日本同仁化学氧化应激与自由基 抗氧化能力 活性氧 谷胱甘肽 DNA损伤 脂质过氧化物- DOJINDO

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氧化应激与自由基

氧是合成激素和ATP等生物活性物质的一种重要的分子。获得利用氧的能力是生命进化的重要的驱动力。氧可以激活细胞中的各种酶,被激活的氧种类涉及细胞功能的运作。尽管氧本身是生命的一个基本元素,但在氧化应激中,诸如DNA和蛋白质等细胞中的分子有时会被活性氧 (Reactive oxygen species, ROS) 破坏。
抗氧化能力
活性氧
谷胱甘肽
DNA损伤
脂质过氧化物
铁离子
谷氨酰胺、谷氨酸
自由基
NO研究

品名货号用途

抗氧化能力检测试剂盒 (DPPH法 ) D678 抗氧化能力检测
超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit S311 超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST

细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中,小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子,接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原,当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS,它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子,它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中,氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法,这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。氧化应激与自由基 抗氧化能力 活性氧 谷胱甘肽 DNA损伤 脂质过氧化物

日本同仁化学活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252- DOJINDO

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活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252
活性氧检测试剂盒
ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-
商品信息
储存条件:-20度保存
运输条件:常温

特点:

● 比DCFH-DA更高的灵敏度

● 可多种仪器上机

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产品文献

选择规格:
100 tests

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

试剂盒内含
产品概述
荧光特性
技术信息
实验例
参考文献
常见问题Q&A

试剂盒内含

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

产品概述

    ROS Reactive Oxygen Species 主要是在线粒体中合成 ATP时所产生的高活性氧簇。ROS对细胞内的信号传导和吞噬作用等免疫机能起着重要的作用。另一方面, ROS对DNA和蛋白质的氧化作用也是各种疾病和细胞衰老的原因之一。

最近的研究发现,由二价铁所诱发的芬顿反应所引起的一种新的细胞死亡方式(铁死亡,Ferroptosis)的研究领域里 ROS也被广泛关注,检测 ROS的需求和意义也在不断升高 1)。目前在检测 ROS时,使用最多的试剂是DCFH-DA。但是 DCFH-DA往往有灵敏度低、样品荧光与背景的差别不明显等问题 。本试剂盒是一种高灵敏度的ROS检测试剂盒,而且配套使用本试剂盒内附带的 Buffer,可以在相对更低的细胞毒性下对 ROS进行高灵敏度检测。

荧光特性

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

技术信息

与市面现有试剂的比较

活性氧反应的选择性

高灵敏度DCFH-DA与常规DCFH-DA对活性氧(ROS)的反应性相同。
另外,由于具有与DCFH-DA相同的荧光特性(λex:505nm,λem:525nm),因此能够以相同的激发/荧光波长进行检测。

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检测灵敏度的比较

用DCFH-DA和ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA-分别对过氧化氢(1×10 4细胞/ ml)处理的HeLa细胞进行染色,并比较细胞内ROS的荧光结果。结果显示,在任何检测仪器中,同仁化学ROS检测试剂盒-高灵敏度DCFH-DA都以比DCFH-DA拥有更高的灵敏度。

(1)荧光显微镜检测

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

<检测条件>
Ex.488 nm / Em.500 -560 nm
细胞种类:HeLa细胞

(2)使用荧光酶标仪检测

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

<检测条件>
Ex.490-520 nm / Em.510-540 nm
细胞种类:HeLa细胞

(3)使用流式细胞仪检测

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

<检测条件>
FITC激发电压:215 V
细胞种类:HeLa细胞

实验例

一.Erastin处理的A549细胞的内在性ROS的检测

1. 向 ibidi 8-well plate中接种A549细胞 (1××104 cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-37°C 、 5% CO2培养箱内过夜培养 。

2. 去除培养基,加入用 DMEM培养基 稀释好的 50 μμmol/l的 Erastin溶液, 37°C 、 5% CO2培养箱过夜培养 。

3. 去除上清,HBSS清洗 2次 ,加入 Highly Sensitive DCFH-DA Dye working solution 37°C 、 5% CO2培养箱培养 30 min。

4. 去除Working solution HBSS清洗 2次 ,再次加入 HBSS,用荧光显微镜观察。

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

二.LPS处理的巨噬细胞内源性ROS的检测

用LPS(脂多糖)处理的RAW264.7细胞中细胞内ROS的变化的荧光成像结果显示,LPS处理可增加细胞内ROS。

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

<检测条件>
细胞内ROS(高灵敏度DCFH-DA染料):Ex. 488 nm / Em.500 -560 nm

<实验操作>
1.在ibidi 8孔板中接种RAW264.7细胞(3×104细胞,DMEM,10%胎牛血清,1%青霉素-链霉素)
2.培养箱(37℃,5%)过夜培养
3.除去培养基,用HBSS洗涤细胞两次,然后添加用DMEM培养基稀释的500 ng / ml LPS
4.培养箱(37°C,5%CO2) 孵育20小时
5.除去上清液,用HBSS洗涤细胞两次,然后添加高灵敏度DCFH-DA染料工作液。
6.培养箱(37°C,5%CO2)培养30分钟
7.培养30分钟后除去工作溶,用HBSS洗涤细胞两次后再添加HBSS并用荧光显微镜观察。

三.柳氮磺吡啶(SSZ)引起的细胞内代谢变化

向A549细胞添加已知抑制胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(xCT)的柳氮磺吡啶(SSZ)之后,确认了细胞内的ROS、ATP、α-谷氨酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)的变化和谷氨酸释放量的变化。

结果显示,由于SSZ的添加,细胞内的ATP、谷胱甘肽(GSH)以及谷氨酸的释放量减少,细胞内的α-谷氨酸和ROS增加。

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

活性氧检测试剂盒(ROS Assay Kit)货号:R252

参考文献

1、S. Kato, “Effects of platinum‑coexisting dopamine with X‑ray irradiation upon human glioblastoma cell proliferation”, Hum. Cell, 2021, doi:10.1007/s13577-021-00591-3.

2、K. Kanno, T. Sakaue, M. Hamaguchi, K. Namiguchi, D. Nanba, J. Aono, M. Kurata, J. Masumoto, S. Higashiyama, H. Izutani, “Hypoxic Culture Maintains Cell Growth of the Primary Human Valve Interstitial Cells with Stemness”, Int. J. Mol. Sci. 2021, doi:10.3390/ijms221910534.

3、C. Fang, L. Wu, M. Zhao, T. Deng, J. Gu, X. Guo, C. Li, W. Li, X. Zeng, “Periodontitis Exacerbates Benign Prostatic Hyperplasia through Regulation of Oxidative Stress and Inflammation”, Oxid. Med. Cell. Longevity, 2021, doi:10.1155/2021/2094665.

4、M. Tmoi and S. Shigeoka, “CP12 Is Involved in Protection against High Light Intensity by Suppressing the ROS Generation in Synechococcus elongatus PCC7942”, Plants, 2021, doi:10.3390/plants10071432.

5、S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, “In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling”, Gene, 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172.

6、Z. Luo, Q. Gao, H. Zhang, Y. Zhang, S. Zhou, J. Zhang, W. Xu, J. Xu, ” Microbe-derived antioxidants attenuate cobalt chloride-induced mitochondrial function, autophagy and BNIP3-dependent mitophagy pathways in BRL3A cells”, 2022, doi:10.1016/j.ecoenv.2022.113219.

7、Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

8、Y. Fujita, M. Iketani, M. Ito, I. Ohsawa, “Temporal changes in mitochondrial function and reactive oxygen species generation during the development of replicative senescence in human fibroblasts”, 2022, Exp. Gerontol.,  doi:10.1016/j.exger.2022.111866.

9、Hao Gu, Yuhui Zhu, Jiawei Yang, Ruixue Jiang, Yuwei Deng, Anshuo Li, Yingjing Fang, Qianju Wu, Honghuan Tu, Haishuang Chang, Jin Wen, Xinquan Jiang,”Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration.Advanced Science”,2023, Advanced Science, doi:10.1002/advs.202302136

10、Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”,Antioxidants2023,doi.org/10.3390/antiox12122097

常见问题Q&A

Q1:   请告诉我一个试剂盒可以测多少个样品?
A1:可以测量的样品数量请参考以下内容。
・96-well plate:1块
・ibidi8-well   plate:6块
・35mm dish:5块
・6-well plate:5孔
Q2:有没有可以用作阳性对照的实验例?
A2:使用说明书上记载了经过过氧化氢处理的HeLa细胞的检测实验例。
Q3: Highly Sensitive DCFH-DA   working solution可以用Loading Buffer以外的溶液配置吗?
A3:为了减轻染色时对细胞的损伤,推荐使用附带的Loading   Buffer配置,Hanks’HEPES和HBSS也可以进行制备。如果用培养基进行制备时请使用无血清培养基。
Q4:染色后的清洗可以使用PBS代替HBSS吗?
A4:为了减轻对细胞的损伤推荐HBSS。如果手头没有HBSS的话,建议用培养基清洗。
Q5:用荧光显微镜检测时有什么注意事项吗?
A5:染料与ROS反应并氧化后发出荧光。如果激发光持续照射,则染料会被氧化,背景会上升,因此,在获取荧光成像图像时,请先调整明场环境下的焦点和参数,然后再获取荧光图像。

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日本同仁化学ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒- DOJINDO

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ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253
耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒
ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:常温

特点:

● 可长时间持续观测ROS水平

● 染色后可PFA固定和免疫共染色

● 可用于多种仪器的检测

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实验手册

100tests

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

产品解说
规格性状
产品概述
常见问题
选择性对比
性能比较表
抑制观察光造成的自发氧化
染色后的细胞固定
检测灵敏度的比较
检测例
FAQ

产品解说

 

规格性状

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

产品概述

ROS(Reactive Oxygen Species)主要是在线粒体中合成ATP时所产生的高活性氧簇。适量的ROS对细胞内的信号传导以及免疫机能都有促进作用,而过量的ROS对DNA和蛋白质所造成的氧化作用是导致多种疾病和细胞衰老的原因之一。

常见的细胞内ROS检测方法是利用DCFH-DA进入细胞内被ROS氧化后会发出荧光的特性进行检测。然而,DCFH-DA有灵敏度较低、染色后易从细胞内漏出、观察光所引起的自发荧光1)等问题。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-克服了上述问题, 是一种比DCFH-DA灵敏度更高、进入细胞后可以与蛋白质结合抑制向细胞外漏出的荧光探针。更重要的是,它可以抑制由观察光所引起的自发荧光,可以更准确的反映细胞内ROS水平。另外,使用试剂盒内附带的Buffer进行观察,可以在尽量不伤害细胞的状态下检测细胞内的ROS。

1) M. Afzal, et al., “Method to overcome photoreaction, a serious drawback to the use of dichlorofluorescin in evaluation of reactive oxygen species” BBRC, 2003, 304, 619–624.

常见问题

相同实验条件下,检测结果的重现性差、由观察光引起荧光探针自发荧光的假阳性等问题是ROS检测的常见问题。而本试剂盒可以有效地解决上述问题。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

选择性对比

        Photo-oxidation Resistant DCFH-DA对各种活性氧(ROS)的选择性与DCFH-DA的选择性基本相同。另外,由于荧光特性(λex:505 nm; λem:525 nm)也相同,可以使用DCFH-DA相同的检测波长或Filter。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

性能比较表

同仁化学研究所的ROS荧光探针与市面上常见的ROS荧光探针的性能比较。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

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抑制观察光造成的自发氧化

在未经任何刺激的正常HeLa细胞中,使用Photo-oxidation Resistant DCFH-DA染色细胞后,每5分钟观察一次细胞。结果显示,与一般的DCFH-DA相比,Photo-oxidation Resistant DCFH-DA可以改善观察光所引起的荧光探针的自氧化(假阳性)。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

 

<实验条件>

细胞系:HeLa(未经任何刺激,正常状态)

荧光显微镜(BZ-X800, KEYENCE)

GFP Filter: Ex= 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm

拍摄时间间隔: 5 min

拍摄曝光时间: 1.5 sec

染色后的细胞固定

    一般的荧光探针在细胞固定后容易泄漏到细胞外造成荧光强度降低,而用本试剂盒染色HeLa细胞并加入过氧化氢后,用PFA进行细胞固定,然后通过荧光观察发现固定后的荧光强度几乎没有变化,而且染料基本都滞留在细胞内。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

检测灵敏度的比较

利用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,比较Photo-oxidation Resistant DCFH-DA与一般的DCFH-DA检测ROS的区别。从实验结果可以看出,同仁化学研究所的探针的灵敏度更高。

① 荧光显微镜检测

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

<检测条件>

GFP Filter: Ex = 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm)

② 荧光酶标仪检测

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

<检测条件>

Ex = 490 – 520 nm, Em = 510 – 540 nm

③ 流式细胞仪检测

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

<检测条件>

Ex = 488 nm, Em = 515 – 545 nm)

检测例

 

LPS诱导后,细胞内ROS水平的监测

用ROS Assay Kit –Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-染色RAW264.7细胞后,加入脂多糖(LPS)刺激细胞并开始实时监测细胞内的ROS水平。通过对检测结果的数值化分析可以看出,在LPS诱导10小时后,胞内的ROS水平明显开始升高。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

<检测条件>

细胞内ROS Photo-oxidation Resistant DCFH-DA Dye)

GFP Filter (Ex = 450 – 490 nm, Em = 500 – 550 nm)

 

<实验步骤>

1. 将RAW264.7细胞(2×105 cells/ml, DMEM, 10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin)接种于黑色96-well孔板中。

2. 37℃、5% CO2培养箱过夜培养。

3. 去除培养基,用HBSS清洗细胞2次,添加Photo-oxidation Resistant DCFH-DA Dye Working solution。

4. 37℃、5% CO2培养箱内培养30 min。

5. 去除培养基,用HBSS清洗细胞2次,添加Highly Sensitive DCFH-DA Dye Working solution。

6. 37℃、5% CO2培养箱内培养30 min。

7. 去除培养基,用HBSS清洗细胞2次。添加含有500 ng/ml LPS的DMEM培养基,用荧光显微镜观察。

8. 每隔1小时检测荧光强度并绘制荧光强度/时间的曲线图。

与线粒体标记物Tom 20的共染色

使用本试剂盒染色HeLa细胞后加入过氧化氢,与Tom 20抗体进行免疫共染色,实现了胞内ROS水平与线粒体的形态的同时观察。该实验证明了本试剂盒可以完美解决传统ROS荧光探针无法用于免疫荧光染色的问题。

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

 

<检测条件>

激光共聚焦显微镜

(蓝) DAPI: Ex = 405 nm, Em = 450-495 nm

(绿) Photo-oxidation Resistant DCFH-DA: Ex = 488 nm, Em = 500-550 nm

(紫) Alexa Fluor 647: Ex = 633 nm, Em = 640-700 nm

Scale bar:10 µm

 

使用活细胞高内涵成像检测被激活的巨噬细胞中ROS的产生

免疫细胞通过炎症反应消除外来物质,在维持正常身体方面发挥了作用。受到外来物质刺激的单核细胞在线粒体中产生活性氧(ROS),分化成活化的巨噬细胞,并分解外来物质。另一方面,过度的炎症会引起自身免疫性疾病、过敏、糖尿病和阿尔茨海默病。这就是为什么ROS检测成为炎症药物的一个重要指标。

<实验>

脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞可以吞噬死细胞。LPS诱导的巨噬细胞的炎症反应是以ROS为指标进行评估的。在尼康倒置显微镜(Ti2-E)上用ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-检测ROS。此外,使用体积对比图像检测每个细胞的ROS随时间的变化。

<结果>

细胞形态和细胞计数的观察

LPS刺激增加了每个细胞的面积(图1A)。 与对照组细胞相比,它还导致了细胞数量的减少(图1B)。

ROS的检测

当测量整个视野中的细胞数量并计算每个细胞的荧光强度时,与500 ng/ml相比,成像开始21小时后,1000 ng/ml的LPS的荧光强度更高,更高的LPS浓度导致每个细胞产生更多的ROS(图2)。 此外,延时成像显示由于细胞分裂导致细胞数量增加,而由于巨噬细胞吞噬死细胞导致细胞数量减少和ROS增加(图3)。传统的ROS检测试剂由于受到激发光的自动氧化,很难测量随时间的变化和进行高重复性的实验,但本实验中使用的ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-减少了激发光对染料的自动氧化,此外,染料在细胞内结合,所以不会产生ROS。 实验中使用的ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-减少了激发光对染料的自动氧化,而且,由于染料在细胞内结合,在产生ROS的区域专门检测到荧光,能够以低背景进行高度准确的分析。 而且,该染料在细胞内的滞留型高,可以在成像48h后仍然检测出高荧光强度,从而使长时间内ROS随时间的变化检测成为可能。

 

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

图 1. 添加LPS后细胞数量及细胞面积的变化情况

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

图 2. ROS的荧光强度分析

(A, B) LPS添加21h后荧光图像  比例尺: 100 μm

(C, D) 每个细胞ROS的荧光强度

ROS Assay Kit -Photo-oxidation Resistant DCFH-DA-货号:R253耐光型活性氧(ROS)检测试剂盒

 

图 3. 被激活的巨噬细胞对死细胞的吞噬作用

使用500 ng/ml LPS后Time-lapse 成像结果  Green: ROS, 比例尺: 10 μm

细胞2,凋亡细胞 (B) 1h后显示死细胞形态 (C).

细胞1吞噬死亡的细胞2和细胞3,并且ROS增加(C-F)

※ 详见以下视频

 

*<用细胞数进行校正(体积对比(VC)成像)>

在这个实验中,”显微镜附加模块体积对比 “被用来校正细胞数。通过使用体积对比(VC)图像,可以从三个不同焦平面的明视野图像中构建类似荧光的相位分布图像、这有利于识别背景和细胞区域,还可以在没有染料或激发光造成的毒性的情况下校正细胞数量。

<仪器>

高内涵分析(HCA)显微镜系统

(Nikon  https://www.microscope.healthcare.nikon.com/zh_CN/)

*关于详细步骤和分析可参见:

Nikon ”APPLICATION NOTE: High-content live cell imaging of ROS production in activated macrophages”

FAQ

Q:每个试剂盒可以检测多少个样品?
A:可检测的样品数请参考下列信息:

・ 96-well plate:1块板
・ ibidi 8-well plate:6块板
・ 35 mm dish:5块
・ 6-well plate:5个孔

Q:是否有可作为“阳性对照”的实验例?
A:产品的使用说明书中的“实验例2”有过氧化氢刺激HeLa的检测实例。请参考说明书实验例2的步骤1-5。
Q:是否可以使用Loading buffer以外的缓冲液来配制Working solution?
A:为了减小观测时对细胞的损伤,建议尽量使用Loading buffer来配制。另外,也可以使用 Hanks’ HEPES或HBSS来配制。如果需要用培养基配制,请使用无血清培养基。
Q:清洗细胞时,是否可以用PBS替代HBSS?
A:为了减小对细胞的损伤,建议尽量使用HBSS。如果手头没有HBSS,建议用培养基清洗细胞。
Q:在使用流式细胞仪检测时,建议在哪一步将贴壁细胞剥落?
A:参照使用说明书,建议在步骤6(药物刺激后并用HBSS清洗细胞之后),将细胞剥离(胰酶消化)。胰酶消化后重新加入培养基,离心后用HBSS清洗1次,再次离心去上清之后,用HBSS重悬细胞用于检测

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