霍乱毒素
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	S014	Primer Set VCT–1&2	各1,000 pmol	￥1,432

□ 浓度 19 pmol/μl □ 体积 53 μl □ 检出细菌 Vibrio cholerae

■ 制品说明

下表是使用PCR方法特异性检测霍乱毒素(CT)基因的引物信息。

Primer (Code No.) 检测基因 扩增产物大小        VCT-1&2(S014) 霍乱毒素基因（ctx基因） 307 bp

■ 保 存

-20℃。

页面更新：2020-06-17 16:08:17

基因编辑后克隆基因型确认
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	632611	Guide-it Genotype Confirmation Kit	100 Rxns	￥5,910

基因敲除               ↗ → → → →               基因敲入                   ↘             基因编辑后克隆基因型确认 Guide-it Genotype Confirmation Kit 每个细胞中大部分基因都拥有两个等位基因。CRISPR/Cas9基因编辑可以对特定基因的一个或两个等位基因引入插入突变或缺失突变(indels)。Guide-it Genotype Confirmation Kit提供了一种简单的方法，用于确认特定克隆是一个等位基因突变（单等位基因），还是两个等位基因突变（双等位基因突变），或者是未发生变化（野生型）。实验操作中涉及到从Cas9 和single guide RNA (sgRNA)处理的细胞中扩增靶点序列。扩增出的序列被用在重组Cas9和相同的sgRNA的体外剪切反应。剪切产物通过琼脂糖凝胶电泳，确定基因型。 基因编辑后使用该试剂盒，加快了在大量克隆中筛选所需基因型的进程。每个试剂盒包含足够的试剂，用于100次提取、扩增和剪切反应。   产品特点： · Cas9 和sgRNA体外剪切实验，用于确定单等位基因突变和双等位基因突变 · 包括高纯度的重组Cas核酸酶，用于体外剪切实验 · 流程化的操作步骤，使用来自于细胞的目的基因组DNA直接扩增   产品应用： · CRISPR/Cas9 基因编辑 · CRISPR/Cas9 基因编辑后，单等位基因突变和双等位基因突变的确定   实验例： A图：使用Cas9和靶向C4BPB 基因的sgRNA对HEK 293细胞进行基因编辑。使用Guide-it Genotype Confirmation Kit对获得的15个单细胞克隆进行C4BPB位点的基因型鉴定。图中左侧的野生型 (WT)，单等位基因 (M)，双等位基因 (B)在分析中作为对照。结果表明克隆1，4，10，12是野生型；克隆2是单等位基因突变；以及克隆3，5-9，11和13-15是双等位基因突变。 B图：对A图中挑选的克隆进行测序分析。每个结果中，小写字母代表的是野生型（WT）序列。对于那些在A图中使用基因型鉴定方法确认的双等位基因突变的克隆，进一步测序分析表明克隆7是杂合子，克隆9和11是纯合子。在克隆2中，检测到3种不同的等位基因，可能是因为在HEK 293细胞系中出现拷贝数变异。 （数据来源于Takara Bio USA, Inc.）

Code No. 产品名称 632611   Guide-it™ Genotype Confirmation Kit

产品详情请点击：

页面更新：2020-03-19 08:35:48

基因敲入用长单链DNA制备 v1
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	632644	Guide-it Long ssDNA Production System	25 Rxns	￥5,654
Clontech	632645	Guide-it Long ssDNA Strandase Kit	25 Rxns	￥4,159

基因敲入用长单链DNA制备

CRISPR/Cas9和其它基因编辑工具已经被成功应用于获得基因敲除突变（knockout），但众多事实证明在基因敲入上的应用有很大的难度。基因敲入所面临的主要难题是修复模板的制备和如何与Cas9-sgRNA核糖核蛋白复合物共导入至细胞。 虽然单链DNA（ssDNA）修复模板展示出了优于双链DNA（dsDNA）模板的众多优势，但是其制备难度和制备费用都有很大的挑战性，因而限制了长单链DNA（long ssDNA）模板的应用。Guide-it Long ssDNA Strandase Kit可以很好地解决这个矛盾，可制备长达5 kb的ssDNA寡核苷酸，应用于CRISPR/Cas9或者其它基因编辑技术作为基因敲入实验修复模板。本试剂盒提供了一种简便的方法通过有选择地消化降解双链DNA PCR产物的正义链（sense strand）或者反义链（antisense strand），将其转化为单链DNA。该试剂盒提供了可以制备50条ssDNA链的足量试剂（25对正义链和反义链）。

与dsDNA相比，使用ssDNA作为模板的优势：

· 显著降低了随机整合到基因组中的概率，从而提高了基因编辑效率 · ssDNA模板导入产生的细胞毒性反应低 · 不存在随机整合或者表达，提高了基因编辑效率 · 非整合模板中不表达，更容易识别发生正确基因编辑的细胞克隆

注意：Guide-it Long ssDNA Production System包含NucleoSpin Gel 和 PCR Clean-up kit，用于在基因编辑实验之前纯化strandase反应液。

■ Overview

· 制备长达5 kb的长单链DNA（ssDNA）供体模板 · 三步操作，快速，简便易用 · 不存在随机整合或者表达，从而提高了基因编辑效率 · 单链DNA供体模板产生的细胞毒性远低于双链DNA模板

■ 应用

· 制作基因敲入实验供体模板，DNA片段> 500 bp

■ 操作流程概要

图1. 同源定向修复（Homology Directed Repair）实验用长单链DNA（long ssDNA）供体模板制备步骤示意图。第一步，通过合适的方法（克隆，融合PCR等）制作dsDNA起始模板，dsDNA模板包含与目的插入位点两侧同源的同源臂，模板中间是欲knockin的外源序列。第二步，通过在第一步中产生的dsDNA的不同位置上结合磷酸化的引物，制备出两种不同的dsDNA作为Strandase反应的底物。添加Strandase Mix A，开始消化降解正义链或反义链（Strandase Mix A有选择性地降解磷酸化的DNA链）。第三步，添加Strandase Mix B完成降解反应，从而获得ssDNA。最后，纯化ssDNA产物用于knockin实验。我们建议制备ssDNA正义链和ssDNA反义链并独立用于knockin实验。

产品详情请点击：

页面更新：2020-07-02 10:17:04