KPL抗体代理，KPL抗体供应商，KPL抗体价格，KPL抗体哪里有卖的KPL抗体代理

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

KPL抗体代理，KPL抗体供应商，KPL抗体价格，KPL抗体哪里有卖的

产品型号： KPL抗体代理
简单描述

sigma代理，sigma公司，sigma供应商，sigma试剂哪里有卖的，sigma试剂价格sigma

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

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产品型号： sigma
简单描述

whatmanVF2滤血膜8124-66218124-6621 VF2

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

whatmanVF2滤血膜8124-6621

简要描述：

whatmanVF2滤血膜8124-6621

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-F 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cell Counting Kit-F

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cell Counting Kit-F

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

製品コード

CK06　 Cell Counting Kit-F

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
500 回用	￥16,500	343-07743

キット内容

500 回用	Calcein-AM DMSO solution	110 μl x1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書
取扱説明書 English
プロトコル生細胞数を測りたい（蛍光測定）
パンフレット細胞増殖測定細胞染色プロトコル

技術情報

細胞増殖／細胞毒性測定試薬ガイド細胞増殖および毒性試験法の特徴を一覧表で比較

参考文献

参考文献を表示する

1) S. Sakamoto, M. Yokoyama, X. Zhang, K. Prakash, K. Nagao, T. Hatanaka, R. H. Getzenberg and Y. Kakehi, "Increased Expression of CYR61, an Extracellular Matrix Signaling Protein, in Human Benign Prostatic Hyperplasia and Its Regulation by Lysophosphatidic Acid", Endocrinology, 2004, 145, 2929.

よくある質問

Q 51Cr-release法とCell Couting Kit-Fとの相関はありますか？: A

Cell Couting Kit-Fとしての相関は確認していませんが、
蛍光試薬として用いているCalcein-AMと51Cr-release法との相関の報告はございます。

N.G.Papadopoulos, et.al., J.Immunol.Methods, 177,101-111(1994)

Q Cell Counting KitとCell Counting Kit-8、Cell Counting Kit-Fの違いは何ですか？: A

Cell Counting KitとCell Counting Kit-8は、発色色素が違いますが基本的な原理は同じです。
細胞内酵素活性を指標とし、比色測定を行います。
また、Cell Counting Kit-8は、Cell Counting Kitと比較して、「感度が高い」、「試薬安定性が高い」と利点があります。

Cell Counting Kit-Fは蛍光での測定となります。細胞内エステラーゼ活性を指標に蛍光測定を行います。
比色法よりも少ない細胞数から測定出来ます。

各製品で使用される色素と形態は以下の通りです。
　【Cell Counting Kit】
　　色素：　WST-1
　　形態：　2ボトル

　【Cell Counting Kit-8】
　　色素：WST-8
　　形態：1ボトル

　【Cell Counting Kit-F】
　　色素：Calcein-AM
　　形態：1ボトル

Q 通常の透明な培養プレートでも測定出来ますか？: A

白か黒のプレートを使用してください。

透明な培養プレートでは測定時の照射した光が散乱してしまい、正確な測定が行えません。
正確な測定を行うためにも、白色及び黒色の蛍光用プレートの御使用をお薦めします。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光
危険・有害シンボルマーク

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whatman沃特曼硝酸纤维素膜直径25mm孔径0.45um7184-0027184-002

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whatman沃特曼硝酸纤维素膜直径25mm孔径0.45um7184-002

简要描述：

whatman沃特曼硝酸纤维素膜直径25mm孔径0.45um7184-002产品型号：7184-002 产品名称：Whatman硝酸纤维素滤膜7184-002孔径0.45um直径25mmWhatman硝酸纤维素滤膜7184-002孔径0.45um直径25mm用于大多数日常应用，是在严格控制室内清洁条件下生产的。Whatman膜可以保证非常窄的孔径分布非常低的杂质

whatman沃特曼硝酸纤维素膜直径25mm孔径0.45um7184-002

产品型号：7184-002
产品名称：Whatman硝酸纤维素滤膜7184-002孔径0.45um直径25mm
Whatman硝酸纤维素滤膜7184-002孔径0.45um直径25mm
用于大多数日常应用，是在严格控制室内清洁条件下生产的。Whatman膜可以保证非常窄的孔径分布非常低的杂志，这些都可以上***终用户受益。
更高的强度和韧性
大多数膜本质上都很脆再切不容易操作，带式很少在装载到过滤器或在使用过程中损坏。Whatman硝酸纤维素膜韧性得到明显增强，能承受住在不破坏膜完整性的条件下操作、装载和消毒时的撕裂。在同类产品中测试已经是韧的膜。
低可提取物水平
滤膜中可提取物水平和过滤或吸附技术的改进一样边的越来越重要。尤其是在药学、免疫学、生物学组织培养和衡量分析应用方面，高的提取物水平会起到负面影响。whatman硝酸纤维素膜的提取物水平一遍比其他同种型号都低。
精控的孔径分布
Whatman滤膜的一个重要恩正就是孔径精确度很高。膜的孔径率径的生产和控制系统严格控制。另外批间差小，可以保持实验结果的*性。
增加的温度稳定性
滤膜可以在不失完整的情况下载121摄氏度下进行正常消毒。硝酸纤维素膜有圆片、方片个卷等不同规格。
收缩量减少
过多的收缩量在消毒过程中会产生问题，也经常会在消毒后在滤器中发生破裂，也可能导致流速的降低和整个过滤量的减少。Whatman滤膜在消毒过程中收缩量很低。
特点和有点
孔径分布精确能改进表面捕获和分析
提取物水平低，保证样品的完整性
应用
样品分离
微生物研究
水溶液过滤
过滤膜类型
白色光滑滤膜
这是大多数实验室应用的标准滤膜，踊跃1.0um-5.0um大小的颗粒和细胞。过滤后的残留物大多数保留在膜的表面，可以进行沉淀物物理性回收和显微镜观察。

whatman沃特曼硝酸纤维素膜直径25mm孔径0.45um7184-002

计数参数–硝酸纤维膜
		硝酸纤维
厚度		125um
爆裂强度		>2 psi
重量		3.6-5.5 mg/cm2
zui高操作温度		80℃
孔率		66-84%
蒸汽高压灭菌		yes
亲水性		yes
典型应用–硝酸纤维膜
应用领域	孔径（um）	应用领域	孔径（um）
普通		沉淀物分析	0.45
微过滤	0.1	悬浮颗粒	5
超净	0.1	空气污染监测
灭菌	0.2	Asbestons Monitoring(NIOSH)	0.8
去除大多数微生物	0.45	食品饮料质控
分析性沉淀物	0.65	大肠菌	0.45（网格）
纯化过滤	1	总细菌计数	0.2
去除颗粒物	5	组织滤膜
水中微生物分析		去除支原体	0.1
细菌计数	0.45（网格）	灭菌过滤	0.2

订货信息–硝酸纤维膜

订货信息-硝酸纤维膜
尺寸（mm）	孔径（um）	货号	型号1	无菌2	蛋白吸附力	数量/包
WCN
25	0.2	7182-002	平滑	否	强	100
25	0.1	7181-002	平滑	否	强	100
25	0.45	7184-002	平滑	否	强	100
25	0.65	7186-002	平滑	否	强	100
25	0.8	7188-002	平滑	否	强	100
25	1.0	7190-002	平滑	否	强	100
25	3.0	7193-002	平滑	否	强	100
25	5.0	7195-002	平滑	否	强	100

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞毒性

細胞毒性測定キット

優れたコストパフォーマンス
冷蔵で6ヶ月保存可能なWorking Solution
1つのキットで、ホモジニアス測定、ノンホモジニアス測定の選択が可能

製品コード

CK12　 Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥11,200	347-91751
500 tests	￥29,700	343-91753
2000 tests	￥44,400	341-91754

<お知らせ>
　取扱説明書を改訂しました。(2022/01/18）

キット内容

100 tests	・Dye Mixture ・Assay Buffer ・lysis Buffer ・Stop Solution	×1 11 ml×1 1.1 ml×1 5.5 ml×1
500 tests	・Dye Mixture ・Assay Buffer ・lysis Buffer ・Stop Solution	×1 55 ml×1 5.5 ml×1 27.5 ml×1
2000 tests	・Dye Mixture ・Assay Buffer ・lysis Buffer ・Stop Solution	×4 55 ml×4 5.5 ml×4 27.5 ml×4

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
細胞傷害性試験（ADCC）日本語：Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST を用いた抗体依存性細胞障害測定用
細胞傷害性試験（ADCC）英語 English：Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity Supporting manual

技術情報

測定原理

本キットは、生細胞と反応せず、かつ、細胞にダメージを与えないため、生細胞と死細胞が混在する細胞培養液中に直接試薬を加えても細胞傷害を測定することが可能である（ホモジニアスアッセイ）。なお、一般的に用いられる細胞培養液を取り出してLDH活性を測定する方法も可能である（ノンホモジニアスアッセイ）。また、安定性の高い試薬を用いているため、調製した溶液は長期間保存でき、用時調製する必要がない。そのため、多検体アッセイから、少ない検体数の測定にも対応することができる。

実験例　生細胞測定と死細胞測定の併用した細胞毒性試験

HeLa 細胞にMitomycin C を添加した際の細胞毒性をCell Counting Kit-8とCytotoxicity LDH Assay Kit-WST（本製品）を用いて測定しました。Cell Counting Kit-8による細胞内代謝活性を指標とした方法とCytotoxicity LDH Assay Kit-WSTを用いた細胞膜損傷による遊離LDHを指標とした方法では各々の指標が異なるため、細胞毒性が現れる薬剤濃度に違いがあることが確認されました。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

試験物質	Mitomycin C
細胞	HeLa
使用培地	MEM, 10% FBS
インキュベート	37℃, 5% CO₂, 48時間
検出波長	Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (490 nm)

生細胞・死細胞の測定をお得なセットで！　Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit
生細胞測定:Cell Counting Kit-8と、死細胞測定:Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST(各500 tests)のお得なセットです。

技術や使用製品に関する補足

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット
Cell Counting Kit-8
生細胞・死細胞測定キットセット
Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

抗がん剤ドキソルビシン（DOX）による細胞毒性メカニズム

近年、細胞毒性評価の際に併せて抗酸化能に関与する指標 (NADP⁺/NADPHやGSSG/GSH等)を測定するケースが増えています。
本項目では抗酸化能の低下が細胞毒性発現に関与するDOXの例をご紹介します。

細胞毒性測定キット Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST 同仁化学研究所

技術や使用製品に関する補足

細胞内代謝測定キット

NADP/NADPH Assay Kit-WST
グルタチオン測定キット

GSSG/GSH Quantification Kit
代謝と疾患の関連性を示した報告例

これからはじめる細胞内代謝

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1)	細胞（C3H10T1/2）	S. F. Jin, H. L. Ma, Z. L. Liu, S. T. Fu, C. P Zhang, Y. He, "XL413, a cell division cycle 7 kinase inhibitor enhanced the anti-fibrotic effect of pirfenidone on TGF-β1-stimulated C3H10T1/2 cells via Smad2/4.", Exp Cell Res., 2015, 339, (2), 289.
2)	細胞（HepG2）	S. Watanabe, C. S. Moniaga, S. Nielsen, M. Hara-Chikuma, "Aquaporin-9 facilitates membrane transport of hydrogen peroxide in mammalian cells.", Biochem Biophys Res Commun ., 2016, 471, 191.
3)	細胞（HEECs, Human Esophageal Epithelial Cells）	L. Wu, T. Oshima, J. Shan, H. Sei, T. Tomita, Y. Ohda, H. Fukui, J. Watari, H. Miwa , "PAR-2 activation enhances weak acid-induced ATP release through TRPV1 and ASIC sensitization in human esophageal epithelial cells.", Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol ., 2015, 309, G695.
4)	細胞（Human L02 Hepatocyte)	D. Zhou, B-H Li, J. Wang, Y-N Ding, Y. Dong, Y-W Chen and J-G Fan, "Prolyl Oligopeptidase Inhibition Attenuates Steatosis in the L02 Human Liver Cell Line.", PloS ONE., 2016, 11, (10), e0165224.
5)	細胞（Human primary Hepatocyte)	T. Fukami, A. Iida, K. Konishi, M. Nakajima , "Human arylacetamide deacetylase hydrolyzes ketoconazole to trigger hepatocellular toxicity", Biochem. Pharmacol., 2016, 116, 153.
6)	細胞（Mouse embryonic fibroblast:MEF）	Y. Takanezawa, R. Nakamura, Y. Sone, S. Uraguchi and M. Kiyono, "Atg5-dependent autophagy plays a protective role against methylmercury-induced cytotoxicity", Toxicol. Lett., 2016, 262, 135.
7)	細胞（neural stem/progenitor cells）	M. Tanaka, M. Yoneyama, T. Shiba, T. Yamaguchi, K. Ogita, "Protease-activated receptor-1 negatively regulates proliferation of neural stem/progenitor cells derived from the hippocampal dentate gyrus of the adult mouse ", J Pharmacol Sci., 2016, 131, (3), 162
8)	細胞（Primary cultured cortical neurons）	S. Wakatsuki, A. Furuno, M. Ohshima, and T. Araki, "Oxidative stress-dependent phosphorylation activates ZNRF1 to induce neuronal/axonal degeneration", J Cell Biol., 2015, 211, (4), 881.
9)	細胞（DLD1 and AGS cells）	A. Ishijima, K. Minamihata, S. Yamaguchi, S. Yamahira, R. Ichikawa, E. Kobayashi, M. Iijima, Y. Shibasaki, T. Azuma, T. Nagamune & I. Sakuma, "Selective intracellular vaporisation of antibody-conjugated phase-change nano-droplets in vitro", Scientific Reports ., 2017, DOI:10.1038/srep44077.
10)	細胞（U87, HUVEC cell)	N. Li, W. Zhang, M. Khan, L. Lin, JM. Lin, "MoS2-LA-PEI nanocomposite carrier for real-time imaging of ATP metabolism in glioma stem cells co-cultured with endothelial cells on a microfluidic system", Biosens Bioelectron., 2017, 99, (2018), 142.
11)	組織（マウス肝臓）	Y. Sakurai, W. Mizumura, M. Murata, T. Hada, S. Yamamoto, K. Ito, K. Iwasaki, T. Katoh, Y. Goto, A. Takagi, M. Kohara, H. Suga, and H. Harashima, "Efficient siRNA delivery by lipid nanoparticles modified with a non-standard macrocyclic peptide for EpCAM-targeting", Mol. Pharm.., 2017,10.1021/acs.molpharmaceut.7b00362.
12)	細胞（Human pleural mesothelial cell)	K. Hattori, K. Nakadate, A. Morii, T. Noguchi, Y. Ogasawara, K. Ishii., "Exposure to nano-size titanium dioxide causes oxidative damages in human mesothelial cells: The crystal form rather than size of particle contributes to cytotoxicity.", Biochem. Biophys. Res. Commun.., 2017,10.1016/j.bbrc.2017.08.054.
13)	組織（murine distal colon)	H. Sakai, S. Tabata, M. Kimura, S. Yabe, Y. Isa, Y. Kai, F. Sato, T. Yumoto, K. Miyano, M. Narita and Y. Uezono, "Active Ingredients of Hange-shashin-to, Baicalelin and 6-Gingerol,　Inhibit 5-Fluorouracil-Induced Upregulation of CXCL1 in the Colon to　Attenuate Diarrhea Development", Biol. Pharm.Bull.., 2017, 40, (12), 2134.
14)	細胞（SH-SY5Y cell)	R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.
15)	細胞 (MC3T3-E1[マウス頭蓋冠由来])	A. Oyane, M. Nakamura, I. Sakamaki, Y. Shimizu, S. Miyata and H. Miyaji, "Laser-assisted wet coating of calcium phosphate for surface-functionalization of PEEK", PLoS ONE ., 2018, doi:10.1371/journal.pone.0206524.
16)	細胞 CRC細胞 [大腸がん]、HT29細胞[ヒト結腸腺癌]	T. Fuji, Y. Umeda, A. Nyuya, F. Taniguchi, T. Kawai, K. Yasui, T. Toshima, K. Yoshida, T. Fujiwara, A. Goel and T.Nagasaka, "Detection of Circulating MicroRNAs with Ago2 Complexes to Monitor the Tumor Dynamics of Colorectal Cancer Patients during Chemotherapy.", Int. J. Cancer., 2018, doi: 10.1002/ijc.31960 .
17)	細胞 (SFXN2ノックアウトHEK293)	E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, "Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 ", J Physiol Sci., 2018, doi:10.1007/s12576-018-0652-2.
18)	細胞 (Human umbilical vein cell line [EA.Hy926])	Y. Xu, C. Huang, M. Liu, N. Chen, W. Chen, C. Yang, Y. Zhao, X. Li, J. Duan, S. Liu and S. Yang, "Survivin regulated by autophagy mediates hyperglycemia-induced vascular endothelial cell dysfunction", Exp. Cell Res.., 2018, doi: 10.1016/j.yexcr.2018.01.037.
19)	細胞 (MIAPaCa-2[ヒト膵臓がん])	M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, "Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis", Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
20)	細胞 (Fibro adipogenic progenitor cells:FAPs)	Y. Saito, T. Chikenji, T. Matsumura, M. Nakano and M. Fujimiya, "Exercise enhances skeletal muscle regeneration by promoting senescence in fibro-adipogenic progenitors", Nat. Commun., 2020, doi:10.1038/s41467-020-14734-x.
21)	細胞 (HEK-293EBNA)	M. Suzuki, A. Urabe, S. Sasaki, R. Tsugawa, S. Nishio, H. Mukaiyama, Y. Murata, H. Masuda, M. Aung, A. Mera, M. Takeuchi, K. Fukushima, M. Kanaki, K. Kobayashi, Y. Chiba, B. Shrestha, H. Nakanishi, T. Watanabe, A. Nakayama, H. Fujino, T. Kobayashi, K. Tanino, N. Nishizawa and K. Namba., "Development of a mugineic acid family phytosiderophore analog as an iron fertilizer", Nat. Commun., 2021, doi:10.1038/s41467-021-21837-6.

よくある質問

Q 490 nm以外の吸収フィルターで測定できますか？: A

弊社では490 nmを推奨していますが、490±2-3 nm程度の違いは問題ありません。490 nm以外では、450 nmのフィルターは弊社でも使用実績があり、使用可能です。但し、吸光度値は490 nmと比較し高くなります。

Q 毒性試験でCell Counting Kit-8との相関性はありますか？: A

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WSTとCell Counting Kit-8では、測定原理が異なるために必ずしも相関性は得られません。そのため、細胞毒性試験の場合には、遊離LDH測定法とCell Counting Kit-8など数種の指標で測定いただくことをお勧めします。
・Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST：細胞膜の損傷により培地中に漏れ出したLDH活性を測定（細胞膜損傷が指標）
・Cell Counting Kit-8：細胞内の代謝活性（デヒドロゲナーゼ）を測定（代謝活性が指標）

Q LD50値が過去の測定値と大きく異なります。なにか対処法はありますか？: A

・細胞の状態によって、被験物質による影響の受け方が変わりLD50値に影響します。ご使用になる細胞は、継代条件や継代回数をコントロールし、可能な限り同じ状態の細胞をお使い下さい。
・被験物質の希釈系列を調製する際の希釈倍率を狭くすることで、より信頼性の高いLD50値を導き出すことができます。
下記の要領で、使用する被験物質濃度を設定されることをおすすめします。

検討の流れ

① 被検物質が利用できる最高濃度を基準に10倍希釈を繰り返し、5-6桁程度の広い検体濃度域で毒性試験を実施する。[図①]
（①の操作で、毒性が現れる濃度域の予測最高濃度の目安をつける）
② ①の結果から、その被検物質の濃度が現れる濃度の予測最高濃度（100%致死を生じる最低濃度）を基準に2倍希釈を繰り返し、2-3桁をカバーする濃度域で毒性試験をする。[図②]
③ ②の手順を繰り返し、最終的に細胞毒性が20-80%の間に少なくとも検体濃度が3点以上プロットできる濃度域を設定する。[図③]

Q LDHのアイソザイムの測り分けはできますか？: A

本製品は、トータルのLDH活性を指標とした細胞毒性測定用となりますので、LDH1, LDH2, LDH3等の活性の測り分けはできません。

Q サンプルの保存は可能ですか?: A

冷蔵保存では約1週間保存可能です¹⁾。
常温²⁾や冷凍での保存は、LDHが失活するためお薦め致しません。

＜参考文献＞
(1) M. Allen, P. Millett, E. Dawes, N. Rushton., "Lactate dehydrogenase activity as a rapid and sensitive test for the quantification of cell numbers in vitro.", Clin Mater. 1994; 16, (4), 189.
(2) A. Wagner, A. Marc, JM. Engasser, A. Einsele, "The use of lactate dehydrogenase (LDH) release kinetics for the evaluation of death and growth of mammalian cells in perfusion reactors.", Biotechnol Bioeng. 1992; 39, (3), :320..

※安定性は評価条件等により変化する可能性があります。ご理解の上、上記論文をご参考ください。

Q Cytotoxicity LDH Assay Kit-WSTにLDH標準品は入っていますか？: A

細胞毒性試験用のため、LDH標準品は同梱しておりません。LDH活性も測定する場合は、別途、お買い求めください。

Q Stop solution添加後すぐに測定する必要はありますか？: A

Stop solution添加後、3時間以内に測定してください。その場合は、プレートを遮光してください。

Q ウェル間でバラツキが多いのですが何が原因でしょうか？: A

以下の要因が考えられますので、ご確認ください。

①培地の表面に気泡が発生している。

以下の方法で気泡を除去してください。
・シリンジや注射針の先端で、気泡を除去してください。
・（96wellプレート用遠心機をお持ちの場合）1,000 x g, 1分間遠心してください。

②インキュベーション中に培地の水分が蒸発して試薬濃度が変化している。

マイクロプレートの一番外側のウェルは、インキュベーション中の水分蒸発が起こりやすいため、長時間インキュベーションする場合は、一番外側のウェルは測定には利用せず、培地のみを入れて使用してください。

③試薬を添加する際に、最初と最後に添加するウェルの時間差が大きい。

全てのウェルに添加するWorking Solution、Stop Solutionについては、マルチチャンネルピペットのご使用をお勧めします。

④添加した試薬がよく混合されていない。

Lysis Buffer, Working Solution およびStop Solutionを添加した際、プレートミキサーで混合するか、または、プレートの側面を指で軽く叩いて添加した試薬と培地を混和してください。
特に、Lysis Bufferは添加量が少なく、高コントロールの値に影響を与えるため、ご注意ください。
なお、プレートを叩く際は、ウェル中の培地が漏れ出さない程度にしてください。

⑤使用する（マルチチャンネル）ピペットの秤量が正確ではない。

ピペットの秤量が正確か確認してください。

Q バックグラウンドが高くなりました。原因や対策を教えてください。: A

以下の原因が考えられます。
①培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。
②被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。
（なお、一般的なDMEM、RPMI、F-12等の培地には、通常、還元物質は含まれていません）

Q 細胞数最適化時の高コントロールと低コントロールの吸光度の差が小さい: A

①バックグラウンドが高いために低コントロールの吸光度が高くなっている可能性があります。以下を確認してください。

・培地中の血清に含まれるLDHはバックグラウンドを上げます。無血清培地または血清量を5%以下となるように調製した培地をご使用下さい。
・被検物質や培地中に強い還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色してバックグラウンドを上げます。試薬ブランクを測定して確認してください。

②高コントロールに生細胞が残っている可能性があります。

Lysis Bufferがウェル内で均一になり細胞が全て死細胞となるように、Lysis Buffer添加後にプレートを軽く振りLysis Bufferが十分に混ざるようにしてください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
危険・有害シンボルマーク

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进口抗体供应商，进口抗体代理，进口抗体哪里有卖的，进口抗体价格进口抗体

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

进口抗体供应商，进口抗体代理，进口抗体哪里有卖的，进口抗体价格

产品型号：进口抗体
简单描述

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞毒性

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

生細胞測定 Cell Counting Kit-8と、死細胞測定 Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST (各500 tests) のセット

製品コード

CK17　 Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
500 tests	￥33,900	346-09271

キット内容

500 tests	Cell Counting Kit-8 [500 回用] ・WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液 Cytotoxicity lDH Assay Kit-WST [500 tests] ・Dye Mixture　　　　　・Assay Buffer ・lysis Buffer ・Stop Solution	5ml x1 x1 55 ml x1 5.5 ml x1 27.5 ml x1

500 tests

Cell Counting Kit-8
[500 回用]
・WST-8, 1-Methoxy PMSの混合溶液

Cytotoxicity lDH Assay Kit-WST
[500 tests]
・Dye Mixture　　　　　
・Assay Buffer
・lysis Buffer
・Stop Solution

5ml x1

x1
55 ml x1
5.5 ml x1
27.5 ml x1

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
プロトコル生細胞数を測りたい(吸光測定)

技術情報

2つの指標で評価する理由

細胞傷害性を確認する際、生細胞のみ又は死細胞のみを指標とした評価では、データの信頼性が十分でない場合もあることから、測定原理の異なる複数の指標で評価することで実験の裏付けを行うケースが増えています。

1つの指標（生細胞）だけでの評価では…
生細胞：代謝活性（CCK-8、MTT、MTS、XTT等）

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

2つの指標（生細胞と死細胞）で評価すると…
生細胞：代謝活性（CCK-8、MTT、MTS、XTT等）
死細胞：細胞膜損傷（LDH Assay Kit）
細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) R. Watanabe, T. Kurose, Y. Morishige and K. Fujimori, "Protective Effects of Fisetin Against 6-OHDA-Induced Apoptosis by Activation of PI3K-Akt Signaling in Human Neuroblastoma SH-SY5Y Cells.", Neurochem. Res.., 2018, 43, (2), 488-499.

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
危険・有害シンボルマーク

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酸素消費速度プレートアッセイキット Extracellular OCR Plate Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Extracellular OCR Plate Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Extracellular OCR Plate Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
ミトコンドリア関連
細胞内代謝

酸素消費速度プレートアッセイキット

細胞のOCRを汎用の蛍光プレートリーダーで測定できる
専用の装置や培地、プレートは不要
必要な試薬とOCR自動算出シートを準備

製品コード

E297　 Extracellular OCR Plate Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥48,000	347-10051

【注意点】
・本測定には温調機能付きのプレートリーダーが必要です。

キット内容

100 tests	・Oxygen Probe ・Mineral Oil	110 ×l×1 10 ml×1

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
OCR計算シート Ver.2

ミネラルオイルの入れ方

技術情報

キットの原理

Extracellular OCR Plate Assay Kitには、培地中の酸素濃度が低下するとりん光強度が高くなる特性を持つOxygen Probeと、空気中の酸素流入を遮断するためのMineral Oilを同梱しています。細胞外の酸素濃度に応じたりん光強度を蛍光マイクロプレートリーダーで測定後、Stern-Volmerの関係式より細胞のOCRを算出(自動計算シート)します。
本製品は、群馬大学吉原利忠先生のご指導の下、製品化しました。

※ウェル内の温度を一定にするために必ずプレートリーダー内で行ってください。
　よくある質問なぜプレートリーダー内でマイクロプレートを恒温にするのですか？ をご参照ください。

実験例：細胞種における代謝経路依存性の比較

多くのがん細胞は解糖系に依存したエネルギー代謝により ATP を産生しています。一方で、解糖系が抑制されたがん細胞はミトコンドリア機能を亢進させることでエネルギー代謝を酸化的リン酸化にシフトさせ生存していることが近年報告されており、細胞種によって代謝経路の依存性が異なります。

２種類のがん細胞(HeLa細胞とHepG2細胞)における酸化的リン酸化と解糖系へのエネルギー産生の依存度合をLactate生成量とATP量およびOCR値より比較しました。

＜Lactate生成量とATP量による評価＞
Oligomycin刺激により酸化的リン酸化でのATP合成を阻害、また2-Deoxy-D-glucose(2-DG)により解糖系でのATP合成を阻害した際のATP量とLactate生成量の変化を確認したところ、
HeLa細胞は解糖系に依存し、HepG2細胞は酸化的リン酸化に依存してATP合成している結果が得られました。
＊結果の補足説明は右側部分”技術や使用製品に関する補足”をご参照ください。
酸素消費速度プレートアッセイキット Extracellular OCR Plate Assay Kit 同仁化学研究所

使用製品：Glycolysis/OXPHOS Assay Kit (製品コード:G270)

＜OCR値による評価＞
同じ細胞数にてミトコンドリア脱共役剤であるFCCP刺激により、細胞の酸素消費を促進した際のOCRを測定しました。
結果、HepG2細胞はHeLa細胞よりもOCR値が高く酸化的リン酸化への依存度が大きいことが示唆され、ATP量やLactate量を指標に評価した場合と相関する結果が得られました。
酸素消費速度プレートアッセイキット Extracellular OCR Plate Assay Kit 同仁化学研究所
〈実験条件〉
　　細胞　　：HeLa, HepG2
　　細胞数　：5×10⁴ cells/well
　　薬剤　　：FCCP
　　薬剤濃度：2 μmol/l

使用製品：Extracellular OCR Plate Assay Kit (製品コード：E297)

技術や使用製品に関する補足

＜Lactate生成量とATP量による評価＞
HeLa細胞は酸化的リン酸化を阻害した際、ATP量は変わらず(①)、Lactate生成量が増加する(②)ことから、酸化的リン酸化が阻害されても解糖系をさらに活性化することができ、逆に解糖系を阻害するとATP量が大きく減少することから(③)、エネルギー産生を解糖系に依存していることが示唆されました。一方、HepG2細胞は、酸化的リン酸化を阻害した際、Lactate生成量が増加していることから(④)、解糖系の亢進によりエネルギー産生を補おうとしているがATP量は減少している(⑤)、すなわち解糖系を亢進させてもATP産生を補えていないこと、さらに解糖系を阻害した場合よりもATP量が減少する(⑥)ことから、エネルギー産生を解糖系よりも酸化的リン酸化に依存しているということが示唆されました。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	引用（リンク）
1	細胞 (HepG2)	K. Saito, et al, "Obesity-induced metabolic imbalance allosterically modulates CtBP2 to inhibit PPAR-alpha transcriptional activity", J. Biol. Chem., 2023, doi:10.1016/j.jbc.2023.104890.
2	細胞 (NIH3T3-L1)	S. Oki, S. Kageyama, Y. Morioka and T. Namba, "Malonate induces the browning of white adipose tissue in high-fat diet induced obesity model", Biochem Biophys Res Commun., 2023, doi:10.1016/j.bbrc.2023.08.054.
3	細胞 (Primary Hepatocyte)	S. Tsuno, K. Harada, M. Horikoshi, M. Mita, T. Kitaguchi, M. Y. Hirai, M. Matsumoto and T. Tsubo , 'Mitochondrial ATP concentration decreases immediately after glucose administration to glucose-deprived hepatocytes', FEBS Open Bio, 2023, doi:10.1002/2211-5463.13744.
4	精子	P. S. Sushadi, M. Kuwabara, E. E. W. Maung, M. S. M. Mohtar, K. Sakamoto, V. Selvaraj and A. Asano, "Arresting calcium-regulated sperm metabolic dynamics enables prolonged fertility in poultry liquid semen storage", Sci. Rep., 2023, doi:10.1038/s41598-023-48550-2.

よくある質問

Q １キットあたりの測定可能なサンプル数の目安を教えてください。: A

1つの細胞種で同一細胞数にて実験する場合24サンプル測定可能です。

*２種類以上の細胞種や複数の細胞数を実験に用いる場合は、別途BlankとControlを準備する必要があり測定可能なサンプル数が変わります。詳細については、取扱説明書に実験系に応じたプレートレイアウトの例を記載しておりますのでご参照ください。

Q 浮遊細胞の実験例を教えてください。: A

Jurkat細胞の実験例をご案内します。
＜操作＞
(1)Blank 3としてJurkat細胞(3.0×10⁶ cells/ml)をRPMI培地に懸濁し、ControlやSampleとしてJurkat細胞(3.0×10⁶ cells/ml)をworking solutionに懸濁したものを用意し、96穴黒色クリアボトムマイクロプレートに100 µl (300,000 cells/well)ずつ播種した。
(2)Blank 1にはRPMI培地を100 µl、Blank 2にはworking solutionを100 µl添加した。
(3)予め37℃に設定しておいたプレートリーダーの中にマイクロプレートを入れ、30分間インキュベーションした。
(4)Blank 1, Blank 2, Blank 3, ControlにRPMI培地を10 µlずつ添加した。
(5)Sampleには、RPMI培地で希釈したSample solution(AntimycinもしくはFCCP溶液)を10 µlずつ添加した。
(6)Sample solution添加後は、直ちにMineral Oilを1滴ずつ各ウェルに滴下した。
(7)37℃に設定しておいたプレートリーダーの中にマイクロプレートを入れ、5分間インキュベーションした。
(8)蛍光プレートリーダーを用いて強度をタイムコースで10分毎に200分間測定した(Ex: 500 nm, Em: 650 nm, Bottomリーディング)。
(9)ダウンロードした専用の計算シートに得られた強度の値を入力し、OCR値を算出した。

各ウェルに必要なサンプル及び試薬の添加量

＜結果＞

Q 本キットのOCR算出方法を教えてください。: A

専用の計算シートをダウンロードし、以下の手順でOCRを算出します。

＜OCR算出手順の概要＞

(1)OCR測定で得られた強度の値を計算シートに入力すると、Stern-Volmerの式より酸素量(nmol)が自動的に算出される。
(2)時間(min)と酸素量(nmol)のグラフより、測定した全ての条件において直線性の得られる範囲を確認する。
(3)2)で確認した時間(min)と酸素量(nmol)の範囲における傾きを算出する。
(4)3)で算出した傾きより、OCR(pmol/min)を算出する。
詳細は取扱説明書の"解析"をご参照ください。

Q なぜプレートリーダー内でマイクロプレートを恒温にするのですか？: A

試薬の添加およびMineral Oil添加後のマイクロプレートのインキュベーションを、インキュベーター(ヒートブロックや恒温槽など)で行うとプレートリーダー内との温度差が生じ正確なOCR変化が測定できません。再現性の低下に繋がります。そのため必ずプレートリーダー内で行って下さい。

＜操作概要＞

取扱説明書の浮遊細胞:操作3),7)、付着細胞:操作5),9)にあたります。

＜インキュベートの環境による結果への影響＞

Q Mineral Oilに細胞毒性はありませんか。: A

Mineral oilを添加した細胞においてCell Counting Kit-8による細胞毒性測定を行ったところ、毒性は確認されませんでした。

(参考)

Q OCR測定後の細胞数を計測する方法を教えてください。: A

核染色剤(Hoechst 33342)を用い、ウェルあたりの細胞数を算出した実験例をお示しします。

＜操作＞
(1)OCR測定用ウェルに細胞を播種した。
(2)段階希釈した細胞を検量線作成用ウェルに播種した。
(3)取扱説明書に従いOCRを測定した。
(4)検量線作成用ウェルに培地を10 µl/wellずつ添加した(液量をOCR測定用ウェルと110 µl/wellに揃えるため)。
(5)培地で希釈したHoechst 33342溶液(10 µg/ml)を全てのウェルに100 µl/wellずつ添加した。
※OCR測定用ウェルはオイル上から添加した。
(6)37℃、30分間インキュベートした。
(7)蛍光プレートリーダーにて測定した(Ex: 350 nm , Em: 461 nm )。
(8)検量線(X軸：細胞数、Y軸：蛍光強度)を作成し、OCR測定用ウェルの細胞数を算出した。

Q Working solutionは保存できますか。: A

working solutionは保存できません。用時調製してください。

Q Oxygen ProbeやMineral Oilは凍結融解を繰り返しても測定に影響しませんか。: A

Oxygen ProbeおよびMineral Oilは凍結融解を繰り返した場合も測定に影響がないことを確認しています。

Q Topリーディングでも測定できますか？: A

Topリーディングでの測定は、オイルの影響を受けるためお奨めしません。Bottomリーディングでの測定を推奨しております。

Q 測定時にシェイキングを行う必要はありますか？: A

シェイキングする必要はありません。お客様の事例となりますが、シェイキングすることで値がバラつき易くなる傾向がみられております。

Q 血清不含培地でも測定できますか？: A

測定自体は可能です。ただし、血清含有よりも蛍光値としては低く出る傾向が得られています。結果を比較する場合は毎回同じ培地条件で測定してください。

Q 37℃以外の温度でも測定できますか？: A

本キットは37℃、110 μl液量中の酸素濃度から酸素消費速度を求める仕様に最適化しております。37℃以外の温度では測定自体は可能ですがキットとしてのOCRは算出出来ません。

Q 【トラブル】コントロールと薬剤処理サンプルのOCR値に差がありません。どのような要因が考えられますか？: A

以下の3点をご確認ください。

(1) 測定時の温度がバラつくと正確なOCR変化が測定できません。
　以下の操作をご確認ください。
　・Mineral Oilや培地、培地で希釈したSample solutionは使用前に37℃付近になるように予め加温してください。
　・試薬の添加後及びMineral oil 添加後のインキュベーションは、必ず37℃の蛍光プレートリーダー内で行ってください。
　　よくある質問「なぜプレートリーダー内でマクロプレートを恒温にするのですか」をご参照ください。

(2)細胞数が少ない可能性があります。
　細胞数を増やしてご検討ください。

　【細胞数と薬剤処理有無でのOCR変化（イメージ図)】
　

(3)細胞の影響
　1),2)を確認してもなおOCR値に差が得られない(小さい)場合、以下のような可能性がございます。

　・細胞自体の呼吸量が少ない。正常細胞はがん細胞と比較しOCRが低くなる傾向があります。
　　・細胞のエネルギー産生を解糖系へ大きく依存している。

　　（参考)
２種類のがん細胞(HeLa細胞とHepG2細胞)のOCRを比較した際、エネルギー産生を解糖系へ大きく依存しているHeLa細胞はHepG2細胞と比較しOCR値が低い結果が得られました。

　　　※細胞種における代謝経路依存性の確認方法については、こちらをご覧ください。

Q 【トラブル】「蛍光強度が経時的に低下・酸素濃度が上昇・OCR値がマイナス」を示します。どのような要因が考えられますか？: A

以下の５点をご確認ください。

(1) Bottom リーディングで測定していますか？
Top リーディングでの測定は、オイルの影響を受け正しい値が得られないことがあります。Bottomリーディングでの測定を推奨しています。

(2) 測定Well内の温度は一定ですか？念のため実測値をご確認ください。
OCR測定は温度に非常に敏感です。Well内の温度がばらつくと初期の測定値がばらつきやすくなりOCR値に影響します。対処法は、よくある質問 なぜプレートリーダー内でマイクロプレートを恒温にするのですか をご参照ください。

(3) シェイキングを行っていませんか？
お客様の実績より、シェイキングすることで結果がばらつきやすくなる傾向が得られております。シェイキング無しでもお試しください。

(4) 測定毎の照射時間、照射回数の設定値を通常(デフォルトの設定値)よりも高い値に設定していませんか？
１回の照射時間や照射回数が高すぎると、強い励起光を経時的に当て続けることになり、プローブが劣化する可能性があります。設定値を下げてご検討ください。
※プレートリーダーの機種により設定項目が異なります。設定についてはプレートリーダーのメーカー様へお問い合わせください。

(5) 酸素消費量がキットでは検出できない非常に小さい量の可能性があります。
細胞数を増やしてご検討ください。また、よくある質問 コントロールと薬剤処理サンプルのOCR値に差がありません。どのような要因が考えられますか？ も併せてご参照ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍,遮光

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老化細胞検出キット Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化

老化細胞検出キット

製品コード

SG03　 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
10 assays	￥44,200	347-09181

キット内容

10 assays	[10 assays:　35 mm dish] ・SPiDER-βGal ・Bafilomycin A1	x 1 x 1

試験成績書

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
プロトコル老化細胞を検出したい

技術情報

技術情報の目次

原理
蛍光特性（β-galactosidaseと反応後のSPiDER-βGal）
本キットを使用した論文
キットの使用手順
特長①．生細胞も固定化細胞も適用できる
特長②．定量が容易にできる
一般的な老化細胞マーカー
異なる老化マーカーとの共染色
組織サンプル中のSA-β-gal検出
T細胞(浮遊細胞)におけるSA-β-gal検出
細胞老化と細胞周期との関連性
共焦点定量イメージサイトメーターによる定量解析

細胞老化と細胞周期との関連性

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、本製品で細胞老化、Cell Cycle Assay Solution Blue （製品コード：C549）/ Deep Red（製品コード：C548）でA549 細胞における細胞周期の変化と、JC-1 MitoMP Detection Kit （製品コード：MT09）でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

技術や使用製品に関する補足

細胞周期測定試薬

Cell Cycle Assay Solution Blue
ミトコンドリア膜電位検出キット

JC-1 MitoMP Detection Kit

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（HEK）遺伝子（LacZ）	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	T. Doura, M. Kamiya, F. Obata, Y. Yamaguchi, T. Y. Hiyama, T. Matsuda, A. Fukamizu, M. Noda, M. Miura, Y. Urano, "Detection of LacZ-Positive Cells in Living Tissue with Single-Cell Resolution.", Angew Chem Int Ed Engl., 2016, 55, 33
2)	組織（マウス脂肪）	蛍光顕微鏡	T. Sugizaki, S. Zhu, G. Guo, A. Matsumoto, J. Zhao, M. Endo, H. Horiguchi, J. Morinaga, Z. Tian, T. Kadomatsu, K. Miyata, H. Itoh & Y. Oike, "Treatment of diabetic mice with the SGLT2 inhibitor TA-1887 antagonizes diabetic cachexia and decreases mortality", Nature Partner Journal：Aging and Mechanisms of Disease., 2017, doi:10.1038/s41514-017-0012-0.
3)	細胞（HSP27-knockdown）タンパク質（Ki67、cyclin B1）	蛍光顕微鏡	A. Park, I. Tsunoda and O. Yoshie, "Heat shock protein 27 promotes cell cycle progression by down-regulating E2F transcription factor 4 and retinoblastoma family protein p130", J. Biol. Chem., 2018, doi: 10.1074/jbc.RA118.003310 .
4)	細胞（A549)	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	R. Tanino, Y. Tsubata, N. Harashima, M. Harada and T. Isobe, "Novel drug-resistance mechanisms of pemetrexed-treated non-small cell lung cancer", Oncotarget., 2018, 9, (24), 16807.
5)	細胞（NHDF)	蛍光顕微鏡	Y. Kitahiro, A. Koike, A. Sonoki, M. Muto, K. Ozaki and M. Shibano. , "Anti-inflammatory activities of Ophiopogonis Radix on hydrogen peroxide-induced cellular senescence of normal human dermal fibroblasts.", J Nat Med., 2018, 72, 905.
6)	組織（老齢マウス腸上皮オルガノイド）	蛍光顕微鏡	R. Uchida, Y. Saito, K. Nogami, Y. Kajiyama, Y. Suzuki, Y. Kawase, T. Nakaoka, T. Muramatsu, M. Kimura and H. Saito, "Epigenetic silencing of Lgr5 induces senescence of intestinal epithelial organoids during the process of aging", NPJ Aging Mech Dis., 2018, doi：10.1038/s41514-018-0031-5.
7)	組織（腎臓凍結切片）	蛍光顕微鏡	S. R. Kim, A. Eirin, X. Zhang, A. Lerman and L. O. Lerman, "Mitochondrial Protection Partly Mitigates Kidney Cellular Senescence in Swine Atherosclerotic Renal Artery Stenosis.", Cell. Physiol. Biochem., 2019, 52, 617.
8)	細胞（HN6, HN12, HN13）	フローサイトメーター	Liana P. Webber, Veronica Q. Yujra, Pablo A. Vargas, Manoela D. Martins. Cristiane H. Squarize, Rogerio M. Castilho, "Interference with the bromodomain epigenome readers drives p21 expression and tumor senescence", Cancer Letters., 2019, doi.org/10.1016/j.canlet.2019.06.019.
9)	細胞（UE7T-13）	フローサイトメーター	H. Ise, K. Matsunaga, M. Shinohara and Y. Sakai, Improved Isolation of Mesenchymal Stem Cells Based on Interactions between N-Acetylglucosamine-Bearing Polymers and Cell-Surface Vimentin ", Stem Cells Int., 2019, 4341286, 13.
10)	細胞（マウス角膜間質）	フローサイトメーター	X. Wang, M. Qu, J. Li, P. Danielson, L. Yang and Q. Zhou, Induction of Fibroblast Senescence During Mouse Corneal Wound Healing.", Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2019, 60, (10), 3669.
11)	細胞（VZ/SVZ)	フローサイトメーター	Y. Nakatani, H. Kiyonari and T. Kondo, Ecrg4 deficiency extends the replicative capacity of neural stem cells in a Foxg1-dependent manner.", Development., 2019, 146, (4), 18.
12)	細胞（HaCaT, HEK001)	蛍光顕微鏡	Y. S. Ryu, K. A. Kang, M. J. Piao, M. J. Ahn, J. M. Yi, G. Bossis, Y. M. Hyun, C. O. Park and J. W. Hyun, Particulate matter-induced senescence of skin keratinocytes involves oxidative stress-dependent epigenetic modifications", Exp. Mol. Med., 2019, 51, 108.
13)	細胞（HT1080)	蛍光顕微鏡	E. M. Angela Ibler, E. Mohamed, L. N. Kathryn, A. B. Natalia, F. E. K. Sherif and H. Daniel, Typhoid toxin exhausts the RPA response to DNA replication stress driving senescence and Salmonella infection', Nat Commun., 2019, 10, 4040.
14)	– (Review)	フローサイトメーター	B.L. Torres, A. Estepa-Fernandez, M. Rovira, M. Oraez, M. Serrano, R. Martinez-Manez and F. Sancenon,"The chemistry of senescence.", The chemistry of senescence., 2019, (3), 426-411
15)	細胞（HepG2）	蛍光顕微鏡	三谷塁一, "肝臓のミトコンドリア活性化に及ぼす大豆イソフラボンの効果とその分子機構に関する研究", 大豆たん白質研究, 2019, 21
16)	細胞（PC12）	蛍光顕微鏡	N. Wang, H. Wang, L. Li, Y. Li and R. Zhang, "β-Asarone Inhibits Amyloid-β by Promoting Autophagy in a Cell Model of Alzheimer's Disease.", Front Pharmacol., 2020, 10, 1529
17)	細胞（A2780)	フローサイトメーター	Z. Wang, J. Gao, Y. Ohno, H. Liu and C. Xu, "Rosiglitazone ameliorates senescence and promotes apoptosis in ovarian cancer induced by olaparib.", Cancer Chemother Pharmacol., 2020.
18)	組織（マウス腎臓凍結切片）	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	J. H. Cho, E. Kim, Y. Son, D. Lee, Y. S. Park, J. H. Choi, K. Cho, K. Kwon and J. Kim, "CD9 Induces Cellular Senescence and Aggravates Atherosclerotic Plaque Formation.", Cell Death Differ., 2020, doi: 10.1038/s41418-020-0537-9
19)	細胞（T cell）	フローサイトメーター	S. Yoshida, H. Nakagami, H. Hayashi, Y. Ikeda, J. Sun, A. Tenma, H. Tomioka, T. Kaawano, M. Shimamura, R. Morishita and H. Rakugi, "The CD153 vaccine is a senotherapeutic option for preventing the accumulation of senescent T cells in mice.", Nat. Commun., 2020, 11, (2482), doi:10.1038/s41467-020-16347-w
20)	細胞（PC12）	蛍光顕微鏡	N. Wang, H. Wang, L. Li, Y. Li and R. Zhang, "β-Asarone Inhibits Amyloid-β by Promoting Autophagy in a Cell Model of Alzheimer's Disease.", Front Pharmacol., 2020, 10, 1529
21)	細胞（ARPE-19）	蛍光顕微鏡	T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, "Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091
22)	細胞 (ゼブラフィッシュの上皮細胞)	蛍光顕微鏡	Y. Haraoka, Y. Akieda, Y. Nagai, C. Mogi and T. Ishitani, "Zebrafish imaging reveals TP53 mutation switching oncogene-induced senescence from suppressor to driver in primary tumorigenesis", Nat. Commun., 2022, doi:10.1038/s41467-022-29061-6.
23)	組織 (脂肪組織)	蛍光顕微鏡	A. Kita, Y. Saito, N. Miura, M. Miyajima, S. Yamamoto, T. Sato, T. Yotsuyanagi, M. Fujimiya and T. Chikenji, "Altered regulation of mesenchymal cell senescence in adipose tissue promotes pathological changes associated with diabetic wound healing", Commun. Biol., 2022, doi:10.1038/s42003-022-03266-3.
24)	細胞(hMPC)	蛍光顕微鏡	X. Liu, Z. Liu, Z. Wu, J. Ren, Y. Fan, L. Sun, G. Cao, Y. Niu, B. Zhang, Q. Ji, X Jiang, C. Wang, Q. Wang, Z. Ji, L. Li, C. R. Esteban, K. Yan, W. Li, Y. Cai, S. Wang, A. Zheng, Y. E. Zhang, S. Tan, Y. Cai, M. Song, F. Lu, F. Tang, W. Ji, Q. Zhou, J. Belmonte, W. Zhang, J. Qu, G. Liu, "Resurrection of endogenous retroviruses during aging reinforces senescence", Cell, 2023, doi:10.1016/j.cell.2022.12.017.

よくある質問

Q 1キット当りの使用回数の目安は？: A

目安となる使用回数については、下記の容器毎の数量をご参考ください。

※１ウェル当りに添加する染色溶液の量によって上記の数量は変わります。
　使用する容器と必要な１ウェル当りの染色溶液量を予め確認の上、ご使用ください。

Q Bafilomycin A1 を添加する理由を教えて下さい。: A

多くの細胞には内在性のβ-ガラクトシダーゼの存在が知られていますが、SPiDER-βGalは、内在性のβ-ガラクトシダーゼと老化マーカーであるSA-β-Galともに反応するため、老化が認められていない細胞でも、バックグラウンドが高くなり、SA-β-Galの検出に支障が出てきます。
Bafilomycin A1は、リソソーム中のATPase活性を阻害し、リソソーム中のpHを酸性から中性付近に変化させますが、この作用により内在性β-ガラクトシダーゼの活性が低下します。そのため、SPiDER-βGalを添加する前にBafilomycin A1で細胞を処理することで、SPiDER-βGalはSA-β-Galと反応して老化細胞を蛍光染色することができます。

左図ではBafilomycin A1の添加有無によるSA-β-Gal検出の違いを示しています。

なお、Bafilomycin A1は、オートファジー阻害剤としての利用も知られています。ご利用の際は、実験系に支障があるかご検討の上、支障が有る場合は、固定化細胞の利用をお勧めします。固定化細胞を用いる場合は、バッファーで細胞内pHをコントロールするため、Bafilomycin A1 は使用しません。取扱説明書に記載された手順に従って染色することができます。

Q DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？: A

SPiDER-βGal DMSO stock solution及びBafilomycin A1 DMSO stock solution調製後は、-20℃保存した場合に1か月間安定であることを確認しています。

Q Working solutionは、どのくらい安定ですか？: A

SPiDER-βGal working solution及びBafilomycin A1 working solutionは保存できないため、用時調製して下さい。

Q 老化細胞を蛍光観察する際の注意点はありますか？: A

細胞老化が進むと細胞内にリポフスチンと呼ばれる不溶性物質が蓄積してきます。リポフスチンは自家蛍光を発するため蛍光観察時にバックグラウンドとして影響することがあります。その場合、老化細胞中のSA-β-gal活性を正確に評価するために、SPiDER-βGalを添加しない試料もご用意いただき確認することをお勧めします。

○フローサイトメーターの場合
・「老化細胞」および「老化していない細胞」を用いて、各々①②の平均蛍光強度(MFI)を測定してください。
　　　①SPiDER-βGalを添加した細胞
　　　②SPiDER-βGalを添加していない細胞（バックグラウンド）

・「①の平均蛍光強度」から「②の平均蛍光強度」を差し引いてください。
　バックグラウンドを差し引いたSA-β-gal由来の蛍光強度をSA-β-gal活性の指標とします。
　　　a：SA-β-gal活性（老化細胞）　　　　　 = ①の平均蛍光強度　－　②の平均蛍光強度
　　　b：SA-β-gal活性（老化していない細胞） = ①の平均蛍光強度　－　②の平均蛍光強度

・上記の aおよびb の値を比較することで、SA-β-gal活性として評価してください。
また、上記のaからbを差し引くことで細胞老化に伴うSA-β-gal活性の変化を確認できます。

○蛍光顕微鏡の場合
・初めにSPiDER-βGalを添加していない老化細胞を用いて蛍光観察してください。
・リポフスチン由来の蛍光像（バックグラウンド）が影響を与えない程度に感度（gainなど）を調整してください。
・その後、同じ撮影条件でSPiDER-βGalを添加した細胞や老化していない細胞の蛍光観察を行い評価してください。

Q 細胞を固定化した後に、SA-β-galは染色できますか？: A

可能です。固定化した場合、Bafilomycin A1を用いた細胞の前処理は必要ありませんが、pH6.0に調整したMcIlvain bufferを別途準備して頂く必要があります。詳細は取扱説明書をご覧ください。

Q 固定化細胞をフローサイトメーターを用いて検出するプロトコルを教えて下さい。: A

下記のプロトコルを参照ください。

(1) 細胞を35 mmディッシュに播種し、37℃、5% CO²インキュベーターで一晩培養する。
(2) 培地を吸引除去し、HBSS 2 mlで1回洗浄する。
(3) トリプシンで細胞を剥がし、培地500 μlで回収する。
(4) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(5) 2% PFA/PBS 100 μlに懸濁し、室温で5分間固定する。
(6) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(7) HBSS 500 μLに懸濁し、300×gで5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(8) SPiDER-βGal working solution(固定化細胞用) 500 μlを加え、37℃で30分間インキュベートする。
　　 ※pHの変動を抑えるため、5% CO₂インキュベーターは使用しない。
(9) 300×gで5分間遠心し、上澄みを除去する。
(10) HBSS 500 μlに懸濁し、300×gで5分間遠心後、上澄みを除去する。これを2回繰り返す。
(11) HBSS 500 μlを加えて細胞を回収し、フローサイトメーターにて解析する。

Q 細胞を固定化後にSA-β-gal検出および免疫染色はできますか？

はい、染色は可能ですが、細胞を固定化するとSA-β-galが低下する可能性があります。（下記の^※2に注意事項を記載）
以下の実験例を参照しご検討ください。

WI-38細胞を固定化後に、SA-β-gal検出およびγ-H2AX（DNA損傷マーカー）の免疫染色を行った。

＜実験操作＞

(1)	WI-38細胞を35 mm dishに播種し、37℃、5% CO₂インキュベーターで一晩培養した。
(2)	培養上清を除き、4% Paraformaldehyde/PBS溶液2 mlを細胞に添加し、室温で3分間インキュベートした^※1。
(3)	PBS 2 mlで細胞を3回洗浄した。
(4)	SPiDER-βGal working solution ^※2 2 mlを添加し、37℃で30分間インキュベートした^※3。
(5)	PBS 2 mlで細胞を2回洗浄した。
(6)	0.1% Triton X-100/PBS 2 mlを細胞へ添加し、室温で30分間インキュベートした。
(7)	PBS 2 mlで2回洗浄した。
(8)	1% BSA/PBS溶液2 mlを細胞へ添加し、室温で1時間インキュベートした。
(9)	抗γ-H2AX IgG (マウス由来)を1% BSA/PBS溶液にて希釈後、細胞に添加し4℃で一晩インキュベートした。
(10)	PBS 2 mlで細胞を3回洗浄した。
(11)	抗マウスIgG(Cy5標識)を1% BSA/PBSで希釈後、細胞に添加し室温で1時間インキュベートした。
(12)	上清を除き、PBS 2 mlで細胞を2回洗浄し蛍光顕微鏡下で観察した。
※1	固定化時間を長くすると、SA-β-gal活性が低下します。
※2	細胞の固定化操作によりSA-β-gal活性が低下する可能性があります。もしSA-β-gal評価時に十分な蛍光強度が得られない場合は、SPiDER-βGal DMSO stock solution を500-1000倍に希釈しご使用ください。通常はSPiDER-βGal DMSO stock solutionをMcIlvaine buffer（pH 6.0）にて2,000倍の希釈を推奨。希釈倍率の異なるSPiDER-βGal working solutionの結果をFig.1に示す。
※3	インキュベートの際は、5% CO₂インキュベーターでは行わないこと。5% CO₂インキュベーター内に固定化した細胞をおくと、バッファーが酸性になることで内在性のβ-galactosidase活性が上昇することが考えられる。結果として、バックグラウンドが上昇し、老化細胞と若い細胞のSA-β-gal活性の差が見えにくくなる。

＜実験データ＞

図1 免染前後におけるSPiDER-βGal染色の蛍光強度変化

免疫染色の前後でSPiDER-βGalの蛍光強度を比較すると、固定化を行う免疫染色の過程でSPiDER-βGalの蛍光強度が低下していることを確認した。

図2 希釈倍率の異なるSPiDER-βGalによる染色例（免疫染色後）
　赤： SPiDER-βGal、青： γ-H2AX　＜露光時間: 1.5 sec＞

SPiDER-βGal working solutionの希釈倍率を2000倍から666倍に変更することで、免疫染色（固定化）により低下したSPiDER-βGalの蛍光強度が免疫染色前と同程度の強度を示すことを確認した。

Q 染色後の蛍光が弱くて確認できないのですが、対策を教えてください。: A

下記の3点についてご確認またはご検討ください。

①ご使用のフィルターが試薬の蛍光特性に合致している。
　＜推奨フィルター＞
　　・蛍光顕微鏡：　励起（500-540 nm）, 蛍光（530-570 nm）
　　・フローサイトメーター：　励起（488 nm）, 蛍光（500-540 nm）
　
②各working solutionは用時調製したものを使用する。

③染色時間を長くする。
　SPiDER-βGal working solution添加後、30分間のインキュベーションで蛍光が確認できない場合は、インキュベーション時間を45-60分間を目安にご検討ください。

Q SA-β-Gal発現細胞を染色後、細胞は固定化できますか？: A

可能です。4%パラホルムアルデヒドを用いて固定化することを推奨します。

Q 培地中の血清やフェノールレッドは検出に影響しますか？: A

培地中の血清およびフェノールレッドは、SA-β-galの検出には影響しません。

Q 老化細胞とコントロール細胞で蛍光強度に差がない場合、何を確認したら良いですか？: A

STEP1:顕微鏡の観察条件を最適化してください。
STEP2:観察条件を最適化しても解決しない場合、染色条件の最適化を行ってください。

—————————————————————————
STEP1＜顕微鏡の観察条件を最適化＞

コントロール細胞の蛍光と老化細胞の蛍光に差が見られない場合下記をご確認ください。

・コントロール細胞を観察し蛍光が僅かに確認できる条件までGain、レーザー強度を下げる、または露光時間を短くする。
(共焦点顕微鏡：Gain、レーザー強度の調整　落射型顕微鏡：露光時間の調整)

・老化細胞の蛍光を観察し、コントロール細胞との蛍光の差を確認する。

・蛍光の差がみられない場合はSTEP2を確認する。

※観察する部分がガラスボトムシャーレの容器をお使いください。

顕微鏡観察条件とコントロールおよび老化細胞の蛍光強度の関係

—————————————————————————
STEP2＜染色条件の最適化＞

細胞によっては、SPiDERの染色時間もしくは濃度の検討が必要な場合がございます。
以下を目安に最適条件をご検討ください。
染色時間：10分～60分
染色濃度：取扱説明書に記載の濃度の1/2量～2倍量

※観察する細胞数が少ないと感度が得られない場合がございます。
　必要に応じて、細胞数の最適化を行ってください。

染色条件とコントロールおよび老化細胞の蛍光強度の関係

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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老化細胞検出キット（マイクロプレート用） Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化

老化細胞検出キット（マイクロプレート用）

製品コード

SG05　 Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 tests	￥12,200	345-09501
100 tests	￥35,300	341-09503

キット内容

20 tests	SPiDER-βGal lysis Buffer Assay Buffer Stop Solution	×1 40 ml×1 1.5 ml×1 3 ml×1
100 tests	SPiDER-βGal lysis Buffer Assay Buffer Stop Solution	×5 100 ml×2 7.5 ml×1 15 ml×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English
細胞数補正キットとの併用プロトコル日本語
Protocol for a Combined Analysis with Cell Count Normalization Kit [English]

技術情報

簡便に老化細胞を数値化

準備した細胞をキット同梱のBuffer で溶解し、蛍光基質（SPiDER-βGal）を添加するだけで、SA-β-gal の活性に応じた蛍光強度が得られます。
なおディッシュ（100 mm dish）等で細胞を準備した場合でも、細胞溶解後に96 ウェルプレートに移して頂くだけで評価頂けます。

実験例：薬剤添加による評価

ROS発生剤であるDoxorubicinを添加し培養したWI-38 細胞を用い、本キットによるプレートアッセイを行いました。結果、Doxorubicinを添加した細胞では、 SA-β-gal の亢進が確認されました。

老化細胞検出キット（マイクロプレート用） Cellular Senescence Plate Assay Kit - SPiDER-βGal 同仁化学研究所
＜検出条件＞
Ex. 535 nm / Em. 580 nm

技術や使用製品に関する補足

本キット使用時の注意点：細胞数の補正をお勧めします。

マイクロプレートを用いた細胞の解析では、得られる結果がウェル中の細胞数によって変化する場合があります。その際には、細胞数のカウントやトータルタンパク質量の確認により、得られた測定値の補正（ノーマライゼーション）が必要となります。本キットでは、試薬を細胞培養液に添加するだけで、細胞内の核を染色し得られる蛍光強度から、細胞数を簡便に評価することができます。
細胞数ノーマライゼーションキットは、
こちらから

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用(リンク)
1	細胞 (MRC-5)	プレートリーダー	Y. Takenaka, I. Inoue, T. Nakano, M. Ikeda and Y. Kakinuma, "Prolonged disturbance of proteostasis induces cellular senescence via temporal mitochondrial dysfunction and subsequent mitochondrial accumulation in human fibroblasts", 2021, doi:10.1111/febs.16249.
2	細胞 (ヒト網膜色素上皮細胞)	プレートリーダー	H. Yamamoto-Imoto, S. Minami, T. Shioda, Y. Yamashita, S. Sakai, S. Maeda, T. Yamamoto, S. Oki, M. Takashima, T. Yamamuro, K. Yanagawa, R. Edahiro, M. Iwatani, M. So, A. Tokumura, T. Abe, R. Imamura, N. Nonomura, Y. Okada, D. E. Ayer, H. Ogawa, E. Hara, Y. Takabatake, Y. Isaka, S. Nakamura and T. Yoshimori, "Age-associated decline of MondoA drives cellular senescence through impaired autophagy and mitochondrial homeostasis", Cell Rep., 2022, doi:10.1016/j.celrep.2022.110444.
3	細胞 (U251MG)	プレートリーダー	A. Saito, Y. Kamikawa, T. Ito, K. Matsuhisa, M. Kaneko T. Okamoto, T. Yoshimaru, Y. Matsushita, T. Katagiri and K. Imizumi, "p53-independent tumor suppression by cell-cycle arrest via CREB/ATF transcription factor OASIS", 2023, doi:10.1016/j.celrep.2023.112479.

よくある質問

Q 1キットあたりの測定可能なサンプル数を教えてください。

測定可能なサンプル数の目安は以下の通りです。

	20 tests	100 tests
測定可能なwell数	96 wellプレート 20 well分	96 wellプレート 1 枚分
測定可能なサンプル数 (n=3 にて測定した場合)	6 サンプル	30 サンプル

Q 96 wellプレートで細胞を老化誘導をして測定することは可能ですか？: A

老化誘導はディッシュ等で行い、その後、細胞を96 wellプレートに移して測定することを推奨します。
同一プレート内に老化誘導しない細胞（コントロール）と老化誘導する細胞（サンプル）を配置して比較を行いますが、96 wellプレートで老化誘導を行うと、（老化誘導の日数に依りますが）コントロール細胞は増殖しすぎてコンフルエントの状態を招く可能性があります。
また、コンフルエントを回避するために予め細胞数を少なく播種した場合にも、老化誘導処理した老化細胞はプレートアッセイに必要な感度（細胞数）が得られない可能性があります。

Q 96 wellプレートに播種する細胞数の目安はどれくらいですか？: A

至適細胞数は細胞種によって異なります。
弊社では、1×10⁴ cellsの WI-38細胞を各 wellに播種し、実験した実績がございます。

詳しい操作については、取扱説明書内の「実験例2」をご参照ください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵,遮光
危険・有害シンボルマーク

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グルコース取り込み検出キットBlue Glucose Uptake Assay Kit-Blue 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Blue

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットBlue

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
蛍光顕微鏡やフローサイトメーターで測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP01　 Glucose Uptake Assay Kit-Blue

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥42,800	342-09871

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Blue WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！4つの特徴

Glucose Uptake Probe-Blueは青色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Blueはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO₂
インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Blueは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Blueを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q Probe solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を一度行ってください。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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グルコース取り込み検出キットGreen Glucose Uptake Assay Kit-Green 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Green

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Green

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットGreen

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
プレートリーダーを用いて測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP02　 Glucose Uptake Assay Kit-Green

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥40,700	347-09821

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well plate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Green WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

高輝度の色素を採用したことにより、既存法(2-NBDG)よりも高感度かつ短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

No.	Sample	Publication
1)	細胞 (HeLa)	W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
2)	菌 (B. licheniformis; P. stutzeri)	M. Jiang, Q. Li, S. Hu, P. He, Y. Chen, D. Cai, Y. Wu, S. Chen, "Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin", 2022, doi:10.1016/j.cej.2022.134686.
3)	細胞 (分化した3T3-L1脂肪細胞)	Y. Liu, Y. Le, M. Xu, W. Wang, H. Chen, Q. Zhang, C. Wang, " Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes", Environ. Pollut., 2022, doi:10.1016/j.envpol.2022.119287.

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Greenはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
悪性黒色腫	MO5
マウス筋芽細胞(未分化)	C2C12
マウス筋管	C2C12
アストロサイト―マ	U-251 MG
ヒト子宮頸癌由来細胞	HeLa
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell
マウスマクロファージ様株化細胞	J774.1
線虫	N2

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。下記例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、
5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Greenは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Greenを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？: A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe working solutionは保存できません。Probe stock solutionは冷凍保存が一か月間可能です。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。マニュアルの洗浄操作6-7を繰り返してください。

Q Glucose Uptake Probe-Greenに細胞毒性はありますか？: A

弊社製品のCell Counting Kit-8 (CK04)を用いてA549細胞におけるプローブの細胞毒性を調査した結果、細胞毒性は確認されませんでした。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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whatman尼龙膜针头式过滤器孔径0.2um直径25mm6750-25026750-2502 6798-2502

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

whatman尼龙膜针头式过滤器孔径0.2um直径25mm6750-2502

简要描述：

whatman尼龙膜针头式过滤器孔径0.2um直径25mm6750-2502简单介绍： Whatman 25mm针头式滤器是标准的实验室特性：配有各种滤膜，可根据您的样品的性质选用由不含粘合剂和添加剂的材料制成，因而不会污染样品过滤量达100ml可满足大多数实验室样品的需求

whatman尼龙膜针头式过滤器孔径0.2um直径25mm6750-2502

Whatman 25mm针头滤器6750-2502 6751-2502 6750-2504 6781-2502 6781-2504 6781-2510 6780-2502 6780-2504 6780-2510 6783-2510 6825-2517 6825-2527 6784-2501 6784-2502 6785-2502 6784-2504 6784-2510 6786-2502 6788-2502 6786-2504 6790-2504

whatman尼龙膜针头式过滤器孔径0.2um直径25mm6750-2502简单介绍：
Whatman 25mm针头式滤器是标准的实验室

特性：
配有各种滤膜，可根据您的样品的性质选用
由不含粘合剂和添加剂的材料制成，因而不会污染样品
过滤量达100ml可满足大多数实验室样品的需求

Puradisc25针头式过滤器沃特曼Whatman的详细介绍：
Puradisc 25ASTM聚醚砜针头过滤器
Puradisc 25AS含有一层低蛋白吸附的聚醚砜膜是水溶液过滤的理想用品。用熔封法制作，因而无表面活性剂或下模剂。确保样品滤液的特别清洁。亦有已灭菌的包装。

Puradisc 25TFTM聚四氟乙烯针头过滤器
Puradisc 25TF聚四氟乙烯针头式滤器含有疏水的聚四氟乙烯膜，是溶剂、化学物和其他非水溶液的有效过滤用品。聚四氟乙烯膜和坚固的到长丙烯外壳特别适合腐蚀性化学物的过滤。

Puradisc 25PPTM聚丙烯针头过滤器
Puradisc 25PP聚丙烯针头过滤器的滤膜和外壳都是用聚丙烯制成，特别适合于含杂质多的水溶液，并适合于腐蚀性，难滤溶液的过滤，确实是一种适合于许多实验室应有和的的针头滤器。

Puradisc 25NY尼龙针头过滤器含尼龙膜，既可过滤水溶液亦可过滤有机溶液。是HPLC样品制备中zui常用的膜，为样品制备提供了洁净可靠的滤液。

Puradisc 25GDTM针头过滤器
Puradisc 25GD针头过滤器具有一层玻璃纤维过滤膜，对含杂质高，难过滤溶液的过滤既快又容易。过滤膜由两层膜合成，下层为粗滤层，下层为细滤层。适用于HPLC，TLC或GC样品制备。

Puradisc 25GF/FTM玻纤针头过滤器
Puradisc 25GF/F玻纤针头过滤器含有玻璃纤维滤膜而过滤水溶液或溶剂性溶液既快又有效。玻纤针头滤器对去除颗粒如沉淀蛋白和环保样品，特别有效。

Puradisc 25NYLTM尼龙针头过滤器
规格	孔径	数量/盒	货号
Puradisc 25NYL
尼龙	0.2μm	50	6750-2502
尼龙	0.2μm	200	6751-2502
尼龙	0.45μm	50	6750-2504
尼龙	0.45μm	1000
Puradisc 25AS
聚醚砜	0.2μm	200	6781-2502
聚醚砜	0.45μm	200	6781-2504
聚醚砜	1.0μm	200	6781-2510
聚醚砜–无菌	0.2μm	50	6780-2502
聚醚砜–无菌	0.45μm	50	6780-2504
聚醚砜–无菌	1.0μm	50	6780-2510
Puradisc 25GD
GMF150	1.0μm*	100	6783-2510
Puradisc 25GF/F	0.7μm*	50	6825-2517
Puradisc 25GF/F	0.7μm*	200	6825-2527
Puradisc 25TF
聚四氟乙烯	0.1μm	50	6784-2501
聚四氟乙烯	0.2μm	50	6784-2502
聚四氟乙烯	0.2μm	200	6785-2502
聚四氟乙烯	0.45μm	50	6784-2504
聚四氟乙烯	0.45μm	1000
聚四氟乙烯	1.0μm	50	6784-2510
Puradisc 25PP
聚丙烯	0.2μm	50	6786-2502
聚丙烯	0.2μm	200	6788-2502
聚丙烯	0.45μm	50	6786-2504
聚丙烯	0.45μm	1000	6790-2504 窗体底端

グルコース取り込み検出キットRed Glucose Uptake Assay Kit-Red 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Glucose Uptake Assay Kit-Red

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glucose Uptake Assay Kit-Red

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

グルコース取り込み検出キットRed

グルコース取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
プレートリーダーやフローサイトメーターでも測定が可能
取り込まれた色素の漏れ出しを抑制し、再現性の高いデータを取得できる

製品コード

UP03　 Glucose Uptake Assay Kit-Red

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥42,800	349-09881

使用回数の目安
1 set あたり、35 mm dish 12 枚、96-well microplate 1 枚

キット内容

1 set	Glucose Uptake Probe-Red WI Solution (50×)	×1 5 ml ×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存法よりココが良い！４つの特徴

Glucose Uptake Probe-Redは赤色蛍光を発するため、蛍光顕微鏡やフローサイトメーターの多重染色の際に緑色蛍光以外の試薬としてご利用頂けます。
また、高輝度の色素と細胞からの漏出を抑えるバッファーを採用したことで、既存法(2-NBDG)よりも短時間での測定が可能となりました。

参考文献

参考文献を表示する

No.	Sample	Publication
1)	菌 (OP50-1)	Y. Suzuki, K. Kikuchi, K. Numayama-Tsuruta and T. Ishikawa, "Reciprocating intestinal flows enhance glucose uptake in C. elegans", Sci. Rep., 2022, doi:10.1038/s41598-022-18968-1.

よくある質問

Q Glucose Uptake Probe-Redはどのグルコーストランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

複数のトランスポーターを介して細胞内へ取り込まれていると推測されますが、各グルコーストランスポーターに対する特異性や親和性に関する詳細なデータはございません。

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞においてプローブの使用実績があります。

細胞
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト肝癌由来細胞	HepG2
前駆脂肪細胞	preadipocyte(3T3-L1)
脂肪細胞	adipocyte(3T3-L1)
ルイス肺がん由来細胞	3LL
T細胞	CD4⁺ T cell

Q 阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績を教えて下さい。: A

下記の細胞において阻害剤や取り込み能力を変化させる実験の実績があります。

Q グルコースでの競合阻害ができない場合の対処法はありますか？: A

細胞ごとのグルコーストランスポーターの発現量や種類により、競合阻害がかからない場合があります。（例：HepG2細胞）

その場合には、2-deoxyglucose(2-DG)による前処理(Pretreatment)を行うことでglucose競合阻害の差が得られる
可能性があります。Glucose Uptake Assay Kit-Green(製品コード：UP02)での実施例を参考にご検討ください。

2-DG前処理とグルコースによる競合阻害を組み合わせた Glucose Uptake Probe の取り込み阻害（HepG2 細胞）

1. 細胞をディッシュまたはマイクロプレートに播種し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で一晩培養した。
2. Medium [DMEM (10% FBS, High-glucose) ]を除去した後、50 mmol/l 2-DG/Mediumを添加し、5% CO₂
インキュベーター（37℃）内で二時間培養した。
3. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)で2 回洗浄した。
4. 加温したDMEM (Glucose-free, serum-free)を添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
5. 上清を除去した後、加温したProbe solutionを添加し、5% CO₂ インキュベーター（37℃）内で15 分間静置した。
6. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) で2 回洗浄した。
7. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加し、室温で5 分間静置した。
8. 上清を除去した後、冷却したWI Solution (1x) を添加した。
9. 蛍光顕微鏡で観察した。

Q Glucose Uptake Probe-Redは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

蛍光色素部位は安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。グルコース部位は、構造上ヘキソキナーゼによるリン酸化を受けることが考えられますが、それ以降の代謝は行われないと考えられます。

Q Glucose Uptake Probe-Redを生細胞へ取り込ませた後、固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？: A

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

Q Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Probe solutionは保存できません。Probe stock solutionは一か月間冷凍保存が可能です。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

初期検討としてプローブ濃度(x250～x1,000)や染色時間(15分～1時間程度)をご検討下さい。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったプローブが残存している可能性があります。再度WI solutionによる洗浄操作を行ってください。

Q WI solutionを用いて洗浄した後、プローブはどのくらいの時間細胞内に保持されますか？: A

室温で約１時間程度は細胞内に保持されます。ただし、細胞の種類によって異なることが考えられます。

Q グルコースの定量はできますか？: A

本製品を用いてグルコースを定量することはできません。

培地中のグルコース消費量や細胞内のグルコース量を定量したい場合は、弊社 グルコース代謝測定キット Glucose Assay Kit-WST (G264) をご使用下さい。

Q 取り込まれた色素の定量はできますか？: A

取り込まれた色素の定量を行う事はできません。本色素は、グルコース取り込み能力の増減を確認するための色素となります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Amino Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Amino Acid Uptake Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞老化
細胞内代謝
蛍光色素
顕微鏡
FCM

アミノ酸取り込み検出キット

アミノ酸取り込み能力を簡便に検出できる
蛍光顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターを用いて検出が可能

製品コード

UP04　 Amino Acid Uptake Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 tests	￥17,100	346-09891
100 tests	￥48,200	342-09893

<使用回数の目安> 100 testsあたり、35 mm dish 10枚、96-well plate 1枚

使用するマイクロプレートの種類によっては測定できない場合があります。
推奨のマイクロプレートの種類と、結果への影響については FAQ をご参照ください。

キット内容

20 tests	BPA Solution BPA Dilution Buffer Probe Solution	35 ×l×1 35 ×l×1 15 ×l×1
100 tests	BPA Solution BPA Dilution Buffer Probe Solution	175 ×l×1 175 ×l×1 75 ×l×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

この製品でできること

アミノ酸の取り込みを阻害する薬剤を抗がん剤としてスクリーニングしたり、正常細胞とがん細胞の取り込み能力を比較することができます。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1	細胞 SCC7 Cell (マウス扁平上皮癌細胞)	フローサイトメーター	T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, "Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy", 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.
2	細胞 CD4⁺ Cells	フローサイトメーター	W. Zhang, X. Cao, X. Zhong, H. Wu, Y. Shi, M. Feng, Y.C. Wang, D. Ann, Y. Gwack, Y.C. Yuan, W. Shang and Z. Sun , "SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated upregulation of amino acid transporter Slc7a5", 2023, PNAS, doi:10.1073/pnas.2221352120.

よくある質問

Q 推奨する蛍光測定用のマイクロプレートを教えてください。

推奨するマイクロプレートは下記の通りです。

社名	製品名	Cat No.
ibidi	μPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
AGC techno glass	EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well	5866-096
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

※プレートの種類による結果への影響は、FAQ マイクロプレートの種類は結果に影響しますか？ をご参照ください。

Q マイクロプレートの種類は結果に影響しますか？

はい。マイクロプレートの種類によっては測定できない場合があります(参考データ参照)。本キットの使用には、下記のプレートを推奨します。

社名	製品名	Cat No.
ibidi	μPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
AGC techno glass	EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well	5866-096
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

＜参考：プレート間の比較＞

Ibidi 製のプレートと他社メーカーのプレートを用い、アミノ酸トランスポーター阻害剤である、BCH(2-Aminobicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylic acid)存在下で、 HeLa細胞のアミノ酸取り込み能力を検出しました。この結果、推奨するIbidi製のプレートよりも、他メーカーのプレートはバックグラウンドが高く、BCHによる取り込みの阻害を確認することができませんでした。

蛍光顕微鏡観察
　アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

プレートリーダーよる検出

　アミノ酸取り込み検出キット Amino Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

Q BPAはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

BPAは、LAT1, LAT2, ATB^0,+を介して取り込まれることが報告されています(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB^0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。また、小社では、LAT1の阻害剤BCHや、LAT1の基質であるleucineなどの競合阻害実験でBPAの取り込みが阻害されることを確認しています。

Q 使用実績のある細胞種を教えて下さい。: A

付着細胞(HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251), 浮遊細胞(MOLT4)

Q BPAは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

BPAは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q BPAを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか？: A

プローブが細胞内から漏出するため、染色後の細胞を固定することはできません。

Q 蛍光シグナルの変化が観察されない場合、どうすればいいですか？: A

2点原因が考えられるため、以下のようにすると改善される可能性があります。
①BPA uptake solutionの取り込み量が少ない可能性があります。その場合は、BPA Solutionの希釈倍率を下げてご検討ください。(5～50倍希釈)
②Working solutionが劣化している可能性があります。再度、Working solutionを調製してください。

Q BPAは細胞内での局在性はありますか？: A

取り込まれたBPAは細胞内に均一に存在します。

Q BPA uptake solution, Working solutionは保存可能でしょうか？: A

BPA uptake solution, Working solutionは保存できません。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったBPAがウェル内に残存している可能性があります。
HBSSによる洗浄を繰り返してください。

Q BPAの定量はできますか？: A

取り込まれたBPAの定量を行う事はできません。本キットは、アミノ酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害シンボルマーク

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シスチン取り込み検出キット Cystine Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Cystine Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Cystine Uptake Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞内代謝

シスチン取り込み検出キット

シスチン取り込み能力を簡便に検出できる
プレートリーダーを用いて検出が可能

製品コード

UP05　 Cystine Uptake Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 tests	￥19,300	344-09951
100 tests	￥53,500	340-09953

<使用回数の目安> 100 testsあたり、96-well plate 1 枚

キット内容

20 tests	Cystine Analog Solution Fluorescent Probe Reducing Agent Assay Buffer	45 μl×1 ×1 ×1 5 ml×1
100 tests	Cystine Analog Solution Fluorescent Probe Reducing Agent Assay Buffer	225 μl×1 ×1 ×2 25 ml×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

この製品でできること

本キットはCystine Analog (CA)としてSelenocystineを用いており、細胞のシスチン取り込み能力を短時間の操作で簡便にプレートリーダーにて測定することが可能です。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞 (A172; LN229)	プレートリーダー	K. Hayashima, H. Katoh, "Expression of gamma-glutamyltransferase 1 in glioblastoma cells confers resistance to cystine deprivation-induced ferroptosis", J. Biol. Chem., 2022, doi:10.1016/j.jbc.2022.101703.
2)	細胞 (HK2; 293T)	プレートリーダー	H. Chen, L. Cao, K. Han, H. Zhang, J. Cui, X. Ma, S. Zhao, C. Zhao, S. Yin, L. Fan, H. Hu, "Patulin disrupts SLC7A11-cystine-cysteine-GSH antioxidant system and promotes renal cell ferroptosis both in vitro and in vivo", 2022, Food Chem. Toxicol., doi: 10.1016/j.fct.2022.113255.
3)	細胞 (Hep 3B)	プレートリーダー	X. Hu, Y. He, Z. Han, W. Liu, D. Liu, X. Zhang, L. Chen, L. Qi, L. Chen, Y. Luo, Q. Li, P. Chen, Q. Wu, X. Zhu and H. Guo, "PNO1 inhibits autophagy-mediated ferroptosis by GSH metabolic reprogramming in hepatocellular carcinoma ", 2022, Cell Death Dis., doi:10.1038/s41419-022-05448-7.

よくある質問

Q 蛍光測定用のマイクロプレートはどのようなものが使えますか？

使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

社名	製品名	Cat No.
ibidi	μPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
AGC techno glass	EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well	5866-096
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

Q Cystine Analogはどのトランスポーターを介して取り込まれるのでしょうか？: A

Cystine Analogはシスチン・グルタミン酸トランスポーター(xCT)を介して細胞内へ取り込まれます。

Q 細胞種の実績を教えて下さい。

下記の細胞において使用実績があります。

由来	細胞名
ヒト神経膠芽腫由来細胞	A172
ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞	A549
ヒト悪性黒色種	A375
ヒト結腸腺癌	HCT116
ヒト子宮頸癌由来細胞	HepG2
白血病細胞	HL60
ヒトサルコーマ細胞	HT1080
マウス胚性線維芽細胞	MEF
ヒト肺小細胞癌	SBC-5
アストロサイト―マ	U-251 MG

Q Cystine Analogは細胞内に取り込まれた後、分解・代謝されるのでしょうか？: A

Cystine Analogは安定な構造を有しているため、実験操作内において分解されることはございません。

Q Cystine uptake solutionは保存可能でしょうか？: A

Cystine uptake solutionは保存できません。添加前に必要量のCystine uptake solutionを調製して下さい。

Q シスチンを定量することはできますか？: A

本製品を用いてシスチンを定量することはできません。

Q 細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできますか？: A

細胞内に取り込まれたCystine Analogを定量することはできません。本製品は、シスチン取り込み能力を数値化するためのキットです。

Q サンプル間またはブランクとの蛍光強度差が無い場合、何を確認すればよいですか？: A

以下5点をご確認ください。

1.細胞数が変化している。　
測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質量で補正してください。
　詳細はよくある質問[測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。]をご参照ください。

2. 細胞へCystine Analogが十分取り込まれていない。
マニュアルの各操作の時間を以下を目安にご検討ください。
　　・シスチン不含培地での培養時間 (接着細胞操作3, 浮遊細胞操作4 )：5 – 30分間　
　　・Cystine Analogの取り込み時間 (接着細胞操作4, 浮遊細胞操作5 ) : 30 – 60分間

3. 細胞に取り込まれなかったCystine Analogがウェル内に残存することでバックグラウンドが上昇している。　
PBSによる洗浄(接着細胞：操作5, 浮遊細胞：操作6)を繰り返してください。

4. Working solutionが分解しており、バックグラウンドが上昇している。
Working solutionを調製後、時間をおくと溶液に含まれる蛍光色素が分解し、蛍光強度が高くなる可能性があります。
Working Solution調製後、時間をおかずに添加してください。

5. 細胞種の影響
細胞種ごとにシスチンの取り込み能は大きく異なっており、取り込み能が低い細胞種では相対的にバックグラウンドが高く見えることがあります。下図は異なるがん細胞のシスチン取り込み能の違いを示しています。上記記載の対処法でもバックグラウンドが解決できない場合には、よくある質問記載の実績のある細胞種でまずご検討いただくことをおすすめいたします。

Q シスチン不含無血清培地以外にCA Uptake solutionの調製に使用できるバッファーはありますか？: A

HeLa細胞においてHBSSや0.1%Glucoseを含むPBS(+)を使用して測定した実績がございます。

Q 測定値(蛍光強度)を細胞数やタンパク質濃度で補正する方法を教えてください。

小社では下記表に記載する方法を推奨しております。使用する細胞（接着細胞・浮遊細胞）により補正方法とタイミングが異なるため、下記表を参照し[UP05による測定値]を補正してください。

細胞	接着細胞	浮遊細胞
補正方法	核染色（蛍光）	タンパク質定量法: BCA法　(比色)
製品	Cell Count Normalization Kit [Code:C544]	Sodium bicinchoninate [Code:B037] 市販のキット
補正のタイミング	取扱説明書接着細胞の操作10（UP05の測定）後の溶液を用いる。	取扱説明書浮遊細胞の操作9で使用した溶液の残りを使用する。
補正の操作	Cell count Normalization Kit [Code:C544] の取扱説明書 [培地交換法]をご参照ください。	取扱説明書の下記実験例をご参照ください。 [xCT阻害剤エラスチンによるシスチントランスポーター活性阻害(HL60)]

[UP05による測定値]を [補正方法による測定値]で補正蛍光強度を計算してください。
補正蛍光強度=[UP05による測定値]/[補正方法による測定値]

※[UP05による測定値] = (サンプルの測定値) – (ブランクの測定値)
※[補正方法による測定値] = (サンプルウェルの測定値) – (細胞なしのウェルの測定値)

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍
危険・有害シンボルマーク

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脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

Fatty Acid Uptake Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Fatty Acid Uptake Assay Kit

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝
顕微鏡
FCM

脂肪酸取り込み検出キット

脂肪酸取り込み能力を高感度かつ簡便に測定できる
3 ステップの簡便操作
Quenching Buffer（同梱）で洗浄不要

製品コード

UP07　 Fatty Acid Uptake Assay Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥32,000	343-10031

使用回数の目安
1 set あたり96-well plate 1 枚

キット内容

100 tests	・Fatty Acid Uptake Probe ・Quenching Buffer ・Washing Buffer (10X)	×1 11 ml×1 11 ml×1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

なぜ、脂肪酸取り込み能力が注目されているのか？

脂肪酸は、生体がエネルギーを得るために重要な物質です。脂肪酸取り込み能は肥満や糖尿病などの疾患に関わるだけでなく、がん細胞における代謝指標の 1 つでもあります（左図）。細胞増殖が活発ながん細胞は多くの脂質を必要とするため、細胞内における脂肪酸合成や細胞外からの脂肪酸取り込みが活発に行われています（右図）。そのため、がん細胞の脂肪酸代謝経路をターゲットとした多くの薬剤が開発されています。

よくある質問

Q 使用実績のある細胞種を教えてください。

下記の細胞において使用実績がございます。

細胞名	由来
A549	ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞
HepG2	ヒト肝癌由来細胞
HeLa	ヒト子宮頸癌由来細胞
Jurkat	ヒト白血病T細胞
MOLT-4	ヒト急性リンパ芽球性白血病細胞
3T3-L1 (preadipocyte)	前駆脂肪細胞
3T3-L1 (adipocyte)	脂肪細胞

Q Fatty Acid Uptake Probeを生細胞へ取り込ませた後、細胞を固定することは可能でしょうか？: A

4% PFAを用いて染色後の細胞を固定した実績がございます。

〈プロトコル〉
－付着細胞－
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
6. 4% PFA/PBSを細胞へ添加し、室温で5分間インキュベートした。
7. PBSで細胞を3回洗浄後、蛍光顕微鏡で観察、プレートリーダーで測定した。

※固定化により蛍光強度は低下します。

－浮遊細胞－
1. マイクロチューブに細胞を準備した。
2. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
3. 無血清培地を加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
4. 無血清培地を添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
5. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
6. Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、ピペッティングにより懸濁後、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
7. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
8. Washing Buffer solutionで1回洗浄した。
9. 4% PFA/PBSを添加し、ピペッティングにより懸濁後、室温で5分間インキュベートした。
10. 300×gで5分間遠心し、上清を除去した。
11. PBSを加え、ピペッティングにより懸濁後、300×gで5分間遠心し、上清を除去した。この操作を2回繰り返した。
12. 蛍光顕微鏡で観察、フローサイトメーターで測定した。

Q プレートリーダーで測定する場合、どのプレートを使用すればよいでしょうか？

蛍光検出のため細胞培養用のブラックマイクロプレートをご使用ください。

〇: 使用可、×: 使用不可、△: 注釈参照

		付着細胞		浮遊細胞
		不透明底プレート	透明底プレート	不透明底プレート	透明底プレート
Washing Buffer (10×) 使用時	Top Reading	〇		〇
	Bottom Reading	×	〇	×	〇
Quenching Buffer 使用時	Top Reading	×		×
	Bottom Reading	×	〇	×	△^※

※細胞がプレートの底を覆う程度に播種し、しばらく静置させて細胞をプレートの底に沈めることで測定することは可能です。

〈Quenching Buffer使用時、浮遊細胞のデータ〉

脂肪酸取り込み検出キット Fatty Acid Uptake Assay Kit 同仁化学研究所

また、使用実績のあるマイクロプレートは下記の通りです。

メーカー名	製品名	Cat No.
ibidi	µPlate 96 well ibiTreat black S 15	ib89626
Thermo Fisher	96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10	165305

Q Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存可能でしょうか？: A

Fatty Acid Uptake Probe working solutionは保存できません。

Q バックグラウンドが高い場合、どうすればいいですか？: A

細胞に取り込まれなかったFatty Acid Uptake Probeがウェル内に残存している可能性があります。Washing Buffer solutionによる洗浄を繰り返すか、Quenching Bufferの使用をご検討ください。

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えてください。

下記表をご参照ください。

付着細胞

浮遊細胞

培養器材

(添加量)

6-well

(1.5 ml/well)

24-well

(0.3 ml/well)

96-well

(0.1 ml/well)

35-mm dish

(1.5 ml/well)

1.5-ml microtube

(0.5 ml/tube)

測定可能

サンプル数

7 sample

34 sample

100 sample

7 sample

20 sample

Q Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行ったのですが、透過光観察ができません。どうすればいいですか？: A

Quenching Bufferを使用して共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合は、QuenchingBufferをWashing Buffer solutionで10倍希釈してご使用いただくか、640 nmレーザーを用いて透過光観察を行ってください。

〈共焦点レーザー顕微鏡で透過光観察を行う場合に見られる現象〉

Q 脂肪酸を定量することはできますか？: A

本製品を用いて脂肪酸を定量することはできません。

Q 細胞内に取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできますか？: A

取り込まれた色素(Fatty Acid Uptake Probe)を定量することはできません。本製品は、脂肪酸取り込み能力の増減を確認するためのキットとなります。

Q 他の蛍光色素との共染色を行うことはできますか？: A

Fatty Acid Uptake Probeは赤色蛍光への漏れ込みが僅かに観察されます。そのため、緑色および赤色蛍光検出以外の色素を用いて共染色を行って下さい。

弊社ミトコンドリア染色用色素MitoBright LT Deep Red (MT12)との共染色を行った実績がございます。

〈赤色蛍光への漏れ込み〉

〈MitoBright LT Deep Redとの共染色プロトコル〉
1. ディッシュまたはマイクロプレートに播種した細胞を準備した。
2. 培地を除去し、無血清培地で2回洗浄した。
3. 無血清培地を添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
4. 上清を除去した後、Fatty Acid Uptake Probe working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で15分間静置した。
5. 上清を除去した後、0.1 µmol/l MitoBright LT working solutionを添加し、インキュベーター(37℃、5%CO₂存在下)で30分間静置した。
6. 上清を除去した後、HBSSを用いて2回洗浄した。
7. HBSSを添加し、蛍光顕微鏡で観察した。

Q 蛍光顕微鏡観察時の注意点はありますか？: A

蛍光顕微鏡観察時、励起光を照射し続けるとFatty Acid Uptake Probe由来の蛍光が退色する可能性があります。連続した励起光の照射は控えてください。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵

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ATP測定キット ATP Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ATP Assay Kit-Luminescence

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

ATP Assay Kit-Luminescence

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
ミトコンドリア関連
細胞内代謝

ATP測定キット

安定した発光による高感度検出
標準品の同梱で、不安定なATPの秤量が不要
試薬を加えるだけの簡単な操作

製品コード

A550　 ATP Assay Kit-Luminescence

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
50 tests	￥26,800	346-09793
200 tests	￥48,200	340-09791

キット内容

50 tests	・Enzyme Solution ・Substrate ・Assay Buffer ・ATP Standard	10 μl×1 ×1 5.5 ml×1 ×1
200 tests	・Enzyme Solution ・Substrate ・Assay Buffer ・ATP Standard	20 μl×2 ×2 11 ml×2 ×1

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

ATPの測定原理

ATP Assay Kit-Luminescenceは、培養細胞中のアデノシン三リン酸(ATP)量をホタル・ルシフェラーゼ発光法で定量するキットです。
本キットではマイクロプレートを用いた多検体測定が可能です。

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞 DLD-1 (ヒト結腸腺癌)	プレートリーダー	G. Enkhbat, A. Nakanishi, Y. Miki, "The BRCA2 missense mutation K2497R suppressed self-degradation and increased ATP production and cell proliferation", 2021, doi:10.1016/j.bbrc.2021.12.073.

よくある質問

Q 1キットで測定可能なサンプル数を教えて下さい: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、以下のサンプル数を測定できます。
96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照ください。
　・50 tests ：8サンプル
　・200 tests：48サンプル(96 ウェルプレート2枚で検量線を2回測定した場合)

Q 発光シグナルはどの程度安定ですか？: A

発光シグナルは3時間安定です。ただし、温度と光が発光に影響しますので、すぐに測定できない場合は、遮光し温度を一定(25℃付近)に保てる場所で静置してください。

Q 測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか？: A

測定はできますが、ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。
また、透明プレートの場合はブランクが高くなりますので、白色プレートを推奨しております。

Q 測定試料は保存できますか？: A

ATPが不安定なため保存できません。実験後は直ぐにWorking solutionを添加し、3時間以内に測定してください。

Q Working solutionは保存できますか？: A

冷凍(-20℃)で30日間の保存が可能です。
凍結融解を繰り返すことは試薬の劣化を招く恐れがありますので、その場合はあらかじめ小分けしてから保存することをお勧めします。

Q 組織を用いた実験例はありますか？: A

マウス肝臓組織を用いてATPおよびNAD/NADH量を測定した事例がございます。
実験操作の詳細は下記をご参照ください。

アルカリ抽出法による肝臓サンプルからの代謝指標の抽出

1. マウス肝臓100 mgあたり500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液を入れる。
　*使用する組織は必ず灌流操作等で十分に脱血してください。血液の残存は測定に影響を与えます。

2. ダウンス型ホモジナイザーで組織を破砕する。
　*氷浴上で行ってください。

3. サンプルを回収し、サンプルチューブに移す。破砕に使用した容器を500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液で共洗いし、チューブ内のサンプルと合わせる。
　（全量 1 ml）

4. 冷えた超純水 1 mlをサンプルチューブに加え、よく混合し氷上で5分間静置する。（全量 2 ml）
　*溶液の粘性が高いと、次操作の遠心後の分離が困難になる場合があります。その際は、シリンジに25 G(針のゲージ数)程度の細い針を付け、サンプル溶液をシリンジでスムーズに出し入れができるまで(20-30回)混合してください。

5. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清を900 µlずつ二つのサンプルチューブに回収する。
　*１本をATP測定、もう１本をNAD/NADH測定に使用。ATPのみを測定する場合は900 μlx1本のみで構いません。

ATP測定用サンプルの調製
6. 上記5. で調製した900 µlのサンプルに200 µl の1 mol/l KH₂PO₄水溶液を入れ中和し、よく混合後氷上で5分間静置する。

7. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清1 mlをサンプルチューブに回収し測定用サンプルとする。

<測定時の注意点>
*操作5、7で得たサンプルは保存できません。その日のうちに測定してください。
*スタンダード、サンプルの希釈には希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH₂PO₄水溶液を9:5の比率で混合したものを使用してください。

＜測定例＞
NASH誘導マウス肝臓組織におけるATP量の変化

Q 発光測定の波長を教えてください。: A

本キットには、ホタルルシフェリンを使用しているため、発光測定の波長は556nmとなります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷凍 , 取扱条件: 吸湿注意

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ADP/ATP比測定キット ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence 同仁化学研究所

发表于2024年3月17日由whatman中国官网

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
ミトコンドリア関連
細胞内代謝
細胞毒性

ADP/ATP比測定キット

安定したADP/ATPの値が取得可能
調液後、保存可能
冷蔵保存(凍結融解不要)

製品コード

A552　 ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥53,500	346-09911

<使用回数の目安> 96-well plate 1枚

アプリケーションデータ追加してます!
アポトーシス誘導におけるADP/ATP比の変動
老化誘導におけるADP/ATP比の変動

キット内容

100 tests	・ATP Enzyme Solution ・ATP Substrate ・Assay Buffer ・ADP Enzyme Solution ・ADP Substrate ・ADP Dilution Buffer	20 ×l×1 ×1 11 ml×1 25 ×l×1 ×1 250 ×l×1

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書日本語
Manual English

技術情報

既存品との比較

他社既存品との比較を下記表にまとめます。

本キットは、既存品に比べATPとADPの総量に依存せず、比率を安定的に測定することが可能です。

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

サンプルの測定をn=3で行った場合、32サンプルの測定が可能です。96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照下さい。

Q 測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか？: A

ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。また、透明プレートの場合はブランクが高くなります。よって、白色プレートを推奨致します。

Q working solutionは保存できますか？

本キットには4種類のworking solutionがございます。ADP working solutionは保存できないため、用時調製して下さい。その他の3種類に関して、保存条件と保存可能期間は以下の通りです。

	保存条件	保存期間
ATP working solution	冷凍(-20℃)	30日間
ADP Substrate working solution	冷蔵(0-5℃)	30日間
ADP Enzyme working solution	冷蔵(0-5℃)	30日間
ADP working solution	保存不可	保存不可

Q 細胞数の最適化の方法を教えて下さい。: A

段階希釈した細胞をプレートに播種し、目的実験と同様の条件で培養します。その後、本キットを用いて検量線(図1参照)を作成しその結果、直線性がある範囲であり、ADP/ATP 比率(図2参照)が一定となる細胞数範囲内で測定を行って下さい。下記の例の場合、細胞数範囲は2,000～4,000 cellsとなります。

取扱条件

取扱条件
保存条件: 冷蔵 , 取扱条件: 吸湿注意

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简要描述：

Cell Counting Kit-F

Cell Counting Kit-F

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

マニュアル

技術情報

参考文献

よくある質問

取扱条件

関連製品

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

細胞毒性測定キット

グルタチオン定量キット

简要描述：

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST

細胞毒性測定キット

マニュアル

技術情報

測定原理

実験例 生細胞測定と死細胞測定の併用した細胞毒性試験

技術や使用製品に関する補足

細胞増殖/細胞毒性アッセイキット Cell Counting Kit-8

生細胞・死細胞測定キットセット Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

抗がん剤ドキソルビシン（DOX）による細胞毒性メカニズム

技術や使用製品に関する補足

細胞内代謝測定キット

グルタチオン測定キット

代謝と疾患の関連性を示した報告例

参考文献

よくある質問

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

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Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit

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細胞増殖/細胞毒性アッセイキット

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2つの指標で評価する理由

参考文献

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Extracellular OCR Plate Assay Kit

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酸素消費速度プレートアッセイキット

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技術情報

キットの原理

実験例：細胞種における代謝経路依存性の比較

技術や使用製品に関する補足

参考文献

よくある質問

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Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

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マニュアル

技術情報

細胞老化と細胞周期との関連性

技術や使用製品に関する補足

細胞周期測定試薬

ミトコンドリア膜電位検出キット

参考文献

よくある質問

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Cell Counting Kit-8

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