CLAMP F405-Signal Boosting

08 ラベル化剤

CLAMP F405-Signal Boosting

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免疫染色用青色蛍光基質

• 表面抗原の発現量を高感度に測定可能
• 高い選択性と滞留性を実現した染色技術

• 製品コード
  C554　 CLAMP F405-Signal Boosting

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マニュアル

測定原理

本技術では、細胞表面タンパク質に対する一次抗体、 β-Galactosidase標識二次抗体、およびβ-Galactosidaseの蛍光基質CLAMP F405を使用します。この蛍光基質は、無蛍光で細胞膜非透過性という性質を有しております。細胞表面タンパク質を介して細胞表面にβ-ガラクトシダーゼが存在すると、この蛍光基質が反応して、キノンメチド構造を有する化合物を生成します。この反応生成物は細胞膜透過性を有しているため、細胞内に入り込み、細胞内のチオールやアミノ基などと反応して共有結合を形成し、蛍光を発します。この反応は抗原の量に依存したβ-Galactosidaseの存在により、色素が反応し細胞内に蓄積していきます。
このようなメカニズムで、細胞表面タンパク質特異的かつ低発現な抗原に対しても高感度に細胞を蛍光染色することが可能となります。

参考文献：Noguchi, K. et al., “β-Galactosidase-Catalyzed Fluorescent Reporter Labeling of Living Cells for Sensitive Detection of Cell Surface Antigens”, Bioconjugate Chem., 2020, 31(7), 1740–1744.

Q

染色実績のある細胞種、抗原を教えてください。

A

下記実績がございます。

サンプルの種類	測定対象	測定抗原	測定方法
Cells	HeLa cells	CD44, GLUT1	蛍光イメージング、FCM
Cells	HeLa cells	CD63, CD9	蛍光イメージング
Cells	A549 cells	CD44	蛍光イメージング
Cells	HepG2 cells	PD-L1	蛍光イメージング
Cells	HL60 cells	CD44, CD33	蛍光イメージング、FCM
Cells	MOLT4 cells	PD-1, CD44	FCM
Cells	T2 cells	自己抗体	FCM
Cells	myocyte cells	自己抗体	蛍光イメージング
Cells	bjab cells	classI抗原	蛍光イメージング
Cells	赤血球	表面抗原	FCM
Cells	マクロファージ化 させたTHP-1 細胞	ABCA 1	蛍光イメージング
tissue	FFPE組織切片 (マウス：肝臓)	Actin	蛍光イメージング
tissue	FFPE組織切片 (ヒト：腎臓)	Actin	蛍光イメージング
tissue	FFPE組織切片 (ヒト：大腸、肺)	p16	蛍光イメージング
tissue	FFPE組織切片 (ヒト：小腸)	CD45,α-SMA	蛍光イメージング
tissue	凍結組織切片 (マウス：脳)	Iba1	蛍光イメージング

 

Q

染色したサンプルは、保存できますか。

A

生細胞の場合、染色後にPFA固定後、PBS中で冷蔵1週間保存可能です。また、固定細胞は染色後、PBS中で冷蔵１週間保存可能です。

Q

内在性のβGalactosidaseは影響しませんか。

A

生細胞の場合、CLAMP F405は膜透過性がないため、内在性のβGalactosidaseと反応しません。また、固定細胞・組織の場合、PBS中での染色を行う条件ではバックグラウンド蛍光の上昇は見られません。

Q

βGal標識二次抗体は入手可能ですか。

A

弊社では、一次抗体やβ-galactosidase標識抗体は販売しておりません。下記に使用実績のある抗体を示します。

Origin	Company	Catalog#
human	arigo biolaboratories	ARG21670
mouse	arigo biolaboratories	ARG21521
Human	arigo biolaboratories	ARG23882
human	arigo biolaboratories	ARG24060
rat	arigo biolaboratories	ARG21691
mouse	abcam	ab136775
rat	abcam	ab136716
goat	abcam	ab136712
rabbit	abcam	ab136774
mouse	abcam	ab130781
mouse	southernbiotech	1010-06
mouse	southernbiotech	1020-06
mouse	southernbiotech	1030-06
human	southernbiotech	2010-06
human	southernbiotech	2040-06
human	southernbiotech	2060-06
rat	southernbiotech	3030-06
rabbit	southernbiotech	4010-06
mouse	sigma aldrich	401607

Q

Staining SolutionをPBS, HBSS以外で調製することは可能ですか。

A

中性以外の緩衝液や培地等を用いた場合、染色反応に影響があるため使用できません。

Q

推奨の測定条件を教えてください。

A

落射型顕微鏡の場合：DAPI filter 励起フィルター320-380 nm, 蛍光フィルター435-485 nm

共焦点顕微鏡の場合：Ex = 405 nm, Em = 425-475 nm

フローサイトメーターの場合：励起 405nm、蛍光フィルター：BV421, Pacific Blue (450/50 nm)

Q

CLAMP F405-Signal Boosting のDMSO溶液は、凍結融解を繰り返しても安定ですか。

A

20回まで凍結融解を行っても性能に影響しないことを確認しております。

Q

Staining Solution は調製して保存できますか。

A

Staining Solutionは保存できません。用時調製してください。

Q

バックグラウンド蛍光が高い場合はどうすればいいですか。

A

マニュアルに記載している“抗体濃度の検討”に従い、適切な一次抗体・二次抗体の濃度を選択してください。また、浮遊細胞を染色する場合には、チューブローテーターなどを用いて懸濁状態を維持しながら染色することにより、バックグラウンドを下げることが可能です。

Q

蛍光が観察されない場合は、どうすればいいですか。

A

Staining Solutionを改めて調製し、37℃で30-60分染色を行ってください。それでも蛍光が観察されない場合、一次/二次抗体の濃度が適切でなかった可能性がありますので、マニュアルに記載している“抗体濃度の検討”に従い、適切な抗体濃度を選択してください。

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