Lbis™ Insulin-Rat (H type)

Shibayagi 大鼠胰岛素 ELISA试剂盒（H型）

　　胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞分泌，分子量约5800，等电点在5.4左右的一种蛋白质激素。

　　A6-A11、A7-B7、A20-B-19之间形成二硫键，在酸性溶液或者不含Zn离子的中性水溶液中形成二聚体，在含锌离子的中性溶液中，则形成含2个Zn离子的六聚体。

　　肝脏、肌肉、脂肪组织是主要的靶组织，分别有以下的作用。

肝脏：促进糖原、蛋白质、脂肪酸合成、促进糖类的摄取和利用、抑制糖异生。

肌肉：糖类、氨基酸、K细胞膜通透性增大、促进糖原、蛋白质的合成、抑制蛋白质分解。

脂肪组织：葡萄糖细胞膜通透性增大、促进脂肪酸的合成。

　　胰岛素是细胞内的合成单链胰岛素原通过二硫键结合一起形成的。在酶分解作用下被激活，C肽和胰岛素分离。

◆特点

●　有色缓冲液（蓝色）、容易确认分装后的孔

●　短时间测定（总的反应时间：3小时）

●　微量样品（标准操作：10 μL）可测

●　使用对环境无害的防腐剂

●　全部试剂均为液体，可直接使用

●　精密的测定精度和高再现性

●　操作简便，不需要特别的预处理

◆构成

◆样品信息

大鼠的血清•血浆•培养液

10 μL/well（标准操作）

※血浆采血建议使用肝素处理血液

◆测量范围

0.5～100 ng/mL（标准曲线范围）

◆Validation data

精度测试（检测内变动系数）

单位：ng/mL

再现性测试（检测内变动系数）

单位：ng/mL n=2

添加回收测试

样品G

单位：ng/mL n=2

样品H

单位：ng/mL n=2

稀释直线性测试

用稀释缓冲液分3次连续稀释2个血清样品的测量结果，直线回归方程的R²在0.9966~0.9995之间。

相关资料

说明书	ELISA试剂盒选择指南①②	ELISA试剂盒选择指③④

参考文献

灵长类胚胎干细胞/诱导多能干细胞培养基（无饲养层培养）

ReproFF2 

◆特点

●　一周只需处理细胞三次

●　只需常规培养基用量的一半

●　维持干细胞的未分化状态

●　维持干细的分化能力

注1）由于不含bFGF，请在培养人iPS/ES细胞时添加。

※保存温度：-20℃

※含有医药用以外的剧毒物0.0008％的2-巯基乙醇

◆优势

●　反复冻融的细胞依然保持存活。

●　具有长期培养核型稳定性。

●　转移培养基后细胞传代培养状态稳定。操作简便。

●　iPS细胞系菌落完整且免疫染色为阳性

◆产品概念：周末无需处理

◆无饲养层ReproFF2培养基对干细胞未分化状态的维持

维持人iPS细胞的未分化状态的培养

●　使用201B7株人iPS细胞

●　ReproFF2（无饲养层）培养：Passage 10.day 3

●　饲养层培养：Passage 48.day 3

1.菌落的形态和碱性磷酸酶活性的确认

　　图为使用ReproFF2无饲养层培养的细胞和有饲养层培养的细胞有着相似的菌落形态和碱性磷酸酶活性阳性。

　　把细胞移到ReproFF2培养基后，可能会出现细胞状态恶化的情况，但继续传代培养的话，状态就会稳定下来。

2.未分化标记物的免疫染色结果

　　用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞相似，都能表达Oct3/4,Nanog,SSEA-1,TRA-1-60。

3.未分化标记物的FACS分析

　　用ReproFF2培养基无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞显示了相似的阳性率。

4.长期培养时核型的稳定性

　　对使用ReproFF2连续培养到第30代的人iPS细胞的核型进行分析。结果显示， ReproFF2培养基适合稳定长期的无饲养层培养。

5.人ES细胞的未分化维持培养

　　使用KhES-1株人ES细胞

　　使用ReproFF2无饲养层培养的人ES细胞显示为碱性磷酸酶染色阳性、Oct3/ 4阳性、未分化性得到良好的维持。

◆使用ReproFF2培养基培养人iPS细胞时，菌落状态不好的情况

　　ReproFF2虽然是适合培养人ES/iPS细胞的培养基，但是，根据培养操作等状况的不同，有时会出现菌落状态恶化的情况。

　　如出现以下所述的情况是没有问题的，请遵从下文指示放心继续培养细胞。

细胞移到ReproFF2培养基后菌落的形态

　　把细胞移到ReproFF2培养基后，可能会出现细胞状态恶化的情况（见下左图）。

　　继续进行传代培养的话，状态将会稳定下来（见下右图），请继续第4代的传代培养。

细胞移到ReproFF2培养基的第三天                  传代培养到第四代的第六天

（状态差的菌落）                                               （恢复状态的菌落）

使用ReproFF2培养基传代后的情况（传代时菌落太小的情况）

　　传代培养后，下左图的细胞可能是传代培养时菌落过小的情况。

　　解决方法：减少移液的次数或者降低移液管的强度。

  传代培养时，菌落太小　                           菌落在200-300um中传代培养

                                                                          （菌落大小恢复正常）

◆ReproFF2培养基无饲养层培养的人iPS细胞的分化能力

　　使用ReproFF2培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞相似，都有向心肌细胞和神经细胞分化的能力。

人iPS细胞向心肌细胞的分化

　　把使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞向心肌细胞诱导分化，结果得到表达心肌标记物阳性的跳动心肌细胞团。

　　由此得出，使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞一样，拥有向心肌细胞分化的能力。

※α-MHC, Connexin-43, Cardiac Troponin T: 心肌标记物

人iPS细胞向神经前体细胞、神经细胞的分化

　　使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞向神经细胞诱导分化，形成玫瑰花结构（rosette），可以观察到βIII-tubulin的表达以及TH阳性的神经细胞。

　　由此得知，使用ReproFF2无饲养层培养的人iPS细胞和有饲养层培养的细胞一样，拥有向神经细胞分化的能力。

※βIII-tubulin：神经纤维的标记物

※rosette：神经前体细胞的标记物形态的特征
※TH (Tyrosine 3-Hydroxyrase)：多巴胺能神经元细胞的标记物

◆相关产品

查看相关产品宣传册，请点击：ReproFF2 ES/iPS细胞培养基

使用ReproFF2培养基的客户反馈

　　使用灵长类胚胎干细胞/诱导多能干细胞培养基（ReproFF2）进行无饲养层培养。以下是使用ReproFF2培养基进行无饲养层培养目的的案例。

　　采用无饲养层培养，可消除饲养层细胞的污染，解决了用有饲养层的培养细胞研究带来的困难。

●　用于提取DNA/RNA，不受饲养层细胞的污染

●　用于再生医学研究

●　通过饲养层细胞消除抗分化作用

●　用于促进病毒感染

◆使用ReproFF2的培养结果

　　以下表格是客户使用ReproFF2培养基进行人类ES或iPS细胞培养的结果汇总。ReproFF2培养基已经在许多实验室成功应用于各种人类ES/iPS细胞系的研究。

◆使用ReproFF2培养人类iPS细胞系

来自熊本大学分子胚胎学与遗传学研究所Nobuaki Shiraki博士（助理教授）的评价：

　　细胞系：201B7

　　“ReproFF2培养基非常有用，我们只需要隔天更换饲养层细胞和培养基的所需物质。反复冻融的细胞依然保持存活。使用ReproStem/小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）培养基与ReproFF2培养基在基质胶进行细胞培养而产生的内胚层分化状态相似。”

日本理化学研究所发育生物学中心：

　　细胞系：内部建立的几种iPS细胞系。

　　“在有饲养层的培养中难以保持未分化状态的一些细胞系可以使用ReproFF2培养基维持。将有饲养层的培养的细胞转移到ReproFF2培养基中进行无饲养层培养，培养状态恶化，但传代后其培养状态恢复。操作程序不仅简单而且有几个小技巧，例如确保菌落的大小是否适合于传代。”

东京大学医科学研究所干细胞与再生医学中心：

　　细胞系：KhES-3、TkDA3-4（采用血液透析滤过与逆转录病毒转导建立）

　　“将有饲养层的培养的细胞转移到ReproFF2培养基中进行无饲养层培养过程中，产生一些实验错误是必然的，但是最后的培养结果是成功的。”

庆应大学医学部生理学系：

　　细胞系：H9, 201B7等

　　“对于任何细胞系来说，将有饲养层的培养的细胞转移到ReproFF2培养基中进行无饲养层培养操作比较简便。”

国立卫生研究所：

　　细胞系：KhES-3, SeV-iPS（采用仙台病毒转导进行人脐静脉内皮细胞建立）

　　“将有饲养层的培养的KhES-3细胞转移到ReproFF2培养基中进行无饲养层培养无任何困难。在SeV-iPS细胞系，我们观察到菌落周围有明显的分化细胞增殖。然而，在iPS细胞系菌落则完整且免疫染色表现为Oct3/4阳性。”

神经退行性疾病相关抗体

在快速老龄化的社会，神经退行性疾病阿尔茨海默症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森病被公认为亟待解决的严重问题，Cosmo 提供独特的神经退行性疾病的抗体，帮助我们加深对疾病病理学和机制的了解。

4R-tau 抗体

该产品在第279 位天冬氨酸脱酰胺时仍能识别具有4 个微管结合重复片断（4R-tau）的Tau 蛋白，并对阿尔茨海默病患者脑内的4R-tau 蛋白亚型进行染色。

图1

A 免疫印迹分析6 个人tau 蛋白亚型（3R 和4R）

B 免疫染色分析石蜡包埋的阿尔茨海默病患者大脑皮层

（预先用蛋白酶K 和甲酸处理）

C9orf72 抗体

该产品能高灵敏度识别C9orf72 基因突变编码的二肽重复序列，并对额颞叶痴呆症和肌萎缩性侧索硬化症患者的p62 阳性包涵体进行染色。

     （预先用蛋白酶K 和甲酸处理）

图2   免疫染色分析小脑C9orf72 部分的poly-GA 蛋白

磷酸化TDF-43 抗体

在额颞叶痴呆症、肌萎缩性侧索硬化症、阿尔茨海默病、路易体痴呆和其他神经退行性疾病患者的大脑中磷酸化的TDP-43 积聚成病理包涵体。

Anti 4R-tau Antibody

Anti C9orf72 Antibodies

Anti Phosphorylated TDP-43 Antibodies

Anti α-Synuclein Antibodies

抗嗅标记蛋白，山羊

Anti Olfactory Marker Protein, Goat

2-NBDG & 2-NBDLG（2-NBDG对照底物）

◆原理

取自活细胞的葡萄糖，实时可视

与高纯度荧光标记葡萄糖的镜像异形体一起开始销售！！

        葡萄糖是微生物乃至人等大多数生物支撑生命活动的重要营养素。葡萄糖进入细胞内的活性成为检测细胞活动度的基本且重要指标。可视至今为止，葡萄糖进入细胞内活性检测采用反射性标记物，在活细胞状态进行实时检测比较困哪。

        2-NBDG¹作为可视的葡萄糖导入细胞试剂，是D-葡萄糖荧光衍生物。松冈等人以迅速检测食物中毒菌（细胞存活指标）为目的，开发了2-NBDG。此后，经山田、松冈、稻垣等人的共同研究，类似哺乳细胞的葡萄糖运载蛋白通过动力学运输葡萄糖，2-NBDG能有效向产生胰岛素的胰脏细胞中导入葡萄糖²。并且，不断有实验结果显示：2-NBDG能用于全身各种组织和器官^3,4,5，特别是将葡萄糖作为供给脑的唯一能源，对代谢相关提出新建议等，极其引人注目^6,7,8。

        此次，本公司推出高纯度2-NBDG产品。有报告指出，2-NBDLG作为2-NBDG的镜像异形体，对2-NBDG膜的吸附程度和非特异性膜通过的评价等有用，而且是2-NBDG最有效的对照比合物。2-NBDLG与2-NBDG同样，推出了高纯度的产品⁹。这些产品对葡萄糖研究来说具有极为重要的意义，有望作为标准品被广泛使用。另外，关于检测对照，请参考文献⁵。

1,Biochim. Biophys. Acta, 1289,5(1996)

2,J.Biol.chem.,275,22278(2000)

3,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,101,12899(2004)

4,Cell,123,1307(2005)

5,Nat. Protoc.,2,753(2007)

6,Proc.Natl.Acad.U.S.A.,101,14937(2004)

7,J.Neurosci.Res.,83,996(2006)

8,Glia,55,1222(2007)

9,Tetrahedron Lett.,49,6876(2008)

◆优点・特色

●2-NBDG：

2-[N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-D-glucose

分子式：(M.W. 342.26) C12H14N4O8

说明：监测活细胞内葡萄糖摄取

 结构：

●2-NBDLG

2-[N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-L-glucose

分子式：(M.W. 342.26) C12H14N4O8

说明：2-NBDG的对照底物

结构

【数据分析】

2-NBDLG.pdf

2-NBDG.pdf

【参考文献】

[1];T. Yamamoto, Y. Nishiuchi, T. Teshima, H. Matsuoka, and K. Yamada, Tetrahedron Lett., 49, 6876 (2008). (Chem. Synthesis)

[2];K. Yamada, M. Saito, H. Matsuoka, and N. Inagaki, Nature Protocols, 2, 753 (2007). (Protocols for Measurement)

[3];K. Yoshioka, H. Takahashi, T. Homma, M. Saito, K.-B. Oh, Y. Nemoto, and H. Matsuoka, Biochim. Biophys. Acta, 1289, 5 (1996).(Original)

[4];K. Yamada, M. Nakata, N. Horimoto, M. Saito, H. Matsuoka, and N. Inagaki, J. Biol. Chem., 275, 22278 (2000). (Measurement of Glucose Uptake in Living Mammalian Cells)

[5];K. Yamada, M. Saito, H. Matsuoka, and N. Inagaki, Nature Protocols, 2, 753 (2007). (Chem. Synthesis & Protocols for Measurement)

[6];J.V. Rocheleau, G.M. Walker, W.S. Head, O.P. McGuinness, and D.W. Piston, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 101, 12899 (2004).(Monitoring of Glucose Uptake in Islet)