutté and D. Czerucka, "An Increase of Seawater Temperature Upregulates the Expression of Vibrio parahaemolyticus Virulence Factors Implicated in Adhesion and Biofilm Formation", Frontiers in Microbiology, 2022, 13, 840628.
5)	R. capsulatus	T. Shimizu, T. Aritoshi, J. T. Beatty and T. Masuda, "Persulfide-Responsive Transcription Factor SqrR Regulates Gene Transfer and Biofilm Formation via the Metabolic Modulation of Cyclic di-GMP in Rhodobacter capsulatus", 2022, doi:10.3390/microorganisms10050908.

よくある質問

Q バイオフィルムの形成条件はどのように検討すればいいですか？: A

バイオフィルム形成条件の検討項目としては、培地の種類、菌播種濃度、培地の交換回数、培養時間、培養温度などが挙げられます。

そのうち、培地の種類、菌播種濃度、培地の交換回数、培養時間を検討する場合の実験例をご紹介致します。
培養温度を検討される場合には、Biofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）を複数ご用意頂く必要がございます。
———————————————————————————————
形成量検討例-①
この検討により培地の種類、菌播種濃度、培地交換条件下でのバイオフィルム形成量を確認できます。

（プレート配置例）

日程表

手順

1)一日目：96-well plate① A, B行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　C～H行は空のままにする。96-peg Lidを被せ、微生物の成長に適した温度で24時間培養する。
　※例：菌濃度①約10⁷CFU/ml、菌濃度②約10⁶CFU/ml
2)二日目：96-well plate② A, B行の各ウェルに菌を含まない培地を配置例と同じように180 μl入れる。
　C, D行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。E～H行は空のままにする。
　手順1)の96-peg Lidを96-well plate②に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
3)三日目：96-well plate③ A～D行の各ウェルに菌を含まない培地を配置例と同じように180 μl入れる。
　E，F行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。G，H行は空のままにする。
　手順2)の96-peg Lidを96-well plate③に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
4)四日目：96-well plate④ A～F行の各ウェルに菌を含まない培地を配置例と同じように180 μl入れる。
　G，H行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　手順3)の96-peg Lidを96-well plate④に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
5)取扱説明書のバイオフィルム形成量・バイオフィルム形成阻害測定の手順(2)～(6)を新しい96-well plateを用いて行う。

———————————————————————————————
形成量検討例-②
この検討により培地の種類、菌播種濃度、培養時間条件下でのバイオフィルム形成量を確認できます。

（プレート配置例）

日程表

手順

1)一日目：96-well plate① A, B行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　C～H行は空のままにする。96-peg Lidを被せ、微生物の成長に適した温度で24時間培養する。
　※例：菌濃度①約10⁷CFU/ml、菌濃度②約10⁶CFU/ml
2)二日目：96-peg Lidを外す。96-well plate①の A, B行は培地を交換せずに培養を継続する。
　C，D行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。E～H行は空のままにする。
　外しておいた96-peg Lidを96-well plate①に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
3)三日目：96-peg Lidを外す。96-well plate①の A～D行は培地を交換せずに培養を継続する。
　E, F行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。G, H行は空のままにする。
　外しておいた96-peg Lidを96-well plate①に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
4)四日目：96-peg Lidを外す。96-well plate①の96-well plate①の A～F行は培地を交換せずに培養を継続する。
　G，H行の各ウェルに培地A～Dで調液した菌濃度①, ②の菌液を配置例と同じように180 μl播種する。
　外しておいた96-peg Lidを96-well plate①に被せ、微生物の成長に適した温度で引き続き24時間培養する。
5)取扱説明書のバイオフィルム形成量・バイオフィルム形成阻害測定の手順(2)～(6)を新しい96-well Plateを用いて行う。

Q どのような菌種での測定実績がありますか？: A

小社ではBiofilm Formation Assay Kit（本製品）ならびにBiofilm Viability Assay Kit（製品コード：B603）を用いたバイオフィルムの評価において、以下の菌種での評価実績がございます。
　・Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）
　・Pseudomonas aeruginosa（緑膿菌）
　・Escherichia coli（大腸菌）
　・Streptococcus mutans（虫歯の原因菌のひとつ）
　・Porphyromonas gingivalis（歯周病の代表的な原因細菌）

上記の細菌を用いた実験例や培養条件等は、取扱説明書をご参照ください。

Q バイオフィルムの形成阻害や薬剤効果を評価するには、どの程度のバイオフィルム形成量が必要ですか？: A

Biofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）を利用した場合、測定手順の最後に得られるクリスタルバイオレット(CV)溶液の吸光度として、0.5 以上(590 nm)を目安としています。

取扱条件

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バイオフィルム薬剤効果測定キット Biofilm Viability Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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Biofilm Viability Assay Kit

06 細菌研究用試薬

Biofilm Viability Assay Kit

細菌研究用試薬
食品機能評価
バイオフィルム

バイオフィルム薬剤効果測定キット

バイオフィルム内微生物の生存率や活性度合を確認できる
測定の手間を大幅に低減
バラツキを抑えることが可能

製品コード

B603　 Biofilm Viability Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
96 tests	￥20,000	347-09583

「試験片用バイオフィルム形成能測定キット」をラインナップ！

・独自開発の蓋(TestPiece Holder)で、任意の素材をを簡便に測定できます

キット内容

96 tests	・WST Solution ・Electron Mediator Reagent ・96-peg lid ・96-well Plate	1 ml×1 0.12 ml×1 ×1 ×10

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Biofilm Viability Assay Kitの特長と操作

技術情報

測定原理

本キットはバイオフィルム内の生菌の代謝活性を測定することで、バイオフィルム内微生物に対する薬剤効果を確認するキットです。エネルギー代謝活動に関与する補酵素であるNADH（NADPH）は電子メディエーターを介してWSTを有色のformazanへと還元します。この還元能を利用することで微生物の代謝活性を検出します。

参考文献

参考文献を表示する

1) 古畑勝則, "Legionella pneumophilaの実験的バイオフィルム形成条件の検討", Bacterial adherence & Biofilm., 2019, 33, 39-42.

2) Y. Sato, T. Ubagai, S. T.-Nagakawa, Y. Yoshino, Y. Ono, "Effects of colistin and tigecycline on multidrug-resistant Acinetobacter baumannii biofilms: advantages and disadvantages of their combination", Sci. Rep.., 2021, 11, 11700. doi:10.1038/s41598-021-90732-3.

よくある質問

Q 発色試薬添加後のインキュベートはどのくらい行えばいいですか？: A

微生物種や代謝活性により、発色に要する時間は異なります。
初回は一定時間ごとに吸光度を確認しながら、24時間ほどインキュベートされる事をお勧めします。
取扱説明書の図2および図3にS.aureus、S.mutansを用いた実験例を掲載してます、ご参照ください。

Q 450 nm以外のフィルターで測定することは可能ですか？: A

440～480 nmの範囲に入るフィルターをご利用いただけます。

Q バイオフィルムの形成阻害や薬剤効果を評価するには、どの程度のバイオフィルム形成量が必要ですか？: A

Biofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）を利用した場合、測定手順の最後に得られるクリスタルバイオレット(CV)溶液の吸光度として、0.5以上(590 nm)を目安としております。

Q どのような菌種での測定実績がありますか？: A

小社ではBiofilm Formation Assay Kit（製品コード：B601）ならびにBiofilm Viability Assay Kit（本製品）を用いたバイオフィルムの評価において、以下の菌種での評価実績がございます。
　・Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）
　・Pseudomonas aeruginosa（緑膿菌）
　・Escherichia coli（大腸菌）
　・Streptococcus mutans（虫歯の原因菌のひとつ）
　・Porphyromonas gingivalis（歯周病の代表的な原因細菌）

上記の細菌を用いた実験例や培養条件等は、取扱説明書をご参照ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵
危険・有害シンボルマーク

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試験片用バイオフィルム形成能測定キット Biofilm TestPiece Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Biofilm TestPiece Assay Kit

06 細菌研究用試薬

Biofilm TestPiece Assay Kit

細菌研究用試薬
食品機能評価
バイオフィルム

試験片用バイオフィルム形成能測定キット

測定の手間を大幅に低減
バラツキを抑えることが可能

製品コード

B606　 Biofilm TestPiece Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
24 tests	￥26,800	344-09831

ご購入に際してはページ下部の本製品のキット内容についての項をご確認ください。

キット内容

24 tests	・TestPiece Holder ・Crystal Violet Solution	×1 50 ml ×1

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技術情報

動画で紹介！

Tips! TestPiece Holderへの試験片の取り付け方

参考文献

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1) Shutao Zhang, Xinhua Qu, Juyang Jiao, Haozheng Tang, Minqi Wang. You Wang, Hongtao Yang, Weien Yuan, Bing Yue, "Felodipine enhances aminoglycosides efficacy against implant infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus, persisters and biofilms", Bioact. Mater., 2021, doi:10.1016/j.bioactmat.2021.11.019.

よくある質問

Q 24ウェルプレートは指定のもの以外で使用できますか。: A

TestPiece Holderは、各社24ウェルプレートの形状が僅かに異なるため、指定のもの以外は対応しておりません。
小社ではFalcon^®24-wellプレートに適合することは確認しております。

Q TestPiece Holderの再利用はできるのでしょうか。: A

TestPiece Holderはガンマ線照射して提供しております。再利用は雑菌等のコンタミネーションの可能性があるため推奨致しません。

Q どのような菌種での測定実績がありますか？: A

以下の菌種での評価実績がございます。
　・Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）
　・Pseudomonas aeruginosa（緑膿菌）
　・Escherichia coli（大腸菌）

上記の細菌を用いた実験例や培養条件等は、取扱説明書をご参照ください。

Q バイオフィルム測定の経験が無い、または必要な設備や装置がありません。測定の委託はできますか。: A

ページ下部の「お問合せフォーム」よりお問合せください。

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Fura 2-AM solution

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