杆状病毒滴度测定酶试剂盒Takara


杆状病毒滴度测定
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631406 BacPAK Baculovirus Rapid Titer Kit 5 Assays ¥5,852 杆状病毒滴度测定 杆状病毒滴度测定 杆状病毒滴度测定
Clontech 631414 BacPAK qPCR Titration Kit 200 Rxns ¥5,985 杆状病毒滴度测定 杆状病毒滴度测定 杆状病毒滴度测定
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产品介绍
    本试剂盒提供了一种快速简单的方法来确定杆状病毒种群的滴度。使用标准免疫测定法在48小时内即可准确测定杆状病毒滴度,而斑块和终点稀释测定法通常需要5-10天。
    在BacPAK杆状病毒表达系统中,感染细胞在斑块形成前长时间表达病毒抗原。BacPAK快速滴定测定法可以在短暂的潜伏期后用于滴度测定。此外,得到的滴度与通过其它方法获得的滴度相当。该试剂盒适用于滴度大于104 pfu/ml的任何病毒库,并且与所有常用(基于AcMNPV)的杆状病毒表达系统兼容。
    本试剂盒使用的一抗是针对AcMNPV包膜糖蛋白质(gp64)的单克隆抗体,用来准确鉴定病毒感染的细胞。二抗偶联了HRP,可以通过光学显微镜观察感染的细胞,并且确定病毒滴度。最近我们将操作流程进行了升级,为鉴定细胞提供更好的信噪比。
 
BacPAK qPCR Titration Kit
    本试剂盒为测定病毒种群滴度提供了非常快速和简单的方法,在使用qPCR和绿色嵌合染料技术确定病毒基因组的内容之前,可快速进行DNA纯化。实验操作仅需4 h,并且与基于AcMNPV的任意的杆状病毒载体兼容。通过qPCR的方法,实验人员可以在同一天内完成病毒收获和靶细胞感染。因而可以避免因操作时间过长导致的病毒感染性降低,同时可以用已知的多重感染(MOI)影响靶细胞从而获得更一致的结果。
    BacPAK qPCR滴定通过校准的DNA标准曲线确定杆状病毒制剂中的病毒基因组拷贝数。过程比较简单:将病毒DNA和BacPAK对照DNA连续稀释并进行qPCR绘制标准曲线。然后通过将每个病毒的Ct值带入标准曲线中,即可算出病毒DNA的拷贝数。
    BacPAK qPCR滴定试剂盒具有简便,重复性好和处理时间短等特点,是测定杆状病毒DNA滴度的理想选择。
 
为什么要知道滴度?
● 确认包装反应成功,以免浪费时间
● 确保实验的一致性
● 确保足够的MOIs,以实现100%的细胞转导
● 控制拷贝数,进而控制表达水平
 
产品特点
● 节省时间,将杆状病毒表达实验的时间控制在6天以内
● 无需麻烦的斑块测定
● 与任意基于AcMNPV的杆状病毒表达系统兼容
● 快速测定病毒滴度
● 收获、滴定和感染可在一天内完成
● 准确的滴度产生一致的感染结果
 
应用
确定杆状病毒滴度,以优化重组蛋白质表达
 
 

页面更新:2020-10-29 11:58:34

杆状病毒表达系统酶试剂盒Takara


杆状病毒表达系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631401 BacPAK6 DNA (Bsu36 I digest) 5 Transfections ¥6,798 杆状病毒表达系统 杆状病毒表达系统
Clontech 631721 X-GLUC 100 mg ¥5,354 杆状病毒表达系统 杆状病毒表达系统
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Code No. 产品名称
631401   BacPAK6 DNA (Bsu36 I digest)
631721   X-GLUC
 
产品介绍
    与细菌表达系统相比,在昆虫细胞中产生的重组蛋白质的翻译后加工和折叠更类似于哺乳动物过程,有功能的目的蛋白质的产量通常要大得多。因此,为了生产大量的重组蛋白质,许多研究者已经转向杆状病毒表达系统。
 
BacPAK法
    BacPAK系统采用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)在昆虫细胞中表达目标蛋白质。首先把目的基因插入到穿梭载体中,然后与线性化的BacPAK6病毒DNA共转染至昆虫宿主细胞。这个特殊设计的BacPAK6病毒DNA能够迫使病毒和载体之间发生重组,实现高的重组效率。重组之后挑选并纯化几个噬菌斑,验证重组表型。新分离得到的重组病毒就可以扩增并且感染昆虫细胞产生大量的目的蛋白质。
    如有需要,可以使用产品附带的pBacPAK8-GUS作为共转染步骤的阳性对照。该载体具有大肠杆菌β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS),克隆在多角体蛋白质启动子的下游。pBacPAK8-GUS与BacPAK6病毒DNA重组后能够表达β-葡糖苷酸酶,该酶可催化底物X-GLUC显现蓝色。
 
产品特点
    ● 每L培养基表达的蛋白质量最高可达500 mg
    ● 重组效率>90%
    ● 蛋白质折叠正确
    ● 可以有效表达具有生物活性的蛋白质
    ● 真核蛋白质的翻译后修饰
 
产品应用
在昆虫细胞中表达重组蛋白质
 
BacPAK6 Viral DNA 图谱
杆状病毒表达系统
 
操作流程示意图
杆状病毒表达系统
In-Fusion Ready BacPAK载体和杆状病毒表达系统。将含有目的基因的PCR片段直接克隆到In-Fusion Ready BacPAK载体以构建N末端或C末端蛋白质的表达载体。将验证过的克隆与BacPAK6病毒DNA共转染至昆虫细胞中,通过AcMNPV序列二者进行重组,被感染的昆虫细胞就会随着病毒的扩增而产生重组蛋白质,最后使用TALON技术对其进行纯化。
 
实验例1
杆状病毒表达系统
使用表达水母绿色荧光蛋白质(AcGFP1)的重组杆状病毒载体感染昆虫细胞。使用In-Fusion Ready BacPAK载体构建重组杆状病毒,用以表达带有N末端标签的AcGFP1。被感染的Sf9细胞能够表达高水平的AcGFP1并发出强烈的荧光,流式细胞术的检测结果显示,被感染细胞的平均荧光强度是未感染对照组的约440倍。
 
实验例2
杆状病毒表达系统
使用BacPAK杆状病毒表达系统生产重组病毒制备蛋白质。通过共转染载体和BacPAK6病毒DNA (Bsu36 I消化)产生重组病毒,然后在Sf21细胞中进行扩增。感染48 hr后裂解细胞进行SDS PAGE检测。
泳道1:未被感染的Sf21细胞
泳道2:野生型AcMNPV病毒感染的Sf21细胞
泳道3:未重组BacPAK6病毒感染的Sf21细胞
泳道4:BacPAK8-GUS重组病毒感染的Sf21细胞
泳道5:纯化的CAT蛋白质
泳道6:BacPAK8-CAT重组病毒感染的Sf21细胞
泳道M:分子量marker
 
产品详情请点击:杆状病毒表达系统
 
 

页面更新:2019-11-11 14:55:28